HÀ mỹ DUYÊN NGHIÊN cứu THÀNH PHẦN hóa học của PHÂN đoạn có tác DỤNG ức CHẾ ENZYM SOLUBLE EPOXIDE HYDROLASE IN VITRO của cúc HOA VÀNG (CHRYSANTHEMUM INDICUM l )

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HÀ MỸ DUYÊN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA PHÂN ĐOẠN CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM SOLUBLE EPOXIDE HYDROLASE IN VITRO CỦA CÚC HOA VÀNG (CHRYSANTHEMUM INDICUM L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HÀ MỸ DUYÊN Mã sinh viên: 1601164 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA PHÂN ĐOẠN CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM SOLUBLE EPOXIDE HYDROLASE IN VITRO CỦA CÚC HOA VÀNG (CHRYSANTHEMUM INDICUM L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Thúy Luyện Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp dƣợc HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực khóa luận tổ chiết xuất – Bộ môn Công nghiệp Dƣợc – Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, nhận đƣợc nhiều quan tâm, giúp đỡ thầy cô, anh chị, bạn em sinh viên Lời đầu tiên, xin bày tỏ biết ơn sâu sắc tới TS Bùi Thị Thúy Luyện, tổ chiết xuất- Bộ môn Công nghiệp Dƣợc- Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội dành thời gian tâm huyết, tận tình bảo, hƣớng dẫn, động viên tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ban lãnh đạo nhà trƣờng với môn Công nghiệp dƣợc tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu, hoàn thành đề tài trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Dù có nhiều cố gắng song đề tài cịn thiếu sót Kính mong nhận đƣợc chia sẻ đóng góp quý báu thầy cô giáo Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2021 Sinh viên Duyên Hà Mỹ Duyên MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Công dụng liều dùng 1.1.5 Một số thuốc có cúc hoa vàng 1.2 Các nghiên cứu cúc hoa vàng 1.2.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học cúc hoa vàng 1.2.2 Các nghiên cứu tác dụng sinh học cúc hoa vàng 1.3 Tổng quan enzym soluble epoxide hydrolase (sEH) 1.3.1 Giới thiệu chung 1.3.2 Một số hợp chất vai trị q trình ức chế enzyme sEH CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 12 2.2 Nguyên liệu 12 2.2.1 Hóa chất 12 2.2.2 Dụng cụ 13 2.2.3 Thiết bị 13 2.3 Nội dung nghiên cứu 13 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 13 2.4.1 Phƣơng pháp chiết xuất 13 2.4.2 Phƣơng pháp đánh giá tác dụng ức chế enzym sEH 14 2.4.3 Phƣơng pháp phân lập xác định cấu trúc phân tử hợp chất hóa học 14 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 16 3.1 Chiết xuất dịch chiết etanol toàn phần dịch chiết phân đoạn 16 3.2 Kết đánh giá tác dụng ức chế enzym sEH cắn chiết EtOH phân đoạn chiết từ cúc hoa vàng 17 3.3 Phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc cúc hoa vàng 17 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ cúc hoa vàng 20 3.4.1 Hợp chất CI-1 20 3.4.2 Hợp chất CI-2 22 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 26 4.1 Về tác dụng ức chế enzym sEH dịch chiết phân đoạn chiết từ cúc hoa vàng 26 4.2 Về thành phần hóa học 27 4.2.1 Hợp chất CI-1 27 4.2.2 Hợp chất CI-2 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC 39 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Thứ tự Kí tự viết tắt Giải nghĩa AUDA 12- (3-adamantan-1-ylureido) axit dodecanoic CH2Cl2 Dicloromethan EtOAc Etyl acetat EtOH Ethanol sEHI ức chế enzym sEH t-AUCB trans-4-[4-(3-adamantan-1-ylureido)- cyclohexyloxy]benzoic acid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số hợp chất từ cúc hoa vàng .4 Bảng 2: Tên hóa chất nguồn gốc .15 Bảng 3: Tác dụng sEHI cắn chiết EtOH phân đoạn chiết từ cúc hoa vàng 20 Bảng 4: Số liệu phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) 13C-NMR (DMSO-d6, 150 MHz) hợp chất CI-1 24 Bảng 5: Số liệu phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 600 Hz) 13C-NMR (DMSO-d6, 150 Hz) hợp chất CI-2 28 Sơ đồ 1: Quy trình chiết xuất dịch chiết phân đoạn chiết cúc hoa vàng 19 Sơ đồ 2: Quy trình phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc 22 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1: Ngun liệu nghiên cứu cúc hoa vàng .15 Hình 2: Phổ 1H-NMR hợp chất CI-1 23 Hình 3: Phổ 13C-NMR hợp chất CI-1 25 Hình 4: Cấu trúc hợp chất CI-1 25 Hình 5: Phổ 1H-NMR hợp chất CI-2 .26 Hình 6: Phổ 13C-NMR hợp chất CI-2 27 Hình 7: Cấu trúc hợp chất CI-2 27 ĐẶT VẤN ĐỀ Cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.) từ xa xƣa đƣợc dân gian sử dụng phổ biến với tác dụng chống viêm, giảm đau, hạ sốt điều trị bệnh mắt [1] Ngoài ra, y học đại chứng minh dịch chiết từ cúc hoa vàng có nhiều tác dụng dƣợc lý: tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan, ngăn ngừa ung thƣ bệnh tim mạch với có mặt nhóm hợp chất flavonoid, terpenoid phenolic [3], [12], [26], [9] tác dụng tƣơng đồng với tác dụng việc ức chế enzym soluble epoxide hydrolase (sEH) bệnh lý liên quan đến viêm, ung thƣ, bệnh tim mạch, bệnh gan bệnh chuyển hóa khác [32], [37], [18], [15] Hơn nữa, số hợp chất có tác dụng ức chế enzym sEH trùng khớp với hợp chất đƣợc phân lập từ cúc hoa vàng Với mong muốn tìm hiểu chế tác dụng thành phần hóa học phân lập từ cúc hoa vàng, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn có tác dụng ức chế enzym soluble epoxide hydrolase in vitro cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.).” đƣợc thực với mục tiêu sau: 1) Đánh giá tác dụng ức chế enzym sEH in vitro cắn chiết phân đoạn chiết từ cúc hoa vàng 2) Phân lập xác định cấu trúc 1-2 hợp chất từ phân đoạn có tác dụng ức chế enzym sEH tốt từ cúc hoa vàng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích, Đặng quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất khoa học kĩ thuật, Hà Nội, 576-580 [2] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, Hà Nội, 604-605 Tiếng Anh [3] Amrani, A., O Benaissa, N Boubekri, K Biod, R Djabari, N Beroal, D Zama, F Benayache and S Benayache (2016), “Impact of Chrysanthemum fontanesii extract on sodium valproate mediated oxidative damage in mice kidney”, J Appl Pharm 6(4), 67–71 [4] Bai, L., X Li, L He, Y Zheng, H Lu, J Li, L Zhong, R Tong, Z Jiang and J Shi (2019), “Antidiabetic potential of flavonoids from traditional Chinese medicine: A review”, Am J Chin Med 47(5), 933–957 [5] Chen, L.; Fan, C.; Zhang, Y.; Bakri, M.; Dong, H.; Morisseau, C.; Maddipati, K R.; Luo, P.; Wang, C Y.; Hammock, B D.; Wang, M H (2013), “Beneficial effects of inhibition of soluble epoxide hydrolase on glucose homeostasis and islet damage in a streptozotocin-induced diabetic mouse model”, Prostaglandins Other Lipid Mediators 104, 42−48 [6] Doan Tran Duy Cuong, Ha Tuan Dat, Nguyen Trung Duan, Pham Dinh Thuong, Nguyen Tan Phat, Mai Dinh Tri, Dang Van Son, Nguyen Thi Hoa, Pham Nguyen Kim Tuyen, Nguyen Kim Phi Phung (2019), “Isolation and characterization of six flavonoids from the leaves of Vietnam J Chem 57(4), 438-442 33 Sterculia foetida Linn”, [7] FaribaSharififar , GholamrezaDehghn-Nudeh , MansourMirtajaldini (2009), “Major flavonoids with antioxidant activity from Teucrium polium L.”, Food chemistry, 112(40), 885-888 [8] Gang Zhao, Guo-Wei Qin, Jie Wang, Wen-Jing Chu (2016), “Functional activation of monoamine transporters by luteolin and apigenin isolated from the fruit of Perilla frutescens (L.) Britt”, Neurochemistry International, 56(1), 168-176 [9] Gu, Q., Y.Y Chen, H Cui, D Huang, J.W Zhou, T.Z Wu, Y.P Chen, L.N Shi and J Xu (2013), “Chrysanolide A, an unprecedented sesquiterpenoid trimer from the flowers of Chrysanthemum indicum L”, RSC Adv 3, 10168–10172 [10] Imig, J D.; Zhao, X.; Zaharis, C Z.; Olearczyk, J J.; Pollock, D M.; Newman, J W.; Kim, I H.; Watanabe, T.; Hammock, B D (2005), “An orally active epoxide hydrolase inhibitor lowers blood pressure and provides renal protection in salt-sensitive hypertension”, Hypertension 46, 975−981 [11] I Ahmad, S Girgis, M M Hassanane (2017), “Impact of Chrysanthemum indicum on genotoxicity and hepatic and kidney function in anticancer drug adriamycin ex-posed mice”, Int J Biol Macromol 102, 813-821 [12] In, S.R., B.D Zhu and X.H Qin (2005), “Effects of Chrysanthemum indicum injection on proliferation of human tumor cells SMMC7721, PC3 and HL60”, Pharm Clin Chinese Mater Med 21, 39–40 [13] Kato, T., K Noguchi, Y Miyamoto, M Suekawa, M Aburada, E Hosoya and M Sakanashi (1987), “Effects of Chrysanthemum indicum Linn on coronary, vertebral, renal and aortic blood flows of the anesthetized”, Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie 285(2), 288–300 [14] Kim, C., M.C Kim, S.M Kim, D Nam, S.H Choi, S.H Kim, K.S Ahn, E.H Lee, J.S Hoon and K.S Ahn (2013), “Chrysanthemum indicum L extract induces apoptosis through suppression of constitutive STAT3 activation in human prostate cancer DU145 cells”, Phytother Res 27, 30–38 34 [15] Lee, H T.; Lee, K I.; Chen, C H.; Lee, T S (2019), “Genetic deletion of soluble epoxide hydrolase delays the progression of Alzheimer’s disease”, J Neuroinflammation 16, 267 [16] Lee, Y.S., E.J Son, S.H Kim, Y.M Lee, O.S Kim and D.S Kim (2017), “Synergistic uric acid-lowering effects of the combination of Chrysanthemum indicum Linne flower and Cinnamomum cassia (L.) J persl bark extracts”, Evid Based Complement Altern 2017, 9764843 [17] Li, Z.F., Z.D Wang, Y.Y Ji, S Zhang, C Huang, J Li and X.M Xia (2009), “Induction of apoptosis and cell cycle arrest in human HCC MHCC97H cells with Chrysanthemum indicum extract”, World J Gastroenterol 15, 4538–4546 [18] Liu, Y.; Dang, H.; Li, D.; Pang, W.; Hammock, B D.; Zhu, Y (2012), “Inhibition of soluble epoxide hydrolase attenuates high-fat-diet induced hepatic steatosis by reduced systemic inflammatory status in mice”, PLoS One 7, 39165 [19] Lou, H., P Fan, R.G Perez and H Lou (2011), “Neuroprotective effects of linarin through activation of the PI3K/Akt pathway in amyloid-β-induced neuronal cell death”, Bio Med Chem 19, 4021–4027 [20] Luo, P., Y Cheng, Z Yin, C Li, J Xu and Q Gu (2019), “Monomeric and dimeric cytotoxic guaianolide type sesquiterpenoids from the aerial parts of Chrysanthemum indicum”, J Nat Prod 82, 349–357 [21] Madhuri Venigalla , Erika Gyengesi , Gerald Münch (2015), “Curcumin and Apigenin - novel and promising therapeutics against chronic neuroinflammation in Alzheimer's disease”, Neural Regen Research 10(8), 1181 [22] MuhammadImran , AbdurRauf TareqAbu-Izneid , MuhammadNadeem Mohammad , AliShariati Imtiaz , AliKhan , AliImran Ilkay , ErdoganOrhan MuhammadRizwan , MuhammadAtif, Tanweer AslamGondal, Mohammad S.Mubarak (2019), “Luteolin, a flavonoid, as an anticancer agent: A review”, Biomedicine & Pharmacotherapy Biomedicine & Pharmacotherapy 35 Volume 112, 108612 [23] Nepali, S., J.Y Cha, H.H Ki, H.Y Lee, Y.H Kim, D.K Kim, B.J Song and Y.M Lee (2018), “Chrysanthemum indicum inhibits adipogenesis and activates the AMPK pathway in high-fat-diet induced obese mice”, The American Journal of Chinese MedicineVol 46, No 01, 119-136 [24] Nikolova, M and A Dzhurmanski (2009), “Evaluation of free radical scavenging capacity of extracts from cultivated plants”, Biotechnol Biotec Eq Volume 23, 109–111 [25] Ren, A.N., Z.G Wang, Z.C Lu, L.W Wang and Y.L Wu (1999), “Study on bacteriostasis and antivirotic activity of flosChrysanthemum indici”, Pharm Biotechno 6, 241–244 [26] Sang, J.C., M.K Sang, T.J Yong and H.S Chi (2013), “Hepatoprotective effect of water extract from Chrysanthemum indicum L flower”, Chin Med 8, 1– [27] Schmelzer, K R.; Kubala, L.; Newman, J W.; Kim, I H.; Eiserich, J P.; Hammock, B D (2005), “Soluble epoxide hydrolase is a therapeutic target for acute inflammation”, Proc Natl Acad Sci U S A 102, 9772−9777 [28] Seyed Fazel Nabavi , Nady Braidy , Olga Gortzi , Eduardo SobarzoSanchez , Maria Daglia , Krystyna Skalicka-Woźniak , Seyed Mohammad Nabavi (2017), “Luteolin as an anti-inflammatory and neuroprotective agent: A brief review”, Brain Research Bulletin Volume 119, Part A, 1-11 [29] Sofa Fajriah, Megawati, Akhmad Darmawan (2016), “Apigenin, an Anticancer Isolated from Macaranga gigantifolia Leaves”, J Trop Life Science; VOL 6, NO 1, 7-9 [30] Srikumar Chakravarthi1), Chong Fu Wen1) and Nagaraja Haleagrahara2) (2009), “Apoptosis and expression of bcl-2 in cyclosporine induced renal damage 36 and its reversal by beneficial effects of 4', 5', 7'- trihydroxyflavone”, Journal of Analytical Bio-Science, 32 (4) [31] Sung-Eun, KimSoojin, JunMinji Song, Joo-Hwan, Kim, Yoon-JaeSong (2012), “The extract of Chrysanthemum indicum Linne inhibits EBV LMP1 induced NF-κB activation and the viability of EBV-transformed lymphoblastoid cell lines”, Food and Chemical Toxicology Volume 50, Pages 1524-1528 [32] Wenming Cheng JunLi TianpaYou ChengmuHu (2005), “Anti-inflammatory and immunomodulatory activities of the extracts from the inflorescence of Chrysanthemum indicum Linné”, Journal of Ethnopharmacology 101(1-3), 334337 [33] Wu, X.L., X.X Feng, C.W Li, X.J Zhang, Z.W Chen, J.N Chen, X.P Lai, S.X Zhang, Y.C Li and Z.R Su (2014), “The protective effects of the supercritical-carbon dioxide fluid extract of Chrysanthemum indicum against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice via modulating Toll-like receptor signaling pathway”, Mediat Inflamm volume 2014, 246-407 [34] Yi Wang,Sunggun Lee,Hyun-Jae Jang,Xiang Dong Su,Heng-Shan Wang,Young Ho Kim (2019), “Inhibition potential of phenolic constituents from the aerial parts of Tetrastigma hemsleyanum against soluble epoxide hydrolase and nitric oxide synthase”, Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry 34(1), Pages 753-760 [35] Yan, Y.C., X.E Lou and H.D Jiang (1999), “Experimental studies on the anti oxidation effects of water extract from Chrysanthemum indicum”, L Chinese J Mod Appl Pharm, 16–18 [36] Yang Hoon Kim and Chang Hyun Jin (2020), “Inhibitory Activity of Flavonoids, Chrysoeriol and Luteolin-7-O-Glucopyranoside, on Soluble Epoxide Hydrolase from Capsicum chinense”, Biomolecules 10(2), 180 37 [37] Ying He and Mr Carlos I Medeiros (2011), “An assessment of the interaction for three Chrysanthemum indicum flavonoids and α-amylase by surface plasmon resonance”, Food science and nutrition PMC6977516 [38] Zhang, L N.; Vincelette, J.; Cheng, Y.; Mehra, U.; Chen, D.; Anandan, S K.; Gless, R.; Webb, H K.; Wang, Y X (2009), “Inhibition of soluble epoxide hydrolase attenuated atherosclerosis, abdominal aortic aneurysm formation, and dyslipidemia”, Arterioscler., Thromb., Vasc Biol 29, 1265−1270 [39] Zhang, Z.Y., X.P Fang, Z.H Diao, R.H Zeng and X.G Mei.(2006), “Antirespiratory syncytial virus effect of the extraction of Chrysanthemum indicum in vitro”, Pharm J Chinese People’s Liberat.Army 22, 37–40 38 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất CI-1 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất CI-1 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất CI-2 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất CI-2 39 40 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất CI-1 41 42 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất CI-1 43 44 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất CI-2 45 46 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất CI-2 47 ... ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HÀ MỸ DUYÊN Mã sinh viên: 1601164 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA PHÂN ĐOẠN CÓ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM SOLUBLE EPOXIDE HYDROLASE IN VITRO CỦA CÚC HOA VÀNG (CHRYSANTHEMUM INDICUM. .. thuốc có cúc hoa vàng 1.2 Các nghiên cứu cúc hoa vàng 1.2.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học cúc hoa vàng 1.2.2 Các nghiên cứu tác dụng sinh học cúc hoa vàng 1.3 Tổng quan enzym. .. hóa học phân đoạn có tác dụng ức chế enzym soluble epoxide hydrolase in vitro cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.). ” đƣợc thực với mục tiêu sau: 1) Đánh giá tác dụng ức chế enzym sEH in vitro