ĐỖ THỊ PHƯƠNG HOA NGHIÊN cứu QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN từ QUẢ NGŨ vị tử NAM (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHD ET WILS) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG HOA NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN TỪ QUẢ NGŨ VỊ TỬ NAM (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHD ET WILS) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG HOA Mã sinh viên: 1601278 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN TỪ QUẢ NGŨ VỊ TỬ NAM (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHD ET WILS) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Tuấn Hiệp TS Bùi Thị Thuý Luyện Nơi thực hiện: Khoa Công nghệ chiết xuất - Viện Dược liệu Bộ môn Công nghiệp Dược HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài trải qua mn vàn khó khăn thử thách, bên cạnh nỗ lực, cố gắng thân quan tâm, hướng dẫn giúp đỡ tận tình thầy, cơ, với động viên giúp đỡ bạn bè, gia đình giúp tơi có động lực hồn thành luận văn Để có thành này, lời xin gửi lời cảm ơn trân trọng sâu sắc đến TS Nguyễn Tuấn Hiệp TS Bùi Thị Thuý Luyện người thầy/ tận tình bảo, đưa lời khuyên giúp tháo gỡ vướng mắc trình nghiên cứu, tạo điều kiện tốt để tơi giúp tơi hồn thành đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn đến người thầy “ đặc biệt” ThS.DS Đỗ Quang Thái sát bảo, góp ý, giúp đỡ động viên tinh thần, giúp tơi có định hướng đắn suốt q trình thực đề tài Ngồi ra, khơng thể không nhắc đến hỗ trợ Khoa Công nghệ chiết xuất – Viện Dược liệu, anh/chị Vũ Thị Hương Anh, Hoàng Thành Dương, Đặng Tuấn Anh, Trần Anh Quang, Phạm Anh Minh giúp đỡ, tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình thực nghiệm đề tài Và cuối xin cảm ơn gia đình , bạn bè, người ln u thương đồng hành suốt chặng đường học tập, nghiên cứu vừa qua Với điều kiện thời gian kinh nghiệm cịn hạn chế, đề tài khơng thể tránh thiếu sót Tơi mong nhận bảo, đóng góp ý kiến quý thầy/cơ để bổ sung, hồn thiện tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2021 Sinh viên Đỗ Thị Phương Hoa MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1.TỔNG QUAN VỀ NGŨ VỊ TỬ 1.1.1 Phân loại thực vật 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Thành phần hoá học 1.1.5 Tác dụng Ngũ vị tử 1.1.6 Các sản phẩm từ Ngũ vị tử Ngọc Linh 12 1.2.MỘT SỐ QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT NGŨ VỊ TỬ 13 CHƯƠNG II: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 NGUYÊN LIỆU 15 2.2 HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ SỬ DỤNG 15 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu quy trình chiết xuất lignan 17 2.4.2 Phương pháp đánh giá tính ổn định quy trình chiết xuất lignan từ Ngũ vị tử nam 18 2.4.3 Bước đầu nghiên cứu phương pháp làm giàu lignan 18 2.4.4 Phương pháp định tính lignan 21 2.4.5.Phương pháp định lượng lignan 22 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 24 3.1 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN TỪ QUẢ NGŨ VỊ TỬ NAM 24 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố dung môi chiết 24 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố kích thước dược liệu 27 3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng phương pháp chiết 28 3.1.4 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ dược liệu/dung môi 31 3.1.5 Khảo sát ảnh hưởng số lần chiết 32 3.1.6 Đánh giá độ ổn định quy trình chiết lignan từ Ngũ vị tử nam 34 3.2 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU CÁC PHƯƠNG PHÁP LÀM GIÀU LIGNAN 35 3.2.1 Làm giàu lignan phương pháp chiết phân bố lỏng – lỏng 35 3.2.2 Làm giàu lignan phương pháp hấp phụ 37 CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO: 43 PHỤ LỤC 49 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) TLC Thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng) DAD Diod Array Detector UV Ultraviolet HS Hiệu suất HL Hàm lượng HK-2 Human kidney-2 IL-6 Interleukin-6 HGF Hepatocyte Growth Factor ( Yếu tố tăng trưởng tế bào gan) EGF Epidermal Growth Factor ( Yếu tố tăng trưởng biểu bì) HBV Hepatitis B Virus ( Virus B gây viêm gan) HCV Hepatitis C Virus ( Virus C gây viêm gan) AST Aspartate aminotransferase ALT Alanine aminotransferase SGPT Serum glutamic-pyruvic transaminase DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 1.1 Tính chất hố lý hợp chất lignan: Gomisin B, Schisandrin Schisandrin A Bảng 1.2 Tác dụng sinh học số lignan nhóm dibenzocyclooctadien chi Schisandra 12 Bảng 2.1 Tỷ lệ hệ dung môi pha động theo thời gian 23 Bảng 3.1 Ảnh hưởng dung môi chiết đến hiệu suất chiết hàm lượng lignan cao 26 Bảng 3.2 Ảnh hưởng kích thước dược liệu đến hiệu suất chiết hàm lượng lignan 27 Bảng 3.3 Ảnh hưởng phương pháp chiết tới hiệu suất chiết hàm lượng lignan cao 29 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ dược liệu/dung môi 31 Bảng 3.5 Ảnh hưởng số lần chiết thay đổi tỷ lệ dược liệu/dung môi 33 Bảng 3.6 Kết trình chiết xuất Lignan quy mơ phịng thí nghiệm 34 Bảng 3.7 Kết định lượng phân đoạn cao chiết trình làm giàu chiết phân bố lỏng – lỏng 36 Bảng 3.8 Kết trình làm giàu hạt nhựa hấp phụ 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số hình ảnh Ngũ vị tử thu hái Ngọc Linh Hình 1.2 Cấu trúc hoá học số hợp chất phân lập từ Ngũ vị tử Ngọc Linh Hình 2.1 Mẫu khơ Ngũ vị tử thu hái Ngọc Linh kích thước thơ 15 Hình 2.2 Sơ đồ tóm tắt nội dung nghiên cứu 17 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình làm giàu lignan phương pháp chiết phân bố lỏng – lỏng 20 Hình 3.1 Sắc ký lớp mỏng dung môi chiết Ngũ vị tử nam bước sóng 254nm (hệ dung mơi: n-Hexan: Ethyl acetat = 7:3) 25 Hình 3.2 Biểu đồ ảnh hưởng ảnh hưởng dung môi chiết đến hiệu suất hàm lượng lignan cao 26 Hình 3.3 Ảnh hưởng phương pháp chiết đến HS chiết lignan theo thời gian 30 Hình 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ dược liệu/dung môi tới hiệu suất chiết hàm lượng Lignan cao 32 Hình 3.5 Sắc ký lớp mỏng phân đoạn làm giàu lignan dung mơi hữu bước sóng 254nm (Hệ dung mơi: n-Hexan: Ethyl acetat = 7:3) 35 Phụ lục 4: Hình ảnh sắc ký đồ HPLC phân đoạn cao Schisandrin Gomisin B Schisandrin A Hình PL 4.1: Hình ảnh sắc ký đồ cao tổng lignan 53 Schisandrin Schisandrin A Gomisin B Hình PL 4.2: Hình ảnh sắc ký đồ phân đoạn n-hexan 54 Schisandrin Gomisin B Schisandrin A Hình PL 4.3: Hình ảnh sắc ký đồ phân đoạn dicloromethan 55 Hình PL 4.4: Hình ảnh sắc ký đồ phân đoạn ethyl acetat 56 Schisandrin Gomisin B Schisandrin A Hình PL 4.5: Hình ảnh sắc ký đồ cao làm giàu lignan hạt nhựa macroporous D101 57 Phụ lục 5: Thẩm định phương pháp định lượng schisandrin, gomisin B, Schisandrin A Ngũ vị tử nam phương pháp HPLC Dụng cụ hóa chất Hóa chất, dung môi - Chất chuẩn: schisandrin (SC) USP (CAS 1609895; Lot: F00810; độ tinh khiết 98%), gomisin B (GB) (CAS: 58546-55-7, LOT: PRF10042941, độ tinh khiết 98 %) schisandrin A (SCA) hãng Biopurify Phytochemicals Ltd (CAS: 61281-38-7; Lot: BP1261, độ tinh khiết 98%) - Dung môi: Acetonitril (≥ 99.9%) (loại HPLC, Fisher, Mỹ); MeOH (đạt tiêu chuẩn phân tích, Trung Quốc); nước cất lần Dụng cụ - Máy siêu âm Daihan, Hàn Quốc - Cân hàm ẩm OHAUS, Switzerland - Cân phân tích số AND, Nhật Bản - Máy HPLC UFLC Shimadzu, Nhật Bản - Các dụng cụ khác: bình định mức, Micropipet 1-200µl, 100-1000µl Quy trình chuẩn bị chung Chuẩn bị mẫu phân tích Với mẫu cao NVT: cân g dược liệu thêm MeOH, rung siêu âm 30 phút Gạn lấy dịch sau thêm MeOH tiến hành lặp lại lần, để nguội định mức 50 ml Dịch lọc qua màng 0.45 chạy HPLC Chuẩn bị dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn gốc: cân xác lượng chất chuẩn loại chất chuẩn: Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A sau thêm MeOH (Merck) để thu dung dịch chuẩn gốc có nồng độ mg/ml Từ dung dịch chuẩn gốc, hút lượng xác dung dịch chuẩn trộn để thu hổn hợp dung dịch chuẩn Pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ: 20, 50, 100, 150, 200, 300 µg/ml 58 Điều kiện sắc ký  Điều kiện: - Cột shim -pack C18 (250 x 4,6 mm, µm) - Detector: UV 254 nm - Tốc độ dịng: 0,8 ml/ phút - Thể tích tiêm mẫu: 10 µl - Pha động:  Acetonitrile (kênh A)  H2O (kênh B)  Chương trình gradient: Thời gian (phút) Kênh A Kênh B - 17 50 50 17 - 42 50 - 70 50 - 30 42-52 70 30 Cơng thức tính Hàm lượng % hoạt chất (X) có cao tính theo khối lượng khơ tuyệt đối tính theo cơng thức: 𝑋(%) = Trong đó: 𝐶 × 𝑉 × 100 𝑚 × (100 − 𝑤) × 1000 C: nồng độ Schisandrin Gomisin B Schisandrin A dung dịch mẫu thử (µg/ml) M: Khối lượng mẫu thử ((mg) W: hàm ẩm % Thẩm định phương pháp: 3.1 Tính thích hợp hệ thống: Tiến hành tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A có nồng độ xác khoảng 150 (µg/ml) với điều kiện sắc ký 59 khảo sát ghi lại giá trị thời gian lưu, diện tích peak Kết độ tương thích hệ thống biểu thị độ lệch chuẩn tương đối RSD thời gian lưu diện tích peak uV(x1,000,000) 1.2 Data1:SD_MIX_150_1.lcd PDA Ch1 254nm,4nm Data2:SD_MIX_150_2.lcd PDA Ch1 254nm,4nm Data3:SD_MIX_150_3.lcd PDA Ch1 254nm,4nm 1.1 Data4:SD_MIX_150_4.lcd PDA Ch1 254nm,4nm Data5:SD_MIX_150_5.lcd PDA Ch1 254nm,4nm Data6:SD_MIX_150_6.lcd PDA Ch1 254nm,4nm 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 60 45.0 50.0 55.0 60.0 65.0 70.0 75.0 HOẠT CHẤT SCHISANDRIN GOMISIN B SCHISANDRIN A AREA RT SD_MIX_150_1 16.204 4001266 169.468 SD_MIX_150_2 16.204 3999728 169.403 SD_MIX_150_3 16.198 4005279 169.638 SD_MIX_150_4 16.193 4005206 169.635 SD_MIX_150_5 16.193 4005188 169.635 SD_MIX_150_6 16.189 4005028 169.628 Xtb 16.197 4003616 169.568 RSD (%) 0.039 SD_MIX_150_1 38.624 2182397 113.359 SD_MIX_150_2 38.622 2180943 113.284 SD_MIX_150_3 38.621 2187333 113.614 SD_MIX_150_4 38.607 2184455 113.465 SD_MIX_150_5 38.618 2185115 113.499 SD_MIX_150_6 38.601 2183207 113.401 Xtb 38.616 2183908 113.437 RSD (%) 0.024 SD_MIX_150_1 50.353 4104298 127.108 SD_MIX_150_2 50.349 4105638 127.150 SD_MIX_150_3 50.349 4108631 127.243 SD_MIX_150_4 50.338 4106246 127.169 SD_MIX_150_5 50.353 4108796 127.248 SD_MIX_150_6 50.325 4105385 127.142 Xtb 50.345 4106499 127.176 RSD (%) 0.022 0.062 0.102 0.045 Kết luận: RSD ≤ 2% phù hợp với yêu cầu định lượng 3.1 C CODE Độ chọn lọc 61 (µg/ml) 0.062 0.102 0.045 Tiến hành phân tích mẫu dung mơi, mẫu thử, mẫu chuẩn thu kết sắc ký đồ mẫu: uV(x100,000) Data1:SD_MIX_100.lcd PDA Ch1 254nm,4nm 3.00 Data2:HA1_37_1.lcd PDA Ch1 254nm,4nm Data3:BLANK.lcd PDA Ch1 254nm,4nm 2.75 2.50 2.25 2.00 1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 0.0 3.2 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 50.0 55.0 60.0 65.0 70.0 75.0 Đường chuẩn Pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ: 20, 50, 100, 150, 200, 300 µg µg/ml từ nồng độ Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A chuẩn gốc 2000 µg/ml tiến hành chạy sắc ký theo điều kiện trình bày Mỗi dung dịch bơm hệ sắc ký lần, diện tích peak trung bình thu số liệu để dựng đường chuẩn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ SCHISANDRIN C AREA C (ĐC) 20 477952 19.839 50 1163252 100 GOMISIN B ĐỘ AREA C (ĐC) 0.805 365588 19.627 48.943 2.115 879402 2359345 99.739 0.261 150 3537032 149.753 200 4813994 300 7021662 (LT) SCHISANDRIN A ĐỘ ĐỘ AREA C (ĐC) 1.865 682147 20.827 4.134 46.135 7.729 1636180 50.456 0.912 1801874 93.727 6.273 3344826 103.521 3.521 0.165 2693036 139.704 6.864 5067924 157.035 4.690 203.983 1.992 3656488 189.410 5.295 6791652 210.569 5.284 297.739 0.754 5733480 296.5651 1.145 9572991 296.949 1.017 CHỆCH 62 CHỆCH CHỆCH 12000000 10000000 y = 32199x + 115451 R² = 0,9977 8000000 y = 23547x + 10802 R² = 0,9996 6000000 y = 19383x - 148418 R² = 0,9987 4000000 2000000 SCHISANDRIN GOMISIN B SCHISANDRIN A 0 50 100 150 200 250 300 350 Kết luận: Phương trình đường chuẩn biểu diễn phụ thuộc nồng độ Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A dung dịch giá trị diện tích peak có mối tương quan tuyến tính chặt chẽ khoảng khảo sát Độ chệch nồng độ madecassoside asiaticos Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A tính lại theo đường chuẩn khoảng ±15% Với hệ số hồi quy tuyến tính R2=0.999 thỏa mãn u cầu, xác định hàm lượng Schisandrin, Gomisin B, Schisandrin A dựa vào đường chuẩn khoảng nồng độ 20-300 µg/ml xây dựng 3.3 Giới hạn phát (LOD); giới hạn định lượng (LOQ) LOD: Tiến hành: pha loãng chuẩn đến nồng độ cho giá trị S/N =3 LOQ: Tiến hành: pha loãng chuẩn đến nồng độ cho giá trị S/N = 10 (10-20) LOD LOQ (µg/ml) (µg/ml) Schisandrin 0.05 0.1 Gomisin B 0.04 0.1 Schisandrin A 0.06 0.125 63 3.4 Độ lặp: Tiến hành: lấy mẫu bột dược liệu Nvt tiến hành xác định độ lặp Cân xác khoảng 1g mẫu bột dược liệu xử lý theo quy trình xây dựng, lặp lại thí nghiệm lần Xác định độ lặp lại theo công thức xây dựng CODE HA1_37_1 KL Hàm ẩm V HÀM LƯỢNG (%) SCHISANDRIN GOMISIN B CHISANDRIN A 1.103 0.327 0.127 0.141 HA1_37_2 1.0845 0.325 0.128 0.141 0.316 0.123 0.136 0.325 0.127 0.141 HA1_37_5 1.1067 0.310 0.122 0.133 HA1_37_6 1.1205 0.316 0.124 0.136 Xtb 0.320 0.125 0.138 RSD 2.128 2.024 2.364 HA1_37_3 1.0296 HA1_37_4 1.1254 7.69 50 - Yêu cầu: theo AOAC, hàm lượng chất phân tích 0.1-1 % độ lệch chuẩn tương đối RSD không vượt 3.7% - Kết luận: RSD ≤ 3.7%, ĐẠT 3.5 Độ đúng: Tiến hành: thêm chuẩn vào mức nồng độ, Tiêm lặp lại lần -> tính độ thu hồi 64 C thêm Code chuẩn RT AREA (µg/ml) HA1_37_7 C tổng (µg/ml) 16.187 1579054 66.601 16.194 1542324 65.041 HA1_37_9 16.185 1427151 60.150 HA1_37_10 16.278 2670054 112.934 16.258 2669026 112.890 HA1_37_12 16.238 2653949 112.250 HA1_37_13 16.243 3004807 127.150 16.238 2998932 126.901 HA1_37_15 16.24 3030720 128.251 HA1_37_16 16.279 3280110 138.842 16.244 3270211 138.421 16.277 3265730 138.231 HA1_37_8 HA1_37_11 HA1_37_14 HA1_37_17 50 62.5 75 HA1_37_18 C thêm Code chuẩn RT AREA (µg/ml) HA1_37_7 C tổng (µg/ml) 38.631 486290 25.854 38.634 481811 25.623 HA1_37_9 38.621 438804 23.404 HA1_37_19 38.599 859034 45.085 38.593 860856 45.179 HA1_37_21 38.609 869891 45.645 HA1_37_22 38.61 941210 49.324 38.611 938957 49.208 HA1_37_24 38.607 939034 49.212 HA1_37_25 38.608 1045968 54.729 38.609 1042694 54.560 38.614 1047210 54.793 HA1_37_8 HA1_37_20 HA1_37_23 HA1_37_26 HA1_37_27 20 25 30 65 trung C thu hồi Độ thu (µg/ml) hồi (%) 112.691 62.691 98.061 127.434 64.934 101.569 138.498 63.498 99.323 C thu hồi Độ thu (µg/ml) hồi (%) 45.303 25.303 101.371 49.248 24.248 97.146 54.694 24.694 98.932 bình (µg/ml) 63.931 trung bình (µg/ml) 24.960 C thêm Code chuẩn RT AREA (µg/ml) HA1_37_7 (µg/ml) 50.361 933722 28.640 50.361 923340 28.317 HA1_37_9 50.347 843706 25.844 HA1_37_28 50.281 1670183 51.512 50.276 1608921 49.609 HA1_37_30 50.309 1617420 49.873 HA1_37_31 50.311 1781742 54.977 50.314 1779067 54.894 HA1_37_33 50.307 1770820 54.638 HA1_37_34 50.296 1928908 59.547 50.308 1930479 59.596 50.298 1924902 HA1_37_8 HA1_37_29 HA1_37_32 HA1_37_35 HA1_37_36 22 27.5 33 trung C tổng C thu hồi Độ thu (µg/ml) hồi (%) 50.332 28.332 102.649 54.836 27.336 99.041 59.522 26.522 96.092 bình (µg/ml) 27.601 59.423 Kết luận: Theo AOAC, mẫu phân tích có hàm lượng chất phân tích ≥ 0.1% độ thu hồi yêu cầu nằm khoảng 95-105% => đạt 66 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG HOA NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN TỪ QUẢ NGŨ VỊ TỬ NAM (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHD ET WILS) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 ... ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG HOA Mã sinh viên: 1601278 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT LIGNAN TỪ QUẢ NGŨ VỊ TỬ NAM (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHD ET WILS) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người... hồi lignan đạt 78,02% 37 CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN Về nghiên cứu quy trình chiết xuất lignan từ Ngũ vị tử nam Ngọc Linh Các yếu tố ảnh hưởng tới trình chiết xuất Lignan từ Ngũ vị tử nam nghiên cứu. .. gồm: Nghiên cứu quy trình chiết xuất nhóm hoạt chất lignan từ Ngũ vị tử nam Ngọc Linh Đã xây dựng quy trình chiết xuất lignan với thơng số quy trình tối ưu lựa chọn là: • Dung mơi chiết: Ethanol