Bước đầu tạo cây tiêu in Vitro kháng nấm Phytophthora sp.

Bước đầu tạo cây tiêu in Vitro kháng nấm Phytophthora sp.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  ĐINH VŨ THẮNG BƢỚC ĐẦU TẠO CÂY TIÊU (Piper nigrum) IN VITRO KHÁNG NẤM Phytophthora sp LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh 2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  BƢỚC ĐẦU TẠO CÂY TIÊU (Piper nigrum) IN VITRO KHÁNG NẤM Phytophthora sp Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: ThS NGUYỄN THỊ KIM LINH ĐINH VŨ THẮNG TS LÊ ĐÌNH ĐƠN NIÊN KHĨA: 2002-2006 Thành phố Hồ Chí Minh 2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY,HCHC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY  INITIAL RESEACH CREATE PEPPER (Piper nigrum) IN VITRO RESISTANTTO Phytophthora sp GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor MSc NGUYEN THI KIM LINH Dr LE ĐINH ĐON HCMC, 09/2006 Student DINH VU THANG TERM: 2002 - 2006 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn: - Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho suốt thời gian học tập - Các thầy cô Bộ môn Công Nghệ Sinh Học thầy cô trực tiếp giảng dạy suốt bốn năm qua - Thầy Lê Đình Đơn Nguyễn Thị Kim Linh tận tình hƣớng dẫn động viên thời gian thực đề tài tốt nghiệp - Các anh chị phụ trách phịng 118 105 Khu Phƣợng Vỹ thuộc Bộ Mơn Bảo Vệ Thực Vật - Đại học Nông Lâm TP HCM - Thầy Trần Ngọc Hùng chị thuộc Trung tâm Công Nghệ Sinh Học Đại học Nông Lâm TP HCM - Tập thể lớp CNSH28, hai bạn Nhã Trầm Thanh Huyền lớp CNSH29 hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập làm đề tài Thành kính ghi ơn ba mẹ ngƣời thân gia đình ln tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trƣờng TP Hồ Chí Minh tháng 08 năm 2006 Đinh Vũ Thắng i TÓM TẮT ĐINH VŨ THẮNG, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2006 “BƢỚC ĐẦU TẠO CÂY TIÊU (Piper nigrum) IN VITRO KHÁNG NẤM Phytophthora sp.” Giáo viên hƣớng dẫn: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN ThS NGUYỄN THỊ KIM LINH Đề tài “Bƣớc đầu tạo tiêu (Piper nigrum) in vitro kháng nấm Phytophthora sp.” đƣợc tiến hành giai đọan đầu giai đoạn tạo tiêu phịng thí nghiệm Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật – Trƣờng Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh từ tháng đến tháng năm 2006 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng dịch chiết nấm Phytophthora đến khả hình thành chồi từ mô sẹo tiêu  Tạo mô sẹo từ mẫu tiêu in vitro Thí nghiệm đƣợc thực mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4D 3mg/L BA  Nuôi cấy tạo dịch nấm Phytophthora  Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora mơi trƣờng nuôi cấy mô sẹo tiêu Thực chủng dịch nấm Phytophthora vào môi trƣờng nuôi cấy mô sẹo tiêu với nhiều nồng độ dịch nấm khác (bảng bố trí thí nghiệm) Thí nghiệm 2: Nhuộm mẩu mơ sẹo Nhuộm mẫu phẩm nhuộm hai màu dung dịch gồm hai thứ phẩm nhuộm: - Phẩm đỏ Carmin nhuộm màu hồng lạt hay tím lạt màng tế bào chất cellulose pectic - Phẩm xanh lục vert d’iod nhuộm màu xanh lục màng tế bào chất gỗ (ligin) hay bần (suberin) ii Bố trí thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora mơi trƣờng ni cấy mô sẹo tiêu Phƣơng pháp Nghiệm Nồng độ Số vô trùng thức dịch nấm (%) chai DC 15 30 CC 15 30 CB 10 15 30 CA 20 15 30 KC 15 30 KB 10 15 30 KA 20 15 30 Hấp khử trùng Lọc vô trùng Số mẫu/chai Tổng số mẫu Ghi chú: DC: đối chứng có nồng độ dịch nấm 0%, CC: nồng độ dịch nấm 5% có hấp khử trùng, CB: nồng độ dịch nấm 10% có hấp khử trùng, CA: nồng độ dịch nấm 20% có hấp khử trùng, KC: nồng độ dịch nấm 5% lọc vô trùng, KB: nồng độ dịch nấm 10% lọc vô trùng, KA: nồng độ dịch nấm 20% lọc vô trùng iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix PHẦN GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu 1.4 Giới hạn đề tài PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển tiêu 2.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ hạt tiêu giới Việt Nam 2.2.1 Thế giới 2.2.2 Việt Nam 2.2.2.1 Tình hình sản xuất 2.2.2.2 Tình hình tiêu thụ 2.3 Tình hình bệnh tiêu 2.3.1 Bệnh chết nhanh dây tiêu nấm Phytophothra gây 2.3.2 Điều kiện phát sinh bệnh, phát triển bệnh 2.4 Giới thiệu giống Phytophthora 2.5 Lịch sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.6 Sự hình thành phát triển mơ sẹo 15 2.6.1 Sự hình thành mơ sẹo 15 2.6.2 Sự hình thành chồi từ mô sẹo 17 2.7 Các nhóm chất kích thích ảnh hƣởng lên q trình tạo mơ sẹo 17 iv 2.7.1 Auxin 17 2.7.1.1 Tính chất sinh lý Auxin 18 2.7.1.2 Auxin trồng 18 2.7.1.3 Các chất auxin tổng hợp 19 2.7.2 Cytokinine 19 2.7.2.1 Tính chất sinh lý Cytokinine 20 2.7.2.2 Cytokinine trồng 20 2.8 Một số nghiên cứu tạo kháng bệnh phƣơng pháp nuôi cấy in vitro 20 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 22 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 3.2 Thiết bị dụng cụ phịng thí nghiệm 22 3.2.1 Phòng chuẩn bị môi trƣờng 22 3.2.2 Phòng cấy 22 3.2.3 Phòng cấy nấm 22 3.2.4 Phịng ni 23 3.2.5 Mơi trƣờng dùng thí nghiệm 23 3.3 Vật liệu nuôi cấy 23 3.4 Phƣơng pháp thí nghiệm 24 3.4.1 Thí nghiệm : Ảnh hƣởng dịch chiết nấm Phytophthora đến khả hình thành chồi từ mô sẹo tiêu 24 3.4.1.1 Tạo mô sẹo từ mẫu tiêu in vitro 24 3.4.1.2 Nuôi cấy tạo dịch nấm Phytophthora 24 3.4.2.3 Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora mơi trƣờng nuôi cấy mô sẹo tiêu 25 3.4.4 Nhuộm mẫu mô sẹo xem kết dƣới kính hiển vi 27 3.5 Phân tích thống kê 27 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 4.1 Thí nghiệm : Ảnh hƣởng dịch chiết nấm Phytophthora đến khả nằng hình thành chồi từ mơ sẹo tiêu 28 4.1.1 Tạo mô sẹo từ mẫu tiêu in vitro 28 v 4.1.2 Thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora môi trƣờng nuôi cấy mô sẹo tiêu 28 4.3 Nhuộm mẫu mô sẹo tiêu sau 10 tuần nuôi cấy 34 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 MỤC LỤC 39 MỤC LỤC 40 vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT HSTTMS: Hệ số tăng trƣởng mô sẹo BA: Benzyladenine 2,4-D: 2,4 – Dichlorophenoxyacetic Acid MS: Murashige & Skoog ctv: Cộng tác viên vii 29 Bảng 4.1 Kết tái sinh chồi hệ số tăng trƣởng mô sẹo sau 90 ngày cấy Phƣơng pháp Nghiệm Nông độ dịch vô trùng Số HSTTMS Hệ số nhân chồi (g/ngày) (chồi/tháng) 2,10a 0,0173 0,68a CC 0,87b 0,0151 0,28 b CB 10 0,33b 0,0153 0,11b 20 0,67b 0,0141 0,22b KC 1,27ab 0,0152 0,42a KB 10 0,80b 0,0154 0,26b KA Lọc vô trùng chồi CA trùng nấm (%) DC Hấp khử thức 20 0,93b 0,0155 0,31b Ghi chú: DC: đối chứng có nồng độ dịch nấm 0%; CC: nồng độ dịch nấm 5% có hấp khử trùng; CB: nồng độ dịch nấm 10% có hấp khử trùng; CA: nồng độ dịch nấm 20% có hấp khử trùng; KC: nồng độ dịch nấm 5% lọc vô trùng; KB: nồng độ dịch nấm 10% lọc vô trùng; KA: nồng độ dịch nấm 20% lọc vô trùng; HSTTMS: hệ số tăng trưởng mô sẹo Các ký tự giống theo sau chữ số cột khơng có khác biệt có ý nghĩa mức 0,01< P ≤ 0,05 Kết Bảng 4.1 cho thấy có khác biệt có ý nghĩa khả tái sinh chồi nghiệm thức khơng chủng dịch nấm nghiệm thức có chủng dịch nấm với nồng độ 10% vô trùng dịch nấm màng có kích thƣớc 0,45μm so với nghiệm thức cịn lại Trong đó, nghiệm thức khơng chủng dịch nấm cho kết tái sinh chồi cao (2,1 chồi/chai) Kết cho thấy dịch nấm có ảnh hƣởng định đến khả bật chồi mơ sẹo, làm ức chế khả tái sinh chồi mẫu mô Kết Bảng 4.1 cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa q trình tăng trƣởng mơ sẹo Tuy nhiên hệ số tăng sinh mô sẹo nghiệm thức không chủng dịch nấm cao (0,0173g/ngày) Nó cho thấy dịch nấm khơng có ảnh hƣởng rõ rệt tới khả tăng trƣởng mô sẹo Sau tuần nuôi cấy, nhận thấy cụm mô sẹo nghiệm thức có chủng dịch nấm có biến đổi phần mô sẹo tiếp xúc với môi trƣờng có dấu hiệu bị đen, phần mơi trƣờng nuôi cấy xung quanh chuyển 30 thành màu đen Thông thƣờng tƣợng đen mô sẹo thay đổi màu (bị đen) mơi trƣờng hết chất dinh dƣỡng môi trƣờng nuôi cấy nuôi cấy mô sẹo dƣới cƣờng độ ánh sáng cao Ở hai nguyên nhân khơng phải thời gian ni cấy tuần (sau nuôi cấy khoảng 10 tuần dinh dƣỡng mơi trƣờng bắt đầu hết) điều kiện chiếu sáng vào khoảng 50µmol/m2.s (cƣờng độ ánh sáng yếu) Mặt khác, điều kiện nghiệm thức khơng có bổ sung dịch nấm tƣợng mơ sẹo bị đen mơi trƣờng chuyển màu khơng xảy Có thể kết luận tƣợng dịch nấm bổ sung vào mơi trƣờng ni cấy ảnh hƣởng đến q trình phát triển mô sẹo Dịch nuôi cấy nấm Phytophthora chứa trao đổi chất nấm Phytophthora, hợp chất bao gồm độc tố loại nấm ký chủ loại nấm Nhƣ ta biết mô sẹo khối tế bào phát sinh vô tổ chức, tế bào mô sẹo phân chia liên tục, đặc biệt tế bào non tƣợng phân chia tế bào mạnh mẽ Trong trình phân chia tế bào làm cho cấu trúc tế bào ổn định Rất độc tố nấm có dịch nấm tác động làm ảnh hƣởng tới trình phân bào mơ sẹo Có thể tế bào tiếp xúc với môi trƣờng bị đen (các tế bào chết) tế bào tiếp xúc chịu ảnh hƣởng trực tiếp từ dịch nấm Vậy có hay khơng có phản ứng tế bào mơ sẹo độc tố nấm? Các tế bào mô sẹo có phản ứng để chống lại với ảnh hƣởng độc tố nấm Tế bào sản sinh chất để chống lại độc tố nấm Cơ chế phịng vệ tế bào mơ sẹo chế: (1) chất chống lại tác động độc tố nấm phản ứng sinh hóa phịng vệ tế bào để chống chịu lại với điều kiện bất lợi; (2) chất chống lại tác động độc tố nấm đƣợc sinh điều khiển gene Sự tác động độc tố nấm lên q trình phân chia tế bào tạo đột biến giúp tế bào có khả chống chịu với độc tố nấm Kết thu đƣợc qua thí nghiệm cho thấy với phƣơng pháp vơ trùng cách sử dụng đầu lọc kích thƣớc 0,45µm cho kết tái sinh chồi cao so với phƣơng pháp hấp khử trùng 121oC 25 phút Có thể nhiệt độ cao dịch nấm bị phân hủy tạo thành chất ức chế tái sinh chồi từ mô sẹo, hay nhiệt độ làm giảm tính độc độc tố nấm 31 Hình 4.2: Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D 3mg/L BA sau 90 ngày ni cấy Hình 4.3 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 5% dịch nấm, hấp khử trùng sau 90 ngày nuôi cấy 32 Hình 4.4 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 10% dịch nấm, hấp khử trùng sau 90 ngày ni cấy Hình 4.5 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 20% dịch nấm, hấp khử trùng sau 90 ngày ni cấy 33 Hình 4.6 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 5% dịch nấm, lọc vô trùng sau 90 ngày nuôi cấy Hình 4.7 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 10% dịch nấm, lọc vô trùng sau 90 ngày ni cấy 34 Hình 4.8 Chồi tiêu hình thành từ mơ sẹo mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L 2,4-D, 3mg/L BA 20% dịch nấm, lọc vô trùng sau 90 ngày nuôi cấy 4.3 Nhuộm mẫu mô sẹo tiêu sau 10 tuần nuôi cấy Sau 10 tuần nuôi cấy, tiến hành cắt mẫu nhuộm phần mô sẹo (phần nằm mơi trƣờng có màu xanh, trắng hay vàng xám) phần mô sẹo dƣới (phần tiếp xúc với môi trƣờng) Kết nhuộm mẫu cho thấy: Phần mô sẹo nằm môi trƣờng tất nghiệm thức cho kết nhuộm mẫu giống Các tế bào xếp sát nhau, hƣớng tâm (hƣớng phần lõi mẫu mô) Phần mô sẹo nằm dƣới môi trƣờng nghiệm thức không chủng dịch nấm mơi trƣờng ni cấy có kết nhuộm mẫu giống với phần mô sẹo nằm môi trƣờng Kết nhuộm mẫu phần dƣới nghiệm thức có chủng dịch nấm cho kết khác biệt so với kết nhuộm mẫu nghiệm thức không chủng dịch nấm Các tế bào xếp thƣa hơn, kích thƣớc tế bào lớn so với tế bào phần phần dƣới mô sẹo nghiệm thức khơng chủng dịch nấm 35 Hình 4.9 Mặt cắt mặt dƣới mô sẹo tiêu nuôi cấy mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L2,4D, 3mg/L BA sau 10 tuần (độ phóng đại 4x10) Hình 4.10 Mặt cắt mặt dƣới mô sẹo tiêu nuôi cấy mơi trƣờng MS có bổ sung 1mg/L2,4D, 3mg/L BA 10% dịch nấm sau 10 tuần (độ phóng đại 4x10) 36 Chúng cho rằng: Phần mơ sẹo (phần thƣờng có màu xanh, trắng hay vàng xám) phần non, nơi tế bào mô sẹo phân chia, tăng sinh, nơi có nhiều tế bào sinh chƣa bị ảnh hƣởng nhiều dịch nấm nên nhuộm ta không thấy khác biệt Phần dƣới mơ sẹo nghiệm thức có chủng dịch nấm có màu đen, nơi tập trung tế bào chết, tế bào già xốp so với phần mô sẹo, nên kết nhuộm mẫu cho thấy tế bào phần xếp thƣa có kích thƣớc lớn Đối với phần dƣới mô sẹo nghiệm thức không chủng dịch nấm tiếp xúc với môi trƣờng nhƣng khơng bị đen nên có tế bào chết nơi xảy phân chia tế bào nên tế bào cịn non xếp đặc Vì thế, kết nhuộm mẫu không cho khác biệt so với phần mô sẹo 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Đã tạo đƣợc dòng tiêu để sử dụng cho việc chon lọc dịng tiêu có tính kháng với nấm Phytophthora Dịch nấm bổ sung môi trƣờng nuôi cấy có ảnh hƣởng định khả tái sinh chồi từ mô sẹo Thành phần bổ sung ức chế đến khả tái sinh chồi mô sẹo, làm cho mô sẹo bật chồi đơn lẻ (chỉ 1-2 chồi cụm mô) Phƣơng pháp vô trùng dịch nấm cách sử dụng màng lọc (0.45μm) cho khả tái sinh chồi cao so với phƣơng pháp vô trùng dịch nấm cách hấp khử trùng (1,2 atm, 1210C 25 phút) Dịch nấm bổ sung mơi trƣờng ni cấy có ảnh hƣởng đến phát triển mô sẹo Phần mô tiếp xúc với mơi trƣờng bị đen, có nhiều tế bào chết xuất 5.2 Kiến nghị Cần gia tăng số lƣợng dòng tiêu vừa tạo đƣợc, đƣa trồng vƣờn ƣơm thực chon lọc cá thể có tính kháng Cần tiếp tục thực thêm thí nghiệm chủng dịch nấm Phytophthora với nhiều nồng độ để gia tăng khả tạo đƣợc dịng đột biến có tính kháng cao Cần có thêm nhiều phƣơng pháp đánh giá khả phát triển, phản ứng mô sẹo dịch nấm Nếu nhuộm mẫu khơng thể đƣa kết luận xác khả kích kháng mô sẹo, phản ứng mô sẹo q trình ni cấy với dịch nấm 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bùi Chí Bửu, 2002 Cơ sở di truyền tính kháng sâu bệnh hại trồng Nhà xuất Nông Nghiệp 272 trang Dƣơng Công Kiên, 2002 Nuôi cấy mô thực vật, tập Nhà xuất Đại học Quốc gia, TP Hồ Chí Minh 199 trang Nguyễn Hữu Định, 2005 Nghiên cứu nhân giống vơ tính tiêu (Piper nigrum) phương pháp ni cấy mơ Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công Nghệ Sinh Học, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Trần Văn Hịa, 2000 Sâu bệnh hại trồng, cách phòng trị Nhà xuất Trẻ Trần Văn Minh, 2003 Công nghệ sinh vật học thực vật Giáo trình cao họcnghiên cứu sinh, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Võ Thị Thu Oanh, 1999 Bệnh chuyên khoa Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng nƣớc Anandaraj, M 2000 Diseases of black pepper In Ravindran, P.N (Ed), Black pepper Piper nigrum Harwood Academic Publisher Kasim, R 1981 Ketahanan tujuh species lada terhadap Phytophthora Pembr Littri vol VIII (39), 34-38 (with English summary) Kueh K T and S.S Liang 1992 Occurrence and Management of wrinkled-leaf disease of black pepper Proe The International Workshop of black pepper Disease Bandarlampung, Indonesia: 227 – 232 39 PHỤ LỤC Kết tái sinh nghiệm thức sau 90 ngày cấy Số chồi hình thành nghiệm thức Số lần lặp lại DC CC CB CA KC KB KA 0 2 2 0 1 0 0 4 0 0 2 2 0 1 0 0 0 0 10 0 11 1 0 12 1 13 0 0 2 14 0 1 0 15 0 1 Tổng 31 13 10 19 12 14 Ghi chú: DC: đối chứng có nồng độ dịch nấm 0%, CC: nồng độ dịch nấm 5% có hấp khử trùng, CB: nồng độ dịch nấm 10% có hấp khử trùng, CA: nồng độ dịch nấm 20% có hấp khử trùng, KC: nồng độ dịch nấm 5% lọc vô trùng, KB: nồng độ dịch nấm 10% lọc vô trùng, KA: nồng độ dịch nấm 20% lọc vô trùng 40 PHỤ LỤC One-Way Analysis of Variance -Data: THANG.so_choi Level codes: THANG.nghiem_thuc Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 27.39048 4.5650794 2.638 0205 Within groups 169.60000 98 1.7306122 -Total (corrected) 196.99048 104 missing value(s) have been excluded Table of means for THANG.so_choi by THANG.nghiem_thuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 15 2.0666667 6052679 3396677 1.5899277 2.5434056 15 8666667 3217018 3396677 3899277 1.3434056 15 3333333 1259882 3396677 -.1434056 8100723 15 6666667 2519763 3396677 1899277 1.1434056 15 1.2666667 3711843 3396677 7899277 1.7434056 15 8000000 2225395 3396677 3232611 1.2767389 15 9333333 2666667 3396677 4565944 1.4100723 -Total 105 9904762 1283823 1283823 8102858 1.1706666 Multiple range analysis for THANG.so_choi by THANG.nghiem_thuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -3 15 3333333 X 15 6666667 X 15 8000000 X 15 8666667 X 15 9333333 X 15 1.2666667 XX 15 2.0666667 X -contrast difference +/limits - 1.20000 0.95348 * - 1.73333 0.95348 * - 1.40000 0.95348 * - 0.80000 0.95348 - 1.26667 0.95348 * - 1.13333 0.95348 * - 0.53333 0.95348 - 0.20000 0.95348 - -0.40000 0.95348 - 0.06667 0.95348 - -0.06667 0.95348 41 - -0.33333 0.95348 - -0.93333 0.95348 - -0.46667 0.95348 - -0.60000 0.95348 - -0.60000 0.95348 - -0.13333 0.95348 - -0.26667 0.95348 - 0.46667 0.95348 - 0.33333 0.95348 - -0.13333 0.95348 -* denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: DT.hstsc Level codes: DT.nghiem_thuc Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 2.467550 4112583 2.284 0423 Within groups 16.564998 92 1800543 -Total (corrected) 19.032548 98 missing value(s) have been excluded Table of means for DT.hstsc by DT.nghiem_thuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 13 6410256 2310065 1176874 4757112 8063401 14 2380952 1014460 1134065 0787943 3973962 15 1111111 0419961 1095610 -.0427882 2650105 14 1666667 0676665 1134065 0073657 3259676 14 3809524 1252940 1134065 2216514 5402533 15 2666667 0741798 1095610 1127673 4205660 14 2619048 0795176 1134065 1026038 4212057 -Total 99 2895623 0426466 0426466 2296571 3494675 Multiple range analysis for DT.hstsc by DT.nghiem_thuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -3 15 1111111 X 14 1666667 X 14 2380952 X 14 2619048 X 15 2666667 X 14 3809524 XX 13 6410256 X -contrast difference +/limits - 0.40293 0.32467 * 42 - 0.52991 0.31942 * - 0.47436 0.32467 * - 0.26007 0.32467 - 0.37436 0.31942 * - 0.37912 0.32467 * - 0.12698 0.31325 - 0.07143 0.31860 - -0.14286 0.31860 - -0.02857 0.31325 - -0.02381 0.31860 - -0.05556 0.31325 - -0.26984 0.31325 - -0.15556 0.30780 - -0.15079 0.31325 - -0.21429 0.31860 - -0.10000 0.31325 - -0.09524 0.31860 - 0.11429 0.31325 - 0.11905 0.31860 - 0.00476 0.31325 * denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: HSTTMS.hsttms Level codes: HSTTMS.nt Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 2.18571E-005 3.64286E-006 260 9494 Within groups 2.94250E-004 21 1.40119E-005 -Total (corrected) 3.16107E-004 27 missing value(s) have been excluded Table of means for HSTTMS.hsttms by HSTTMS.nt -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 0167500 0014930 0018716 0139971 0195029 0145000 0018484 0018716 0117471 0172529 0150000 0029439 0018716 0122471 0177529 4 0137500 0014930 0018716 0109971 0165029 0150000 0013540 0018716 0122471 0177529 0155000 0015546 0018716 0127471 0182529 0157500 0019311 0018716 0129971 0185029 -Total 28 0151786 0007074 0007074 0141381 0162191 43 Multiple range analysis for HSTTMS.hsttms by HSTTMS.nt -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -4 0137500 X 0145000 X 0150000 X 0150000 X 0155000 X 0157500 X 0167500 X -contrast difference +/limits - 0.00225 0.00551 - 0.00175 0.00551 - 0.00300 0.00551 - 0.00175 0.00551 - 0.00125 0.00551 - 0.00100 0.00551 - -0.00050 0.00551 - 0.00075 0.00551 - -0.00050 0.00551 - -0.00100 0.00551 - -0.00125 0.00551 - 0.00125 0.00551 - 0.00000 0.00551 - -0.00050 0.00551 - -0.00075 0.00551 - -0.00125 0.00551 - -0.00175 0.00551 - -0.00200 0.00551 - -0.00050 0.00551 - -0.00075 0.00551 - -0.00025 0.00551 -* denotes a statistically significant difference ... (Piper nigrum) IN VITRO KHÁNG NẤM Phytophthora sp.? ?? Giáo viên hƣớng dẫn: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN ThS NGUYỄN THỊ KIM LINH Đề tài “Bƣớc đầu tạo tiêu (Piper nigrum) in vitro kháng nấm Phytophthora sp.? ?? đƣợc tiến... nigrum) in vitro kháng nấm Phytophthora sp.? ?? để tạo dịng tiêu có khả chống chịu với nấm Phytophthora nhằm làm giảm thiệt hại loài nấm gây 2 1.2 Mục đích - Tạo tiêu có khả chống chịu nấm Phytophthora. .. VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  BƢỚC ĐẦU TẠO CÂY TIÊU (Piper nigrum) IN VITRO KHÁNG NẤM Phytophthora sp Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên