NGUYỄN hà THANH xác ĐỊNH hàm LƯỢNG GLUTARALDEHYD TRONG DUNG DỊCH KHỬ KHUẨN BẰNG sắc ký LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HÀ THANH XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG GLUTARALDEHYD TRONG DUNG DỊCH KHỬ KHUẨN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HÀ THANH Mã sinh viên: 1601704 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG GLUTARALDEHYD TRONG DUNG DỊCH KHỬ KHUẨN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Đặng Thị Ngọc Lan ThS Mạc Thị Thanh Hoa Nơi thực hiện: Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia HÀ NỘI - 2021 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin phép gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS Đặng Thị Ngọc Lan ThS Mạc Thị Thanh Hoa – người thầy trực tiếp hướng dẫn em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà thầy, giáo mơn Hóa phân tích – Độc chất, anh/chị khoa Nghiên cứu phát triển – Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, đặc biệt ThS Nguyễn Thị Hồng Ngọc DS Vũ Thị Thanh An, quan tâm giúp đỡ em nhiệt tình trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến ban lãnh đạo mơn Hóa phân tích – Độc chất khoa Nghiên cứu phát triển – Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia tạo điều kiện thuận lợi cho em hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè, người ln động viên giúp đỡ em suốt q trình học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Hà Thanh Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu chất khử khuẩn 1.2 Tổng quan glutaraldehyd 1.2.1 Tính chất lý hóa 1.2.2 Khả khử khuẩn 1.2.3 Độc tính 1.2.4 Ứng dụng 1.3 Phương pháp xác định glutaraldehyd 1.3.1 Một số phương pháp xác định glutaraldehyd 1.3.2 Phản ứng tạo dẫn xuất với 2,4 – dinitrophenylhydrazin 1.4 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao – HPLC 1.4.1 Khái niệm 1.4.2 Nguyên tắc – cấu tạo hệ thống HPLC 1.4.3 Một số thông số trình sắc ký 10 Chương Đối tượng phương pháp phân tích 12 2.1 Đối tượng nghiên cứu 12 2.2 Nguyên vật liệu, thiết bị 12 2.2.1 Chất chuẩn, hóa chất 12 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ 12 2.3 Nội dung nghiên cứu 12 2.4 Phương pháp nghiên cứu 13 2.4.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 13 2.4.2 Tối ưu trình dẫn xuất 13 2.4.3 Lựa chọn dung môi pha mẫu 14 2.4.4 Khảo sát điều kiện sắc ký 14 2.4.5 Thẩm định quy trình 15 2.5 Ứng dụng phương pháp 17 2.6 Xử lý kết 17 Chương Thực nghiệm, kết bàn luận 18 3.1 Tối ưu hóa q trình dẫn xuất glutaraldehyd với 2,4 – dinitrophenylhydrazin 18 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng thời gian nồng độ acid phosphoric ảnh hưởng đến phản ứng dẫn xuất 18 3.1.2 Độ ổn định sản phẩm dẫn xuất hóa theo thời gian 19 3.1.3 Khảo sát nhiệt độ phản ứng 19 3.1.4 Lựa chọn dung môi pha mẫu 21 3.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 23 3.2.1 Lựa chọn pha tĩnh 23 3.2.2 Khảo sát tỷ lệ pha động 24 3.3 Thẩm định phương pháp 26 3.3.1 Độ phù hợp hệ thống 26 3.3.2 Độ đặc hiệu 26 3.3.3 Đường chuẩn 28 3.3.4 Độ xác 28 3.3.5 Độ 28 3.4 Ứng dụng 30 Chương Kết luận kiến nghị 32 4.1 Kết luận 32 4.2 Kiến nghị 32 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên tiếng Anh Tiếng Việt Association of Official Hiệp hội nhà hóa phân tích Analytical Chemists thống ACN Acetonitrile Acetonitril C Concentration Nồng độ AOAC DDKK Dung dịch khử khuẩn DNPH Dinitrophenylhydrazine Dinitrophenylhydrazin GA Glutaraldehyde Glutaraldehyd HPLC PDA High performance liquid chromatography Photodiode array PL Sắc ký lỏng hiệu cao Mảng diod Pha loãng R Recovery Độ thu hồi RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn Std Standard Chuẩn UV - VIS Ultraviolet–visible Tử ngoại – khả kiến VKNATVSTPQG Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Khả khử khuẩn dung dịch glutaraldehyd 2% nước [12] Bảng 1.2 So sánh hoạt động diệt bào tử số aldehyd Bảng 1.3 Một số phương pháp định lượng GA DDKK HPLC Bảng 1.4 Một số phương pháp định lượng aldehyde mẫu khác HPLC Bảng 2.1 Quy trình pha dãy chuẩn GA 13 Bảng 3.1 So sánh tín hiệu sản phẩm dẫn xuất điều kiện nhiệt độ: 45oC/ 45 phút (A) nhiệt độ thường (B) 20 Bảng 3.2 Kết độ phù hợp hệ thống 26 Bảng 3.3 Kết đường chuẩn 28 Bảng 3.4 Kết độ xác 29 Bảng 3.5 Kết độ 29 Bảng 3.6 Nồng độ 10 mẫu DDKK 30 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học glutaraldehyd Hình 1.2 Phản ứng tạo dẫn xuất GA với 2,4 - DNPH Hình 1.3 Sơ đồ cấu trúc hệ thống HPLC Hình 3.1 Ảnh hưởng thời gian nồng độ acid phosphoric thuốc thử đến phản ứng dẫn xuất 18 Hình 3.2 Độ ổn định sản phẩm dẫn xuất hóa 19 Hình 3.3 So sánh tín hiệu dẫn xuất điều kiện nhiệt độ: 45oC/ 45 phút nhiệt độ thường 20 Hình 3.4 Lựa chọn dung môi pha mẫu (1: nước, 2: ACN) A: bước 1, B: bước 21 Hình 3.5 Sắc ký đồ phản ứng dẫn xuất hóa bước PL với A: nước, B: ACN 22 Hình 3.6 Sơ đồ chuẩn bị mẫu 23 Hình 3.7 Lựa chọn pha tĩnh (A: cột C18, B: cột CN) 23 Hình 3.8 Phổ pic sắc ký đồ cột C18 24 Hình 3.9 Sắc ký đồ khảo sát pha động ACN - H3PO4 0,1% A: 62:38, B: 55:45, C: 50:50 25 Hình 3.10 Sắc ký đồ độ chọn lọc 27 Hình 3.11 Kết chồng pic bước sóng 360 nm 27 Hình 3.12 Sắc ký đồ phân tích DDKK chứa GA 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Tổ chức Y tế giới (WHO), tỷ lệ nhiễm khuẩn bệnh viện quốc gia châu Âu chiếm khoảng 5%, nước thu nhập thấp trung bình 5,7% - 19,1% tổng số người nhập viện Tại Việt Nam, tỷ lệ nhiễm khuẩn bệnh viện từ 3,5% đến 10% số người nhập viện Một số cố nghiêm trọng liên quan đến nhiễm khuẩn ghi nhận khứ như: nhiễm trùng muộn sau phẫu thuật Hà Giang (2013), lây nhiễm sởi, vi khuẩn đa kháng kháng sinh bệnh viện Nhi Trung ương, nhiễm vi khuẩn đa kháng bệnh viện Sản Nhi Bắc Ninh (2017) … Bên cạnh đó, giới ngày xuất nhiều chủng loại vi khuẩn, virus gây đại dịch SARs, Ebola, nCo-V,… gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người dân kinh tế toàn cầu Từ đây, nhận thức rõ ý nghĩa việc kiểm sốt nhiễm khuẩn, khơng sở y tế mà cịn hộ gia đình, doanh nghiệp, nông trại,… để ngăn chặn nguy lây nhiễm Nhiều phương pháp khử khuẩn, tiệt khuẩn phát triển, nhiên phương pháp hóa học ưu tiên sử dụng khơng ảnh hưởng đến thiết bị dễ di chuyển, sử dụng Trong đó, glutaraldehyd hóa chất khử khuẩn phổ rộng sử dụng phổ biến để khử trùng sát khuẩn bề mặt thiết bị phổ biến cho mục đích cơng nghiệp, phịng thí nghiệm, nơng nghiệp, y tế số mục đích gia dụng khác [11] Nhằm đảm bảo chất lượng dung dịch khử khuẩn chứa glutaraldehyd thị trường, việc có phương pháp định lượng chất vơ cần thiết Trên giới có nhiều phương pháp định lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao [10], [19], [21] chưa có nghiên cứu cơng bố Việt Nam Vì vậy, với mong muốn đề xuất phương pháp định lượng glutaraldehyd phục vụ kiểm nghiệm thường quy viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, nghiên cứu “Xác định hàm lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn” tiến hành với hai mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Ứng dụng phương pháp xây dựng để xác định hàm lượng glutaraldehyd vào mẫu gửi viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia Chương Tổng quan 1.1 Giới thiệu chất khử khuẩn Theo hướng dẫn khử khuẩn, tiệt khuẩn dụng cụ sở khám bệnh, chữa bệnh Bộ Y tế (2012), khử khuẩn (disinfection) trình loại bỏ hầu hết tất vi sinh vật gây bệnh dụng cụ không diệt bào tử vi khuẩn Có ba mức khử khuẩn: - Nhóm 1: Khử khuẩn mức độ cao (high level disinfection) trình tiêu diệt toàn vi sinh vật số bào tử vi khuẩn - Nhóm 2: Khử khuẩn mức độ trung bình (intermediate-level disinfection) trình khử M tuberculosis, vi khuẩn sinh dưỡng, virus nấm, khơng tiêu diệt bào tử vi khuẩn - Nhóm 3: Khử khuẩn mức độ thấp (low-level disinfection) tiêu diệt vi khuẩn thông thường vài virus nấm, không tiêu diệt bào tử vi khuẩn Một số hóa chất khử khuẩn thường sử dụng bao gồm: alcohol (cồn), clo hợp chất chứa clo, glutaraldehyd, ortho-phthalaldehyd (OPA), peracetic acid, hydrogen peroxid, iodophor, dẫn chất phenol, formaldehyd hợp chất amoni bậc Trong đó, glutaraldehyd ≥ 2% xếp vào nhóm [2] Ngày nay, phương pháp khử khuẩn chất hóa học ngày phổ biến nhiều trang, thiết bị y tế nhạy cảm nhiệt chất dễ di chuyển, sử dụng đơn giản Đặc tính chất khử khuẩn lý tưởng [2]: - Phải có phổ kháng khuẩn rộng - Tác dụng nhanh - Không bị tác dụng yếu tố môi trường - Không độc - Không tác hại tới dụng cụ kim loại cao su, nhựa - Hiệu kéo dài bề mặt dụng cụ xử lý - Dễ sử dụng - Không mùi có mùi dễ chịu - Kinh tế - Có khả pha lỗng - Có nồng độ ổn định kể pha loãng để sử dụng 3.3.3 Đường chuẩn Chuẩn bị dung dịch chuẩn glutaraldehyd có nồng độ từ – 50 µg/mL, phân tích HPLC xây dựng đường phụ thuộc diện tích pic nồng độ chất phân tích tương ứng Nồng độ tín hiệu chất phân tích liệt kê bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết đường chuẩn Nồng độ (µg/mL) 50 40 30 25 20 10 Nồng độ thực tế (µg/mL) Spic (mAU.s) Bias (%) 5572358 50,6 4354219 39,6 3248514 29,7 2718439 24,9 2144092 19,8 1070938 10,1 509103 5,1 y = 111662x - 68783 R² = 0,9996 1,1 -0,9 -1,0 -0,3 -1,2 1,1 1,3 Nhận xét: Trong khoảng nồng độ khảo sát có tương quan tuyến tính diện tích pic glutaraldehyd Độ lệch ∆ < 15%, 1> R² > 0,99 Kết luận: Phương pháp khảo sát có khoảng tuyến tính đạt u cầu 3.3.4 Độ xác Tiến hành phân tích xác lần riêng biệt mẫu thử độ xác tiến hành phân tích thêm lần với thời gian khác độ xác trung gian Kết liệt kê bảng 3.4 Nhận xét: Độ lặp lại độ lặp lại trung gian hàm lượng glutaraldehyd đạt yêu cầu Kết luận: Phương pháp khảo sát đạt độ xác 3.3.5 Độ Tiến hành thêm chuẩn vào mẫu thực tính hiệu suất thu hồi theo cơng thức đề cập mục 2.4.4.6 Kết thể bảng 3.5 Nhận xét: Kết phân tích cho thấy độ thu hồi glutaraldehyd nằm khoảng 97,8 – 103,2 %, phù hợp với yêu cầu AOAC [8] Kết luận: Phương pháp khảo sát đạt độ 28 Bảng 3.4 Kết độ xác Ngày S V V định T (mL) T Diện tích Nồng độ Hàm Trung RSD mức pic (µg/mL) lượng bình (%) (mL) (mAU.s) (mg/mL) (mg/mL) D 1 100 100 1770329 16,5 164,7 100 100 1755143 16,3 163,3 100 100 1775451 16,5 165,2 100 100 1770538 16,5 164,7 100 100 1779591 16,6 165,5 100 100 1765632 16,4 164,3 1 100 100 1782016 16,9 168,9 100 100 1781444 16,9 168,8 100 100 1804986 17,1 171,1 100 100 1763479 16,7 167,2 100 100 1787696 16,9 169,4 100 100 1776887 16,8 168,4 n=12 164,6 0,5 169,0 0,8 166,5 1,5 Bảng 3.5 Kết độ STT V Thể tích Hệ số Thể tích Diện tích Nồng độ R RSD mẫu (mL) định mức pha std 25000 pic mẫu (%) (%) (mL) lỗng µg/mL (mAU.s) (µg/mL) spike (mL) 1 100 100 0,1 2044049 18,9 98,7 100 100 0,1 2042645 18,9 98,2 100 100 0,1 2056536 19,0 103,2 100 100 0,1 2044511 18,9 98,9 100 100 0,5 3130000 28,6 97,8 100 100 0,5 3139969 28,7 98,6 100 100 0,5 3143448 28,7 98,8 100 100 0,5 3136244 28,7 98,3 100 100 4591095 41,8 101,5 10 100 100 4580250 41,7 101,1 11 100 100 4584240 41,7 101,2 12 100 100 4608691 41,9 102,1 2,3 0,4 0,4 29 3.4 Ứng dụng Phương pháp với hóa chất, thiết bị phổ biến, thời gian phân tích ngắn (10 phút/ lần tiêm mẫu) thẩm định theo tiêu chí AOAC dễ dàng chuyển giao phịng thí nghiệm Phương pháp có đủ điều kiện tiến hành thẩm định liên phịng thí nghiệm để phát triển thành phương pháp thức, góp phần định lượng dung dịch khử khuẩn chứa GA thị trường Kết phân tích 10 mẫu dung dịch khử khuẩn chưa có hàm lượng ghi nhãn gửi kiểm nghiệm VKNATVSTPQG cho thấy mẫu chứa GA nhãn có nồng độ khoảng 0,2 – 27,1% mô tả bảng 3.6 Các mẫu chuẩn bị hình 3.6, riêng mẫu pha loãng 10 lần bước Bảng 3.6 Nồng độ 10 mẫu DDKK STT 10 C (%) 21,9 0,5 16,5 0,2 19,3 1,1 27,1 10,2 24,4 20,3 Một số sắc ký đồ phân tích dung dịch khử khuẩn chứa GA thể hình 3.12 0.25 0.20 0.20 8.876 - 2315403 0.25 0.15 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 0.00 -0.05 5.00 10.00 15.00 Minutes 8.236 - 1782016 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05 0.00 5.00 0.00 5.00 10.00 Minutes 0.25 AU 0.10 8.818 - 100921 AU AU 0.15 10.00 15.00 Minutes 30 15.00 0.20 0.15 0.15 0.10 0.05 0.10 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 0.00 8.801 - 1065493 0.20 AU 0.25 8.813 - 517781 AU 0.25 5.00 10.00 0.00 15.00 5.00 15.00 0.25 0.20 0.20 8.821 - 2585408 0.25 0.15 AU 0.15 0.10 0.10 8.810 - 213511 AU 10.00 Minutes Minutes 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 0.00 -0.05 0.00 5.00 10.00 5.00 10.00 15.00 10.00 15.00 Minutes 15.00 0.25 0.20 0.20 8.836 - 2047159 0.25 0.10 0.15 AU AU 0.15 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 0.00 8.805 - 2145324 Minutes 5.00 10.00 15.00 0.00 5.00 Minutes Minutes Hình 3.12 Sắc ký đồ phân tích DDKK chứa GA 31 Chương Kết luận kiến nghị 4.1 Kết luận Đề tài thực khảo sát thẩm định quy trình phân tích GA phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao dùng detector PDA Sau trình nghiên cứu, đề tài thu kết sau: Khảo sát, xây dựng thẩm định phương pháp xác định hàm lượng GA dung dịch khử khuẩn HPLC - PDA a Lựa chọn điều kiện phân tích HPLC - Pha tĩnh: cột cyanid Agilent Eclipse XDB-CN (250 x 4,6 mm, µm) - Pha động: Hỗn hợp ACN - acid phosphoric 0,1% (50:50 v/v) - Tốc độ dòng: 1,0 mL/phút - Bước sóng phát hiện: 360 nm - Thể tích tiêm mẫu: 10 µL b Khảo sát lựa chọn điều kiện xử lý mẫu Cụ thể: Pha loãng mẫu thử nước đến nồng độ khoảng 0,1 – 0,5%, sau pha lỗng - 100 lần ACN Cho mẫu thử pha loãng phản ứng với thuốc thử 2,4 – DNPH 2500 µg/mL - ACN tỷ lệ 1:1 c Thẩm định phương pháp xác định hàm lượng GA dung dịch khử khuẩn cho kết sau: - Phương pháp có tính chọn lọc đáp ứng yêu cầu - Khoảng tuyến tính với R2 > 0,99 khoảng nồng độ từ đến 50 µg/mL - Độ lặp lại, độ tái lặp nội bộ, độ thu hồi đáp ứng yêu cầu AOAC Phân tích số mẫu dung dịch khử khuẩn lấy ngẫu nhiên thị trường cho kết nồng độ GA khoảng 0,2 – 27,1% 4.2 Kiến nghị Đề tài thẩm định đáp ứng điều kiện AOAC, nhiên dung mơi pha lỗng mẫu chưa tối ưu, cột cyanid không thực phổ biến phương pháp thẩm định mẫu dung dịch khử khuẩn Do kiến nghị: - Khảo sát loại dung mơi pha lỗng mẫu khác, ví dụ hỗn hợp nước – ACN có tỷ lệ định… mà khơng cần pha lỗng bước với loại dung môi khác 32 - Khảo sát pha động khác để cột C18 tách đồng phân EE, EZ sản phẩm dẫn xuất hydrazon, từ xác định điều kiện để tỷ lệ chất khơng đổi, dựa tổng diện tích pic để tính tốn, tăng tính ứng dụng phương pháp cột C18 phổ biến cột CN - Khảo sát thẩm định phương pháp vào mẫu khác thực phẩm, mỹ phẩm để mở rộng phạm vi ứng dụng 33 Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Trần Tử An, Thái Nguyễn Hùng Thu (2012), Hóa phân tích tập II, NXB Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2012), Hướng dẫn khử khuẩn, tiệt khuẩn dụng cụ sở khám bệnh, chữa bệnh Phạm Luận (2014), Phương pháp phân tích sắc ký chiết tách, NXB Bách khoa Hà Nội, Hà Nội Tổng cục Thủy sản (2019), Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sản phẩm xử lý môi trường ni trồng thủy sản phần 1: hóa chất, chế phẩm sinh học (QCVN 02 – 32 - 1: 2019/BNNPTNT) Đặng Minh Thành (2012), Xác định phương pháp định lượng glutaraldehyd nguyên liệu thành phẩm thuốc thú y, Khóa luận tốt nghiệp Đại học, Trường Đại học Cần Thơ, Cần Thơ Viện Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 16-59 Tiếng Anh Allen C F H (1930), "The identification of carbonyl compounds by use of 2,4dinitrophenylhydrazine", Journal of the American Chemical Society, 52(7), 2955-2959 Association of Official Analytical Chemists (2016), "Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements", AOAC Official methods of analysis, USA, 1-18 Association of Official Analytical Chemists (2002), AOAC Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals 10 Barnes A R (1993), "Determination of glutaraldehyde in solution as its bis-2,4dinitrophenylhydrazone derivative; determination of geometrical isomer ratios", Pharmaceutica Acta Helvetiae, 68(2), 113-119 11 Beauchamp R O., Jr., St Clair M B., et al (1992), "A critical review of the toxicology of glutaraldehyde", Critical Reviews in Toxicology, 22(3-4), 143-174 12 Borick P M (1968), "Chemical sterilizers (chemosterilizers)", Advances in Applied Microbiology 10, 291-312 13 Brady O L., Elsmie G V (1926), "The use of 2,4-dinitrophenylhydrazine as a reagent for aldehydes and ketones", Analyst, 51(599), 77-78 14 Committee on Food Chemicals Codex, Food and Nutrition Board, et al (2004), "Glutaraldehyde", Food chemicals codex V, The National Academies Press, USA, 197-198 15 Danielson J W., Thompson R D (1996), "Determination of glutaraldehyde and phenol in germicide products by capillary gas chromatography", Journal of Chromatography A, 724(1), 398-402 16 Gorman S P , Scott M E., et al (1980), "Antimicrobial activity, uses and mechanism of action of glutaraldehyde", Journal of Applied Bacteriology 17 Kang H I., Shin H S (2016), "Sensitive determination of glutaraldehyde in environmental water by derivatization and gas chromatography-mass spectrometry", Analytical Methods, 18 Kim S U., Lee J S., et al (2019), "Determination of formaldehyde , acetaldehyde and glutaraldehyde in cosmetics by high-performance liquid chromatography", International Journal of Innovations in Engineering and Technology 19 Maggadani B P., Isfadhila M (2018), "High performance liquid chromatography analytical method validation for glutaraldehyde and benzalkonium chloride in disinfectants", International Journal of Applied Pharmaceutics, 10(1) 20 McGucken P V., Woodside W (1973), "Studies on the mode of action of glutaraldehyde on Escherichia coli", Journal of Applied Bacteriology, 36(3), 419-426 21 Menet M C., Gueylard D., et al (1997), "Fast specific separation and sensitive quantification of bactericidal and sporicidal aldehydes by high-performance liquid chromatography: example of glutaraldehyde determination", Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, 692(1), 79-86 22 National Industrial Chemicals Notification and Assessment Scheme (1994), "Glutaraldehyde", Priority Existing Chemical No 3, Australian Government Publishing Service, Australia, 7, 13 - 16 23 Norman A F., Michael J S (1968), "A simple method for determination of Glutaraldehyde", The Journal of Histochemistry and Cytochemistry, 17 24 Pieraccini G., Bartolucci G., et al (2002), "Gas chromatographic determination of glutaraldehyde in the workplace atmosphere after derivatization with O(2,3,4,5,6-pentafluorobenzyl)hydroxylamine on a solid-phase microextraction fibre", Journal of Chromatography A, 955(1), 117-124 25 Pranaityt B., Padarauskas A., et al (2004), "Rapid capillary electrophoretic determination of glutaraldehyde in photographic developers using a cationic polymer coating", Analytica Chimica Acta, 507(2), 185-190 26 Rietz B (1985), "Determination of three aldehydes in the air of working environments", Analytical Letters, 18(19), 2369-2379 27 Uchiyama S., Ando M., et al (2003), "Isomerization of aldehyde-2,4dinitrophenylhydrazone derivatives and validation of high-performance liquid chromatographic analysis", Journal of chromatography A, 996, 95-102 28 United States Pharmacopeial Convention (2017), "Glutaral disinfectant solution", U.S Pharmacopeia 40 - National Formulary 35, USA, 7678 Trang web 29 Cơ sở liệu hóa học viện sức khỏe quốc gia Hoa Kỳ (2021), "https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/2_4-Dinitrophenylhydrazine", Retrieved, from PHỤ LỤC 1: SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ỔN ĐỊNH HỆ THỐNG 8.952 - 4372619 0.25 0.20 0.25 0.20 AU AU 0.10 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 0.20 0.25 0.20 0.15 AU 0.15 AU 8.910 - 4354620 8.915 - 4370796 0.25 0.10 0.05 0.10 0.00 0.00 -0.05 -0.05 5.00 10.00 0.05 -0.10 0.00 15.00 5.00 10.00 15.00 Minutes Minutes 8.921 - 4346626 0.25 0.20 8.920 - 4344176 0.30 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 AU 0.15 AU 15.00 0.30 0.30 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 -0.10 0.00 10.00 Minutes Minutes -0.10 0.00 0.15 0.15 -0.10 0.00 8.917 - 4373664 0.30 0.30 5.00 10.00 Minutes 15.00 -0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 0.30 0.25 0.25 0.20 0.20 8.912 - 5572358 0.30 0.10 0.15 AU AU 0.15 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 -0.10 0.00 5.00 8.921 - 4354219 PHỤ LỤC 2: SẮC KÝ ĐỒ ĐƯỜNG CHUẨN 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 0.25 0.25 0.20 0.15 AU AU 0.15 0.10 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 -0.10 0.00 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 0.25 0.25 0.20 0.20 AU AU 0.15 0.05 0.00 0.00 -0.05 -0.05 5.00 10.00 15.00 0.30 0.25 0.20 9.038 - 509103 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05 -0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes -0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes Minutes AU 0.10 0.05 -0.10 0.00 15.00 9.014 - 1070938 0.30 8.963 - 2144092 0.30 0.10 10.00 Minutes Minutes 0.15 15.00 8.959 - 2718439 0.30 8.954 - 3248514 0.30 0.20 10.00 Minutes Minutes 15.00 15.00 0.30 0.20 0.20 AU 0.10 0.00 -0.10 0.00 8.877 - 1755143 0.30 8.875 - 1770329 AU PHỤ LỤC 3: SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC 0.10 0.00 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 0.30 0.20 0.20 AU 0.00 -0.10 0.00 15.00 10.00 15.00 8.860 - 1770538 0.30 0.10 10.00 Minutes 8.865 - 1775451 AU Minutes 0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 -0.10 0.00 5.00 Minutes 0.20 0.20 AU 0.10 0.00 -0.10 0.00 8.835 - 1765632 0.30 8.854 - 1779591 AU 0.30 0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 -0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 PHỤ LỤC 4: SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Thêm chuẩn 2,5 µg/mL 8.842 - 2044049 0.10 0.20 AU AU 0.20 0.10 0.00 0.00 -0.10 0.00 8.793 - 2042645 0.30 0.30 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 10.00 15.00 10.00 15.00 Minutes Minutes 8.784 - 2056536 0.10 0.20 AU AU 0.20 0.10 0.00 0.00 -0.10 0.00 8.761 - 2044511 0.30 0.30 -0.10 0.00 5.00 10.00 5.00 15.00 Minutes Minutes Thêm chuẩn 10 µg/mL 8.871 - 3130255 0.20 AU AU 0.20 8.880 - 3139969 0.30 0.30 0.10 0.10 0.00 0.00 -0.10 5.00 10.00 Minutes 15.00 -0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 0.30 0.20 AU AU 0.20 0.10 0.00 -0.10 0.00 8.902 - 3136244 8.902 - 3143448 0.30 0.10 0.00 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 Minutes 10.00 15.00 10.00 15.00 10.00 15.00 Minutes Thêm chuẩn 25 µg/mL 0.10 0.00 -0.10 0.00 8.955 - 4580250 0.20 AU 0.20 AU 0.30 8.923 - 4591095 0.30 0.10 0.00 5.00 10.00 -0.10 0.00 15.00 5.00 Minutes 0.20 AU 0.10 0.00 -0.10 0.00 8.955 - 4608691 0.20 AU 0.30 8.928 - 4584240 0.30 Minutes 0.10 0.00 5.00 10.00 Minutes 15.00 -0.10 0.00 5.00 Minutes ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HÀ THANH Mã sinh viên: 1601704 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG GLUTARALDEHYD TRONG DUNG DỊCH KHỬ KHUẨN BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng... cứu ? ?Xác định hàm lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn? ?? tiến hành với hai mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn phương pháp sắc ký lỏng hiệu. .. bảo chất lượng dung dịch khử khuẩn chứa glutaraldehyd thị trường, việc có phương pháp định lượng chất vơ cần thiết Trên giới có nhiều phương pháp định lượng glutaraldehyd dung dịch khử khuẩn phương