HOÀNG THỊ NGỌC ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN lập một số hợp CHẤT từ PHÂN đoạn ETHYL ACETAT THÂN THÙ DU bắc bộ (cornus hongkongensis, họ CORNACEAE) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dƣợc sĩ hà nội – 2020

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ NGỌC ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT THÂN THÙ DU BẮC BỘ (Cornus hongkongensis, HỌ CORNACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ NGỌC ÁNH 1501037 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT THÂN THÙ DU BẮC BỘ (Cornus hongkongensis, HỌ CORNACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Thu TS Hà Vân Oanh Nơi thực hiện: Khoa Hóa Thực vật – Viện Dƣợc liệu Bộ môn Dƣợc học cổ truyền HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ thầy cô, anh chị bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lịng kính trọng lời cảm ơn chân thành đến: TS Hà Vân Oanh, người tạo điều kiện, dẫn dắt em đến với ngày đầu tham gia nghiên cứu, hỗ trợ em suốt trình thực khóa luận ThS Nguyễn Thị Thu, người tận tình hướng dẫn, ln quan tâm, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình nghiên cứu thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Đỗ Thị Hà anh chị Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em q trình hồn thành đề tài Em xin gửi lời cám ơn đề tài Nghị định thư Việt - Hàn "Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hịa miễn dịch số thuốc Việt Nam" 349/QĐBKHCN tài trợ kinh phí để em thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu Thầy Cô Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện giúp đỡ em trình thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè ln bên đồng hành giúp đỡ em trình học tập hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2020 Sinh viên Hoàng Thị Ngọc Ánh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Cornus Linnaeus 1.1.1 Vị trí phân loại chi Cornus Linnaeus 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố, sinh thái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng sinh học 1.1.6 Công dụng .9 1.2 Tổng quan loài Cornus hongkongensis Hemsley 10 1.2.1 Đặc điểm thực vật 10 1.2.2 Phân bố 10 1.2.3 Tác dụng sinh học 11 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 12 2.2 Nguyên liệu, dụng cụ 12 2.2.1 Hóa chất, dung mơi .12 2.2.2 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 13 2.3 Nội dung nghiên cứu 13 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Phương pháp định tính 14 2.4.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc chất phân lập 18 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Kết định tính 20 3.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 21 3.2.1 Kết chiết xuất phân lập 21 3.2.2 Hợp chất CK-4C1 25 3.2.3 Hợp chất CK-7F 26 3.3 Bàn luận .27 3.3.1 Về kết định tính nhóm chất hữu có dược liệu 27 3.3.2 Về kết chiết xuất, phân lập chất .27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 30 Kết luận .30 Kiến nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ ALT Alanin aminotransferase ALP Alkalin phosphatase AST Aspartat aminotransferase BuOH n-Butanol 13 Carbon (13) nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hưởng từ C-NMR hạt nhân carbon 13) d doublet DCM Dichloromethan DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer (Phổ DEPT) DPPH 2,2-Diphenyl-1-picryhydrazyl ESI-MS Electrospray ionization mass spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa phun mù điện tử) EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol Gall Galloyl Glc Glucopyranosid GLUT4 Glucose transporter (Kênh vận chuyển glucose 4) HCC Hepatocellular carcinoma (Ung thư biểu mô tế bào gan) Hx n-Hexan HR-ESI-MS High resolution electrospray ionization mass spectrometry (Phổ khối phân giải cao) IC50 Half-maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) Me Methoxyl MeOH Methanol NIDDM Noninsulin-dependent diabetes mellitus (Bệnh đái tháo đường không phụ thuộc insulin) s singlet SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự Rha Rhamnosyl To Nhiệt độ TLTK Tài liệu tham khảo TNF-α Tumor necrosis factor alpha (Yếu tố hoại tử khối u alpha) TT Thuốc thử v/v Thể tích / thể tích δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất thân Thù du Bắc Bộ .20 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất CK-4C1 .25 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất CK-7F 26 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Hình 1.1 Cấu trúc số nhóm chất phân lập từ chi Cornus Hình 2.1 Dược liệu thân Thù du Bắc Bộ .12 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ thân Thù du Bắc Bộ .22 Hình 3.2 Sắc ký đồ cao tổng cao phân đoạn thân Thù du Bắc Bộ 23 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc thân Thù du Bắc Bộ 24 Hình 3.4 Sắc ký đồ chất phân lập từ phân đoạn EtOAc thân Thù du Bắc Bộ .24 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất CK-4C1 .26 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học hợp chất CK-7F 27 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, song song phát triển thuốc tân dược, lồi thảo dược đóng vai trị vơ quan trọng việc sản xuất dược phẩm nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp tiền chất cho việc tìm kiếm loại thuốc mới, có hoạt tính cao, chữa nhiều bệnh, kể bệnh hiểm nghèo [5] Chi Cornus chi thực vật rộng với khoảng 50 lồi, phân bố từ Châu Âu đến Đơng Nam Á… [75] Tại Châu Âu, tất phận loài Cornus mas L sử dụng điều trị bệnh khác tiêu chảy, viêm ruột, bệnh tả, sốt rét, sỏi thận, chảy máu… [29] Trong y học cổ truyền Trung Quốc, Cornus officinalis Siebold & Zuccarini (Sơn thù) vị thuốc dùng để bổ gan thận, thành phần 20 đơn thuốc mô tả Dược điển Trung Quốc [30] Rất nhiều loài khác thuộc chi nghiên cứu thành phần hóa học có nhiều hoạt tính sinh học bật, có tác dụng chống ung thư Ung thư bệnh nguy hiểm, chi phí điều trị đắt đỏ, tỷ lệ tử vong cao Theo thống kê tổ chức Ung thư tồn cầu (Globocal), năm 2018 có 18078957 ca mắc ung thư mới, ung thư phổi, ung thư vú, ung thư đại trực tràng chiếm tỷ lệ lớn Thù du Bắc Bộ (Cornus hongkongensis Hemsley.) loài thực vật thuộc chi Cornus, mọc vùng núi cao Ba Vì, Quảng Ninh, Sa Pa…[4] Tuy chưa có nghiên cứu loài này, số loài chi Cornus cho thấy tác dụng chống ung thư (ung thư vú, ung thư gan, ung thư biểu mô đại trực tràng….) Do đó, Thù du Bắc Bộ đưa vào danh sách đề tài Nghị định thư Việt - Hàn "Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thƣ điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam" 349/QĐ-BKHCN nhằm sàng lọc tác dụng ung thư miễn dịch Nhằm cung cấp liệu khoa học lồi góp phần phục vụ cho nghiên cứu sau có đề tài Nghị định thư Việt - Hàn, đề tài: “Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat thân Thù du Bắc Bộ (Cornus hongkongensis, họ Cornaceae)” thực với mục tiêu sau: Định tính nhóm chất thân Thù du Bắc Bộ Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat thân Thù du Bắc Bộ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Cornus Linnaeus 1.1.1 Vị trí phân loại chi Cornus Linnaeus Theo hệ thống phân loại tác giả Takhtajan 2009 [61], chi Cornus Linnaeus phân loại sau: Giới: Thực vật bậc cao (Plantae) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Cúc (Asteridae) Bộ: Sơn thù du (Cornales) Họ: Thù du (Cornaceae) Chi: Giác mộc (Cornus Linnaeus.) 1.1.2 Đặc điểm thực vật Các loài thuộc chi Cornus Linnaeus có dạng bụi, gỗ thảo Chồi non có lơng, nhẵn Cuống nhăn, phiến hẹp hình giáo, hình elip, hình thn hình trứng, nhẵn có lơng dày, có gân hai bên [75] Cụm hoa có bắc khơng Đài 4, hợp nhất; khơng có cưa, nhỏ, hình tam giác Tràng cánh, rời Chỉ nhị hình sợi, dài ngắn cánh hoa; bao phấn màu trắng vàng, màu xanh đỏ đỏ tía, hình elip hình thn, có ngăn [75] Quả hình cầu, hình trứng, hình thn hình elip Hạt hình cầu, hình trứng, hình elip, đơi khơng đối xứng, bề mặt nhẵn có gân, khơng bị rỗ [75] 1.1.3 Phân bố, sinh thái Chi Cornus có đặc điểm phân bố rộng khắp, từ vùng Bắc Mỹ, Châu Âu đến Châu Á Tại khu vực Đơng Nam Á, lồi thuộc chi Cornus tìm thấy Thái Lan, Việt Nam, Lào Myanmar [75] Tại Việt Nam, có sáu lồi thuộc chi Cornus L phát hiện, C controversa Hemsley Sa Pa; C hongkongensis Hemsley Sapa, Hải Ninh, dãy Bạch Mã núi Ba Vì, C gigantea (Hand - Maz.) Tard Sapa, C oblonga Wall Ba Vì Chư Yang Sin (Đắk Lắk), C oliogophlebia Merr Sapa C tonkinensis đèo Ô Quý Hồ, Sapa [4], [6] 56 2,3-Di-O-galloyl-ᴅ-glucose H Gall Gall H H C officinalis Gall Gall Gall H H C officinalis Gall Gall H H Gall C officinalis [26], [27], C capitata [63] (66) 57 1,2,3-Tri-O-galloyl-β-ᴅ-glucose (67) 58 1,2,6-Tri-O-galloyl-β-ᴅ-glucose (68) 59 1,2,3,6-Tetra-O-galloyl-β-ᴅ- Gall Gall Gall H Gall C officinalis [26], [27] Gall H H H H C officinalis, [26], [27], C capitata [63] glucose (69) 60 61 β-Glucogallin (75) 1,3,6-Tri-O-galloyl-β-ᴅ-glucose Gall H Gall H Gall C capitata (76) 62 63 1,2,3,4,6-Penta-O-galloyl-β-ᴅ- C officinalis, Gall Gall Gall Gall Gall C capitata, glucopyranoside (77) C alba Methyl tri-O-methylgallat (70) C officinalis [63], [49] [26], [27] 64 Dimethyl C officinalis hexamethoxydiphenat (71) 65 Trimethyl-octa-O- C officinalis methylvaloneat (72) 66 Acid gallic (73) C officinalis, [26], [27], C mas, [63], [49], C alba, [18] C capitata 67 7-O-Galloyl-ᴅ-sedoheptulose C officinalis [70] Acid 2-galloyl-4-caffeoyl-l- C alba, [38], [49] threonic (78) C controversa (74) 68 R=H 69 Acid 2,3-di-O-galloyl-4- C alba, caffeoyl-l-threonic (79) C controversa R = Gall 70 2,6-Di-O-galloyl- C alba [49] hamamelofuranosid (80) Irodoid R1 R2 R3 =O H Me β-OH H H 71 7-Dehydrologanin (82) 72 Acid loganic (83) 73 Dihydrocornin (93) H OH 74 Cornin (94) H =O C officinalis C mas [18] Me C capitata [62] Me C capitata, C [12], [62] officinalis 75 Loganin (96) β-OH H Me C mas, C officinalis [18] R 76 Morronisid (84) OH 77 7-α-Morronisid (85 α-OH 78 7-β-Morronisid (86) β-OH 79 7-α-O-Methyl-morronisid (87) α-OMe 80 7-β-O-Methyl-morronisid (88) β-OMe 81 7-α-O-Ethyl-morronisid (89) α-O-Ethyl 82 7-β-O-Ethyl-morronisid (90) β-O-Ethyl 83 Secologanin (81) C mas, C officinalis [18], [37] C officinalis [25] C mas, C officinalis [33] 84 Cornusid (91) C mas, C officinalis [18], [37], [60], [73] 85 Swerosid (92) C officinalis [12] 86 Cornusosid A (95) C florida [28] PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT CK-4C1 Cấu trúc hóa học hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.4 Phổ khối ESI-MS hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất CK-4C1 Phụ lục 3.4 Phổ khối ESI-MS hợp chất CK-4C1 PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT CK-7F Cấu trúc hóa học hợp chất CK-7F Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất CK-7F Phụ lục 4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) hợp chất CK-7F Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất CK-7F Phụ lục 4.4 Phổ khối HR-ESI-MS hợp chất CK-7F Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất CK-7F Phụ lục 4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) hợp chất CK-7F Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất CK-7F Phụ lục 4.4 Phổ khối HR-ESI-MS hợp chất CK-7F ...BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ NGỌC ÁNH 1501037 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT THÂN THÙ DU BẮC BỘ (Cornus hongkongensis, HỌ CORNACEAE) KHÓA LUẬN... phân lập hợp chất từ cao ethyl acetat cao phân đoạn lại (n-hexan n-butanol) từ thân Thù du Bắc Bộ  Nghiên cứu tác dụng sinh học cao tổng, cao phân đoạn hợp chất phân lập từ thân Thù du Bắc Bộ. .. phân đoạn thân Thù du Bắc Bộ 23 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc thân Thù du Bắc Bộ 24 Hình 3.4 Sắc ký đồ chất phân lập từ phân đoạn EtOAc thân Thù du Bắc Bộ