Sự hiện diện của bệnh đốm trắng, hoại tử gan tụy cấp và vi bào tử trùng trên tôm giống và tôm nuôi nước lợ ở đồng bằng sông Cửu Long

Nghiên cứu được thực hiện trên 600 mẫu tôm giống thu tại các tỉnh Ninh Thuận, Bình Thuận, Vũng Tàu, Bạc Liêu và 120 mẫu tôm nuôi nuớc lợ được thu tại các tỉnh Bạc Liêu, Bến Tre, Sóc Trăng, Trà Vinh và Cà Mau từ tháng 1 đến tháng 10 năm 2020 để kiểm tra các mầm bệnh nguy hiểm gồm WSSV, Vibrio parahaemolyticus và EHP bằng phương pháp PCR.

VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II SỰ HIỆN DIỆN CỦA BỆNH ĐỐM TRẮNG, HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP VÀ VI BÀO TỬ TRÙNG TRÊN TÔM GIỐNG VÀ TÔM NUÔI NƯỚC LỢ Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Lê Hồng Phước1*, Nguyễn Hồng Lộc1 TÓM TẮT Nghiên cứu thực 600 mẫu tôm giống thu tỉnh Ninh Thuận, Bình Thuận, Vũng Tàu, Bạc Liêu 120 mẫu tôm nuôi nuớc lợ thu tỉnh Bạc Liêu, Bến Tre, Sóc Trăng, Trà Vinh Cà Mau từ tháng đến tháng 10 năm 2020 để kiểm tra mầm bệnh nguy hiểm gồm WSSV, Vibrio parahaemolyticus EHP phương pháp PCR Trên tôm giống tỷ lệ nhiễm WSSV, Vibrio parahaemolyticus gây AHPND EHP 2,0; 3,6 4,8% mùa khô 1,4; 2,6 7,2% mùa mưa Đối với tôm nuôi thương phẩm, tỷ lệ nhiễm mầm bệnh 13,5; 21,2 23,1% mùa khô 17,7; 11,8 25,0% mùa mưa Tỷ lệ nhiễm Vibrio parahaemolyticus tôm giống năm 2020 3,0%, thấp so với năm 2019 (4,0%) Tương tự Vibrio parahaemolyticus, tỷ lệ nhiễm WSSV tôm giống năm 2020 thấp năm 2019 (1,67% năm 2020 so với 1,88% năm 2019) Tỷ lệ nhiễm EHP tôm giống năm 2020 thấp so với năm 2019 (6,5% năm 2020 so với 7,88% năm 2019) Từ khóa: WSSV, Vibrio parahaemolyticus, EHP, tơm I ĐẶT VẤN ĐỀ Từ năm 2010, người nuôi tôm Việt Nam gặp phải dịch bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (Acute Hepatopancreatic Necrosis DiseaseAHPND) gây chết hàng loạt tôm nuôi thương phẩm Đến tháng 05/2013 tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính xác định Vibrio parahaemolyticus Bệnh hoại tử gan tụy cấp tính gây thiệt hại nghiêm trọng nuôi tôm số quốc gia, với tổn thất toàn cầu tỷ USD năm Bệnh thường xảy khoảng ngày sau thả nuôi, bệnh phát triển cách nhanh chóng gây chết nghiêm trọng vịng 20-30 ngày sau thả nuôi (Han ctv., 2015) Dấu hiệu lâm sàng tôm bệnh bao ruột rỗng bị đứt đoạn, mềm vỏ, gan tụy nhạt màu, sưng teo nhỏ, có nhiều điểm đen Các giải pháp tổng hợp áp dụng để phòng trị bệnh bao gồm giống tốt, cải tạo ao kỹ, quản lý chất lượng nước, sử dụng chế phẩm vi sinh tăng sức đề kháng Đáng kể việc sử dụng kháng sinh trộn vào thức ăn để phịng trị bệnh khơng theo hướng dẫn cụ thể hay tn thủ theo quy định Chính hiệu mang lại chưa ổn định dễ dẫn đến hậu nghiêm trọng kháng kháng sinh hay dư lượng Bệnh đốm trắng phát gây thiệt lại lớn tôm nuôi Trung Quốc năm 1992 sau lây lan sang Nam Mỹ Châu Á Từ năm 1995 đến năm bệnh đốm trắng có xuất tơm ni nước ta Mặc dù có nhiều nghiên cứu tìm giải pháp phịng bệnh đốm trắng chưa có giải pháp cụ thể cho bệnh biện pháp tổng hợp an toàn sinh học, chọn giống tốt tăng sức đề kháng cho tôm nuôi Viện Nghiện cứu Nuôi trồng Thủy sản II * Email: lehongphuoc@yahoo.com 74 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Năm 2009, lần tôm sú nuôi Thái Lan phát vi bào tử trùng có tên EHP (Enterocytozoon hepatopenaei) chưa người ni ý Cho đến năm 2011 bệnh lồi vi bào tử trùng trở nên nghiêm trọng trang trại nuôi năm gần biển (Panakorn, 2012) EHP gây ảnh hưởng lên hệ thống gan tụy tơm có hình thái giống với loài vi bào tử trùng chưa đặt tên microsporian nghiên cứu nhiễm tôm Penaeus japonicas Úc năm 2001 (Tourtip ctv., 2009) Ở Việt Nam, bệnh EHP tìm thấy năm gần tôm sú tôm thẻ chân trắng Hiện nay, tình hình nhiễm EHP tơm nước lợ có chiều hướng gia tăng Đây bệnh khơng gây chết hàng loạt bệnh đốm trắng, hoại tử gan tụy cấp có ảnh hưởng đáng kể đến sản lượng thu hoạch mức độ chậm lớn tiêu tốn nhiều thức ăn (tôm nuôi 90-100 ngày tuổi đạt kích cỡ 4-5 g/con) Trong năm gần với biến đổi khí hậu dịch bệnh hàng năm làm ảnh hưởng đáng kể đến sản lượng gây thiệt hại lớn cho người nuôi tôm Các tháng đầu năm 2020 người nuôi tiếp tục gặp khó khăn xâm nhập mặn làm ảnh hưởng đến mùa vụ thả nuôi không theo kế hoạch ban đầu Tính đến 10 tháng đầu năm 2020, tổng diện tích ni tơm bị thiệt hại 39.536,69 thiệt hại mơ hình thâm canh bán thâm canh 7.616,35 ha, quảng canh, quảng canh cải tiến 31.392,62 mơ hình khác 527,72 Thiệt hại bệnh 5.482,71 không rõ nguyên nhân 31.275,14 Trong giai đoạn từ 2016 đến tháng 8/2020 tổng diện tích tôm nuôi nước lợ bị thiệt hại 204.000 (Cục Thú Y, 2020) Xuất phát từ thực tế trên, thực nghiên cứu “Sự diện bệnh đốm trắng, hoại tử gan tụy cấp vi bào tử trùng tôm giống tôm nuôi nước lợ ĐBSCL” với mục tiêu: Đánh giá tình trạng nhiễm mầm bệnh nguy hiểm tôm giống tôm nuôi ĐBSCL làm sở cho việc cảnh báo đề giải pháp phòng quản lý II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu Tổng cộng 600 mẫu tôm sú tôm thẻ chân trắng giống thu tỉnh Ninh Thuận, Bình Thuận, Vũng Tàu Bạc Liêu (Bảng 1) 120 mẫu tôm sú tôm thẻ chân trắng thương phẩm thu tỉnh Bạc Liêu, Bến Tre, Trà Vinh, Cà Mau Sóc Trăng (Bảng 2) Đối với mẫu tôm giống thu nguyên cố định cồn 90o, mẫu tôm thương phẩm thu từ ao nuôi, thu nguyên tôm < 1g thu phần đầu tôm > 1g cố định cồn 90o Ngồi cịn có kết nghiên cứu năm 2018, 2019 từ nhiệm vụ thường xuyên Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản II thực năm 2018 2019 nhóm nghiên cứu thực với phương pháp thu phân tích mẫu (Lê Hồng Phước ctv., 2019) Các hóa chất chính: DNA Taq polymerase (Promega, Mỹ), dNTP (Promega, Mỹ) mồi thiết kế công bố tạp chí giới (IDT, Mỹ) (Bảng 3), Agarose (Promega, Mỹ), Gel-Red (Invitrogen, Mỹ), Sodium hydroxide (Promega, Mỹ), Sodium dodecyl sulfate (Merk, Đức) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 75 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Bảng Số mẫu tôm giống thu Tôm sú giống Mùa khô Mùa mưa 10 25 20 40 10 25 20 50 60 140 Tỉnh Bình Thuận Ninh Thuận Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Tôm thẻ giống Mùa khô Mùa mưa 40 30 60 80 30 30 60 70 190 210 Ghi chú: Mùa mưa từ tháng 6-11; mùa khô từ tháng 1-5 Bảng Số mẫu tôm nuôi nước lợ thâm canh thu tỉnh Tỉnh Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Trà Vinh Cà Mau Tổng Tơm sú giống Mùa khô Mùa mưa 6 6 24 26 Tôm thẻ giống Mùa khô Mùa mưa 10 5 10 10 28 42 Ghi chú: Mùa mưa từ tháng 6-11; mùa khơ từ tháng 1-5 Bảng Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu Tác nhân Tên mồi F1 R1 WSSV R2 R3 VpPirB-392F VP VpPirB-392R EHP 510F EHP EHP 510R AGAGCCCGAATAGTGTTTCCTCAGC CAGGCAATATAGCCCGTTTGGG ATTGCCAATGTGACTAAGCGG AACACAGCTAACCTTTATGAG TGATGAAGTGATGGGTGCTC3 TGTAAGCGCCGTTTAACTCA GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp tách chiết DNA tổng số từ mẫu tôm DNA tổng số từ mẫu tôm tách chiết theo phương pháp Kiatpathomchai ctv (2001) với số thay đổi nhỏ Lấy 50-100 mg mô tôm cho mẫu tôm giống, 50-100 mg mô mang cho mẫu tôm nuôi (chỉ tiêu WSSV), 50 mg-100 mg mô gan cho mẫu tôm nuôi (chỉ tiêu 76 Kích thước Tác giả sản phẩm Trình tự (5’-3’) 1100 bp 526 bp 250 bp Kiatpathomchai ctv., 2001 392 bp Han ctv., 2015 510 bp Tang ctv., 2015 EHP AHPND) Mẫu đồng ml dung dịch ly trích thơ DNA NaOH-SDS (0,025N – 0,0125%) Sau đó, mẫu ủ khoảng 94-99°C 10 phút làm lạnh nhanh nước đá lạnh (khoảng 4-8°C) Tiếp theo, mẫu ly tâm với tốc độ 13.000 vòng trong phút Cuối cùng, 1-2 µl dịch dùng làm mẫu cho phản ứng PCR TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II 2.2.1 Phương pháp semi-nested PCR phát WSSV tôm (Kiatpathomchai ctv., 2001) Sử dụng mồi F/R1/R2/R3 (Bảng 3) Thành phần phản ứng bao gồm: 200 mM dNTP, 1,5 mM MgCl2, 0,1 µM mồi F1, 0,2 µM mồi R1, 0,3 µM mồi R2, 0,5 µM mồi R3, 1,25 unit Taq polymerase tổng thể tích 50 µl Với chu trình nhiệt: 930/5 phút; chu kỳ: 93oC/20 giây, 70oC/20 giây, 72oC/20 giây; 20 chu kỳ: 93oC/20 giây, 55oC/20 giây, 72oC/20 giây, 25 chu kỳ: 93oC/20 giây, 70oC/20 giây, 72oC/20 giây Sản phẩm PCR sau điện di gel agarose 2% nhuộm với thuốc nhuộm GelRed Nếu mẫu nhiễm vi rút mức độ nặng, sản phẩm dự kiến có kích thước 1100 bp, 526 bp 250 bp Nếu mẫu nhiễm vi rút mức độ trung bình, sản phẩm dự kiến có kích thước 526 bp 250 bp Nếu mẫu nhiễm vi rút mức độ nhẹ sản phẩm dự kiến có kích thước 250 bp 2.2.2 Phương pháp PCR xác định V parahaemolyticus gây bệnh AHPND (Han ctv., 2015) Sử dụng cặp mồi VpPirB-392/ VpPirB392R (Bảng 3) Thành phần phản ứng bao gồm: 0,2 mM dNTP, 1,5 mM MgCl2, 0,5µM mồi 0,625 unit Taq polymerase tổng thể tích 50 µl Chu trình nhiệt: 35 chu kỳ: 93oC/3 phút; 94°C/30 giây, 60°C/30 giây, 72°C/30 giây; kết thúc: 72°C/7 phút Sản phẩm PCR sau điện di gel agarose 2% nhuộm với thuốc nhuộm GelRed, kích thước dự kiến 392 bp 2.2.3 Phương pháp PCR phát EHP tôm (Tang ctv., 2015) Sử dụng cặp mồi EHP 510 F/EHP 510R (Bảng 3) để xác định sữ diện EHP mẫu tôm thu Thành phần phản ứng bao gồm: 200 mM dNTP, 1,5 mM MgCl2, 0,1 µM mồi 0,625 unit Taq polymerase tổng thể tích 50 µl Chu trình nhiệt: 94°C/3 phút; 40 chu kỳ: 94°C/30 giây, 60°C/30 giây, 72°C/30 giây; kết thúc 72oC/5 phút Sản phẩm PCR sau điện di gel agarose 2% nhuộm với thuốc nhuộm GelRed, kích thước dự kiến 510 bp III KẾT QUẢ 3.1 Sự diện WSSV, V parahaemolyticus gây AHPND EHP tôm giống 3.1.1 WSSV tôm giống Trong năm 2020 ghi nhận tỷ lệ nhiễm WSSV tôm giống sú thẻ chân trắng 1,67% Trong mùa khơ 2020, có 60 mẫu tơm sú giống 190 mẫu tôm thẻ giống kiểm tra Ghi nhận có mẫu tơm sú mẫu tơm thẻ nhiễm WSSV (tỷ lệ 3,33% 1,58%) có nguồn gốc Ninh Thuận, Bình Thuận, Vũng Tàu Bạc Liêu Trong mùa mưa 2020, tổng số 140 mẫu tôm sú giống 210 mẫu tôm thẻ giống kiểm tra, có mẫu tơm sú giống nhiễm WSSV (1,43%), có mẫu Ninh Thuận mẫu Bạc Liêu Có mẫu tơm thẻ giống nhiễm WSSV (1,43%), mẫu có nguồn gốc từ Bạc Liêu Ninh Thuận, kết chi tiết thể Bảng Bảng Kết kiểm tra virus gây bệnh đốm trắng WSSV tôm giống PL (Postlarvae) Loại PL sú Tỉnh Bình Thuận Ninh Thuận Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 10 20 10 20 60 (3,33%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 25 40 25 50 140 (1,43%) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 77 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Loại Tỉnh Bình Thuận Ninh Thuận PL thẻ Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Tổng cộng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 40 60 30 60 190 (1,58%) 250 (2,00%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 30 80 30 70 210 (1,43%) 350 (1,43%) 3.1.2 Kết kiểm tra V parahaemolyticus mùa mưa 2020, tổng số 140 mẫu tôm sú giống 210 mẫu tôm thẻ giống kiểm gây AHPND tơm giống Trong mùa khơ 2020, có 60 mẫu tơm sú tra, có mẫu (3,57%) tơm sú giống nhiễm vi giống 190 mẫu tôm thẻ giống kiểm tra khuẩn V parahaemolyticus gây AHPND Ghi nhận có mẫu tơm sú giống (5,0%) nhiễm mẫu tôm thẻ giống (1,9%) nhiễm vi khuẩn V V parahaemolyticus gây AHPND gồm mẫu parahaemolyticus gây AHPND (Bảng 5) Từ Ninh Thuận, mẫu Bình Thuận mẫu kết kiểm tra mẫu tôm giống cho thấy tỷ lệ Bạc Liêu Đối với tôm thẻ chân trắng có nhiễm V parahaemolyticus 3,0% tỷ mẫu (3,16%) nhiễm V parahaemolyticus gây lệ nhiễm mùa khô 3,6% mùa AHPND, có mẫu Ninh Thuận, mưa 2,57% mẫu Vũng Tàu mẫu Bạc Liêu Trong Bảng Kết kiểm tra V parahaemolyticus gây AHPND tôm giống Loại Tỉnh Tổng số mẫu kiểm tra Số mẫu (+) Tổng số mẫu kiểm tra Mùa khơ Bình Thuận Ninh Thuận PL sú Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Bình Thuận Ninh Thuận PL thẻ Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Tổng cộng 10 20 10 20 60 40 60 30 60 190 250 3.1.3 Kết kiểm tra vi bào tử trùng EHP tôm giống Trong mùa khô 2020, kiểm tra 60 mẫu tôm sú giống ghi nhận mẫu (8,33%) dương tính 78 Số mẫu (+) Mùa mưa 1 (5,00%) 2 (3,16%) (3,60%) 25 40 25 50 140 30 80 30 70 210 350 2 (3,57%) 1 (1,90%) (2,57%) với EHP, mẫu tập trung Ninh Thuận, Bình Thuận Bạc Liêu Đối với tơm thẻ giống kiểm tra 190 mẫu có mẫu (3,68%) dương tính với EHP Trong mùa mưa với tổng số 140 mẫu TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II tôm sú giống 210 mẫu tôm thẻ giống mùa mưa tỷ lệ nhiễm EHP tơm giống kiểm tra, có 11 mẫu tơm sú (7,86%) 14 mẫu 7,14%, cao so với mùa khô 4,8%, kết tôm thẻ (6,67%) nhiễm EHP Như chi tiết thể Bảng Bảng Kết kiểm tra vi bào tử trùng EHP tơm giống Loại Tỉnh Bình Thuận Ninh Thuận PL sú Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Bình Thuận Ninh Thuận PL thẻ Vũng Tàu Bạc Liêu Tổng Tổng cộng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 10 20 10 20 60 (8,33%) 40 60 30 60 190 (3,68%) 250 12 (4,80%) Các số liệu năm 2020 so sánh với năm 2018 2019 nhóm tác giả thực (Lê Hồng Phước & Nguyễn Hồng Lộc, 2019) Kết so sánh cho thấy tỷ lệ nhiễm V parahaemolyticus năm 2020 3,0%, thấp so với năm 2018 (3,63%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 25 40 25 50 140 11 (7,86%) 30 80 30 70 210 14 (6,67%) 350 25 (7,14%) năm 2019 (4,0%) Tỷ lệ nhiễm WSSV năm 2020 thấp so với năm 2019 (1,67 1,88%) Với EHP ghi nhận tương tự, tỷ lệ nhiễm năm 2020 6,17%, thấp so với năm 2018 (7,75%) năm 2019 (7,88%) (Hình 1) Hình Tỷ lệ nhiễm mầm bệnh tôm giống năm 2018, 2019 & 2020 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 79 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Hình Kết điện kiểm tra WSSV phương pháp semi-nested PCR Giếng 1, 2, 3, 4: mẫu âm tính Giếng 5: mẫu dương tính Giếng (-): mẫu chứng âm Giếng (+): mẫu chứng dương Giếng M: Thang P-Ladder-01-100 (Phusa Biochem) Hình Kết kiểm tra Vibrio parahaemolyticus phương pháp PCR Giếng 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7: mẫu âm tính Giếng 8, 9: mẫu dương tính Giếng (-): mẫu chứng âm Giếng (+): mẫu chứng dương Giếng M: Thang P-Ladder-01-100 (Phusa Biochem) Hình Kết kiểm tra EHP phương pháp PCR Giếng 2, 3, 6, 7, 8: mẫu âm tính Giếng 1, 4, 5, 9, 10: mẫu dương tính Giếng (-): mẫu chứng âm Giếng (+): mẫu chứng dương Giếng M: Thang P-Ladder-01-100 (Phusa Biochem) 3.2 Sự diện WSSV, V 8) 12 mẫu nhiễm EHP (23,07%) (Bảng 9) parahaemolyticus gây AHPND EHP Trong mùa mưa 2020 với tổng số 26 mẫu tôm sú 52 mẫu tơm thẻ có 12 mẫu nhiễm WSSV tơm ni thương phẩm Trong mùa khơ 2020, có 24 mẫu tơm sú (17,65%), mẫu nhiễm V parahaemolyticus 28 mẫu tôm thẻ nuôi kiểm tra mầm gây AHPND (11,76%) 17 mẫu nhiễm EHP bệnh nguy hiểm WSSV, V parahaemolyticus (25,0%) Kết kiểm tra cho thấy, tỉ lệ nhiễm gây AHPND EHP có mẫu nhiễm WSSV EHP tháng mùa mưa cao WSSV (13,46%) (Bảng 7), 11 mẫu nhiễm V tháng mùa khô parahaemolyticus gây AHPND (21,15%) (Bảng Bảng Kết kiểm tra WSSV mẫu tôm nuôi Loại Sú 80 Tỉnh Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Trà Vinh Cà Mau Tổng Tổng số mẫu kiểm tra Số mẫu (+) Tổng số mẫu kiểm tra Mùa khô 6 24 1 (12,50%) Số mẫu (+) Mùa mưa 6 4 26 2 (19,23% TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Loại Tỉnh Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Thẻ Trà Vinh Cà Mau Tổng Tổng cộng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 6 28 (14,29%) 52 (13,46%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 10 10 10 42 (16,67%) 68 12 (17,65%) Bảng Kết kiểm tra V parahaemolyticus mẫu tôm ni Loại Tỉnh Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Sú Trà Vinh Cà Mau Tổng Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Thẻ Trà Vinh Cà Mau Tổng Tổng cộng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 6 2 24 (25,0%) 6 28 (17,85%) 52 11 (21,15%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 6 4 26 (15,38% 10 10 10 42 (9,52%) 68 (11,76%) Bảng Kết kiểm tra vi bào tử trùng EHP mẫu tơm ni Loại Tỉnh Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Sú Trà Vinh Cà Mau Tổng Bạc Liêu Bến Tre Sóc Trăng Thẻ Trà Vinh Cà Mau Tổng Tổng cộng Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa khô 6 2 24 (20,83%) 6 28 (25,0%) 52 12 (23,07%) Tổng số mẫu Số mẫu (+) kiểm tra Mùa mưa 6 4 26 (26,92%) 10 10 10 42 10 (23,81%) 68 17 (25,00%) TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 81 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Đối với bệnh đốm trắng tôm nuôi thương phẩm năm 2019 2020 cao so với năm 2018, tương tự cho bệnh hoại tử gan tụy cấp Tỷ lệ nhiễm bệnh vi bào tử trùng năm 2019 2020 cao so với 2018 (Hình 5) Hình Tỷ lệ nhiễm mầm bệnh tôm nuôi thương phẩm năm 2018, 2019 & 2020 IV THẢO LUẬN Bệnh vi bào tử trùng không gây chết cấp tính tơm ảnh hưởng lớn đến sản lượng xuất nuôi (Lightner, 1996) Ở châu Á ghi nhận vi bào tử trùng xuất tôm nuôi Malaysia, Thái Lan, Indonesia Việt Nam (Limsuwan, 1997; Flegel và ctv., 1992; Flegel., 2012) Gần hai ký sinh trùng gây thiệt hại tơm ghi nhận bào tử trùng Entorocytozoon hepatopenaei (EHP) gây bệnh phân trắng tôm sú nuôi Việt Nam bệnh chậm lớn trắng tôm thẻ chân trắng Thái Lan Ký sinh trùng Halopsoridian gây chết hàng loạt chậm lớn tôm thẻ nuôi Indonesia (Flegel., 2012) Bệnh vi bào tử trùng EHP phát Việt Nam năm 2014 Ngay sau nhận thông tin bệnh vi bào tử trùng EHP, Cục Thú Y có báo cáo hướng dẫn địa phương chủ động triển khai giám sát thêm bệnh EHP số vùng nuôi tôm trọng điểm từ năm 2015 Đến nay, EHP phát 82 tỉnh, thành phố gồm: Quảng Ninh, Hải Phòng, Nam Định, Hà Tĩnh, Quảng Nam, Phú Yên, Khánh Hịa, Ninh Thuận, Bình Thuận, Long An, Bến Tre, Trà Vinh, Cần Thơ, Bạc Liêu, Sóc Trăng, Kiên Giang, Cà Mau Trong giai đoạn 2016-2020 bệnh EHP gây thiệt hại số địa phương biểu chậm lớn có lúc kết hợp với bệnh khác (Cục Thú Y, 2020) Hội chứng phân trắng (White Feces Syndrome -WFS) tìm thấy nhiều tác nhân làm tơm chậm lớn, phân đàn, giảm ăn có trường hợp chết rải rác liên tục Những biểu thường nhận thấy bệnh khác liên quan đến tình trạng gan tụy tơm ni bệnh EHP, hoại tử gan tụy Vibrio parahaemolyticus bệnh nhiễm giống vi khuẩn Vibrio nói chung gây hoại tử gan tụy (Septic Hepatopancreatic Necrosis -SHPN) Vibrio gây SHPN tác nhân tác nhân hội thường diện chủ yếu gan tụy tôm Đặc biệt gan tụy tôm bị TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II yếu tố ban đầu làm tổn thương tạo điều kiện cho Vibrio hội gây bệnh gây SHPN Điều chứng minh theo nhận định Aranguren ctv (2017), EHP xác định yếu tố làm tăng mẫn cảm tôm thẻ chân trắng bệnh gan tụy cấp AHPND, SHPN WFS Do đó, việc kiểm sốt phịng tránh lồi vi bào tử trùng q trình ni quan trọng Trước có thơng tin cho hội chứng phân trắng nhiều tác nhân bao gồm Vibrio cholera, ký sinh trùng Gregarine,  Bacilloplasma  sp., Phascolarctobacterium sp., lồi tảo độc khơng thấy liên quan đến EHP Tuy nhiên theo nghiên cứu gần cho thấy mối liên hệ WFS tác nhân khác có vai trị EHP, SHPN kết hợp với môi trường bất lợi Kết thu mẫu kiểm tra EHP phương pháp PCR vùng có WFS vùng khơng có WFS cho thấy mẫu thu vùng có WFS có số lượng vi rút EHP cao vùng khơng có WFS (Aranguren ctv., 2017) Điều cho thấy tôm bệnh phân trắng có nhiều nguy nhiễm EHP Bệnh hoại tử gan tụy cấp báo cáo lần đầu vào cuối năm 2010 tỉnh Sóc Trăng, sau dịch bệnh lây sang hầu hết địa phương nuôi tôm trọng điểm ĐBSCL Trong giai đoạn từ 2016 đến nay, phạm vi xảy bệnh giảm dần từ 306 xã năm 2016 237 xã năm 2018 xuống 136 xã năm 2020 (Cục Thú Y, 2020) Từ năm 2016-2020 bệnh hoại tử gan tụy cấp có xu hướng giảm mạnh diện tích mắc bệnh từ 3.339 xuống 2.143 Bệnh hoại tử gan tụy cấp xảy tất mơ hình ni tơm nước lợ nặng mơ hình ni thâm canh (Cục Thú Y, 2020) Bệnh đốm trắng xuất hầu hết vùng nuôi tôm nước chủ yếu tập trung tỉnh thuộc ĐBSCL Diện tích tơm ni nước lợ mắc bệnh đốm trắng tăng từ năm 20162017 sau có xu hướng giảm mạnh từ 5.873 (năm 2018) xuống 1.900 (8 tháng đầu năm 2020) Bệnh đốm trắng xuất tất tháng năm tập trung nhiều vào tháng có mùa vụ thả ni Đối với mơ hình ni thâm canh bán thâm canh có diện tích bị thiệt hại bệnh đốm trắng tăng từ 2016-2018 sau có xu hướng giảm Cụ thể năm 2016 có 2.811 ha, năm 2018 có 4.734 tháng đầu năm 2020 có 1.350 bị nhiễm bệnh đốm trắng Đối với mô hình ni quảng canh quảng canh cải tiến có diện tích ni bị thiệt hại bệnh đốm trắng giảm dần từ năm 2016 Cụ thể năm 2016 có 1.079 tháng đầu năm 2020 549 tôm nuôi bị bệnh đốm trắng (Cục Thú Y, 2020) Nghiên cứu Rahman ctv (2007a, b) cho thấy nhiệt độ có liên quan đến nhân lên WSSV Nhóm tác giả bố trí thí nghiệm gây nhiễm tôm với nghiệm thức khác thay đổi nhiệt độ 27 33oC Ở nghiệm thức 27oC liên tục thời gian gây nhiễm tơm với WSSV cho thấy tơm có dấu hiệu đốm trắng sau 24 giờ chết sớm sau 36 gây nhiễm, tỷ lệ nhiễm đạt 100% sau 60 gây nhiễm Ở nghiệm thức trì nhiệt độ nước ổn định 33°C cho tỷ lệ chết thấp từ 0-10% Ở nghiệm thức trước gây nhiễm trì 27oC sau gây nhiễm trì 33oC cho thấy mức độ chết mức thấp so với nhóm nghiệm thức ổn định 27oC Tỷ lệ chết nghiệm thức đạt 100% sau 96 gây nhiễm Kết thí nghiệm cho thấy tăng nhiệt độ có khả ức chế nhân lên WSSV Điều trùng hợp thực tế nhiệt độ thấp, mưa nhiều khả bùng phát dịch bệnh đốm trắng tăng cao Một số nghiên cứu giới Tendencia Verreth (2011), Gao ctv (2011) cho thấy yếu tố độ mặn thấp, hàm lượng Vibrio tổng số nước ao cao biến động nhiệt độ ngày lớn yếu tố liên quan tới bùng phát bệnh đốm trắng tôm Ở điều kiện nhiệt độ 35oC 15oC xuất bệnh đốm trắng giảm rõ rệt khoảng nhiệt độ từ 25-28oC thích hợp cho phát triển WSSV Trong nghiên cứu cho thấy tôm nuôi mùa mưa có tỷ lệ nhiễm bệnh TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 83 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II đốm trắng 17,5% cao so với mùa khô 13,4% Trong phạm vi nghiên cứu cho thấy tỷ lệ nhiễm mầm bệnh năm 2020 tôm giống thấp so với năm 2018 2019 mức độ kiểm sốt tơm bố mẹ, thức ăn cho tơm bố mẹ an tồn sinh học trại giống bước cải thiện Đối với tôm nuôi thương phẩm tỷ lệ nhiễm loại mầm bệnh tăng cao ảnh hưởng ngày tăng mức độ thâm canh hóa Tỷ lệ nhiễm EHP tơm ni năm 2020 tỉnh thuộc ĐBSCL ghi nhận cao (từ 23-25%) (Lê Hồng Phước và ctv., 2020) Ở Thái Lan ghi nhận tỷ lệ nhiễm EHP cao (chiếm 60% số mẫu phân tích), chứng cho thấy tỷ lệ nhiễm EHP cao tôm thẻ chân trắng từ nghiên cứu đoàn hệ dịch tễ học 196 ao nuôi Thái Lan thực giai đoạn 2013–2014 để xác định yếu tố rủi ro liên quan đến hội chứng chết sớm (EMS) (Sanguanrut ctv., 2018) Trong phần khảo sát này, gan tụy tôm kiểm tra EHP phương pháp PCR phát 60% số ao dương tính với EHP tình trạng EMS chúng Kết dẫn đến thông báo khẩn cấp NACA mối đe dọa EHP ngành nuôi tơm tồn cầu vào năm 2015 Theo Tourtip ctv (2009), bệnh vi bào tử trùng ngày tăng cao nước Đông Nam Á Hiên nay, EHP ghi nhận xuất Trung Quốc, Indonesia, Malaysia, Việt Nam, Thái Lan, Ấn Độ số nước vùng Nam Á Theo Aranguren ctv (2017), EHP xác định yếu tố làm tăng mẫn cảm tôm thẻ chân trắng bệnh gan tụy cấp AHPND triệu trứng SHPN (septic hepatopancreatic necrosis) bao gồm hội chứng phân trắng dị hình gây lồi vi khuẩn Vibrio Do đó, việc kiểm sốt phịng tránh lồi vi bào tử trùng q trình ni quan trọng Rajendran ctv (2016) thu 137 mẫu tôm nuôi thương phẩm giai đoạn 84-91 ngày nuôi với trọng lượng 2,5-28,5g từ trang trại nuôi tôm 84 Andhra Pradesh Tamil Nadu (Ấn Độ) cho kết tỷ lệ nhiễm EHP 63,5% Shen ctv (2019) thu mẫu tôm nuôi ao đất nhà màng tỉnh Jiangsu –Trung Quốc để kiểm tra EHP phương pháp kính hiển vi điện tử, mơ bệnh học PCR Kết cho thấy tỷ lệ nhiễm EHP nhóm tơm chậm lớn ni nhà màng cao (93%) Đối với nhóm tơm ni chậm lớn ao đất cho tỷ lệ nhiễm gần với nhóm tôm nuôi nhà màng (91,3%) Tuy nhiên, tỷ lệ nhiễm EHP nhóm tơm bình thường ni nhà màng mức 10,6% thấp nhiều so với nhóm tơm bình thường ni ao đất (72,4%) Hiện tượng EHP làm chậm tăng trưởng chứng minh phân tích mẫu phương pháp Realtime PCR Định lượng trường hợp nhiễm EHP tôm thẻ chân trắng cho thấy diện 1×103 copies/1 ng gan tụy tách chiết DNA có tương quan với chậm phát triển tôm nuôi (Liu ctv., 2016; Rajendran ctv., 2016) Tôm chậm lớn thể giảm tăng trọng ngày, tơm phân nhiều cỡ Hơn nữa, có thơng tin cho nhiễm EHP liên quan đến hội chứng phân trắng (WFS) tôm thẻ chân trắng nuôi (Ha ctv., 2010) Tuy nhiên, báo cáo sau cho liên kết gián tiếp trực tiếp (Tangprasittipap ctv., 2013) V KẾT LUẬN Đối với tôm giống tỷ lệ nhiễm WSSV, Vibrio parahaemolyticus gây AHPND EHP năm 2020 1,67; 3,0 6,5% khơng có khác biệt rõ rệt tỷ lệ nhiễm theo mùa Đối với tôm thương phẩm tỷ lệ nhiễm WSSV, V parahaemolyticus gây AHPND EHP năm 2020 15,83; 15,83 24,17% tỷ lệ nhiễm WSSV EHP mùa mưa cao tỷ lệ nhiễm AHPND mùa mưa lại thấp TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SƠNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Cục Thú Y, 2020 Báo cáo kết phòng, chống dịch bệnh thủy sản giai đoạn 2016-2020 hội nghị xây dựng kế hoạch quốc gia phòng chống dịch bệnh thủy sản giai đoạn 2021-2025 phục vụ xuất khẩu, Cần Thơ 9/2019 Lê Hồng Phước & Nguyễn Hồng Lộc, 2019 Sự diện White Spot Syndrome Virus, Vibrio parahaemolyticus Enterocytzoon hepatopenaei tôm giống tôm nuôi nước lợ Đồng sông Cửu Long Tạp chí Nghề cá sơng Cửu Long 15: 15-23 Lê Hồng Phước, Trương Hồng Việt, Trần Minh Thiện, Đoàn Văn Cường, Thới Ngọc Bảo, 2020 Khảo sát diện vi bào tử trùng Enterocytozoon hepatopenaei tôm nuôi, thức ăn cơng nghiệp lồi động vật khác ao ni tơm Tạp chí Nghề cá sơng Cửu Long 16: 27-37 Tài liệu tiếng Anh Aranguren, L.F., Jee Eun Han, Kathy, F.J., Tang, 2017 Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) is a risk factor for acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) and septic hepatopancreatic necrosis (SHPN) in the Pacific white shrimp Penaeus vannamei Aquaculture 471: 37-42 Flegel, T.W., Boonyaratpalin, S., Fegan, D.F., Guerin, M., and Sriurairatana, S.,1992 High mortality of black tiger prawns from cotton shrimp disease in Thailand In: Shariff M, Subasinghe RP, Arthur JR, editors Diseases in Asian Aquaculture I Fish Health Section, Asian Fisheries Society Manila: 181–197 Flegel, T.W., 2012 Historic emergence, impact and current status of shrimp pathogens in Asia Journal of Invertebr Pathol 110: 166-173 Gao, H., Kong, J., Li, Z., Xiao, G., Meng, X., 2011 Quantitative analysis of temperature, salinity and pH on WSSV pro-liferation in Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensisby real-time PCR Aquaculture 312: 26-31 Ha, N.T., Ha, D.T., Thuy, N.T., Lien, V.T.K., 2010 Occurrence of microsporidia Enterocytozoon hepatopenaei in white feces disease of cultured black tiger shrimp (Penaeus monodon) in Vietnam Aquat Anim Dis Han, J.E., Mohney, L.L., Tang, K.F.J., Pantoja, C.R., Lightner, D.V., 2015 Plasmid mediated tetracycline resistance of Vibrio parahaemolyticus associated with acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) in shrimps Aquaculture Reports (2): 17–21 Kiatpathomchai, W.,  Boonsaeng, V.,  Tassanakajon, A.,  Wongteerasupaya, C.,  Jitrapakdee, S.,  Panyim, S., 2001 A non-stop, single-tube, semi-nested PCR technique for grading the severity of white spot syndrome virus infections in Penaeus monodon Dis Aquat Organ 47(3): 235-9 Lightner, D.V., 1996 A Handbook of Pathology and Diagnostic Procedures for Diseases of Penaeid Shrimp J World Aquac Soc, Baton Rouge Limsuwan, C., 1997 Reducing the effects of white-spot baculovirususing PCR screeningand stressors Aquat Anim Health Res Inst News l6:1–2 Liu, Y.M., Zhang, Q., Wan, X.Y., Ma, F., Huang, J., 2016 Development of real-time PCR assay for detecting microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei and the application in shrimp samples with different growth rates Prog Fish Sci 37: 119–126 Panakorn, S., 2012 Opinion article: more on early mortality syndrome in shrimp Aqua Culture Asia Pacific, (1): 8-10 Rahman, M.M., Corteel, M., Dantas-Lima, J.J., Wille, M., Alday-Sanz, V., Pensaert, M.B., Sorgeloos, P., Nauwynck, H.J, 2007a Impact of daily fluctuations of optimum (27°C) and high water temperature (33°C) on Penaeus vannamei juveniles infected with white spot syndrome virus (WSSV) Aquaculture 269: 107–113 Rahman, M.M., Corteel, M., Wille, M., Alday-Sanz, V., Pensaert, M.B., Sorgeloos, P., Nauwynck, H.J, 2007b The effect of raising water temperature to 33 °C in Penaeus vannameijuveniles at different stages of infection with white spot syndrome virus (WSSV) Aquaculture 272: 240–245 Rajendran, K.V., Shivam, S., Ezhil Praveena, P., Sahaya Rajan, J.J., Sathish Kumar, T., Satheesha, A., 2016 Emergence of Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) in farmed Penaeus (Litopenaeus) vannamei in India Aquaculture 454: 272-280 Sanguanrut, P., Munkongwongsiri, N., Kongkumnerd, J., Thawonsuwan, J., Thitamadee, S., Boonyawiwat, V., Tanasomwang, V., Flegel, T.W., Sritunyalucksana, K., 2018 A cohort study of 196 Thai shrimp ponds reveals a complex etiology for early mortality syndrome (EMS) Aquaculture 493: 26-36 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 85 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II Shen, H., Qiao, Y., Wan, X., Jiang, G., Fan, X., Li, H., Shi, W., Wang, L and Zhen, X., 2019.  Prevalence of shrimp microsporidian parasite Enterocytozoon hepatopenaei in Jiangsu Province, China. Aquacult Int 27: 675–68 Tang, K.F.J., Pantoja, C.R., Redman, R.M., Han, J.E., Tran, L.H., Lightner, D.V., 2015 Development of in situ hybridization and PCR assays for the detection of Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), a microsporidian parasite infecting penaeid shrimp J Invertebr Pathol 130: 37–41 Tangprasittipap, A., Srisala, J., Chouwdee, S., Somboon, M., Chuchird, N., Limsuwan, C., Srisuvan, T., Flegel, T.W., and Sritunyalucksana, K., 2013 The Microsporidian Enterocytozoon Hepatopenaei Is Not the Cause of White 86 Feces Syndrome in Whiteleg Shrimp Penaeus (Litopenaeus) vannamei BMC veterinary research 9(1): 139 Tendencia, E.A., Verreth, J.A.J., 2011 Temperature fluctuation,low salinity, watermicroflora: risk factors for WSSV outbreaksin Penaeus monodon Isr J Aquacult-Bamid 63: 1−7 Tourtip, S., Wongtripop, S., Stentiford, G.D., Bateman, K.S., Sriurairatana, S., Chavadej, J., Sritunyalucksana, K., Withyachumnarnkul, B, 2009 Enterocytozoon hepatopenaei sp Nov (Microsporida: Enterocytozoonidae), a parasite of the black tiger shrimp Penaeus monodon (Decapoda: Penaeidae): Fine structure and phylogenetic relationships J Invertebr Pathol 102(1): 21-29 TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 VIỆN NGHIÊN CỨU NUÔI TRỒNG THỦY SẢN II THE PRESENCE OF WHITE SPOT SYNDROME VIRUS, Vibrio parahaemolyticus AND Enterocytozoon hepatopenaei IN POSTPARVAE AND MARINE SHRIMP CULTURED IN MEKONG DELTA Le Hong Phuoc1*, Nguyen Hong Loc1 ABSTRACT This study was conducted with 600 postlarvae samples collected at Ninh Thuận, Binh Thuan, Vung Tau, Bac Lieu provinces and 120 farmed shrimp sample collected at Bac Lieu, Soc Trang, Ben Tre, Tra Vinh and Ca Mau The samples were collected from Janary to October of 2020 and tested for some dangerous pathogenic agents including WSSV, Vibrio parahaemolyticus and EHP via PCR method The prevalence of postlarvae samples positive with WSSV, Vibrio parahaemolyticus and EHP were 2.0%, 3.6% and 4.8%, respectively in dry season while In rainy season the postlarvae were infected with WSSV, Vibrio parahaemolyticus and EHP with the prevalence of 1.4%, 2.6% and 7.2%, respectively The percentage of farmed shrimp samples positive with WSSV, Vibrio parahaemolyticus and EHP in dry season were 13.5%, 21.2% and 23,1%, respectively In rainy season, farmed shrimp were infected with these pathogens wth the prevalence of 17.7; 11.8 and 25.0% respectively The percentage of postlarve samples positive with Vibrio parahaemolyticus in 2020 is 3.0% It is lower than that of 2019 (4.0%) The percentage of postlarve samples positive with WSSV in 2020 is also lower than in 2019 It was 1.67% in 2020 and 1.88% in 2019 EHP infection in postlarvae was also lower than that of 2019 (6.5% in 2020 compare to 7.88% in 2019) Keywords: WSSV, Vibrio parahaemolyticus, EHP, shrimp Người phản biện: TS Ngô Huỳnh Phương Thảo Người phản biện: PGS TS Từ Thanh Dung Ngày nhận bài: 10/11/2020 Ngày nhận bài: 10/11/2020 Ngày thông qua phản biện: 12/12/2020 Ngày thông qua phản biện: 15/12/2020 Ngày duyệt đăng: 25/12/2020 Ngày duyệt đăng: 25/12/2020 Research Institute for Aquaculture No.2 *Email: lehongphuoc@yahoo.com TẠP CHÍ NGHỀ CÁ SÔNG CỬU LONG - SỐ 18 - THÁNG 12/2020 87 ... tổng diện tích tơm ni nước lợ bị thiệt hại 204.000 (Cục Thú Y, 2020) Xuất phát từ thực tế trên, thực nghiên cứu ? ?Sự diện bệnh đốm trắng, hoại tử gan tụy cấp vi bào tử trùng tôm giống tôm nuôi nước. .. thường nhận thấy bệnh khác liên quan đến tình trạng gan tụy tôm nuôi bệnh EHP, hoại tử gan tụy Vibrio parahaemolyticus bệnh nhiễm giống vi khuẩn Vibrio nói chung gây hoại tử gan tụy (Septic Hepatopancreatic... 2016-2020 bệnh hoại tử gan tụy cấp có xu hướng giảm mạnh diện tích mắc bệnh từ 3.339 xuống 2.143 Bệnh hoại tử gan tụy cấp xảy tất mơ hình ni tơm nước lợ nặng mơ hình ni thâm canh (Cục Thú Y, 2020) Bệnh