Tách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

71 981 1
Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Tách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

MỤC LỤCBảng 1.1. Phân loại cấu trúc một số penicillin 3Bảng 1.2. Phân loại cấu trúc một số cephalosporin 5Bảng 1.3. Hằng số axit của các kháng sinh nghiên cứu 61.2. Tình hình lạm dụng kháng sinh ở Việt Nam trên thế giới hiện nay 7Hình 2.1. Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo của hệ điện di mao quản 16Hình 2.2. Cấu trúc của các Mixen dòng EOF trong MEKC 20 Từ phương trình Hi = k1.Ci khi tăng nồng độ chất phân tích thì chiều cao pic sắc ký cũng tăng lên, song lý thuyết chỉ ra rằng tỉ lê đó chỉ đúng trong một khoảng nhất định. Vì vậy chúng tôi phải khảo sát khoảng tuyến tính của chất phân tích. 48Bảng 3.8 Chiều cao pic β-Lactam tại các nồng độ khác nhau. 48Bảng 3.9 Giới hạn phát hiện của phương pháp 51Bảng 3.13: Đánh giá độ lặp lại của phương pháp phân tích 55MỞ ĐẦUNgày nay, khi xã hội ngày càng phát triển thì vấn đề sức khỏe của con người ngày càng được chú trọng đặc biệt là các sản phẩm liên quan trực tiếp đến sức khỏeβ-Lactam là thuốc kháng sinh tổng hợp quan trọng chữa bệnh cho con người, thú y từ khi chúng được giới thiệu trên thị trường vào năm 1938 là loại kháng sinh được dùng nhiều nhất hiện nay. Liều lượng cách dùng kháng sinh không đúng sẽ dễ bị vi khuẩn nhờn thuốc, kháng thuốc, từ đó việc chữa trị bệnh càng khó khăn. Ngoài ra còn gây lãng phí cho người bệnh vì có các bệnh do virut không chữa được bằng kháng sinh nhưng vẫn dùng kháng sinh, gây khó khăn cho việc chuẩn đoán các bệnh ảnh hưởng sức khỏe của người bệnh. Hàm lượng lớn kháng sinh trong máu gây ra các bệnh về thận, 1 đặc biệt ở người cao tuổi. Vì vậy kiểm soát phân tích thuốc kháng sinh đối với người bệnh là biện pháp cần thiết để nâng cao hiệu quả sử dụng chúng.Ở Việt Nam đã có rất nhiều công trình nghiên cứu tách xác định đồng thời các kháng sinh β-Lactam trong các mẫu dược phẩm, sinh học, thực phẩm môi trường chủ yếu là các công trình phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC. Phương pháp HPLC là phương pháp tách chọn lọc, độ nhạy cao, lượng mẫu bơm ít thời gian phân tích ngắn. Tuy nhiên phương pháp cũng có một số nhược điểm là phải sử dụng một lượng lớn dung môi để rửa cột, giá thành phân tích cao. Ngược lại, phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) lại sử dụng một lượng hóa chất không đáng kể, tiết kiệm chi phí từ 3 – 4 lần, lượng mẫu bơm nhỏ hơn trong HPLC hàng trăm lần, cỡ nl, cho độ tin cậy cao.Tách xác định đồng thời kháng sinh β-Lactam bằng phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) trong mẫu dược phẩm sinh học là một hướng nghiên cứu mới, song với ưu điểm của nó thì phương pháp sẽ ngày càng thông dụng được áp dụng nhiều trong phòng thí nghiệm phân tích mẫu dịch vụ. Vì vậy chúng tôi quyết định chọn đề tài là “ Tách xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản”CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN1.1. Giới thiệu về chất kháng sinh β-lactam [1,2,10,25]Là các kháng sinh mà phân tử chứa vòng β-Lactam. Gồm các nhóm: penicillin, cephalosporin, monobactam, cacbapenem trong đó hai nhóm sử dụng phổ biến lớn nhất là penicillin cephalosporin. Các penicillin thu được từ môi trường nuôi cấy nấm Penicilium notatum Penicillium chryrogenum, bán tổng hợp từ axit 6-amino penicillanic (6APA).Các cephalosporin tự nhiên được phân lập từ môi trường nuôi cấy nấm Cephalosporium acremonium bán tổng hợp từ axit 7-amino cephalosporinic (7ACA) xuất phát từ các kháng sinh thiên nhiên. 2 Cấu trúc phân loại:* Các penicillinCác penicillin đều có cấu trúc cơ bản gồm 2 vòng: vòng thiazolidin, vòng β-Lactam NSCH3CH3NHOCORCOOM2341567Hình 1.1. Công thức cấu tạo các kháng sinh penicillin Tên gọi chung công thức của các penicillin khi chưa có gốc R là: (2S,5R,6R 3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Khi thay thế R bằng các gốc khác nhau, những cacbon bất đối có cấu hình 2S, 5R, 6R ta có các penicilin có độ bền, dược động học phổ kháng khuẩn khác nhau. Với M là gốc cation thường là: K, Na, H. Nhóm kháng sinh penicillin được chia thành 3 nhóm chính với hoạt tính khác nhau.Bảng 1.1. Phân loại cấu trúc một số penicillin Tên kháng sinh R Hoạt tínhNhóm penicillin tự nhiênPenicillin G (PENG)BenzathinCH2-BenzylGồm các Penicillin tự nhiên dẫn chất.Phổ hẹp: vi khuẩn gram(+). Không kháng β-lactamase3 Nhóm penicillin kháng penicilliiaseOxacillin(OXA)NC-OCH36-[(5-methyl-3-phenyl-1,2-oxazole-4-carbonyl)amino]Cloxacillin (CLO)ClNOC-CH36-{[3-(2-chlorophenyl )-5-methyl-oxazole-4-carbonyl]amino}Là các Penicillin bán tổng hợp. Phổ hẹp như nhóm I. Kháng penicilliiase, không tác động vào vòng β – Lactam được.Nhóm penicillin phổ rộngAmpicillin (AMP)CH-NH2NH26-([(2R)-2-amino-2-phenylacetyl]amino)Amoxicillin (AMO)CH-NH2NH2HO6-{[(2R)-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)-acetyl]amino}Phổ rộng, tác dụng cả khuẩn gram (+) (-). Không kháng β-lactamase penicilliiase* Các cephalosporin Các cephalosporin cấu trúc chung gồm 2 vòng: vòng β-Lactam 4 cạnh gắn với 1 dị vòng 6 cạnh, những cacbon bất đối có cấu hình 6R, 7R. Khác nhau bởi các gốc RNHOCOR1NSR3R2COOM123456784 Hình 1.2. Công thức cấu tạo các kháng sinh cephalosporinTên gọi chung của các cephalosporin khi chưa có gốc R là: (6R,7R) 8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acidKhi thay đổi các gốc R, những cacbon bất đối có cấu hình 6R, 7R được các cephalosporin có độ bền, tính kháng khuẩn dược động học khác nhau.Dựa vào khổ kháng khuẩn, chia các cephalosporin thành 4 thế hệ. Các cephalosporin thế hệ trước tác dụng trên vi khuẩn gram dương mạnh hơn, nhưng trên gram âm yếu hơn thế hệ sau. Trong bản luận văn này, chúng tôi chỉ trình bày thế hệ I (CEP) thế hệ III (CEF)Bảng 1.2. Phân loại cấu trúc một số cephalosporinThế hệ Kháng sinh R1 R2 R3I: Phổ tác dụng trung bình, tác dụng mạnh nhất trên vi khuẩn gram (+), yếu nhất trên gram (-). Không bền dễ bị β-lactamase phá hủyCephalexin (CEP)CH-NH2H -CH3III: Tác dụng tốt trên vi khuẩn gram (-), trên vi khuẩn gram (+) thì tác dụng kém penicillin cephalosporin thế hệ I. Bền với β-lactamaseCefixim (CEF)SNNNH2HOOCCH2OH -CH=CH2Tính chất:Các β-lactam thường ở dạng bột kết tinh màu trắng, dạng axit ít tan trong nước, dạng muối natri kali dễ tan; tan được trong metanol một số dung môi hữu cơ phân cực vừa phải. Tan trong dung dịch axit kiềm loãng do đa phần chứa đồng thời nhóm –COOH –NH2.5 Cực đại hấp phụ chủ yếu do nhân phenyl, tùy vào cấu trúc khác làm dạng phổ thay đổi (đỉnh phụ, vai, sự dịch chuyển sang bước sóng ngắn hoặc dài, giảm độ hấp thụ).Các β-lactam là các axit với nhóm –COOH có pKa= 2.5-2.8 tùy vào cấu trúc phân tử. Trong môi trường axit, kiềm, β-lactamase có tác dụng phân cắt khung phân tử, mở vòng β-lactam làm kháng sinh mất tác dụng.Bảng 1.3. Hằng số axit của các kháng sinh nghiên cứuTên kháng sinhpKa1Tên kháng sinhpKa1Tên kháng sinhpKa1PEN 2.74 AMO 2.8 CLO 2.7AMP 2.7 CEP 2.6 CEF 2.75OXA 2.72Tác dụng:Cơ chế: Các penicillin có khả năng acyl hóa các D- alanin tranpeptidase, làm cho quá trình tổng hợp peptidoglycan không được thực hiện. Sinh tổng hợp vách tế bào bị ngừng lại. Ít tác dụng trên vi khuẩn gram (-). Mặc khác, các penicillin còn hoạt hóa enzym tự phân giải murein hydroxylase làm tăng phân hủy vách tế bào, kết quả là vi khuẩn bị tiêu diệt.Ngăn cản xây dựng giảm độ bền của mang tế bào vi khuẩn nên chủ yếu kìm hãm sự tồn tại phát triển của vi khuẩn. Các kháng sinh β-lactam có hoạt phổ rộng.Kháng thuốc: Vi khuẩn sinh ra các β-lactamase, là enzim có tác dụng mở vòng β-lactam, theo phản ứng ái nhân vào nhóm C=O, làm kháng sinh mất tác dụng. Tất cả các cách kháng không sinh ra β-lactamase để thực hiện gọi là kháng gián tiếp (được gọi là kháng methicillin).Độc tính:6 Các kháng sinh β-lactam độc tính thấp, nhưng cũng dễ gây dị ứng thuốc: dị ứng, mày đay, vàng da, gây độc với thận, rối loạn tiêu hóa…nguy hiểm nhất là sốc phản vệ Thuốc không dùng cho trẻ sơ sinh trong thời kỳ cho con bú. Chống chỉ định dị ứng với thành phần của thuốc.1.2. Tình hình lạm dụng kháng sinh ở Việt Nam trên thế giới hiện nayNhư trên cho thấy, có nhiều loại kháng sinh khác nhau, tác động bằng các cơ chế khác nhau đối với các vi trùng khác nhau. Kháng sinh chỉ có tác dụng với các bệnh do vi trùng (bacteria), không có tác dụng với các bệnh do siêu vi (virus). Để điều trị bệnh nhiễm trùng cần biết loại vi trùng gây bệnh để chọn kháng sinh thích hợp. Vì thiếu hiểu biết vì tin tưởng sai lầm, nên ở khắp nơi trên thế giới, nhất là ở các nước đang phát triển, người ta đã dùng kháng sinh quá nhiều, cả khi không cần thiết, không đúng chỉ định không đúng cách.Năm 2000, các bác sĩ Hoa kỳ viết 160 triệu toa thuốc kháng sinh cho 275 triệu người dân, một nửa đến 2/3 số toa đó được coi là không cần thiết.Theo R. Gonzales [6,26], 3/4 số kháng sinh dùng ở ngoại chẩn là cho viêm đường hô hấp trên trong khi 60% các trường hợp viêm đường hô hấp trên là do siêu vi, không cần không điều trị được bằng kháng sinh. Dùng cephalosporins bừa bãi khiến enterococus trở nên đề kháng cũng đã xuất hiện các vi trùng enterococus kháng vancomycin. Theo báo cáo của A.W. McCormick [13] năm 2003, tỉ lệ pneumococus kháng penicillin tăng nhanh ở Hoa kỳ, tác giả dự tính đến năm 2004, 41% pneumococcus sẽ đề kháng penicillin. Tỉ lệ vi trùng lao kháng thuốc tăng cao khiến phải dùng 4 thứ thuốc kết hợp để điều trị bệnh lao. Các vi trùng kháng thuốc không khu trú ở một địa phương nào vì với phương tiện giao thông mau lẹ, vi trùng có thể di chuyển đến khắp nơi trên thế giới trong vòng 24 giờ. D.P. Raymond [17] mỗi năm ở Hoa kỳ có 2 triệu người bị nhiễm trùng vì lây lan trong bệnh viện, hơn một nửa số này là do vi trùng kháng thuốc, gây tử vong cho 70 ngàn người làm tốn của ngân sách từ 5 đến 10 tỉ đô-la 7 Tại Việt Nam, theo báo cáo của Nguyễn Kim Phượng J. Chalker [4], năm 1997 tại 23 trạm y tế ở Hải phòng, 69% bệnh nhân được cho kháng sinh, 71% bệnh nhân không dùng kháng sinh đúng liều lượng đúng thời gian (dưới 5 ngày). Theo [4] Qua thống kê tại khoa Dị ứng - Miễn dịch lâm sàng Bệnh viện Bạch Mai cho thấy, hơn 70% bệnh nhân dị ứng do dùng kháng sinh, trong đó có không ít trẻ em. Sốc phản vệ do dùng kháng sinh là tai biến nghiêm trọng nhất, dễ gây tử vong. Nhiều trường hợp dị ứng thuốc gây giảm hồng cầu, bạch cầu, thiếu máu huyết tán, xuất huyết giảm tiểu cầu, tổn thương tế bào gan . Phó giám đốc Bệnh viện Nhi Trung ương Nguyễn Văn Lộc thừa nhận, tiền mua kháng sinh đang chiếm tới 60% tổng kinh phí mua thuốc của bệnh viện. Nhiều loại kháng sinh gần như đã bị kháng hoàn toàn. Đối với vi khuẩn E.coli (gây bệnh tiêu chảy, viêm phổi, nhiễm trùng huyết), tỉ lệ kháng thuốc ở Ampiciline là 88%, Amoxiciline là 38,9%. Đối với vi khuẩn Klebsiella (gây bệnh nhiễm trùng huyết viêm phổi), tỉ lệ kháng thuốc của Ampiciline gần 97% Amoxiciline là 42%Các nhà chuyên môn đã báo động về hậu quả nguy hiểm của sự lạm dụng kháng sinh từ nhiều chục năm nay. Năm 1981, sau hội nghị ở Santa Domingo, các nhà chuyên môn đã thành lập “Liên Hiệp vì sự Sử Dụng Kháng Sinh Hợp Lý” (Alliance for the Prudent use of Antibiotics) có thành viên thuộc 93 quốc gia nhằm chống lại sự lan tràn của các bệnh do vi trùng kháng thuốc tại các nước đang phát triển. Năm 2001, Tổ Chức Y Tế Thế Giới đã đề ra “Kế Hoạch Toàn Cầu để Kiểm Soát Sự Đề Kháng Kháng Sinh”. Kế hoạch đề cập đến mọi hoạt động y tế của tất cả các quốc gia đã phát triển cũng như đang phát triển: Phòng thí nghiệm phải tăng cường khả năng chẩn đoán các bệnh nhiễm trùng, giúp chẩn đoán nhanh chóng chính xác, đo lường độ nhạy của kháng sinh, đo nồng độ kháng sinh trong máu. Ngành dược cần cung cấp đầy đủ thuốc thiết yếu, ngăn ngứa sự lưu hành của các thuốc giả, 5% lượng thuốc lưu hành tại các nước đang phát triển là thuốc giả mạo, không đúng phẩm chất, hàm lượng hoặc không có hoạt chất……8 Nếu ngăn ngừa được sự phát triển của các vi trùng kháng thuốc chúng ta sẽ bảo vệ được môi trường sống, duy trì được sự hữu hiêu của kháng sinh, hạn chế được chi phí về y tế cứu đươc nhiều sinh mạng. 1.3. Các phương pháp phân tích định lượng β-lactam 1.3.1. Phương pháp quang học Phương pháp đo quang là phương pháp phân tích dựa trên tính chất quang học của chất cần phân tích như tính hấp thụ quang, tính phát quang… Các phương pháp này đơn giản, dễ tiến hành, thông dụng, được ứng dụng nhiều khi xác định β-lactam, đặc biệt trong dược phẩm.Các β-lactam hấp thụ UV nhưng không nhiều cực đại hấp thụ, chúng cũng tạo phức với một số ion kim loại giúp nâng cao độ nhạy của phép đo. Trong nhiều trường hợp, các β-lactam được thủy phân thành các chất đơn giản hơn để phân tích.Các phương pháp phát quang có thể dùng xác định các β-lactam với độ nhạy khá cao dựa trên đặc tính tạo phức với ion kim loại hay phản ứng quang hóa của các β-lactam. A. Fernández-González cộng sự [11] dùng Cu2+ thủy phân tạo phức với AMP, với bước sóng kích thích 343nm, phát xạ 420nm có giới hạn phát hiện thu được 4.10-7M (0.16 mg/l). Phương pháp này kết hợp phương pháp dòng chảy cho hiệu quả tốc độ phân tích cao, sử dụng để phân tích AMP trong thuốc uống, huyết thanh…Theo [18], F. Belal cộng sự xác định AMO AMP trong thuốc uống bằng phương pháp phổ hấp thụ phân tử. Phương pháp cải tiến sự thủy phân của kháng sinh với HCl 1M, NaOH 1M sau đó thêm PdCl2, KCl 2M. Kết quả tạo ra phức màu vàng được đo tại bước sóng 335 nm. Khoảng tuyến tính từ 8- 40 mg/l giới hạn phát hiện của AMP là 0.73 mg/l, AMP 0.76 mg/lWei Liu cộng sự [28], sử dụng phản ứng quang hóa của β-lactam với hệ luminol-K3Fe(CN)6 kết hợp phương pháp chiết pha rắn mắc trực tiếp đã phân tích một số β-lactam (penicillin, cefradine, cefadroxil, CEP ) trong sữa đạt độ nhạy cao: PEN là 0.5 9 mg/l, cefradine 0.04 mg/l, cefadroxil là 0.08 mg/l, 0.1 mg/l CEP. Kết quả được kiểm chứng lại bằng phương pháp HPLC, detector UV-VIS, nồng độ CEP trong mẫu là 0.1 mg/l. Tuy nhiên, nếu không kết hợp với phương pháp chiết pha rắn mắc nối tiếp, các phương pháp quang học chủ yếu chỉ dùng xác định riêng rẽ từng chất kháng sinh trong các đối tượng có nhiều yếu tố ảnh hưởng hay chất tương tự chất phân tích, việc xác định sẽ kém chính xác. Ngoài ra, trong nhiều trường hợp chất phân tích cần thủy phân mới phát hiện được cũng là sự hạn chế của phương pháp này.1.3.2. Phương pháp điện hóaMột số phương pháp điện hóa đã được ứng dụng để phân tích các β-lactam nhưng không phổ biến nhiều. Theo [7], Daniela P. Santos cộng sự sử dụng sensor điện thế phân tích AMO, đạt giới hạn phát hiện 0.92 μM (0.39 mg/l) trong môi trường đệm axetat 0.1M pH=5.2.1.3.3. Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)Trong những năm gần đây, phương pháp HPLC đã đóng một vai trò vô cùng quan trọng trong việc tách phân tích các chất trong mọi lĩnh vực khác nhau, nhất là trong việc tách phân tích lượng vết các chất. Phương pháp HPLC với cột tách pha đảo được sử dụng rất rộng rãi để xác định các kháng sinh β-lactam trong các loại mẫu khác nhau do có nhiều ưu thế so với các phương pháp khác vì có độ chính xác, độ nhạy, độ lặp lại cao, khoảng tuyến tính rộng…Detector ghép nối trong máy HPLC cho phép phát hiện sự xuất hiện chất sau khi rửa giải. Hiện nay có rất nhiều loại detector được sử dụng cho mục đích này đã mở rộng khả năng phân tích được rất nhiều loại chất bằng phương pháp HPLC. Đối với phân tích dư lượng, detector khối phổ (MS) là một sự lựa chọn ưu tiên do có thể phát hiện phân tích chất trong các đối tượng phức tạp.Theo [29], Blanchflower WJ cộng sự dùng HPLC – MS phân tích penicillin V, PENG, OXA, CLO, dicloxacillin trong thịt, thận sữa. Điều kiện chạy sắc ký: cột 10 [...]... Chọn phương pháp bơm mẫu Trong kỹ thuật điện di mao quản có thể đưa vào mao quản bằng ba phương pháp phương pháp điện động học (electrokinetic), phương pháp thủy động học (hydrodynamic) phương pháp Xiphong (siphon) Trong đó phương pháp điện động học thủy động học được dùng rộng rãi Nguyên tắc của phương pháp điện là đặt một thế nhất định trong một thời gian nhất định vào đầu của hai điện cực,... Focusing : CIEF) 6 Điện di mao quản đẳng tốc độ (Capillary Iso-Tacho-Phoresis: CITP) 2.2.5 Phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) Phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen ( MCEK, hay viết ngắn gọn là MEKC) là một kiểu của kỹ thuật tách theo bản chất của sự điện di có sử dụng kết hợp cả tính chất của kỹ thuật điện di mao quản ( Capillary Electrophoresis) sắc ký lỏng... chất trong hỗn hợp mẫu Các bộ phận này có thể xem trong sơ đồ nguyên lý mô tả ở hình 1 Hình 2.1 Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo của hệ điện di mao quản 2.2.3 Các quá trình xẩy ra trong mao quản 16 Trong quá trình điện di, dưới tác dụng của lực điện trường E, do điện thế V đặt vào hai đầu mao quản tạo ra, trong mao quản có các quá trình là: 1 Sự xuất hiện lớp điện kép sát thành mao quản, 2 Trong mao quản. .. thống kê phương pháp phân tích - Áp dụng phân tích một số mẫu thuốc mẫu máu - Đánh giá ưu khuyết điểm của phương pháp 250C 2.2 Giới thiệu chung về phương pháp Điện di mao quản [7,8,20] Để thực hiện được nhiệm vụ của luận văn, kỹ thuật tách được chọn là phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) 2.2.1 Nguyên tắc của phương pháp điện di mao quản - Nguyên tắc của sự tách: là... tách cao, thời gian tách ngắn, lượng mẫu tiêu tốn ít Phương pháp đã được ứng dụng để tách xác định các kháng sinh β-lactam trong nhiều đối tượng mẫu khác nhau L Nozal, L Arce1,A.R´ıos, M Valcárcel [21] sử dụng phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) với thành phần dung dịch đệm điện di gồm 40 mM đệm Borat, 100 mM SDS pH 8.5 Tiến hành phân tích tại thế điện di 10 kV, nhiệt độ... là các kháng sinh β-lactam được sử dụng phổ biến hiện nay 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Nội dung đề tài cần giải quyết là: 14 - Lựa chọn phương pháp nghiên cứu là phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) với detector DAD - Nghiên cứu chọn điều kiện tối ưu tách các kháng sinh β-lactam có thể tách xác định đồng thời các kháng sinh β-lactam như: pH, nồng độ chất điện ly, điện thế, nhiệt... Cụ thể các kiểu đó là: 1 Điện di mao quản cổ điển (Capillary Electrophoresis: CE) 2 Điện di mao quản vùng (Capillary Zone Electrophoresis: CZE) 3 Điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (Micell), (Micellary Capillary ElectroKenetic:MEK hay MCEK) 4 Điện di mao quản Gel-Filter (sàng lọc hay rây phân tử), (Capillary Gel Electrophoresis: Gel-CE), 5 Điện di mao quản hội tụ đẳng điện (Capillary Iso-electric... lệch chuẩn tương đối không lớn hơn 2.2% thời gian phân tích ngắn 6 phút/ mẫu Attila Gaspar cộng sự [14] đã tách xác định thành công 14 kháng sinh họ cephalosporin bằng phương pháp điện di mao quản vùng (capillary zone electrophoresis – CZE) Quá trình tách dùng đệm photphat 25 mM có pH = 6.8 Phương pháp này tách được 14 kháng sinh trong vòng 20 phút, giới hạn phát hiện 14 kháng sinh cefalosporin... hai điện cực, một điện cực nhúng trong lọ mẫu một điện cực kia nhúng trong lọ đệm Trong khi đó hai đầu của 28 mao quản cũng được nhúng vào hai lọ mẫu đệm nói trên Như thế những ion mẫu sẽ di chuyển vào mao quản tạo thành vùng mẫu đầu mao quản Ion nào có kích thước nhỏ, điện tích lớn sẽ được dẫn vào mao quản nhiều hơn Trong mẫu nếu có hai chất phân tích có cùng nồng độ nhưng điện tích khác nhau... nhúng vào lọ chứa mẫu đầu kia nhúng vào lọ chứa đệm để mẫu tự xiphong vào ống mao quản trong thời gian nhất định Như thế mẫu nạp vào được đặt ở đầu mao quản cao Phương pháp này đơn giản nhưng khi nạp một lượng mẫu nhỏ cỡ vài nl thì khó chính xác áp dụng cho những hệ điện di tự tạo đơn giản, độ lặp lại kém Vì vậy ít được dùng Phương pháp bơm mẫu bằng áp suất là dùng một áp suất thích hợp để nén vào . nghiệm và phân tích mẫu dịch vụ. Vì vậy chúng tôi quyết định chọn đề tài là “ Tách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao. hơn trong HPLC hàng trăm lần, cỡ nl, cho độ tin cậy cao .Tách và xác định đồng thời kháng sinh β-Lactam bằng phương pháp điện di mao quản điện động học

Ngày đăng: 17/11/2012, 09:46

Hình ảnh liên quan

Hình 1.2. Công thức cấu tạo các kháng sinh cephalosporin - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 1.2..

Công thức cấu tạo các kháng sinh cephalosporin Xem tại trang 5 của tài liệu.
Hình 2.1. Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo của hệ điện di mao quản - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 2.1..

Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo của hệ điện di mao quản Xem tại trang 16 của tài liệu.
Hình 2.2. Cấu trúc của các Mixen và dòng EOF trong MEKC - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 2.2..

Cấu trúc của các Mixen và dòng EOF trong MEKC Xem tại trang 20 của tài liệu.
Hình 3.1 Phổ hấp thụ của các β-Lactam (nồng độ 10mg/l) - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.1.

Phổ hấp thụ của các β-Lactam (nồng độ 10mg/l) Xem tại trang 27 của tài liệu.
Hình 3.2 Sắc đồ điện di của β-Lacta mở pH 8.25; 8.0; 7.75; 7.5 - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.2.

Sắc đồ điện di của β-Lacta mở pH 8.25; 8.0; 7.75; 7.5 Xem tại trang 32 của tài liệu.
Bảng 3.1 Khảo sát ảnh hưởng của pH đến thời gian di chuyển của β-Lactam - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.1.

Khảo sát ảnh hưởng của pH đến thời gian di chuyển của β-Lactam Xem tại trang 32 của tài liệu.
Hình 3.5 Ảnh hưởng của nồng độ SDS trong dung dịch đệm điện di đến độ điện di hiệu dụng của β-Lactam  - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.5.

Ảnh hưởng của nồng độ SDS trong dung dịch đệm điện di đến độ điện di hiệu dụng của β-Lactam Xem tại trang 36 của tài liệu.
HÌnh 3.6 Sắc đồ điện di của β-Lactam tại nồng độ đệm 20 mM, 25 mM, 30 mM và 35 mM - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

nh.

3.6 Sắc đồ điện di của β-Lactam tại nồng độ đệm 20 mM, 25 mM, 30 mM và 35 mM Xem tại trang 39 của tài liệu.
Bảng 3.3 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ đệm tới thời gian lưu (phút) - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.3.

Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ đệm tới thời gian lưu (phút) Xem tại trang 39 của tài liệu.
HÌnh 3.8 Sắc đồ điện di tại thời gian bơm mẫu 8s, 10s và 12s - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

nh.

3.8 Sắc đồ điện di tại thời gian bơm mẫu 8s, 10s và 12s Xem tại trang 41 của tài liệu.
Hình 3.9 Ảnh hưởng của thời gian bơm mẫu đến chiều cao pic β-Lactam  - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.9.

Ảnh hưởng của thời gian bơm mẫu đến chiều cao pic β-Lactam Xem tại trang 42 của tài liệu.
HÌnh 3.10 Sắc đồ điện di thế điện di 15kV, 20kV và 25kV - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

nh.

3.10 Sắc đồ điện di thế điện di 15kV, 20kV và 25kV Xem tại trang 43 của tài liệu.
Hình 3.11 Ảnh hưởng của thế điện di đến độ điện di hiệu dụng của β-Lactam  - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.11.

Ảnh hưởng của thế điện di đến độ điện di hiệu dụng của β-Lactam Xem tại trang 44 của tài liệu.
HÌnh 3.12. Sắc đồ điện di ảnh hưởng của nhiệt độ tại 250C, 280C và 300C - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

nh.

3.12. Sắc đồ điện di ảnh hưởng của nhiệt độ tại 250C, 280C và 300C Xem tại trang 45 của tài liệu.
Bảng 3.6 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ tới thời gian di chuyển β-Lactam - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.6.

Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ tới thời gian di chuyển β-Lactam Xem tại trang 46 của tài liệu.
Hình 3.14. Sắc đồ điện di của β-Lactam tại điều kiện tối ưu. - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.14..

Sắc đồ điện di của β-Lactam tại điều kiện tối ưu Xem tại trang 48 của tài liệu.
Bảng 3.8 Chiều cao pic β-Lactam tại các nồng độ khác nhau. - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.8.

Chiều cao pic β-Lactam tại các nồng độ khác nhau Xem tại trang 48 của tài liệu.
Hình 3.15. Sắc đồ điện di của β-Lactam tại nồng độ 15ppm - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.15..

Sắc đồ điện di của β-Lactam tại nồng độ 15ppm Xem tại trang 49 của tài liệu.
Hình 3.16 Đường chuẩn của 7 loại β-Lactam nồng độ 1 -10 mg/l - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.16.

Đường chuẩn của 7 loại β-Lactam nồng độ 1 -10 mg/l Xem tại trang 50 của tài liệu.
Bảng 3.9 Giới hạn phát hiện của phương pháp - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.9.

Giới hạn phát hiện của phương pháp Xem tại trang 51 của tài liệu.
Kết quả phân tích được trình bày trong bảng sau - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

t.

quả phân tích được trình bày trong bảng sau Xem tại trang 52 của tài liệu.
Bảng 3.11 Khảo sát độ chính xác của phương pháp phân tích (5mg/l) - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.11.

Khảo sát độ chính xác của phương pháp phân tích (5mg/l) Xem tại trang 53 của tài liệu.
Bảng 3.13: Đánh giá độ lặp lại của phương pháp phân tích - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.13.

Đánh giá độ lặp lại của phương pháp phân tích Xem tại trang 55 của tài liệu.
Bảng 3.15. Kết quả độ thu hồi xác định β-Lactam theo phương pháp thêm chuẩn trong mẫu thuốc - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.15..

Kết quả độ thu hồi xác định β-Lactam theo phương pháp thêm chuẩn trong mẫu thuốc Xem tại trang 58 của tài liệu.
Bảng 3.16. Kết quả tính nồng độ Cx và sự sai khác hàm lượng so với kết quả in trên nhãn thuốc - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.16..

Kết quả tính nồng độ Cx và sự sai khác hàm lượng so với kết quả in trên nhãn thuốc Xem tại trang 59 của tài liệu.
Bảng 3.17 Kết quả phân tích hàm lượng kháng sinh β-Lactam trong mẫu máu. - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Bảng 3.17.

Kết quả phân tích hàm lượng kháng sinh β-Lactam trong mẫu máu Xem tại trang 60 của tài liệu.
Hình 3.17. Sắc đồ điện di của β-Lactam trong mẫu thuốc - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.17..

Sắc đồ điện di của β-Lactam trong mẫu thuốc Xem tại trang 68 của tài liệu.
Hình 3.18. Đường thêm chuẩn mẫu thuốc của β-Lactam phụ thuộc vào chiều  cao pic. - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

Hình 3.18..

Đường thêm chuẩn mẫu thuốc của β-Lactam phụ thuộc vào chiều cao pic Xem tại trang 70 của tài liệu.
HÌnh 3.20 Đường thêm chuẩn của AMO và CLO trong mẫu máu phụ thuộc vào chiều cao pic - Tách và xác định β-Lactam  trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

nh.

3.20 Đường thêm chuẩn của AMO và CLO trong mẫu máu phụ thuộc vào chiều cao pic Xem tại trang 71 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan