ĐẶT VẤN ĐỀ...................................................................................................1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN.............................................................................2 1.1. TỔNG QUAN VỀ CHI Zanthoxylum.....................................................2 1.1.1. Vị trí phân loại chi Zanthoxylum.......................................................2 1.1.2. Đặc điểm thực vật chi Zanthoxylum.................................................2 1.1.3. Phân bố chi Zanthoxylum..................................................................3 1.1.4. Thành phần hóa học của 1 số loài thuộc chi Zanthoxylum...............3 1.1.5. Tác dụng sinh học của chi Zanthoxylum L.......................................8 1.2. TỔNG QUAN VỀ CÂY HOÀNG MỘC LEO.....................................10 1.2.1. Đặc điểm thực vật...........................................................................10 1.2.2. Phân bố và thu hái...........................................................................11 1.2.3. Thành phần hóa học........................................................................11 1.2.4. Tác dụng của cây Hoàng mộc leo...................................................14 CHƯƠNG II. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU16 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU..............................................................16 2.2. NGUYÊN VẬT LIỆU...........................................................................16 2.2.1. Nguyên liệu.....................................................................................16 2.2.2. Dung môi và hóa chất.....................................................................16 2.2.3. Thiết bị nghiên cứu.........................................................................16 2.2.4. Dụng cụ nghiên cứu........................................................................17 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.........................................................17 2.3.1. Chiết xuất........................................................................................17 2.3.2. Phân lập các hợp chất......................................................................17
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGÔ THỊ NGỌC ÁNH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ CÂY HOÀNG MỘC LEO (Zanthoxylum scandens Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGÔ THỊ NGỌC ÁNH NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ CÂY HOÀNG MỘC LEO (Zanthoxylum scandens Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Cán hướng dẫn ThS Nguyễn Văn Liệu HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực khóa luận, em nhận nhiều giúp đỡ q báu thầy cơ, gia đình bạn bè để em hồn thành khóa luận cách tốt Đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Nguyễn Văn Liệu, người thầy ln tận tình hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Văn Thư cho em nhiều ý kiến q báu để hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám đốc Học Viện Quân Y, Viện Đào Tạo Dược tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt năm học tập trường Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô giáo kĩ thuật viên mơn Dược liệu – Dược học cổ truyền nói riêng tồn thể thầy giáo kĩ thuật viên Viện Đào Tạo Dược, Học Viện Qn Y ln dạy tận tình tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân bạn bè, người bên, động viên giúp đỡ em vượt qua khó khăn trình thực khóa luận Em xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quý báu này! Hà Nội, ngày 11 tháng năm 2019 Học viên Ngô Thị Ngọc Ánh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI Zanthoxylum 1.1.1 Vị trí phân loại chi Zanthoxylum .2 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Zanthoxylum .2 1.1.3 Phân bố chi Zanthoxylum 1.1.4 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Zanthoxylum .3 1.1.5 Tác dụng sinh học chi Zanthoxylum L .8 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÂY HOÀNG MỘC LEO 10 1.2.1 Đặc điểm thực vật 10 1.2.2 Phân bố thu hái 11 1.2.3 Thành phần hóa học 11 1.2.4 Tác dụng Hoàng mộc leo 14 CHƯƠNG II NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.2 NGUYÊN VẬT LIỆU 16 2.2.1 Nguyên liệu 16 2.2.2 Dung mơi hóa chất 16 2.2.3 Thiết bị nghiên cứu .16 2.2.4 Dụng cụ nghiên cứu 17 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .17 2.3.1 Chiết xuất 17 2.3.2 Phân lập hợp chất 17 2.3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập .19 2.4 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 19 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT 20 3.1.1 Chiết xuất 20 3.1.2 Phân lập hợp chất từ cắn phân đoạn n-hexan 20 3.2 NHẬN DẠNG CHẤT PHÂN LẬP 26 3.2.1 Nhận dạng hợp chất HM-1 26 3.2.2 Nhận dạng hợp chất HM-2 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .34 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết thu sau tiến hành sắc ký cột phân đoạn n-hexan 22 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C-NMR chất HM-1a .28 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ 1H- NMR 13C-NMR chất HM-2a .32 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 CTCT số tinh dầu phân lập từ sơ lồi thuộc chi Zanthoxylum Hình 1.2 CTCT số alcaloid phân lập từ số loài thuộc chi Zanthoxylum Hình 1.3 CTCT số coumarin phân lập từ số loài thuộc chi Zanthoxylum Hình 1.4 CTCT số flavonoid phân lập từ sơ lồi thuộc chi Zanthoxylum Hình 1.5 Hình ảnh Hoàng mộc leo .10 Hình 1.6 CTCT số chất phân lập từ Z.scandens 13 Hình 3.1 Sắc ký đồ TLC cắn n-hexan, hệ dung môi n-hexan: aceton (7:1) .21 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập chất từ phần cắn n-hexan .22 Hình 3.3 Sắc ký đồ TLC phân đoạn H3 khai triển với hệ dung mơi .23 Hình 3.4 Sắc ký đồ TLC chất HM-1, hệ dung môi DCM : EtOAc (30:1) 24 Hình 3.5 Sắc ký đồ TLC phân đoạn H4 khai triển với hệ dung mơi .24 Hình 3.6 Sắc ký đồ TLC chất HM-2, hệ dung môi n-hexan : EtOAc (3:1) 25 Hình 3.7 Phổ 1H-NMR hợp chất HM-1 26 Hình 3.8 Phổ 13C-NMR hợp chất HM-1 .31 Hình 3.9 CTCT β-sitosterol 29 Hình 3.10 Phổ 1H-NMR hợp chất HM-2 30 Hình 3.11 Phổ 13C-NMR hợp chất HM-2 .31 Hình 3.12 CTCT Sesamin .33 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Z Zanthoxylum CTCT Công thức cấu tạo SKLM Sắc ký lớp mỏng DCM Dicloromethan EtOAc Ethyl acetat Rf Hệ số di chuyển Cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance H-NMR 13 Cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 (Carbon -13 Nuclear Magnetic Resonance) HSQC Phổ tương tác gần 13C – 1H (Heteronuclear Single Quantum Correlation) HMBC Phổ tương tác xa 13C – 1H (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) s Tín hiệu đơn (singlet) d Tín hiệu đơi (doublet) dd Doublet of doublet t Tín hiệu ba (triplet) m Đa tín hiệu (multiplet) J Hằng số tương tác δ Độ dịch chuyển hóa học IC50 Nồng độ ức chế 50% EC50 Nồng độ có hiệu 50% C-NMR ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, với phát triển ngành tổng hợp hóa dược; cơng tác nghiên cứu, phát triển thảo dược sản phẩm có nguồn gốc từ thảo dược vấn đề thu hút quan tâm nhiều quốc gia giới Nước ta với diện tích khoảng 330.000 km2, nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa cận xích đạo nên nhiệt độ hàng năm cao (khoảng từ 22 – 35oC) Lượng mưa hàng năm lớn tạo cho nước ta hệ thực vật đa dạng phong phú, tiềm to lớn tài nguyên thuốc nói riêng tài nguyên dược liệu nói chung Theo số liệu thống kê gần Viện Dược liệu, hệ thực vật Việt Nam có khoảng 12.000 lồi [10]; đặc biệt tính đến năm 2017, Việt Nam ghi nhận 5.117 lồi, riêng thuộc nhóm thực vật bậc cao có mạch có tới 5.000 lồi có cơng dụng làm thuốc Đây nguồn tài nguyên thiên nhiên quý báu đất nước Bên cạnh đó, với hỗ trợ nhiều ngành khoa học công nghệ đại kỹ thuật tiên tiến, nhà khoa học phát nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học lồi thảo dược Nhiều hợp chất đưa vào ứng dụng cách có hiệu nhiều lĩnh vực cơng nghiệp dược phẩm, hương liệu mỹ phẩm thực phẩm Tuy nhiên, thực tế có nhiều thuốc sử dụng để chữa bệnh theo kinh nghiệm dân gian chưa nghiên cứu cách đầy đủ Cây Hoàng mộc leo (Zanthoxylum scandens Blume) bụi leo, phân bố chủ yếu vùng núi trung du nước ta Phần rễ, vỏ thân Hoàng mộc leo từ lâu sử dụng dân gian để chữa số bệnh đau bụng, đau răng, thấp khớp chấn thương Đặc biệt, số nghiên cứu giới, từ vỏ thân Z.scandens nhà khoa học phân lập 14 hợp chất có tác dụng ức chế phát triển virus HIV [22] Tuy nhiên có nghiên cứu Hoàng mộc leo nước giới Vì vậy, để góp phần cung cấp thêm thơng tin thành phần hóa học Hồng mộc leo, em tiến hành đề tài: “Nghiên cứu chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Hoàng mộc leo (Zanthoxylum scandens Blume)” với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ Hoàng mộc leo Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI Zanthoxylum 1.1.1 Vị trí phân loại chi Zanthoxylum Theo hệ thống phân loại thực vật Takhtajan (2009), chi Zanthoxylum có vị trí phân loại sau [40]: Giới thực vật (Plantae) Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Hoa Hồng (Rosidae) Bộ: Cam (Rutales) Họ: Cam (Rutaceae) Phân họ: Cửu lí hương (Rutoideae) Chi: Xuyên tiêu (Zanthoxylum) PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC 2: HÌNH ẢNH PHỔ NMR CỦA HỢP CHẤT HM-1 PHỤ LỤC 3: HÌNH ẢNH PHỔ NMR CỦA HỢP CHẤT HM-2 PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC HÌNH ẢNH PHỔ NMR CỦA HỢP CHẤT HM-1 Phổ 1H-NMR hợp chất HM-1 đo CDCl3 Phổ 13C-NMR hợp chất HM-1 đo CDCl3 Phổ HMBC-NMR hợp chất HM-1 đo CDCl3 Phổ HSQC-NMR hợp chất HM-1 đo CDCl3 Phổ NOESY hợp chất HM-1 đo CDCl3 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH PHỔ NMR CỦA HỢP CHẤT HM-2 Phổ 1H-NMR hợp chất HM-2 đo CDCl3 Phổ 13C-NMR hợp chất HM-2 đo CDCl3 Phổ HMBC-NMR hợp chất HM-2 đo CDCl3 Phổ HSQC-NMR hợp chất HM-2 đo CDCl3