Lời cảm ơn
MỞ ĐẦU
CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN
1.1. Bệnh ung thƣ bạch cầu cấp dòng tủy (Acute Myeloid Leukemia-AML)
Hình 1.1: Sự phát sinh các loại tế bào máu [55]
1.1.1. Thực trạng bệnh ung thƣ bạch cầu cấp dòng tủy và tình hình nghiên cứu trên thế giới và ở Việt Nam
Hình 1.2: Phân loại bệnh ung thƣ máu theo tế bào học (WHO2008) [2]
Hình 1.3: Tỷ lệ đột biến của một số gen gây bệnh ung thƣ bạch cầu cấp (WHO, 2008)[53]
1.1.1.2. Tổng quan tình hình nghiên cứu ở Việt Nam
Bảng 1.1: Giá trị của phƣơng pháp hình thái học và phƣơng pháp hoá tế bào trong chẩn đoán phân dòng bệnh ung thƣ bạch cầu cấp [2]
1.1.2. Phân loại các thể bệnh ung thƣ bạch cầu cấp dòng tủy
1.1.3. Các phƣơng pháp chẩn đoán bệnh AML
1.1.4. Hƣớng điều trị đối với ngƣời bệnh ung thƣ bạch cầu cấp dòng tủy
1.1.4.1. Hóa trị
1.1.4.2. Điều trị nhắm đích
1.1.4.3. Điều trị sinh học
1.1.4.4. Gây chết tự nhiên (apotosis)
1.1.4.5. Sử dụng các chất ức chế tyrosine kinase
Bảng 1.2. Các chất ức chế Tyrosine kinase (TKIs) đƣợc Cục Quản lý thực phẩm và Dƣợc phẩm Mỹ (FDA) phê chuẩn
1.2. Gen FLT3 và sự liên quan tới bệnh bạch cầu cấp dòng tủy
1.2.1. Cấu trúc và chức năng của gen FLT3
Hình 1.4: Cấu trúc phân tử protein FLT3 [18], [19].
1.2.2. Các loại đột biến FLT3
1.2.3. Mối liên hệ giữa đột biến trên gen FLT3 và bệnh bạch cầu cấp dòng tủy
1.2.4. Ý nghĩa của việc nghiên cứu gen FLT3 trong chẩn đoán và điều trị AML
CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
2.1. Nguyên liệu
2.1.1. Mẫu máu
2.1.2. Các hóa chất và bộ kit
Hóa chất dùng cho tách chiết plasmid từ vi khuẩn
Hóa chất dùng cho phản ứng PCR (Polymerase Chain Reaction)
Hóa chất dùng cho điện di trên gel agarose
Hóa chất dùng trong cảm ứng biểu hiện gen
2.1.3. Máy móc và thiết bị
2.2. Phƣơng pháp
2.2.1. Tách DNA tổng số từ mẫu máu
2.2.2. Thiết kế cặp mồi đặc hiệu nhân bản đoạn gen có đột biến
2.2.3. Nhân đoạn gen FLT3chứa đột biến với cặp mồi đặc hiệu bằng phản ứng chuỗi polymerase(PCR)
Hình 2.1: Chu trình nhiệt của phản ứng PCR
Bảng 2.1: Thành phẩn của phản ứng PCR đoạn gen FLT3
2.2.4. Điện di agarose hoặc acrylamide để phân tích phổ băng đột biến
2.2.6. Nhân dòng đoạn gen FLT3 và đọc trình tự gen bằng phƣơng pháp Sanger
* Đọc trình tự bằng phƣơng pháp Sanger
2.2.7. Một số phần mềm sử dụng trong luận văn
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Thu thập và tách chiết ADN hệ gen từ mẫu máutổng số
Bảng 3.1: Nồng độ của một số mẫu ADN tổng số
Hình 3.1: Ảnh điện di ADN tổng số sau khi tách
3.2. Thiết kế và tối ƣu quy trình phát hiện đột biến gen FLT3-ITD
3.2.1. Thiết kế trình tự mồi
3.2.2. Thiết kế và tối ƣu quy trình phát hiện đột biến FLT3-ITD
Hình 3.2: Quy trình phát hiện đột biến FLT3-ITD
Hình 3.3: Điện di sản phẩm PCR một số mẫu máu (19-32)
3.3. Bƣớc đầu sàng lọc trong quy mô phòng thí nghiệm
Hình 3.4: Điện di một số mẫu chứa đột biến FLT3-ITD
3.4. Kết quả đƣa sản phẩm PCR vào vectơ tái tổ hợp
Hình 3.5: Kết quả điện sản phẩm ADN tinh sạch từ gel
Hình 3.6: Kiểm tra ADN trong khuẩn lạc bằng PCR
3.5. Phân tích các đặc điểm phân tử của đột biến gen FLT3-ITD
Bảng 3.2: Số băng có kích thƣớc lớn hơn băng thƣờng trên mẫu
3.5.2. Kích thƣớc đột biến
Bảng 3.3: Độ di động của các băng của marker trong điện di
Hình 3.7: Đƣờng chuẩn xác định kích thƣớc băng điện di
Bảng 3.4: Kích thƣớc đột biến FLT3-ITD
3.5.3. Trình tự đột biến
Bảng 3.5: Trình tự đột biến FLT3-ITD
Hình 3.8. Trình tự protein một số mẫu chứa đột biến
3.5.4. Mức độ đột biến
Bảng 3.6: Mức độ đột biến trên mẫu (%)
KẾT LUẬN
KIẾN NGHỊ
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC 1