ĐỒNG THỊ HIỀN NGHIÊN cứu đặc điểm THỰC vật, THÀNH PHẦN hóa học LOÀI TRÂN CHÂU BA vì (lysimachia baviensis c m hu) và TRÂN CHÂU THƯA (lysimachia laxa baudo) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỒNG THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC LỒI TRÂN CHÂU BA VÌ (Lysimachia baviensis C.M.Hu) VÀ TRÂN CHÂU THƯA (Lysimachia laxa Baudo) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỒNG THỊ HIỀN Mã sinh viên: 1601245 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC LỒI TRÂN CHÂU BA VÌ (Lysimachia baviensis C.M.Hu) VÀ TRÂN CHÂU THƯA (Lysimachia laxa Baudo) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng TS Nguyễn Quang Hưng Nơi thực Bộ môn Dược liệu Viện sinh thái tài nguyên sinh vật HÀ NỘI 2021 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp môn Dược liệu trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều sự quan tâm, động viên, bảo tận tình từ quý thầy cơ, gia đình bạn bè Lời em xin bày tỏ lời cảm ơn biết ơn sâu sắc đến DS NCS Nguyễn Thanh Tùng người thầy tận tụy trực tiếp hướng dẫn, nhiệt tình giúp đỡ dẫn dắt em từ ngày đầu bỡ ngỡ đến hết chặng đường thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quang Hưng – Viện sinh thái tài nguyên sinh vật tận tình dìu dắt, hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm nghiên cứu cho em trình thực Em xin gửi lời cảm ơn tới tồn thể thầy trường Đại học Dược Hà Nội nói chung mơn Dược liệu nói riêng tận tình dạy bảo truyền đạt kiến thức suốt năm tháng ngồi ghế nhà trường Em xin cảm ơn chân thành tới toàn thể anh chị, bạn bè làm việc em đồng hành, giúp đỡ động viên em thời gian thực khóa luận Cuối em xin bày tỏ yêu thương biết ơn vô hạn tới gia đình, người thân ln chỗ dựa tinh thần vững để tiếp thêm động lực giúp em cố gắng trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Đồng Thị Hiền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan phân loại, phân bố đặc điểm thực vật chi Lysimachia L .3 1.1.1 Lịch sử phân loại vị trí phân loại chi Lysimachia L 1.1.2 Phân bố chi Lysimachia L 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Lysimachia L 1.2 Tổng quan thành phần hóa học lồi Lysimachia L Việt Nam 1.2.1 Nhóm hợp chất Flavonoid .8 1.2.2 Nhóm hợp chất Saponin 1.2.3 Các hợp chất thuộc nhóm khác 10 1.3 Công dụng tác dụng sinh học của loài thuộc chi Lysimachia L 11 1.3.1 Công dụng 11 1.3.2 Tác dụng sinh học 11 1.4 Tởng quan lồi Lysimachia baviensis C.M.Hu Lysimachia laxa Baudo 11 1.4.1 Lysimachia baviensis C.M.Hu 11 1.4.2 Lysimachia laxa Baudo 12 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu .14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Phương pháp giám định tên khoa học 15 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu hiển vi 16 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu hóa học 16 2.3.3.1 Định tính nhóm chất hữu dược liệu phản ứng hóa học .16 2.3.3.2 Định lượng polyphenol toàn phần dịch chiết dược liệu 16 2.3.3.3 Định lượng flavonoid toàn phần dịch chiết dược liệu 16 2.3.3.4 Triển khai sắc ký lớp mỏng phân đoạn dịch chiết loài Lysimachia baviensis Lysimachia laxa 18 Chương THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm thực vật giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu 20 3.1.1 Đặc điểm thực vật loài Lysimachia baviensis .20 3.1.2 Đặc điểm thực vật Lysimachia laxa 21 3.2 Kết nghiên cứu đặc điểm hiển vi loài Lysimachia baviensis C.M.Hu Lysimachia laxa Baudo 22 3.2.1 Đặc điểm giải phẫu (thân, lá) loài nghiên cứu 22 3.2.2 Đặc điểm bột dược liệu loài nghiên cứu 25 3.3 Kết định tính nhóm chất hữu dược liệu phản ứng hóa học 27 3.4 Kết định lượng polyphenol toàn phàn dịch chiết dược liệu loài nghiên cứu 29 3.5 Kết định lượng flavonoid toàn phàn dịch chiết dược liệu loài nghiên cứu 29 3.6 Kết triển khai sắc ký lớp mỏng dịch chiết loài Lysimachia baviensis Lysimachia laxa 31 BÀN LUẬN .38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………………… 41 PHỤ LỤC Phụ lục Tiêu thực vật loài nghiên cứu Phụ lục Kết giám định tên khoa học loài nghiên cứu Phụ lục Các phản ứng hóa học dùng để định tính nhóm chất hữu dược liệu DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt L p/ư SKĐ TT UV Chữ đầy đủ (giải nghĩa) Lysimachia Phản ứng Sắc ký đồ Thuốc thử Ultra violet (tử ngoại) DANH MỤC CÁC BẢNG Bản Tên bảng g 1.1 Phân bố loài Lysimachia L Việt Nam 3.1 Kết định tính sơ nhóm chất dịch chiết loài nghiên cứu Trang 26 3.2 Kết đo độ hấp thụ của dãy dung dịch chuẩn từ G1 đến G5 28 3.3 Kết định lượng polyphenol toàn phần dược liệu 29 3.4 Kết đo độ hấp thụ của dãy dung dịch chuẩn từ Q1 đến Q5 30 3.5 Kết định lượng flavonoid toàn phần dược liệu 30 3.6 Bảng kết vết sắc ký đồ phân đoạm n-hexan của loài 31 3.7 Bảng kết vết sắc ký đồ phân đoạn ethyl acetat của lồ triển khai với hệ dung mơi (I) toluen - ethyl acetat - acid formic 33 (14:10:1) 3.8 Bảng kết vết sắc ký đồ phân đoạn ethyl acetat của lồi triển khai với hệ dung mơi ethyl acetat-acid formic-nước (8:1:1) 35 DANH MỤC CÁC HÌNH STT 1.1 1.2 Tên hình Cấu trúc hóa học của kaempferol, quercetin, myricetin Cơng thức saponin nhóm olean-12-en nhóm 13β,28eopxyoleananan Trang 10 1.3 Ảnh phân bố loài Lysimachia baviensis giới 13 1.4 Ảnh phân bố loài Lysimachia laxa giới 13 3.1 Ảnh chụp đặc điểm thực vật loài Lysimachia baviensis C.M.Hu 19 3.2 Ảnh chụp đặc điểm thực vật loài Lysimachia laxa Baudo 20 3.3 Ảnh vi phẫu thân Lysimachia baviensis C.M.Hu 21 3.4 Ảnh vi phẫu Lysimachia baviensis C.M.Hu 22 3.5 Ảnh vi phẫu thân L laxa 23 3.6 Ảnh vi phẫu L laxa 24 3.7 Một số đặc điểm bột loài Lysimachia baviensis C.M Hu 25 3.8 Một số đặc điểm bột loài Lysimachia laxa Hemsl 26 3.9 3.10 Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ nồng độ acid gallic chuẩn Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ nồng độ quercetin chuẩn 29 30 Ảnh chụp sắc kí đồ phân đoạn n-hexan của dịch chiết L baviensis 3.11 L laxa triển khai với hệ dung môi n-hexan-ethyl acetat (3:1) quan sát (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử, (b) ánh sáng trắng sau 31 phun thuốc thử, (c) UV 366 nm sau phun thuốc thử Ảnh chụp sắc kí đồ phân đoạn ethyl acetat của dịch chiết L baviensis 3.12 L laxa triển khai với hệ dung môi toluen-ethyl acetat-acid formic (14:10:1) quan sát (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử, (b) UV 33 366 nm sau phun thuốc thử Ảnh chụp sắc kí đồ phân đoạn ethyl acetat của dịch chiết L baviensis 3.13 L laxa triển khai với hệ dung môi ethyl acetat-acid formic-nước (8:1:1) quan sát (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử, (b) UV 35 366 nm trước phun thuốc thử, (c) ánh sáng trắng sau phun thuốc thử, (d) UV 366 nm sau phun thuốc thử Ảnh chụp sắc kí đồ phân đoạn nước của dịch chiết L baviensis L laxa triển khai với hệ dung môi Cloroform – methanol – nước 3.13 (65:35:10) quan sát (a) UV 254 nm trước phun thuốc thử, (b) UV 366 nm trước phun thuốc thử, (c) ánh sáng trắng sau phun thuốc thử 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Trân Châu (Lysimachia L.) thuộc họ Anh thảo (Primulaceae Vent.) bao gồm 180 loài ghi nhận toàn giới, phân bố chủ yếu vùng khí hậu ôn đới cận nhiệt đới Bắc bán cầu, vài loài châu Phi, châu Úc, Nam Mỹ vùng nhiệt đới Đơng Nam Á, có Việt Nam [15], [26], [33] Hiện nay, Việt Nam ghi nhận khoảng 20 loài thuộc chi Lysimachia L phân bố tỉnh từ Bắc vào Nam [6], [27], [28] Các loài thuộc chi Lysimachia L Việt Nam từ lâu dùng làm thuốc chữa bệnh dân gian như: Trân châu hoa chụm (L congestiflora Hemsl.) dùng để chữa viêm gan, lỵ, ho nhiều đờm, trẻ em co giật; Trân châu thưa (Lysimachia laxa Baudo) chữa giun đũa; Trân châu nhị dài (L lobeloides Wall.) dùng để chữa ho, vú sưng đau, cầm máu, tiêu viêm, thấp khớp; Trân châu ba (L insignis Hemsl.) có tác dụng điều huyết, huyết, hành khí, tán ứ, sơ phong thơng lạc, bình can; Trân châu ba (L baviensis C.M.Hu) dùng chữa thấp nhiệt, hồng đản, khó tiểu tiện, bạch đới, băng lậu Các tác dụng ghi lại nhiều tài liệu của Việt Nam sách “Từ điển thuốc Việt Nam” (Võ Văn Chi), “Danh lục thuốc Việt Nam” (Viện dược liệu) [4], [11] Mặc dù sử dụng làm thuốc từ lâu, thông tin đặc điểm thực vật thành phần hóa học của lồi thuộc chi Lysimachia L Việt Nam cịn hạn chế Trong 20 lồi Việt Nam có loài L congestiflora Hemsl., L clethroides DC., L fortunei Maxim, L candida Lindl., L sikokiana Miq nghiên cứu mặt hóa học nhóm nghiên cứu giới Gần đây, Nguyễn Quang Hưng Lê Ngọc Văn nghiên cứu đặc điểm hiển vi, định tính loài L vietnamensis, L congestiflora, L insignis L decurrens, sử dụng sắc ký lớp mỏng [7], [10] Hai lồi Trân châu ba (L baviensis C.M.Hu) Trân châu thưa (L laxa Baudo) mô tả sơ đặc điểm hình thái, sinh thái, tính vị tác dụng công dụng tài liệu Nhằm mục đích cung cấp liệu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học của loài Việt Nam, làm sở cho nghiên cứu sâu xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu này, khóa luận “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học của lồi Trân châu ba (Lysimachia baviensis C.M.Hu) Trân châu thưa (Lysimachia laxa Baudo)” thực Đề tài gồm mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm thực vật, vi học hai loài nghiên cứu - Định tính thành phần hóa học, định lượng polyphenol tồn phần flavoinid toàn phần dược liệu hai mẫu nghiên cứu Đánh giá thêm số tác dụng sinh học in vitro in vivo của dịch chiết toàn phần phân đoạn hai loài này, lựa chọn phân đoạn có tác dụng tốt làm đối tượng nghiên cứu hóa thực vật 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật dược, Nhà xuất Y học, tr 139155 Bộ môn Dược liệu (2019), Thực tập dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 64-133 Bộ môn Thực vật (2004), Thực tập thực vật nhận biết thuốc, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 1-98 Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam tập 1, NXB Y học, Hà Nội, tr 1064-1069 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1990), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nhà xuất Y học, tr 60-68 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam tập 1, Nhà xuất trẻ, tr 712-715 Nguyễn Quang Hưng, Lê Ngọc Văn, et al (2020), "Đặc điểm hiển vi định tính thành phần hóa học lồi Lysimachia congestiflora Hemsl Lysimachia vietnamensis L.K Phan & C.M Hu", Tạp chí Dược học, 5, tr 53-58 Nguyễn Viết Thân (2003), Kiểm nghiệm dược liệu phương pháp hiển vi, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 13-21 Trung tâm tài nguyên môi trường - Đại học quốc gia Hà Nội (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, tập 2, Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội, tr 513515 10 Lê Ngọc Văn (2020), Nghiên cứu phân biệt thực vật hóa học số loài Lysimachia L dùng làm thuốc Việt Nam, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 56-65 11 Viện dược liệu (2016), Danh lục thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr 977-979 Tài liệu Tiếng Anh 12 Anderberg Arne, Manns Ulrika, et al (2007), "Phylogeny and floral evolution of the Lysimachieae (Ericales, Myrsinaceae): Evidence from ndhF sequence data", Willdenowia, 37, pp 407-421 13 Blainski Andressa, Lopes Gisely Cristiny, et al (2013), "Application and Analysis of the Folin Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic Content from Limonium Brasiliense L", 18(6), pp 6852-6865 14 Guo Jian, Yu Dong-Lei, et al (1998), "Flavonol glycosides from Lysimachia congestiflora", Phytochemistry, 48(8), pp 1445-1447 15 Hu Chi‐Ming, Kelso S (1996), Flora of China Science Press, Beijing & Missouri Botanica Garden Press, St Louiss, pp 38-78 16 Jian-Jun Zhou, Xun-Lin Yu, et al (2015), "Lysimachia huangsangensis (Primulaceae), a New Species from Hunan, China", PLoS One, 10(7), pp 1-13 17 Jiang Yong, Peng Li, et al (2007), "Optimization of pressurized liquid extraction of five major flavanoids from Lysimachia clethroide", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43(1), pp 341-345 18 Jin-feng Wei, Zhi-juan Zhang, et al (2017), "Flavonoids in Different Parts of Lysimachia clethroides Duby Extracted by Ionic Liquid: Analysis by HPLC and Antioxidant Activity Assay", Journal of Chemistry, pp 1-10 19 Kohada Hiroshiau, Takeda Osamu, et al (1989), "Molluscicidal Triterpenoidal Saponin from Lysimachia sikokiana", Chemical & Pharmaceutical Bulletin 37(12), pp 3304-3305 20 Li Qi‐Ji, Zhu Zhu, et al (2014), "Four New 13, 28‐Epoxyoleanane Saponins from Lysimachia lobelioides", Helvetica Chimica Acta, 6(97), pp 839-846 21 Liang D., Hao Z Y., et al (2011), "Cytotoxic triterpenoid saponins from Lysimachia clethroides", J Nat Prod, 74(10), pp 2128-36 22 Liang Dong, Yan-Fei Liu, et al (2015), "Acylated flavonol glycosides and δtruxinate derivative from the aerial parts of Lysimachia clethroides", Phytochemistry Letters, 11, pp 116-119 23 Liang Dong, Hao Zhi-You, et al (2013), "Bioactive carboxylic acids from Lysimachia clethroides", Journal of Asian natural products research, 15(1), pp 59-66 24 Liang Dong, Luo Huan, et al (2013), "Lysilactones A–C, three 6H-dibenzo [b, d] pyran-6-one glycosides from Lysimachia clethroides, total synthesis of Lysilactone A", Tetrahedron, 69(9), pp 2093-2097 25 Liu Yan-li, Li-hua Tang, et al (2010), "Growth inhibitory and apoptosis inducing by effects of total flavonoids from Lysimachia clethroides Duby in human chronic myeloid leukemia K562 cells", Journal of Ethnopharmacology, 131(1), pp 1-9 26 Marr Kendrick L.B, Bohm Bruce A (1997), "A Taxonomic Revision of the Endemic Hawaiian Lysimachia (Primulaceae) Including Three New Species", University of Hawaii Press, 51(3), pp 254-287 27 Phan Ke Loc, Chi‐Ming Hu (2011), "Lysimachia vietnamensis and L verbascifolia spp nov.(Primulaceae) from Vietnam", Nordic Journal of Botany, 29(5), pp 601-604 28 Phan Ke Loc, L.V Averyanov , et al (2005), The diversity of the flora of Vietnam 19 Lysimachia vittiformis F.H Chen & C.M Hu (Primulaceae), new species occurrence for the flora, Genetics and Application 1, pp 22-24 29 Podolak Irma, Koczurkiewicz Paulina, et al (2013), "Cytotoxic triterpene saponins from the underground parts of six Lysimachia L species", Biochemical Systematics and Ecology, 47, pp 116-120 30 Ray J.D (1956), The genus Lysimachia in the New World, University of Illinois Press, Urbana, vol 24, pp 1-54 31 Sanjoy Gupta, Seal Tapan, et al (2017), "High frequency direct shoot organogenesis of leaf explants and a comparative evaluation of phytochemicals, antioxidant potential of wild vs in vitro plant extracts of Lysimachia laxa", Biotech, 7(4), pp 1-10 32 Sạnoy Gupta, Sarma Soneswar, et al (2013), "Antioxidant activity of different parts of Lysimachia laxa and Gymnocladus asamicus, a comparison using three different solvent extraction systems", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research 5(4), pp 33-40 33 Takhtajan Armen (2009), Flowering Plants, Springer, pp 212-216 34 Tong Yi-Hua, Xia Nian-He (2017), "Lysimachia rupestris FH Chen & CM Hu (Primulaceae): a new record for the flora of Vietnam and reconsideration of its taxonomical position", Adansonia, 39(2), pp 125-128 35 Tóth A., Végh K., et al (2016), "A new ultra-high pressure liquid chromatography method for the determination of antioxidant flavonol aglycones in six Lysimachia species", Nat Prod Res, 30(20), pp 2372-7 36 Toth Anita, Toth Gergo, et al (2014), "Polyphenol composition and antioxidant capacity of three Lysimachia species", Natural product communications, 9(10), pp 1473-1478 37 Xia Xin, Wei Xiaoyi, et al (2013), "Triterpenoid saponins from Lysimachia candida Lindl", Pharmacognosy Journal, 5(3), pp 119-122 38 Xu Qiong-ming, Liu Yan-li, et al (2012), "A new E-ring γ-lactone pentacyclic triterpene from Lysimachia clethroides and its cytotoxic activities", Chemistry of Natural Compounds, 48(4), pp 597-600 39 Yasukawa Ken, Sekine Hitoshi, et al (1989), "Two flavonol glycosides from Lysimachia fortunei", Phytochemistry, 28(8), pp 2215-2216 40 Zhang S L., Yang Z N., et al (2018), "Oleanane-type triterpenoid saponins from Lysimachia fortunei Maxim", Phytochemistry, 147, pp 140-146 41 Pham Hoang Hô, Hu Chi-Ming, et al (1992), Flore du Cambodge, du Laos, et du Viêtnam, Muséum national d'histoire naturelle (Paris) - Direction des bibliothèques et de la documentation, pp 115-137 42 Huang Xin-An, Cai Jia-Zhong, et al (2007), "Phytochemical investigation on Lysimachia fortunei", Zhongguo Zhongyao Zazhi, 32(7), pp 596-599 43 Liang Dong, Liu Yan-Fei, et al (2015), "Flavonol glycosides from Lysimachia clethroides", China journal of Chinese materia medica, 40(1), pp 103-107 44 Wan Jin-Fu, Yang Chang-Hong, et al (2011), "Chemical Constituents from Lysimachia clethroides", Natural Product Research and Development, 23(1), pp 59 45 Wang Ding-yong, Liu En-gui, et al (2007), "Study on the Chemical Constituents of Lysimachia congestiflora ", Subtropical Plant Science, 2, pp 19-21 46 Xia Xin, Liu MeiFang, et al (2014), "Flavonoid metabolites from Lysimachia fortunei Maxim", Journal of Tropical and Subtropical Botany 22(1), pp 93-95 47 Zhang Xiaorong, Peng Shulin, et al (1999), "Saponins from Lysimachia candida", Acta Botanica Sinica, 41(5), pp 534-536 48 Zhang Xiaorong, Peng Shulin, et al (1998), "Chemical Constituents of Lysimachia candida ", Chinese Journal of Applied Environmental Biology 2(2), pp 145-147 49 Zhang XR, Peng SL, et al (1999), "Studies on the constituents of Lysimachia congestiflora", Acta Pharmaceutica sinica, 34, pp 838-840 50 Zhi Ren Feng, Kun QIE Jian, et al (2001), "Studies on the Chemical Constituents of Lysimachia Clethroide Duby [J]", Pharmaceutical Journal of Chinese People's Liberation Army, 4, pp 31-34 Tài liệu tiếng Pháp 51 Pham Hoang Hô, Hu Chi-Ming, et al (1992), Flore du Cambodge, du Laos, et du Viêtnam, Muséum national d'histoire naturelle (Paris) - Direction des bibliothèques et de la documentation, pp 115-137 Tài liệu tiếng Trung 52 Ding Linfen, Yadong Guo, et al (1992), "珍珠菜黄酮类化学成分研究", Chinese Traditional Patent Medicine, (05), pp 827-831 53 Guo Jian, Xu Lizhen, et al (1998), "微谱求助 结构- 药学- 小木虫- 学术科研互 动社区", Natural Product Research and Development, 10(4), pp 12-14 54 Zhu Zhu, Zhu Qiao-ling, et al (2009), "微谱求助，还要来一发，坑爹的甾第二 个- 药学- 小木虫- 学术", Lishizhen Medicine and Materia Medica Research, (12), pp 2936-2938 Trang web 55 (2017), "Plant of the World online", Retrieved 5, 2021, from http://www.plantsoftheworldonline.org/taxon/urn:lsid:ipni.org:names:968505-1 56 (2017), "Plant of the Word online", Retrieved 5, 2021, from http://www.plantsoftheworldonline.org/taxon/urn:lsid:ipni.org:names:701196-1 57 (2013), "The Plant List", Retrieved http://www.theplantlist.org/tpl1.1/search?q=Lysimachia 5, 2021, from PHỤ LỤC Phụ lục Tiêu bản thực vật loài nghiên cứu Phụ lục Kết quả giám định tên khoa học loài nghiên cứu Phụ lục Các phản ứng hóa học dùng để định tính nhóm chất hữu dược liệu Phụ lục Tiêu bản thực vật lồi nghiên cứu Hình Tiêu thực vật lồi Lysimachia bavisensis C.M.Hu Hình 10 Tiêu thực vật loài Lysimachia laxa Baudo Phụ lục Kết quả giám định tên khoa học loài nghiên cứu Phụ lục Các phản ứng hóa học dùng để định tính nhóm chất hữu dược liệu a Định tính glycosid tim: Cho 20 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250 ml, thêm 60ml ethanol 25 %, lắc đều, ngâm 24 Lọc lấy dịch chiết, loại tạp (chất nhầy, chất nhựa) chì acetat 30% để dư Để lắng, lọc Loại chì acetat thừa dung dịch Na 2SO4 bão hịa đến khơng cịn tủa với Na2SO4 Lọc lấy dịch lọc vào bình gạn Lắc kỹ lần với hỗn hợp cloroform - ethanol (4:1), lần 20 ml, để lắng, gạn lấy dịch chiết, loại nước cách lọc qua Chia dịch chiết vào ống nghiệm sấy khô, đem cô cách thủy đến khô Cắn thu để làm phản ứng định tính - Phản ứng Liberman – Burchardt (phản ứng của khung steroid): Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 1ml anhydride acetic, lắc cho tan hết cắn Nghiêng ống 45° Cho từ từ theo thành ống 0,5 ml acid H2SO4 đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Nếu mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng xuất vòng màu tím đỏ; lớp chất lỏng phía có màu hồng, lớp có màu xanh Phản ứng dương tính - Phản ứng Baljet (phản ứng của vòng lacton cạnh): + Pha thuốc thử Baljet: Cho vào ống nghiệm to phần dung dịch acid picric 1% phần dung dịch NaOH 10% Lắc + Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử Baljet pha xuất màu đỏ cam phản ứng dương tính - Phản ứng Legal: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử natrinitroprussiat 0,5% giọt dung dịch NaOH 10% Lắc thấy xuất màu đỏ cam phản ứng dương tính - Phản ứng Keller-Kiliani (Phản ứng của phần đường 2,6 – desoxy): Cho vào ống nghiệm chứa cắn dược liệu 0,5 ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Thêm vài giọt dung dịch sắt III chlorid 5% pha acid acetic Lắc Nghiêng ống 450 Cho từ từ theo thành ống 0,5 ml acid sulphuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống nghiệm Nếu mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng xuất vòng màu tím đỏ; lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía có màu xanh phản ứng dương tính b Định tính alcaloid: Cho khoảng 10g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100 ml, thấm ẩm dung dịch amoniac đặc, đậy kín bình 30 phút Cho thêm 15 ml chloroform, lắc đều, ngâm 12 Lọc lấy dịch chiết cho vào bình gạn Sau lắc kỹ lần, lần với 10 ml dung dịch H2SO4 1N Để phân lớp, gạn lấy dịch chiết acid, cho vào ống nghiệm, ống ml dịch chiết acid + Ống 1: ml dịch chiết + giọt TT Mayer + Ống 2: ml dịch chiết + giọt TT Bouchardat + Ông 3: ml dịch chiết + giọt TT Dragendorff Phản ứng dương tính ống nghiệm xuất tủa c Định tính saponin: Quan sát tượng tạo bọt: Cho 0,5 g bột dược liệu vào ống nghiệm có dung tích 20 ml, thêm vào ml nước cất, đun sơi nhẹ, lọc nóng qua bơng vào ống nghiệm có dung tích 20 ml, thêm ml nước cất Bịt ống nghiệm ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc phút, để yên quan sát Nếu bọt cịn bền vững sau 15 phút sơ kết luận dược liệu có chứa saponin d Định tính anthranoid: Phản ứng Borntraeger: Lấy 3g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm 50 ml dung dịch H2SO4 10% Đun cách thủy sôi 15 phút Lọc nóng vào bình gạn Để nguội lắc với 5ml chloroform Gạn lớp chloroform để làm phản ứng Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết chloroform, thêm ml dung dịch NaOH 10% Lắc nhẹ Phản ứng dương tính lớp nước có màu đỏ sim e Định tính flavonoid: Cho 5g bột dược liệu vào bình nón 250 ml, thêm 100 ml ethanol 90%, đun cách thủy 10 phút, lọc nóng Dùng dịch lọc để làm phản ứng - Phản ứng với kiềm: Phản ứng với ammoniac: Nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khơ, quan sát ánh sáng thường thấy có màu vàng, sau hơ miệng lọ amoniac đặc, màu vàng tăng lên Phản ứng với NaOH: cho vào ống nghiệm ml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% Phản ứng dương tính dịch chiết chuyển từ vàng sang vàng đậm, thêm 1ml nước cất tủa tan màu vàng của dung dịch tăng thêm - Phản ứng Cyanidin: Cho ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm ít bột magie kim loại, nhỏ từ từ 4-5 giọt acid HCl đậm đặc Phản ứng dương tính dung dịch có màu từ hồng đến đỏ - Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt dung dịch FeCl3 5%, lắc nhẹ Phản ứng dương tính dịch chiết chuyển sang màu xanh đen - Phản ứng Diazo hóa: Cho ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa NaOH 10% Thêm vài giọt TT Diazoni, lắc đều, đun cách thủy vài phút phản ứng dương tính dung dịch xuất màu đỏ f Định tính coumarin: Cho 3g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100 ml, thêm 30 ml ethanol 90% Đun cách thủy sôi phút Lọc nóng Dịch lọc thu để làm phản ứng - Phản ứng mở, đóng vịng lacton: cho vào hai ống nghiệm mối ống ml dịch chiết cồn Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10% Ống 2: Để nguyên Đun sôi hai ống nghiệm, để nguội Quan sát có tượng sau dương tính: Ớng 1: Dung dịch có tủa vàng tủa đục có màu vàng Ống 2: Trong Thêm vào hai ống nghiệm, ống ml nước cất Lắc đều, thấy: Ống 1: Trong suốt Ống 2: Có tủa đục Acid hóa ống vài giọt HCl đặc, ống trở lại đục ống - Quan sát huỳnh quang của vết coumarin ánh sáng tử ngoại sau tác dụng với dung dịch kiềm: Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm Nhỏ tiếp vài giọt NaOH 5%, sấy nhẹ Che phần diện tích dịch chiết giấy lọc miếng kim loại (chìa khóa, đồng xu,…) chiếu tia tử ngoại vài phút Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp đèn tử ngoại thấy: phần không bị che có huỳnh quang sáng phần bị che Nếu tiếp tục chiếu tia tử ngoại, phần bị che sáng dần lên Sau vài phút, hai phần phát quang g Định tính tanin: Cho vào ống nghiệm lớn g bột dược liệu, thêm 10ml nước cất, đun sôi trực tiếp phút Lọc qua giấy lọc gấp nếp Lấy dịch lọc làm phản ứng sau: - Ống 1: ml dịch lọc, thêm giọt FeCl3 5% Phản ứng dương tính xuất tủa xanh đen - Ống 2: ml dịch lọc, thêm giọt chì acetat 10% Phản ứng dương tính xuất tủa bơng - Ớng 3: ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch gelatin 1% Phản ứng dương tính xuất tủa trắng h Định tính đường khử Cân khoảng 3g dược liệu cho vào ống nghiệm to, thêm 5ml nước cất, đun sôi Lọc qua giấy lọc vào ống nghiệm nhỏ Thêm 1ml dung dịch thuốc thử Felling A 1ml dung dịch Felling B Đun sôi cách thủy vài phút Phản ứng dương tính xuất tủa đỏ gạch i Định tính acid amin Cân khoảng 3g dược liệu cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml nước cất, đun sôi vài phút Lọc qua giấy lọc vào ống nghiệm nhỏ Thêm vài giọt thuốc thử Ninhydrin 3% Đun sôi cách thủy vài phút Phản ứng dương tính xuất màu xanh đến tím j Định tính sterol Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch chiết ether dầu hỏa Thêm vào ống nghiệm khoảng 1ml anhydride acetic, lắc kỹ cho tan hết cắn Để nghiêng ống nghiệm 450, thêm từ từ H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm Phản ứng dương tính mặt phân cách có vịng tím đỏ, lớp chất lỏng phía có màu xanh ... ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỒNG THỊ HIỀN Mã sinh viên: 1601245 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC LỒI TRÂN CHÂU BA VÌ (Lysimachia baviensis C.M.Hu) VÀ TRÂN CHÂU THƯA (Lysimachia laxa Baudo). .. đặc điểm hình thái thực vật, giám định tên khoa học loài nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu thân, lá, đặc điểm bột dược liệu loài nghiên cứu - Định tính thành phần hóa học mẫu nghiên cứu. .. (Lysimachia baviensis C.M.Hu) Trân châu thưa (Lysimachia laxa Baudo)? ?? thực Đề tài gồm mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm thực vật, vi học hai loài nghiên cứu - Định tính thành phần hóa học, định lượng