Khảo sát hàm lượng tinh dầu, các chất chiết được và hai hoạt chất z-ligustilide, axit ferulic của rễ cây đương quy và hoạt tính kháng nấm hại cây trồng của chúng

Trong bài viết này, hàm lượng tinh dầu, hàm lượng cặn chiết được bằng các dung môi khác nhau, hàm lượng hai hoạt chất chính Z-ligustilide và axit ferulic trong rễ của các mẫu A. acutiloba trồng ở tỉnh Lào Cai đã được khảo sát và so sánh với quy định trong Dược điển Việt Nam về mẫu dược liệu khô. Hàm lượng tinh dầu của rễ A. acutiloba nằm trong khoảng 0,06 -0,19%. Hàm lượng chất chiết xuất được xác định nằm trong khoảng 10,85 -35,78%.

SCIENCE - TECHNOLOGY P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG TINH DẦU, CÁC CHẤT CHIẾT ĐƯỢC VÀ HAI HOẠT CHẤT Z-LIGUSTILIDE, AXIT FERULIC CỦA RỄ CÂY ĐƯƠNG QUY VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM HẠI CÂY TRỒNG CỦA CHÚNG INVESTIGATION OF THE CONTENTS OF ESSENTIAL OIL, EXTRACTABLE MATERIALS, Z-LIGUSTILIDE AND FERULIC ACID FROM ANGELICA ACUTILOBA AND THEIR ANTIFUNGAL ACTIVITY AGAINST PLANT FUNGI Vũ Văn Điền1, Nguyễn Quang Tùng2, Nguyễn Hà Trang1, Đỗ Văn Phúc1, Nguyễn Thị Thanh Hương1, Lê Thị Hương3, Nguyễn Hữu Tùng4, Lê Đăng Quang1,* TÓM TẮT Cây Đương quy (Angelica acutiloba) di thực vào Việt Nam trồng phổ biến tỉnh Tây Bắc Lào Cai, Hịa Bình, Lai Châu Tây Ngun Đà Lạt, Lâm Đồng Trong y học cổ truyền, Đương quy coi sâm tố nữ sử dụng để điều trị chứng bệnh nội tiết, đầy bệnh khớp, bệnh da Ngồi ra, A acutiloba cịn có tác dụng kháng khuẩn điều trị đau bụng, co thắt giảm triệu chứng viêm phế quản Trong nghiên cứu này, hàm lượng tinh dầu, hàm lượng cặn chiết dung môi khác nhau, hàm lượng hai hoạt chất Z-ligustilide axit ferulic rễ mẫu A acutiloba trồng tỉnh Lào Cai khảo sát so sánh với quy định Dược điển Việt Nam mẫu dược liệu khô Hàm lượng tinh dầu rễ A acutiloba nằm khoảng 0,06 - 0,19% Hàm lượng chất chiết xuất xác định nằm khoảng 10,85 - 35,78% Hàm lượng Z-ligustilide, xác định phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao HPLC, nằm khoảng 83,33 - 198,45µg/g hàm lượng axit ferulic (130,79 - 488,05µg/g) phân tích HPLC Kết thử nghiệm ba chủng nấm gây bệnh thực vật Sclerotium rolfsii, Fusarium oxysporum Collectotrichum orbiculare cho thấy, cặn chiết thơ tinh dầu có khả kháng nấm in vitro tương đối mạnh chủng nấm thử nghiệm Ở nồng độ 500µg/mL, tinh dầu rễ A acutiloba ức chế mạnh phát triển sợi nấm S rolfsii (100%), F oxysporum (82 - 84%) C orbiculare (81 - 100%) thời điểm - ngày sau điều trị Các cặn chiết từ rễ A acutiloba cho thấy khả ức chế khác phát triển loại nấm thử nghiệm nổng độ thử nghiệm 1000µg/mL Từ khóa: Đương quy, Angelica acutiloba, GC-MS, HPLC, Z-ligustilide, axit ferulic, hoạt tính kháng nấm, nấm gây bệnh thực vật ABSTRACT Angelica acutiloba was introduced to Vietnam and popularly grown in the Northwest provinces such as Lao Cai, Hoa Binh, Lai Chau and the Central Highlands such as Da Lat, Lam Dong In traditional medicine, it is considered female ginseng and is used to treat endocrine diseases, flatulence and joint diseases, skin diseases In addition, A acutiloba has antibacterial effects and can treat abdominal pain, muscle spasms, and relieve symptoms of bronchitis In this study, the content of essential oils, the content of extracts obtained with different solvents (extract residues), the content of two main active ingredients Z-ligustilide and ferulic acid in the roots of the samples of A acutiloba grown in the province Lao Cai has been surveyed and compared with the provisions of the Vietnamese Pharmacopoeia V The essential oil content of A acutiloba root is between 0.06 - 0.19% The content of extracts is determined to be between 10.85 - 35.78% The Z-ligustilide content was in the range 83.33 - 198.45µg/g (wt/dwt) and ferulic acid content was from 130.79 to 488.05µg/g (wt/dwt) based on the analysis of HPLC Test results for three fungal strains of plant pathogens, Sclerotium rolfsii, Fusarium oxysporum and Colletotrichum orbiculare, showed that the crude extracts and essential oils were relatively strong against the tested strains of fungi in vitro At a concentration of 500µg/mL, A acutiloba root essential oil strongly inhibited mycelium growth of S rolfsii (100%), F oxysporum (82 - 84%) and C orbiculare (81 - 100%) at - days after treatment The residues from A acutiloba roots also showed different inhibitory abilities on the growth of tested fungi at 1000µg/mL Keywords: Angelica acutiloba, GC-MS, HPLC, antifungal activity, plant disease Trung tâm Nghiên cứu triển khai Hoạt chất Sinh học, Viện Hóa học Cơng nghiệp Việt Nam Trường Đại học Công nghiệp Hà Nội Viện Thổ nhưỡng Nơng hóa Khoa Dược, Trường Đại học Phenikaa * Email: ledangquang2011@gmail.com Ngày nhận bài: 15/01/2021 Ngày nhận sửa sau phản biện: 24/6/2021 Ngày chấp nhận đăng: 25/10/2021 Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn Vol 57 - No (Oct 2021) ● Journal of SCIENCE & TECHNOLOGY 127 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ MỞ ĐẦU Đương quy có tên khoa học Angelica acutiloba, lồi thực vật có hoa thuộc họ Hoa tán (Apiaceae) Loài (Oliv.) Diels mô tả khoa học lần năm 1900 Đương quy vị thuốc bắt nguồn từ Trung Quốc, trồng nơi có khí hậu mát mẻ độ cao 1000m Ở Việt Nam, Đương quy trồng từ năm 1960, loài trồng phổ biến tỉnh Tây Bắc Lào Cai, Hịa Bình, Lai Châu Tây Ngun Đà Lạt, Lâm Đồng Đương quy có vị ngọt, đắng, cay, mùi thơm, tính ấm, có tác dụng bổ huyết Trong y học cổ truyền, Đương quy coi sâm tố nữ dùng để chữa bệnh nội tiết, rối loạn phụ khoa đau bụng kinh, đau vùng chậu, phục hồi rối loạn sau sinh Ngoài ra, Đương quy sử dụng để bổ huyết trị bệnh thiếu máu, tăng huyết áp, bệnh tim mạch, viêm nhiễm, nhức đầu, nhiễm trùng, đau thần kinh [1] Rễ Đương quy có hàm lượng tinh dầu axit tự tương đối cao, chứng minh loại thuốc Đông y hiệu giúp giảm đau có tác dụng chống viêm [1] Lá Đương quy chứa 0,2 - 0,6% tinh dầu, lượng lớn Z-ligustilide, vitamin B12, vitamin E - hoạt chất có tác dụng chống oxy hóa [1] Trong báo này, tiến hành xác định số thông số Đương quy như: hàm lượng tinh dầu, hàm lượng chất chiết (cặn chiết), hàm lượng Z-ligustilide, hàm lượng axit ferulic khảo sát hoạt tính kháng nấm tinh dầu cặn chiết thu từ rễ Đương quy THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu Nguyên liệu sử dụng 15 mẫu rễ Đương quy thu hái tỉnh Lào Cai Mẫu gửi đến phân tích Trung tâm Nghiên cứu khoa học Hoạt chất Sinh học, Viện Hóa học Cơng nghiệp Việt Nam thời gian năm 2019 Các chủng nấm sử dụng nghiên cứu bao gồm: Fusarium oxysporum (gây bệnh héo rũ chết vàng), Sclerotium rolfsii (gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng, thối thân), Colletotrichum orbiculare spp (gây bệnh thán thư) cung cấp Trung tâm Nghiên cứu triển khai Hoạt chất Sinh học - Viện Hóa học Cơng nghiệp Việt Nam Chất chuẩn Z-ligustilide axit ferulic cung cấp từ phịng thí nghiệm Hóa Dược, Khoa Dược, Đại học Phenikaa 2.2 Xác định hàm lượng tinh dầu mẫu Đương quy [2] Chuẩn bị 15 mẫu Đương quy theo khối lượng quy định, cân xác đến 0,01g Sử dụng 1ml xylen cho vào nhánh bên dụng cụ chưng cất Chuyển phần mẫu nguyên liệu cần chưng cất tinh dầu vào bình cầu, nối lại bình cầu với hệ thống ngưng tinh dầu sinh hàn ngưng tụ (thiết bị chưng cất tinh dầu Clevenger) Làm nóng bình cầu điều chỉnh tốc độ chưng cất đến 2ml/phút 3ml/phút Tiếp tục chưng cất, tiến hành 6h mẫu xác định tinh dầu Tháo nguồn nhiệt để nguội Sau 10 phút, đọc thể tích pha hữu (hỗn hợp tinh dầu xylen) thu ống đong P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 Hàm lượng tinh dầu, theo công thức sau: w = 100 đó: wVO: Tính mililít 100g sản phẩm khơ; Vo: Thể tích xylen đo được, tính mililít (ml); V1: Tổng thể tích tinh dầu xylen đo được, tính mililít (ml); M: Khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); w1: Độ ẩm xác định được, tính phần trăm khối lượng Xác định độ ẩm: Cân 10g mẫu thử chuẩn bị, cho toàn vào hộp lồng nắp vào tủ sấy nhiệt độ 103°C Đậy nắp ngang vào hộp, lấy toàn khỏi tủ sấy, để nguội đến nhiệt độ phịng bình hút ẩm Cơng thức xác định độ ẩm: w = 100 Trong đó: W1: Độ ẩm xác định được, tính phần trăm khối lượng G1: Khối lượng hộp nguyên liệu trước sấy, tính gam (g) G2: Khối lượng hộp nguyên liệu sau sấy, tính gam (g) G: Khối lượng nguyên liệu trước sấy, tính gam (g) 2.3 Xác định hàm lượng chất chiết (cặn chiết) mẫu Đương quy phương pháp chiết lạnh [3] Cân xác 4g bột Đương quy có cỡ bột thơ cho vào bình nón 250ml Thêm xác 100ml Methanol, đậy kín, ngâm lạnh, lắc 6h đầu, sau để yên 18h Lọc qua phễu lọc khơ vào bình hứng khơ thích hợp Lấy xác 20ml dịch lọc cho vào cốc thủy tinh cân bì trước, quay đến khơ Sấy cặn 105°C 3h, lấy để nguội binhg hút ẩm 30 phút, cân nhanh để xác định khối lượng cặn sau sấy, tính phần trăm lượng chất chiết methanol theo khối lượng Đương quy khơ Cơng thức tính hàm lượng chất chiết được: w = 100 Trong đó: W0: Hàm lượng chất chiết được, tính phần trăm khối lượng M: Khối lượng dược liệu khơ đem chiết, tính gam (g) m: Khối lượng cặn chiết thu được, tính gam (g) Thao tác tương tự với dung môi hexan, axeton, etanol etyl axetat để thu cặn chiết tương ứng với loại dung môi hexan, axeton, etanol etyl axetat 2.4 Xác định hàm lượng Z-ligustilide mẫu Đương quy phương pháp HPLC Sử dụng phương pháp sắc ký HPLC để phân tích mẫu Đương quy có chứa Z-ligustilide xây dựng dựa 128 Tạp chí KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ● Tập 57 - Số (10/2021) Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn SCIENCE - TECHNOLOGY P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 phương pháp phân tích định lượng Lu cộng [4] Cân xác 2,7mg chất chuẩn Z-ligustilide, hoà tan với 1ml MeOH dung dịch có nồng độ 2,7mg/ml Bên cạnh đó, mẫu Đương quy chuẩn bị cách nghiền nhỏ cân xác 2,0g mẫu cho vào bình Soxhlet Thêm 200ml MeOH tiến hành chiết tới dịch chiết khơng cịn màu Lọc lấy dịch thu hồi tồn dung mơi thiết bị quay áp suất giảm thu cắn Hòa tan lại cắn 20ml MeOH cho vào bình định mức 25ml, thêm MeOH đến vạch Lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm (bỏ 5ml dịch lọc đầu) dung dịch tiêm sắc ký Khảo sát điều kiện chạy sắc ký: sau khảo sát điều kiện cuối điều kiện sắc ký lựa chọn sau: Máy sắc ký lỏng hiệu cao Agilent 1260 Infinity Cột sắc ký: Agilent Eclipse Plus C18 (ϕ 4,6 × 100mm; cỡ hạt 3,5μm) Detector DAD phát bước sóng 320nm Tốc độ dịng: 1,0ml/phút Thể thích bơm mẫu: 10µl Nhiệt độ: 25oC Dung môi pha mẫu: methanol Pha động: acetonitril (kênh A) sử dụng 1,0% axit acetic/H2O (kênh B) vạch Lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm (bỏ 5ml dịch lọc đầu) dung dịch tiêm sắc ký Khảo sát điều kiện chạy sắc ký: sau khảo sát điều kiện cuối điều kiện sắc ký lựa chọn sau: Máy sắc ký lỏng hiệu cao Agilent 1260 Infinity Cột sắc ký: Agilent Eclipse Plus C18 (ϕ 4,6 × 100mm; cỡ hạt 3,5μm) Detector DAD phát bước sóng 320nm Tốc độ dịng: 0,5ml/phút Thể thích bơm mẫu: 10µl Nhiệt độ: 25oC Dung môi pha mẫu: Methanol Pha động: Acetonitril (kênh A): 0,5% axit acetic/H2O (kênh B) = 25:75 Sắc ký đồ HPLC thu (hình 2) cho thấy pic chất axit ferulic tách rõ ràng, có thời gian lưu khoảng phút thứ (tR~5 phút), nhiễu thấp mẫu chuẩn mẫu thử Như dùng điều kiện sắc ký lựa chọn để phân tích định tính, định lượng chất axit ferulic dược liệu Kết hợp với điều kiện tham khảo cho phân tích định lượng axit ferulic Dược điển Việt Nam V [3] với điều kiện phân tích xây dựng, thu kết phân tích sau: Sắc ký đồ HPLC thu (hình 1) cho thấy pic chất Z-ligustilide tách rõ ràng, có thời gian lưu khoảng phút thứ 20 (tR~20 phút), nhiễu thấp mẫu chuẩn mẫu thử Như dùng điều kiện sắc ký lựa chọn để phân tích định tính, định lượng chất Z-ligustilide dược liệu A A B Hình Sắc ký đồ chất chuẩn axit ferulic (A) mẫu thử (B) B 2.6 Thử nghiệm hoạt tính kháng nấm tinh dầu cặn chiết mẫu Đương quy Hình Sắc ký đồ mẫu chuẩn ligustilide (A) mẫu dược liệu (B) 2.5 Xác định hàm lượng axit ferulic mẫu Đương quy phương pháp HPLC Chuẩn bị mẫu chuẩn: Cân xác 1,0mg chất chuẩn axit ferulic, hồ tan với 1ml MeOH dung dịch có nồng độ 1mg/ml Sau pha lỗng mẫu thành nồng độ 50,0µg/ml; 100,0µg/ml; 250,0µg/ml; 500,0µg/ml 1000,0µg/ml, lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm dãy dung dịch chuẩn Chuẩn bị mẫu thử: Tán nhỏ mẫu dược liệu Cân 2,0g mẫu bột dược liệu cho vào bình Soxhlet Thêm 200ml MeOH tiến hành chiết tới dịch chiết không cịn màu Lọc lấy dịch thu hồi tồn dung môi thiết bị cô quay áp suất giảm thu cắn Hòa tan lại cắn 20ml MeOH cho vào bình định mức 25ml, thêm MeOH đến Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn Đánh giá hiệu kháng nấm mẫu thử cặn chiết điều kiện phịng thí nghiệm (in vitro): sử dụng phương pháp poisoned food technique [5] Hoạt tính kháng nấm thử đĩa thạch petri với môi trường PDA Các chủng nấm sau phân lập làm thuần, dùng dụng cụ đục lỗ có đường kính 4mm tiến hành đục vành ngồi đường kính tán nấm sau đặt lên mơi trường PDA trộn với mẫu thử Mẫu thử cặn chiết phân tán Tween 0,05% methanol 2% DMSO 2% nồng thử nghiệm sau trộn vào mơi trường PDA nóng chảy 50oC, khử trùng để nguội Mỗi nồng độ khác thử nhắc lại lần môi trường PDA Chủng nấm sau đưa lên thạch đĩa petri nuôi cấy nhiệt độ 25oC Theo dõi phát triển nấm thời gian - ngày Quan sát hình thành vùng kháng nấm đo đường kính tản nấm Hiệu ức chế tính theo cơng thức: Cv (%) = 100 × Vol 57 - No (Oct 2021) ● Journal of SCIENCE & TECHNOLOGY 129 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 Trong đó: Dc: Đường kính tản nấm đĩa petri đối chứng; 4: Đường kính khoanh agar-nấm, mm; Dt: Đường kính tản nấm đĩa petri trộn mẫu thí nghiệm, mm KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hàm lượng hoạt tính kháng nấm tinh dầu mẫu Đương quy 3.1.1 Hàm lượng tinh dầu mẫu Đương quy Hình Hàm lượng tinh dầu 15 mẫu Đương quy Trong 15 mẫu Đương quy phân tích, kết cho thấy hàm lượng tinh dầu trung bình đạt 0,157 ± 0,013% Trong đó, mẫu mẫu có hàm lượng tinh dầu cao đạt 0,19 ± 0,01%, mẫu 13 mẫu 14 có hàm lượng tinh dầu thấp đạt 0,11 ± 0,02% (hình 3) Theo báo cáo Seong-Kyu Choi cộng (2005) [1], Đương quy trồng Hàn Quốc có hàm lượng tinh dầu đạt 0,2 - 0,6%, cao nhiều so với hàm lượng tinh dầu Đương quy trồng Việt Nam Hình Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm Fusarium oxysporum tinh dầu Đương quy nồng độ 500 1000ppm sau ngày thí nghiệm Control: đối chứng 3.1.2 Hoạt tính kháng nấm tinh dầu Đương quy Kết bảng cho thấy, tinh dầu Đương quy nồng độ 500 1000ppm ức chế hoàn toàn phát triển hai chủng nấm F oxysporum S rolfsii (100%) (hình 4, 5) Hình Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm C Orbiculare tinh dầu Đương quy nồng độ 500 1000ppm sau ngày thí nghiệm Control: đối chứng Hình Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm S rolfsii tinh dầu Đương quy nồng độ 500 1000ppm sau ngày thí nghiệm Control: đối chứng Tiến hành nghiên cứu hiệu ức chế nồng độ 500ppm mẫu tinh dầu Đương quy với SR-BV, FOAH COK Kết cho thấy, với SR-BV, hiệu ức chế đạt 100% sau ngày nuôi cấy; với FOAH, hiệu ức chế sau ngày nuôi cấy đạt 84% 82%; với COK, hiệu ức chế đạt 100% sau ngày nuôi cấy đạt 81% sau ngày nuôi cấy Hiệu ức chế sau ngày giảm chế tự thích ứng nấm chất thử nghiệm Từ kết thí nghiệm cho thấy, hiệu ức chế nồng độ 500ppm với SR-BV đạt cao nhất, với COK tương đối cao với FOAH cho hiệu ức chế (bảng 1) 130 Tạp chí KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ● Tập 57 - Số (10/2021) Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn SCIENCE - TECHNOLOGY P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 Bảng Hiệu ức chế nồng độ 500ppm tinh dầu Đương quy Tên mẫu thử Tinh dầu Đương quy Hiệu ức chế nồng độ 500ppm (%) SR-BV FOAH COK DAT 3DAT 2DAT DAT 2DAT DAT 100 100 84 82 100 Đương quy Kết cho thấy tất mẫu chất chiết nồng độ 1000ppm ức chế tương đối tốt phát triển ba chủng nấm F oxysporum, S rolfsii C orbiculare (hình 8, 9, 10) 81 DAT: ngày sau nuôi cấy; FO-AH: nấm F oxysporum; SR-BV: nấm S rolfsii COK: nấm Colletotrichum orbiculare SR-BV xác định sau - ngày tốc độ phát triển nhanh nấm 3.2 Hàm lượng hoạt tính kháng nấm chất chiết mẫu Đương quy 3.2.1 Hàm lượng chất chiết mẫu Đương quy Trong 15 mẫu Đương quy phân tích, kết cho thấy hàm lượng chất chiết dung môi methanol từ rễ Đương quy trung bình đạt 31,059 ± 0,607% Trong đó, mẫu có hàm lượng chất chiết thấp đạt 15,78 ± 0,41%, mẫu có hàm lượng chất chiết cao đạt 38,06 ± 0,06% (hình 7) Hàm lượng xấp xỉ so với quy định dược điển Việt Nam hàm lượng chất chiết rễ Đương quy khơng 40,0% tính theo dược liệu khơ kiệt Hình Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm Fusarium oxysporum chất chiết dung môi methanol, hexan, ethanol, axeton, etyl axetat từ rễ Đương quy nồng độ 1000ppm sau ngày thí nghiệm MeOH: chất chiết dung môi methanol; He: chất chiết dung môi hexan; Etyl: chất chiết dung môi etanol; Axeton: chất chiết dung môi axeton; EA: chất chiết dung mơi etyl axetat; Control: đối chứng Hình 10 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm Collectotrichum orbiculare chất chiết dung môi methanol, hexan, ethanol, axeton, etyl axetat từ rễ Đương quy nồng độ 1000ppm sau ngày thí nghiệm MeOH: chất chiết dung môi methanol; He: chất chiết dung môi hexan; Etyl: chất chiết dung môi etanol; Axeton: chất chiết dung môi axeton; EA: chất chiết dung môi etyl axetat; Control: đối chứng Bảng Hiệu ức chế nồng độ 1000ppm chất chiết từ Đương quy Chất chiết Đương quy với dung mơi Hình Hàm lượng chất chiết dung môi methanol từ rễ 15 mẫu Đương quy 3.2.2 Hoạt tính kháng nấm chất chiết mẫu Đương quy Hình Kết thử nghiệm hoạt tính kháng nấm Sclerotium rolfssi chất chiết dung môi methanol, hexan, ethanol, axeton, etyl axetat từ rễ Đương quy nồng độ 1000ppm sau ngày thí nghiệm MeOH: chất chiết dung môi methanol; He: chất chiết dung môi hexan; Etyl: chất chiết dung môi etanol; Axeton: chất chiết dung môi axeton; EA: chất chiết dung môi etyl axetat; Control: đối chứng Tiến hành nghiên cứu hoạt tính kháng nấm F oxysporum, S rolfsii C orbiculare chất chiết từ Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn Hiệu ức chế nồng độ 1000ppm (%) SR-BV FOAH COK 2DAT 3DAT 2DAT 4DAT 2DAT 4DAT Chất chiết dung 64,84 63,60 25,28 19,91 39,92 38,16 môi MeOH Chất chiết dung 86,26 78,44 41,53 39,61 63,12 57,77 môi Hex Chất chiết dung 75,27 64,90 35,44 31,28 53,23 52,34 môi Etanol Chất chiết dung 70,33 61,86 21,44 18,61 43,35 42,68 môi Axeton Chất chiết dung 91,94 86,46 68,40 57,36 66,92 60,78 môi Etyl axetat DAT: ngày sau nuôi cấy; FO-AH: nấm F oxysporum; SR-BV: nấm S rolfsii COK: nấm C orbiculare Tiến hành nghiên cứu hiệu ức chế nồng độ 1000ppm chất chiết từ rễ Đương quy với SR-BV, FOAH COK Kết cho thấy (bảng 2), chất chiết từ rễ Đương quy thể hiệu ức chế tốt với SR-BV sau đến ngày nuôi cấy, với FOAH COK cho hiệu ức chế trung bình Trong đó, chất chiết dung mơi etyl axetat cho hiệu ức chế cao với tất chủng nấm, đạt 91,94%, 68,40% 66,92% với chủng nấm SR-BV, FOAH, COK sau ngày nuôi cấy Vol 57 - No (Oct 2021) ● Journal of SCIENCE & TECHNOLOGY 131 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ 3.3 Hàm lượng Z-ligustilide mẫu Đương quy Hàm lượng Z-ligustilide mẫu Đương quy xác định phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao HPLC Đây phương pháp quan trọng việc xác định hàm lượng từ đánh giá chất lượng mẫu cần phân tích Kết thu thể hình 11 Z-ligustilde biết có tinh dầu Đương quy, nghiên cứu hoạt chất có tác dụng chống ung thư, chống viêm, chống độc, tác dụng bảo vệ thần kinh [5] Hình 11 Hàm lượng Z-ligustilde 15 mẫu Đương quy Trong 15 mẫu Đương quy phân tích, kết cho thấy hàm lượng Z-ligustilide trung bình 124,3 ± 4,92µg/g (chất khơ: CK) Trong đó, mẫu 15 có hàm lượng Z-ligustilide thấp đạt 105,6 ± 2,36µg/g (CK), mẫu có hàm lượng Z-ligustilde cao đạt 198,5 ± 9,00µg/g (CK) Trong báo cáo Kelvin Chan cộng [6] (2004), hàm lượng Z-ligustilide Đương quy trồng Hàn Quốc trung bình đạt 285,00 ± 3,42µg/g, cao nhiều so với hàm lượng Z-ligustilide Đương quy trồng Việt Nam 3.4 Hàm lượng axit ferulic mẫu Đương quy Hình 12 Hàm lượng axit ferulic 15 mẫu Đương quy Tương tự Z-ligustilde, hàm lượng axit ferulic mẫu Đương quy xác định phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao HPLC Kết thu thể hình 12 Axit ferulic có tinh dầu Đương quy, nghiên cứu hoạt chất có khả ức chế co mạch thuốc co mạch gây ra, có hiệu điều trị triệu chứng co thắt liên quan đến bệnh tim mạch [7] P-ISSN 1859-3585 E-ISSN 2615-9619 hàm lượng axit ferulic mẫu Đương quy Hàn Quốc nghiên cứu trung bình đạt 0,14% (tương đương 140µg/g), thấp nhiều so với hàm lượng axit ferulic Đương quy trồng Việt Nam KẾT LUẬN Kết khảo sát 15 mẫu Đương quy thu hái tỉnh Lào Cai cho thấy mẫu chứa Z-ligustilide với hàm lượng trung bình đạt 124,3 ± 4,92µg/g axit ferulic với hàm lượng trung bình đạt 288,5 ± 4,28µg/g Kết khảo sát hoạt tính kháng nấm cho thấy tinh dầu chất chiết từ rễ Đương quy có khả ức chế tốt chủng nấm Fusarium oxysporum, Sclerotium rolfsii Collectotrichum orbiculare nồng độ 500 1000ppm Tinh dầu Đương quy có hoạt tính mạnh so với loại chất chiết dung môi Chất chiết dung môi etyl axetat thể hoạt tính kháng nấm tới 90% nồng độ thử nghiệm 500ppm 1000ppm TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Seong-Kyu Choi, Deok-Chun Yang, 2005 A basic study on utiliZation of Angelica acutiloba Kitag (Tanggu) Korean J Plant Res 8(3), 230-234 [2] TCVN 7039:2013 Determination of volatile oil content (hydrodistillation method) [3] Vietnamese pharmacopoeia Ed 5th., 2018 Medicine Publising House, Hanoi [4] Qingxuan Xie, Linlin Zhang, Long Xie, Yu Zheng, Kai Liu, Hailong Tang, Yanmei Liao, Xiaofang Li, 2020 Z-ligustilide: A review of its pharmacokinetics and pharmacology Phytotherapy Research, 1-26 [5] Trang Thi Thu Bui, Quynh Trang Thi Pham, Trung Hieu Pham, Thanh Huong Nguyen, Thoa Thi Vu, Duyen Thi Nguyen, Quang Le Dang, 2020 Antifungal activity of coumarin and triterpenoid taraxasteryl acetate from the n-hexane soluble fraction of the aerial part of Eupatorium fortune against Sclerotium rolfsii and RhiZoctonia solani Vietnam Journal of Science and Technology, 58(6A), 17-25 [6] Guang-Hua Lu, Kelvin Chan, Chi-Leung Chan, Kelvin Leung, Zhi-Hong Jiang, Zhong-Zhen Zhao, 2004 Quantification of ligustilides in the roots of Angelica sinensis and related umbelliferous medicinal plants by high-performance liquid chromatography and liquid chromatography-mass spectrometry Journal of Chromatography A, 13;1046(1-2) 101-107 [7] Yuwei Pan, Guoping Zhao, Zejian Cai, Fengguo Chen, Dandan Xu, Si Huang, Hai Lan, Yi Tong, 2016 Synergistic effect of ferulic acid and Z-ligustilide, major components of A sinensis, on regulating cold-sensing protein TRPM8 and TPRA1 in vitro Evid Based Complement Alternat Med., 3160247 [8] Lao Sin Cheng, Li Shaoping, Kelvin Kan, Li Peng, Wan Jianbo, Wang Yu-Te, Dong Ting Xia, Tsim Karl Wah Keung, 2004 Identification and quantification of 13 components in Angelica sinensis (Danggui) by gas chromatography-mass spectrometry coupled with pressuriZed liquid extraction Analytica Chimica Acta, 526, 131-137 Trong 15 mẫu Đương quy phân tích, kết cho thấy hàm lượng axit ferulic trung bình đạt 386,9 ± 13,51µg/g (CK) Trong mẫu có hàm lượng axit ferulic thấp đạt 288,5 ± 4,28µg/g (CK), mẫu có hàm lượng axit ferulic cao đạt 488,1 ± 8,84µg/g (CK) Trong [8], 132 Tạp chí KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ● Tập 57 - Số (10/2021) AUTHORS INFORMATION Vu Van Dien1, Nguyen Quang Tung2, Nguyen Ha Trang1, Do Van Phuc1, Nguyen Thi Thanh Huong1, Le Thi Huong3, Nguyen Huu Tung4, Le Dang Quang1 R&D Center of Bioactive Compounds, Vietnam Institute of Industrial Chemistry Hanoi University of Industry Soils and Fertilizers Research Institute Faculty of Pharmacy, Phenikaa University Website: https://tapchikhcn.haui.edu.vn ... triển nhanh nấm 3.2 Hàm lượng hoạt tính kháng nấm chất chiết mẫu Đương quy 3.2.1 Hàm lượng chất chiết mẫu Đương quy Trong 15 mẫu Đương quy phân tích, kết cho thấy hàm lượng chất chiết dung mơi... độ 1000ppm chất chiết từ Đương quy Chất chiết Đương quy với dung môi Hình Hàm lượng chất chiết dung mơi methanol từ rễ 15 mẫu Đương quy 3.2.2 Hoạt tính kháng nấm chất chiết mẫu Đương quy Hình Kết... với hàm lượng Z-ligustilide Đương quy trồng Việt Nam 3.4 Hàm lượng axit ferulic mẫu Đương quy Hình 12 Hàm lượng axit ferulic 15 mẫu Đương quy Tương tự Z-ligustilde, hàm lượng axit ferulic mẫu Đương