Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch và chống viêm gan mạn của viên nén livganic trên thực nghiệm TT

24 nhiên nồng độ IgG máu ngoại vi có gia tăng rõ rệt hai nghiên cứu mơ hình suy giảm miễn dịch CY cấp tính CY mạn tính Kết nghiên cứu mơ hình suy giảm miễn dịch mạn tính CY cho thấy viên nén Livganic có tác dụng làm gia tăng số lượng tế bào lympho T CD4+, không làm gia tăng số lượng tế bào lympho T CD8a+, làm gia tăng tỷ lệ CD4+/CD8a+ Bên cạnh đó, cytokin quan trọng tế bào lympho T CD4+ IL – có gia tăng rõ rệt nhóm sử dụng Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY Hiệu tăng cường miễn dịch thông qua tế bào lympho T quan sát thấy thông qua số phản ứng bì với kháng nguyên OA tất nghiên cứu miễn dịch Như vậy, thấy tác dụng Livganic lên tế bào lympho T theo chiều hướng làm gia tăng Th1 cytokin chống xơ hóa có tác dụng có lợi chống lại q trình xơ hóa gan KẾT LUẬN Viên nén Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch: Trên mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY liều 200 mg lần nhất, viên nén Livganic làm tăng đáp ứng miễn dịch dịch thể thông qua: Tăng nồng độ IgG máu ngoại vi; tăng đáp ứng miễn dịch tế bào: Tăng phản ứng bì với kháng nguyên OA tăng nồng độ IL – Trên mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY liều nhỏ 10 ngày, viên nén Livganic làm tăng đáp ứng miễn dịch dịch thể: Tăng nồng độ IgG máu ngoại vi; tăng đáp ứng miễn dịch tế bào: Tăng phản ứng bì với kháng ngun OA Trên mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ ngày, Livganic làm tăng đáp ứng miễn dịch chung thông qua: Tăng số lượng bạch cầu máu ngoại vi, tăng số lượng tế bào lympho, tăng số lượng bạch cầu đa nhân trung tính, cải thiện hình ảnh vi thể giải phẫu bệnh lách tuyến ức; tăng đáp ứng miễn dịch tế bào: Làm tăng phản ứng bì với kháng nguyên OA, làm phục hồi tỷ lệ CD4+/CD8a+ Viên nén Livganic có tác dụng chống viêm gạn tính: Trên mơ hình viêm gan mạn tính gây CCl4 18 tuần, viên nén Livganic làm giảm tỷ lệ chuột chết, cải thiện hình ảnh đại thể giải phẫu bệnh vi thể, làm hạn chế gia tăng trọng lượng gan, cải thiện chức gan (làm tăng albumin tăng cholesterol), làm tăng số lượng hồng cầu số lượng huyết sắc tố Như vậy, viên nén Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch chống viêm gan mạn tính mơ hình động vật thực nghiệm KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu, đưa số kiến nghị sau: - Tiến hành thêm số nghiên cứu chuyên sâu nhằm tìm hiểu mối liên quan tác dụng kích thích miễn dịch tác dụng hạn chế tổn thương gan mạn tính sản phẩm Livganic - Tiến hành đánh giá tác dụng Livganic số mơ hình viêm gan khác mơ hình viêm gan mạn tính virus Phần A: GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết luận án Viêm gan mạn tính bệnh lý gây nhiều tác nhân, dẫn tới hậu xơ gan, ung thư gan nguyên nhân dẫn tới gia tăng gánh nặng bệnh tật tử vong Cơ chế đáp ứng miễn dịch rối loạn gây đáp ứng miễn dịch nguyên nhân quan trọng hàng đầu đóng góp vào tổn thương gan dẫn tới xơ gan, đặc biệt đáp ứng miễn dịch nguyên nhân gây viêm gan mạn virus Ngược lại, trình xơ hóa gan đáp ứng miễn dịch kéo dài với tác nhân gây bệnh dẫn tới suy giảm hệ thống miễn dịch gan thể Hạn chế q trình xơ hóa gan yếu tố quan trọng điều trị bệnh lý viêm gan mạn tính, đặc biệt viêm gan virus Do vậy, hướng nghiên cứu phát triển thuốc điều trị viêm gan mạn virus tìm sản phẩm có khả nâng cao khả đáp ứng miễn dịch thể có khả hạn chế q trình diễn tiến dẫn tới xơ gan Livganic sản phẩm phối hợp vị thuốc biết đến trước có tác dụng bảo vệ gan (cao Cà gai leo cao Mật nhân), nhiên chưa nghiên cứu kỹ lưỡng tác dụng bệnh lý gan phối hợp, với bệnh lý gan mạn tính Nhiều nghiên cứu kiệt quệ suy giảm đáp ứng miễn dịch thể với tác nhân gây bệnh viêm gan mạn tính, gây xơ hóa tổ chức gan, suy giảm chức gan Do đề tài nghiên cứu thực nhằm tìm hiểu tác dụng kích thích miễn dịch chống viêm gan mạn viên nén Livganic Mục tiêu nội dung luận án 2.1 Mục tiêu luận án: Đánh giá tác dụng kích thích miễn dịch viên nén Livganic thực nghiệm Đánh giá tác dụng chống viêm gan mạn viên nén Livganic thực nghiệm 2.2 Nội dung luận án: 2.2.1 Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch viên nén Livganic thực nghiệm Tác dụng kích thích miễn dịch Livganic đánh giá mơ hình: - Mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính cyclophosphamid (CY) - Mơ hình suy giảm miễn dịch mạn tính CY nhiều liều nhỏ - Mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm gan mạn viên nén Livganic thực nghiệm - Nghiên cứu tác dụng chống viêm gan viên nén Livganic mơ hình viêm gan mạn carbon tetraclorid (CCl4) Những đóng góp luận án Lần tác dụng kích thích miễn dịch tác dụng chống viêm gan mạn tính phối hợp dược liệu cao Mật nhân cao Cà gai leo đánh giá luận án 2 Kết nghiên cứu cho thấy viên nén Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào mơ hình suy giảm miễn dịch khác nhau: Mơ hình suy giảm miễn dịch cấp CY, mơ hình suy giảm miễn dịch mạn tính CY mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ Trên mơ hình gây tổn thương gan mạn tính CCl4, Livganic cho thấy tác dụng chống viêm gan mạn tính xơ hóa gan thơng qua số đại thể, vi thể gan số sinh hóa đánh giá chức gan, mức độ xơ hóa gan Kết nghiên cứu đóng góp luận án, lần công bố tác dụng kích thích miễn dịch tác dụng chống viêm gan mạn tính hai dược liệu phối hợp sản phẩm viên nén Livganic Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 4.1 Ý nghĩa khoa học: Kết tích cực nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch, tác dụng chống viêm gan mạn mang lại hiểu biết tác dụng dược lý hai dược liệu sở khoa học cho việc tiếp tục nghiên cứu tác dụng viên nén Livganic lâm sàng nhằm mục đích hỗ trợ điều trị bệnh lý viêm gan mạn tính người 4.2 Ý nghĩa thực tiễn: Cao Mật nhân cao Cà gai leo có viên nén Livganic dược liệu sẵn có sử dụng lâu đời Việt Nam Phát triển sản phẩm viên nén Livganic điều trị lâm sàng dựa hai nguồn dược liệu có ý nghĩa thực tiễn cao Cấu trúc luận án: Luận án gồm 128 trang, bao gồm phần: Đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan 38 trang; Đối tượng phương pháp nghiên cứu 14 trang; Kết nghiên cứu 42 trang với 35 bảng, 40 hình; Bàn luận 30 trang; Kết luận kiến nghị (2 trang) Luận án có 156 tài liệu tham khảo tiếng Việt tiếng Anh Phần B: NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh lý viêm gan 1.1.1 Sơ lược giải phẫu, mô học chức gan Gan chiếm – 3% trọng lượng trung bình thể quan lớn Gan phân loại thuộc hệ tiêu hóa, chia làm nhiều thùy, thùy gan tạo thành khối nhỏ gọi tiểu thùy Chức gan bao gồm: chức sinh hóa, chuyển hóa, khử độc, tiết, tạo phá hủy hồng cầu 1.1.2 Bệnh lý viêm gan cấp tính Viêm gan cấp bệnh lý gan xảy cấp tính, biểu đặc trưng phản ứng viêm rối loạn số chức phận gan Bệnh lý gan cấp tính gây nguyên nhân chính: virus, thuốc nhiễm độc 1.1.3 Bệnh lý viêm gan mạn 1.1.3.1 Khái niệm viêm gan mạn 23 thấy toàn mẫu lô uống Livganic, không quan sát rõ hình ảnh xơ gan Kết phù hợp với bàn luận trước tác dụng rõ rệt Livganic lên chức gan Ảnh hưởng Livganic lên mức độ xơ hóa gan: Để khẳng định tình trạng xơ gan xảy ra, bên cạnh đánh giá mô bệnh học, phương pháp quan trọng xác định có mặt collagen hàm lượng hydroxyprolin gan Kết nghiên cứu Bảng 3.20 cho thấy Livganic liều có xu hướng làm giảm collagen CCl4 khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Như thấy tình trạng xơ hóa xảy tất lô chuột tiêm CCl4 sau 18 tuần, mức độ tổn thương suy giảm chức tế bào có cải thiện việc dùng thuốc nghiên cứu 4.3 Mối liên quan tác dụng tăng cường miễn dịch chống viêm gan mạn viên nén Livganic Tổn thương xơ hóa gan có mối liên quan mật thiết với tình trạng suy giảm miễn dịch bệnh lý gan mạn tính Do vậy, nghiên cứu tiền lâm sàng viên nén Livganic tập trung hướng tới đánh giá tác dụng tăng cường miễn dịch tác dụng ức chế trình tổn thương gan, trình tổn thương gan diễn biến từ từ, mạn tính Trong nghiên cứu mơ hình tổn thương gan mạn CCl4, viên nén Livganic cho thấy tác dụng cải thiện tình trạng tổn thương gan rõ rệt thơng qua hình ảnh đại thể vi thể gan, qua số liên quan tới chức gan Hạn chế tổn thương tế bào gan nguyên nhân dẫn tới tăng cường đáp ứng miễn dịch thể Ngược lại, trình viêm gan mạn, số cytokin gây viêm gia tăng, có TNF-α, tác nhân làm nặng thêm trình tổn thương tế bào gan, ảnh hưởng tới đáp ứng tế bào hình sao, q trình hoạt hóa di chuyển tế bào miễn dịch Trong nghiên cứu mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY, viên nén Livganic cho thấy tác dụng rõ rệt làm hạn chế gia tăng TNFα so với lô mô hình, điều góp phần làm giảm tổn thương tế bào gan gây CY làm tăng cường đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu viên nén Livganic Ở bệnh nhân viêm gan mạn, đặc biệt giai đoạn có tình trạng xơ gan bù, chức bạch cầu đa nhân trung tính suy giảm có liên quan tới tăng cytokin tiền viêm, nhiễm khuẩn tử vong Trên mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ, viên nén Livganic cho thấy tác dụng làm tăng số lượng bạch cầu đa nhân trung tính khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Tuy nhiên, mơ hình suy giảm miễn dịch CY, tác dụng rõ Suy giảm miễn dịch liên quan tới xơ gan, có suy giảm miễn dịch đặc hiệu tình trạng phổ biến bệnh nhân viêm gan mạn xơ gan, kể xơ gan có nguyên nhân rượu Suy giảm chức tế bào B có liên quan mạnh mẽ tới xơ gan và/hoặc tăng áp lực tĩnh mạch cửa Hơn nữa, nghiên cứu bệnh nhân xơ gan, giảm sản xuất IgG, TNF-β, giảm đáp ứng miễn dịch với vắc xin tăng nhạy cảm với nhiễm khuẩn có liên quan tới suy giảm lympho B Kết nghiên cứu cho thấy số lượng CD19+ (dấu ấn bề mặt tế bào lympho B) không gia tăng có ý nghĩa thống kê lơ uống Livganic nghiên cứu miễn dịch, 22 coumarin Như vậy, tác dụng kích thích miễn dịch cao Cà gai leo tác dụng cộng hợp nhiều chất có thành phần Trong nghiên cứu chúng tơi, Livganic thể rõ tác dụng kích thích miễn dịch thơng qua lympho T, tức kích thích miễn dịch tế bào Nghiên cứu Dao Thi Thanh Hien cộng cho thấy dịch chiết giàu alcaloid Eurycoma longifolia Jack, đặc biệt thành phần 9,10dimethoxycanthin-6-one có tác dụng ức chế đường tín hiệu thông qua NO (nitric oxid), điều dẫn tới giảm đáp ứng mức tế bào miễn dịch, bao gồm đại thực bào làm giảm số cytokin TNF- α Trong nghiên cứu chúng tôi, kết nghiên cứu cho thấy Livganic có tác dụng rõ rệt làm giảm TNF- α, tác dụng làm hạn chế gây rối loạn miễn dịch liên quan tới cytokin 4.2 Tác dụng ức chế viêm gan mạn Livganic Mơ hình gây viêm gan mạn CCl4 chuột nhắt trắng: CCl4 hóa chất sử dụng rộng rãi giới để gây mơ hình xơ hóa gan thực nghiệm, nhiên có nhiều bất đồng liều dùng, thời gian sử dụng, tỷ lệ động vật chết báo cáo sử dụng CCl4 để gây mơ hình xơ gan Vì vậy, sau tham khảo tham khảo số liệu nghiên cứu Việt Nam, thực nghiên cứu thử định sử dụng CCl4 liều mL/kg (hai lần tuần, cách ngày), 18 tuần để gây viêm gan mạn, xơ hóa gan với thuốc đối chứng dương silymarin Kết nghiên cứu cho thấy CCl4 gây chết khoảng 37,5% lơ mơ hình gây tình trạng viêm gan mạn xơ hóa gan rõ rệt chuột lơ Tình trạng viêm gan mạn, xơ gan thể qua hầu hết số nghiên cứu Thuốc đối chứng silymarin phần thể tác dụng làm hạn chế viêm gan mạn, xơ hóa gan mơ hình Do đó, mơ hình đáng tin cậy Ảnh hưởng Livganic lên hủy hoại tế bào gan: Tăng cao hai enzym ALT AST máu biểu thị cho tình trạng tổn thương màng tế bào gan Kết nghiên cứu silymarin Livganic hai liều có xu hướng làm giảm nồng độ ALT, AST khơng có ý nghĩa thống kê so sánh với lơ mơ hình Hơn nữa, gia tăng ALT, AST lơ mơ hình tương ứng 1,77 lần 2,06 lần so với lô chứng sinh học, giá trị không cao, gợi ý giai đoạn cuối xơ gan chuột (Bảng 3.19) Ảnh hưởng Livganic lên chức gan: Kết nghiên cứu bảng 3.19 cho thấy nồng độ albumin, cholesterol, số lượng hồng cầu, số lượng huyết sắc tố, nồng độ bilirubin cải thiện có ý nghĩa thống kê lơ uống Livganic so với lơ mơ hình Một số số nồng độ albumin, số lượng huyết sắc tố phục hồi tương tự nhóm chứng sinh học Như vậy, Livganic có tác dụng hạn chế suy giảm chức gan Ảnh hưởng Livganic lên tỷ lệ chuột chết, hình thái đại thể vi thể gan: Kết nghiên cứu cho thấy Livganic hai liều cải thiện rõ rệt tỷ lệ sống sót sau 18 tuần, kết phù hợp với tác dụng hạn chế tổn thương gan phục hồi chức tế bào gan sản phẩm Khi quan sát đại thể, hình ảnh gan cải thiện rõ rệt lô sử dụng Livganic Hình ảnh mơ bệnh học cho Thuật ngữ viêm gan mạn (chronic hepatitis): Viêm gan mạn hình thái bệnh lý thường gặp gan nhiều nguyên nhân gây với biểu viêm hoại tử gan kéo dài tháng 1.1.3.2 Phân loại viêm gan mạn: - Phân loại theo nguyên nhân: Viêm gan mạn virus, viêm gan mạn tự miễn, viêm gan mạn thuốc nhiễm độc, viêm gan mạn không rõ nguyên nhân - Phân loại theo mức độ: Dựa vào kết sinh thiết gan 1.1.3.3 Sơ chế bệnh sinh viêm gan mạn Hiện nay, đáp ứng miễn dịch xem chế bệnh sinh quan trọng trình gây xơ hóa tế bào gan Nhiều tế bào, cytokin hệ thống miễn dịch tham gia hoạt hóa tế bào hình tham gia vào trình viêm gan mạn dẫn tới xơ gan Càng ngày nhà nghiên cứu thấy phản ứng miễn dịch tế bào đóng vai trị quan trọng bệnh sinh viêm gan mạn 1.1.3.3 Triệu chứng chẩn đoán viêm gan mạn Đối với viêm gan mạn giai đoạn ban đầu chưa có xơ gan, có xơ gan chức gan cịn bù, triệu chứng lâm sàng phát Đối với tình trạng viêm gan mạn tính có xơ hóa gan bù, triệu chứng lâm sàng rõ ràng điển hình hơn, rầm rộ chí dẫn tới tử vong Chẩn đốn viêm gan mạn tính thường trải qua bước quan trọng: Xác định tình trạng có viêm mạn (thơng qua xét nghiệm ALT/AST, chẩn đốn hình ảnh (siêu âm, chụp cắt lớp chụp cộng hưởng từ gợi ý tình trạng thay đổi cấu trúc gan) sinh thiết gan thấy thâm nhiễm tế bào viêm khoảng cửa), xác định nguyên nhân viêm gan, xác định mức độ tổn thương gan sử dụng thang phân loại Knodell, Ishak-Knodell, Metavir 1.1.3.5 Đáp ứng miễn dịch viêm gan mạn Suy giảm miễn dịch bệnh lý viêm gan dẫn tới tình trạng giảm đáp ứng chống chọi thể với tác nhân gây bệnh, gây xơ hóa gan bùng phát tái phát bệnh Xơ gan liên quan tới suy giảm miễn dịch tượng thường gặp, phối hợp suy giảm miễn dịch tăng phản ứng viêm hệ thống nguyên nhân 30% số trường hợp tử vong 1.1.3.6 Điều trị viêm gan mạn tính Mục tiêu điều trị tùy thuộc vào nguyên nguyên gây viêm gan mạn Đối với viêm gan virus, mục tiêu giảm nguy bệnh tiến triển tới viêm gan mạn tính, xơ gan, giảm lây lan Điều trị bao gồm điều trị triệu chứng điều trị ngun nhân 1.2 Mơ hình dược lý gây suy giảm miễn dịch viêm gan mạn, xơ gan 1.2.1 Mơ hình gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm - Động vật sử dụng: Thường bao gồm loài gặm nhấm chuột nhắt trắng, chuột cống trắng - Mô hình suy giảm miễn dịch thực nghiệm: Có thể sử dụng hóa chất (như CY) sử dụng tia xạ, virus 1.2.2 Mơ hình gây viêm gan mạn tính, xơ gan: - Động vật sử dụng: Sử dụng nhiều lồi động vật khác nhau, thơng thường chuột nhắt chuột cống - Mơ hình viêm gan mạn tính thực nghiệm: Sử dụng phương pháp gây tắc ống mật, gây viêm gan virus, gây viêm gan hóa chất (như CCl4) 1.3 Tổng quan viên nén Livganic 1.4.1 Cây Cà gai leo: Cây Cà gai leo có tên khoa học Solanum hainanense Hance (Solanum Procumbens Lour), thuộc họ cà Solanaceae, mọc nhiều nơi Việt Nam Trên giới Cà gai leo phân bố vùng nhiệt đới châu Á Trung Quốc, Việt Nam, Campuchia Thái Lan Thành phần hóa học: Thân, lá, rễ Cà gai leo có thành phần chủ yếu alcaloid, saponin, flavonoid, phytosterol, chất béo, carotenoid, coumarin, acid hữu cơ, acid amin Tuy nhiên glycoalcaloid hoạt chất có tác dụng ức chế phát triển xơ, chống viêm bảo vệ gan Độc tính: Cao Cà gai leo có độ an tồn cao thể qua độc tính cấp: chuột nhắt uống liều gấp 500 lần liều tương đương tính người khơng tính LD50 Tác dụng dược lý: Tác dụng bảo vệ gan ức chế xơ gan, tác dụng chống viêm, tác dụng kích thích miễn dịch, tác dụng chống oxy hóa 1.4.2 Cây Mật nhân Cây mật nhân có tên khoa học Eurycoma longifolia Jack (Crassula pinnata Lour) thuộc họ Thanh thất Simaroubaceae, Cam Rutales, phân lớp Hoa hồng Rosidae, lớp Ngọc Lan Magnoliopsida, ngành Ngọc lan Magnoliophyta, phân giới thực vật bậc cao Kormobionta Cây mọc hoang rừng, phân bố rộng rãi nước vùng Đông Nam Á Việt Nam, Malaysia, Thái Lan Thành phần hóa học: Lá mật nhân chứa loại quassinoid chủ yếu 14, 15 β – dihydroxyklaineannone, rễ mật nhân chứa 65 hoạt chất ví dụ: Eurycomanon, eurycomalacton, longilacton, canthin – – on, pasakbumin Vỏ gỗ mật nhân chứa nhiều loại Quassinoid, Triterpen Alcaloid Cacbonlin eurico – malacton, – dimethoxybenzoquinon Tác dụng dược lý: Tác dụng lên chức sinh sản, tác dụng bảo vệ gan, kháng ký sinh trùng Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Động vật thực nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, tuần tuổi, cân nặng 25 ± g, viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp 2.2 Chất liệu nghiên cứu: Viên nén Livganic cung cấp công ty TNHH Tuệ Linh, viên gồm 250 mg cao Mật nhân 250 mg cao Cà gai leo đạt tiêu chuẩn sở 21 miễn dịch Livganic Kết nghiên cứu Bảng 3.12 cho thấy lô sử dụng levamisol, Livganic 0,6 g/kg Livganic 1,8 g/kg tác dụng cải thiện trọng lượng tương đối quan Tuy nhiên, hình ảnh giải phẫu bệnh học lại cho thấy có cải thiện tương đối rõ rệt tác dụng levamisol Livganic, 2/3 mẫu giải phẫu bệnh học lơ sử dụng Livganic liều 0,6 g/kg có hình ảnh vi thể lách tuyến ức khơng có thay đổi rõ rệt gần bình thường Điều liên quan tới tác dụng chống oxy hóa tác dụng chống lại chết theo chương trình thành phần viên nén Livganic, làm hạn chế tác dụng tia xạ Livganic liều có tác dụng làm tăng số lượng bạch cầu máu ngoại vi, Livganic liều 1,8 g/kg làm tăng có ý nghĩa thống kê số lượng bạch cầu so với lô mơ hình (Bảng 3.13) Bên cạnh đó, Livganic liều 1,8 g/kg làm tăng ý nghĩa thống kê số lượng bạch cầu lympho bạch cầu trung tính so với lơ mơ hình Kết phù hợp với kết cải thiện hình ảnh vi thể Livganic Tác dụng Livganic lên miễn dịch dịch thể: Kết nghiên cứu cho thấy lơ mơ hình, khơng quan sát thấy suy giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ IgG máu Livganic hai liều không làm tăng nồng độ IgG máu so với lơ mơ hình Tác dụng Livganic lên miễn dịch tế bào: Livganic hai liều có tác dụng làm tăng đáp ứng miễn dịch tế bào thông qua số phản ứng bì với kháng nguyên OA, liều 0,6 g/kg biểu khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Kết tương đồng với kết quan sát nghiên cứu mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY nhiều liều nhỏ Tương tự kết nghiên cứu trước mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY nhiều liều nhỏ, Livganic hai liều khơng có tác dụng làm giảm IFN – α Tia γ báo cáo gây suy giảm dấu ấn miễn dịch CD4+, CD8+ làm tăng tỷ lệ CD4+/CD8+ tế bào CD8+ nhạy cảm với tia xạ Livganic liều 1,8 g/kg thể rõ tác dụng phụ hồi tỷ lệ CD4+/CD8+ so với lơ mơ hình Tuy nhiên, Livganic hai liều khơng làm tăng có ý nghĩa thống kê số lượng CD4+ CD8+ 4.1.3 Bàn luận chung tác dụng kích thích miễn dịch Livganic Từ kết nghiên cứu sử dụng mơ hình khác nhau, thấy Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào, nhiên mức độ tác dụng khác nghiên cứu Trên giới chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng kích thích miễn dịch phối hợp cao Mật nhân cao Cà gai leo mơ hình suy giảm miễn dịch thực nghiệm Tuy nhiên, số nghiên cứu tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, tác dụng chống ung thư, nghiên cứu in vitro gợi mở số mối liên quan tới tác dụng kích thích miễn dịch Livganic Nghiên cứu Nguyễn Thị Bích Thu cho thấy cao Cà gai leo mẫu chiết có tác dụng làm tăng sinh tế bào T Thành phần hóa học cao cà gai leo tác giả công bố gồm alcaloid, glycoalcaloid, saponin, flavonoid, phytosterol, 20 Kết nghiên cứu Bảng 3.10 cho thấy Livganic hai liều 0,6 1,8 g/kg có tác dụng làm tăng cao hàm lượng IL-2 so với lơ mơ hình Kết phù hợp với nghiên cứu trước mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY liều 200 mg/kg Interferon alpha (IFN - ) cytokin có chất glycoprotein có vai trị ức chế nhân lên virus, kháng ung thư, tham gia số đáp ứng miễn dịch bệnh tự miễn CY biết đến làm gia tăng nồng độ IFN nhóm I (bao gồm IFN - ) tham gia vào việc gây gia tăng rối loạn miễn dịch Livganic hai liều có xu hướng làm giảm nồng độ IFN – α máu ngoại vi so với lơ mơ hình sử dụng CY nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết nghiên cứu Bảng 3.11 cho thấy Livganic hai liều có xu hướng làm gia tăng số lym B, Th Tc, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Trong đó, lô Livganic liều 0,6 g/kg làm gia tăng số lượng Th nhiều thể qua tỷ lệ CD4+/CD8+ tăng cao có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Như vậy, thơng qua tồn kết nghiên cứu dễ dàng nhận thấy Livganic liều 0,6 g/kg có tác dụng kích thích miễn dịch miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào, tác dụng kích thích miễn dịch khơng quan sát đầy đủ nhóm sử dụng Livganic liều 1,8 g/kg Nói cách khác, Livganic dùng liều thấp có tác dụng rõ rệt dùng liều cao gấp lần Ở nghiên cứu mơ hình gây suy giảm miễn dịch cấp CY trước đó, Livganic liều 0,6 g/kg khơng có tác dụng kích thích miễn dịch tốt liều 1,8 g/kg Ngoài ra, Viên nén Livganic đánh giá nghiên cứu khác trước đó, theo Livganic liều 0,6 g/kg khơng có tác dụng tốt nghiên cứu bảo vệ gan mơ hình viêm gan cấp paracetamol, lại có tác dụng chống viêm mạn tính tốt hẳn so với Livganic liều 1,8 g/kg Tác dụng chống viêm mạn tính liên quan mật thiết tới khả điều biến miễn dịch Livganic, thấy kết nghiên cứu mô hình suy giảm miễn dịch mạn tính có phù hợp với nghiên cứu chống viêm mạn tính 4.1.2 Tác dụng kích thích miễn dịch Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ Mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ: Bên cạnh mơ hình suy giảm miễn dịch phổ biến sử dụng hóa chất, mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ sử dụng nghiên cứu nhằm đánh giá đầy đủ tác dụng kích thích miễn dịch Livganic Tia γ (gamma) tia xạ có mức đâm xuyên lớn nhất, sử dụng phổ biến để gây suy giảm miễn dịch Kết nghiên cứu cho thấy tia γ liều Gy ngày gây suy giảm miễn dịch thể qua đa số số đánh giá Levamisol 50 mg/kg thể rõ tác dụng kích thích miễn dịch mơ hình Như vậy, mơ hình tương đối đáng tin cậy nhằm đánh giá tác dụng kích thích miễn dịch viên nén Livganic Tác dụng Livganic lên số miễn dịch chung: Lách tuyến ức quan có mức độ nhạy cảm cao tia xạ Do vậy, trọng lượng lách tuyến ức số quan trọng nhằm đánh giá tác dụng kích thích 2.3 Thuốc, hóa chất, máy thiết bị phục vụ nghiên cứu: Đạt tiêu chuẩn thí nghiệm 2.4 Mơ hình nghiên cứu đánh giá tác dụng viên nén Livganic 2.4.1 Tác dụng Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch 2.4.1.1 Mơ hình suy giảm miễn dịch cyclophosphamid Tác dụng Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY: Tiêm màng bụng cyclophosphamid liều 200 mg/kg thể trọng để gây suy giảm miễn dịch cấp tính Chuột thí nghiệm chia thành lơ: - Lô (chứng sinh học) (n = 8): Tiêm màng bụng NaCl 0,9% 0,1ml/10g, uống nước cất 0,2 ml/10g thể trọng hàng ngày - Lơ 2: Mơ hình (n = 8): Tiêm CY + uống nước cất 0,2 ml/10 g hàng ngày - Lô 3: Chứng dương (n = 8): Tiêm CY + levamisol liều 100 mg/kg hàng ngày - Lô 4: Livganic liều thấp (n = 8): Tiêm CY + Livganic liều 0,6 g/kg hàng ngày (liều tương đương với liều dùng lâm sàng, hệ số quy đổi 12 chuột nhắt trắng) - Lô 5: Livganic liều cao (n = 8): Tiêm CY + Livganic liều 1,8 g/kg hàng ngày Sau tiêm màng bụng cyclophosphamid liều 200 mg/kg lô 2, 3, 4, 5, vào ngày lô chuột uống nước cất thuốc liên tục ngày Ngày thứ 7, giết chuột, lấy máu tổ chức lympho để làm xét nghiệm Trên mơ hình nghiên cứu, chuột phải trải qua ba giai đoạn: ức chế miễn dịch (bằng CY), mẫn cảm kháng nguyên (bằng kháng nguyên OA tiêm dọc sống lưng, hồng cầu cừu tiêm màng bụng) điều trị thuốc thử Chỉ số đánh giá: - Chỉ số chung: Trọng lượng lách, tuyến ức tương đối, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, giải phẫu vi thể lách tuyến ức - Chỉ số miễn dịch: Phản ứng mẫn chậm gan bàn chân chuột với kháng nguyên OA, định lượng IgG, IL-2, TNF- α Tác dụng Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch mạn tính CY: Tiêm màng bụng cyclophosphamid liều 50 mg/kg thời gian 10 ngày Chuột thí nghiệm chia thành lơ: - Lơ (chứng sinh học) (n = 10): Tiêm màng bụng NaCl 0,9% 0,1ml/10g, uống nước cất 0,2 ml/10g thể trọng hàng ngày - Lơ 2: Mơ hình (n = 10): Tiêm CY + uống nước cất 0,2 ml/10 g hàng ngày - Lô 3: Chứng dương (n = 10): Tiêm CY + levamisol liều 50 mg/kg hàng ngày - Lô 4: Livganic liều thấp (n = 10): Tiêm CY + Livganic liều 0,6 g/kg hàng ngày - Lô 5: Livganic liều cao (n = 10): Tiêm CY + Livganic liều 1,8 g/kg hàng ngày Vào ngày thứ 11, giết chuột lấy tổ chức gan, lách, tuyến ức máu động mạch cảnh để làm xét nghiệm Trên mơ hình nghiên cứu, chuột phải trải qua ba giai đoạn: ức chế miễn dịch, mẫn cảm kháng nguyên điều trị thuốc thử Chỉ số đánh giá: - Chỉ số chung: Trọng lượng lách, tuyến ức tương đối, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, giải phẫu vi thể lách tuyến ức 6 - Chỉ số miễn dịch: Phản ứng mẫn chậm gan bàn chân chuột với kháng nguyên OA, định lượng IgG, IL-2, IFN- α, định lượng CD4, CD8a, CD19 2.4.1.2 Mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ Sử dụng tia gamma chiếu toàn thân để gây suy giảm miễn dịch Suất liều 1Gy/ngày, liên tục ngày, tổng liều chiếu xạ cho đợt Gy Chuột thí nghiệm chia thành lô: - Lô Chứng sinh học (n = 10): Không chiếu xạ, uống nước cất 0,2 ml/10g thể trọng hàng ngày - Lơ 2: Mơ hình (n = 10): Chiếu xạ + uống nước cất 0,2 ml/10 g hàng ngày - Lô 3: Chứng dương (n = 10): Chiếu xạ + levamisol liều 100 mg/kg hàng ngày - Lô 4: Livganic liều thấp (n = 10): Chiếu xạ + Livganic liều 0,6 g/kg hàng ngày - Lô 5: Livganic liều cao (n = 10): Chiếu xạ + Livganic liều 1,8 g/kg hàng ngày Vào ngày thứ 7, giết chuột lấy tổ chức gan, lách, tuyến ức máu động mạch cảnh để làm xét nghiệm Trên mơ hình nghiên cứu, chuột phải trải qua ba giai đoạn: ức chế miễn dịch, mẫn cảm kháng nguyên điều trị thuốc thử Chỉ số đánh giá: - Chỉ số chung: Trọng lượng lách, tuyến ức tương đối, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, giải phẫu vi thể lách tuyến ức - Chỉ số miễn dịch: Phản ứng mẫn chậm gan bàn chân chuột với kháng nguyên OA, định lượng IgG, IL-2, IFN- α, định lượng CD4, CD8a, CD19 2.4.2 Tác dụng Livganic mô hình viêm gan mạn Mơ hình viêm gan mạn tính thực cách tiêm màng bụng carbon tertraclorid mL/kg (pha dầu oliu), hàng tuần, tuần lần cách ngày 18 tuần Chuột chia thành lô sau: - Lô 1: Chứng sinh học (n = 10): Tiêm dầu oliu + uống nước cất - Lơ 2: Mơ hình (n = 16): Tiêm CCl4 1,0 mL/kg lần/tuần + uống nước cất - Lô 3: Chứng dương (n = 16): Tiêm CCl4 + uống silymarin 200 mg/kg hàng ngày - Lô 4: Livganic liều thấp (n = 16): Tiêm CCl4 + uống Livganic liều 0,6 g/kg - Lô 5: Livganic liều cao (n = 16): Tiêm CCl4 + uống Livganic liều 1,8 g/kg Các số nghiên cứu: - Tỷ lệ chuột chết - Hoạt độ ALT, AST, bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần, albumin máu định lượng máy hóa sinh - Định lượng cơng thức máu - Định lượng hydroxyprolin gan: Định lượng hydroxyprolin toàn phần phương pháp Stegemann thông qua máy đo quang phổ tử ngoại – khả kiến - Định lượng collagen typ IV: Định lượng collagen thông qua phương pháp nhuộm Van Gieson, sau sử dụng phần mềm ImageJ để tính tốn phần trăm diện tích vùng nhuộm (collagen) vi trường - Hình ảnh đại thể gan nhuộm vi thể HE 2.5 Xử lý số liệu 19 nghĩa thống kê so với lô chứng sinh học Kết cho thấy Livganic có tác dụng tăng cường miễn dịch dịch thể Ảnh hưởng Livganic lên miễn dịch tế bào Phản ứng bì với kháng nguyên OA phản ứng hệ miễn dịch tế bào T đảm nhiệm Thông qua đánh giá phản ứng hệ miễn dịch với kháng nguyên OA xác định tác dụng thuốc miễn dịch tế bào Kết nghiên cứu Bảng 3.4 cho thấy lô sử dụng Livganic, đặc biệt lô uống Livganic 1,8 g/kg phản ứng hệ miễn dịch với kháng nguyên OA tăng lên rõ rệt Điều cho thấy Livganic có tác dụng mạnh mẽ miễn dịch tế bào Kết nghiên cứu Bảng 3.5 cho thấy Livganic hai liều 0,6 1,8 g/kg có tác dụng làm tăng cao hàm lượng IL-2 so với lơ mơ hình, điều khẳng định thêm tác dụng kích thích miễn dịch tế bào Livganic Livganic liều 1,8 g/kg có tác dụng mạnh liều 0,6 g/kg Yếu tố hoại tử u TNF- α cytokin sản sinh đại thực bào hoạt hóa, có vai trị điều hịa miễn dịch thơng qua phản ứng viêm gây độc (chết) tế bào Kết nghiên cứu Bảng 3.5 cho thấy Livganic hai liều làm giảm nồng độ TNF – α máu ngoại vi so với lơ mơ hình sử dụng CY Điều góp phần hạn chế rối loạn miễn dịch gây CY 4.1.1.2 Tác dụng mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY Mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY Để đánh giá đầy đủ tác dụng kích thích miễn dịch viên nén Livganic, mơ hình suy giảm miễn dịch kéo dài CY nhiều liều nhỏ sử dụng Đây lần mơ hình tiến hành Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội Kết nghiên cứu cho thấy CY liều nhỏ 50 mg/kg liên tục 10 ngày gây suy giảm miễn dịch cách rõ rệt hầu hết số đo lường Ảnh hưởng Livganic lên số miễn dịch chung Kết nghiên cứu Bảng 3.6 cho thấy Livganic hai liều cho thấy cải thiện trọng lượng tương đối lách tuyến ức, liều thấp 0,6 g/kg có hiệu cao hơn, chưa có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Levamisol khơng thể rõ tác dụng phục hồi số lượng bạch cầu bị giảm CY, Livganic hai liều làm tăng số lượng bạch cầu so với lơ mơ hình, khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (Bảng 3.7) Ảnh hưởng Livganic lên miễn dịch dịch thể Livganic hai liều làm tăng cao số IgG so với lơ mơ hình khác biệt có ý nghĩa thống kê quan sát liều 0,6 g/kg giá trị IgG lô Livganic 0,6 g/kg trở tương tự nhóm chứng sinh học (Bảng 3.8) Như vậy, nhận thấy Livganic có tác dụng tăng cường miễn dịch dịch thể Ảnh hưởng Livganic lên miễn dịch tế bào Kết nghiên cứu Bảng 3.9 cho thấy lô uống levamisol, Livganic liều 0,6 g/kg Livganic liều 1,8 g/kg, số phản ứng bì tăng lơ có lơ 0,6 g/kg khác biệt có ý nghĩa thống kê Kết phù hợp với quan sát bàn luận trước đó, tức Livganic liều thấp 0,6 g/kg có hiệu rõ rệt liều cao 1,8 g/kg 18 Thuốc chứng dương silymarin có xu hướng làm giảm hydroxyprolin nhiên khác biệt ý nghĩa thống kê, silymarin khơng làm thay đổi lượng collagen typ IV Livganic hai liều có xu hướng làm giảm lượng hydroxyprolin collagen typ IV khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Tác dụng kích thích miễn dịch Livganic 4.1.1 Tác dụng kích thích miễn dịch Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch CY 4.1.1.1 Tác dụng mơ hình suy giảm miễn dịch cấp CY Mơ hình suy giảm miễn dịch cấp tính CY Để đánh giá đặc điểm tác dụng lên hệ miễn dịch Livganic, mơ hình suy giảm miễn dịch hóa chất tia xạ sử dụng nghiên cứu CY thuốc thuốc nhóm alkyl hóa gây suy giảm miễn dịch sử dụng phổ biến lâm sàng để điều trị số bệnh lý ung thư rối loạn miễn dịch CY gây suy giảm miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào, CY sử dụng tác nhân gây suy giảm miễn dịch mơ hình động vật thực nghiệm để đánh giá tác dụng tăng cường miễn dịch thuốc Trong nghiên cứu này, hai mơ suy giảm miễn dịch CY liều cao CY nhiều liều nhỏ sử dụng nhằm đánh giá đầy đủ đặc điểm kích thích miễn dịch viên nén Livganic CY liều 200 mg/kg sử dụng phổ biến Việt Nam giới để gây suy giảm miễn dịch cấp tính Trong nghiên cứu này, kết cho thấy CY liều 200 mg/kg gây suy giảm miễn dịch rõ ràng chuột nhắt trắng thông qua số miễn dịch chung, miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào Ảnh hưởng Livganic lên số miễn dịch chung Kết nghiên cứu cho thấy lơ mơ hình sử dụng CY liều nhất, trọng lượng tương đối lách tăng cao, nhiên giải phẫu bệnh học cho thấy tình trạng suy giảm số lượng tế bào lympho rõ ràng, điều giải thích tác dụng ức chế miễn dịch CY ngày thứ Trọng lượng tương đối tuyến ức giảm rõ rệt (Bảng 3.2), đồng thời giải phẫu bệnh có tình trạng suy giảm số lượng tế bào lympho rõ rệt cho thấy tình trạng suy giảm miễn dịch Livganic không cho thấy tác dụng có ý nghĩa thống kê trọng lượng tương đối quan hình ảnh giải phẫu bệnh nhiên số phần phản ánh phục hồi miễn dịch Kết nghiên cứu Bảng 3.2 cho thấy số lượng bạch cầu giảm rõ rệt lơ mơ hình gây suy giảm miễn dịch CY Livganic hai liều chưa thể tác dụng làm tăng số lượng bạch cầu máu ngoại vi so với lơ mơ hình Kết tương tự quan sát xem xét kết công thức bạch cầu Điều cho thấy Livganic chưa biểu tác dụng lên khả sinh bạch cầu tủy xương, lách tuyến ức Ảnh hưởng Livganic lên miễn dịch dịch thể Kết nghiên cứu Bảng 3.4 cho thấy Livganic hai liều có tác dụng hạn chế tác dụng gây suy giảm IgG CY Tác dụng nồng độ IgG Livganic tăng theo liều, liều 1,8 g/kg nồng độ IgG tăng lên tới mức không khác biệt có ý Số liệu nhập xử lý phương pháp thuật toán thống kê y sinh học phần mềm SPSS 16 Số liệu biểu diễn dạng X  SE Kiểm định giá trị T –test test trước sau (Avant – Apres) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Tác dụng Livganic mơ hình suy giảm miễn dịch 3.1.1 Mơ hình suy giảm miễn dịch cấp cyclophosphamid 3.1.1.1 Kết đánh giá tình trạng chung hệ miễn dịch »Trọng lượng lách tương đối Bảng 3.1 Ảnh hưởng thuốc thử lên trọng lượng lách, tuyến ức tương đối Lô n Trọng lượng lách tương đối Trọng lượng tuyến ức tương đối Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình CY 8 ( X ± SE, 1:1000, mg/g) 8,83 ± 0,63 14,60 ± 1,32* Lô 3: Levamisol 7,56 ± 1,09 ΔΔΔ 1,89 ± 0,30*** Lô 4: Livganic 0,6 g/kg 12,10 ± 1,41 1,52 ± 0,24***Δ Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10,32 ± 0,82 Δ 1,88 ± 0,27*** ( X ± SE, 1:1000, mg/g) 4,17 ± 0,22 2,39 ± 0,22*** Chú thích: *: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05 Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05 ΔΔΔ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,001 Kết trình bày bảng 3.1 cho thấy: Livganic liều 1,8 g/kg có tác dụng hạn chế có ý nghĩa thống kê gia tăng trọng lượng lách tương đối gây CY (p < 0,05) Trọng lượng tuyến ức tương đối lơ uống Livganic 0,6 g/kg thấp có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình, trọng lượng tuyến ức tương đối lô uống Livganic 1,8 g/kg tương đương với lơ dùng levamisol khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình » Số lượng bạch cầu: Bảng 3.2 Ảnh hưởng thuốc thử lên số lượng bạch cầu Lô Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg n 8 8 Số lượng bạch cầu ( X ± SE, G/l) 2,34 ± 0,12 1,21 ± 0,20*** 3,17 ± 0,63 ΔΔ 0,75 ± 0,15*** 0,79 ± 0,24*** Chú thích: ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001 ΔΔ: Khác biệt so với Mô hình với p < 0,01 Kết trình bày bảng 3.2 cho thấy: CY làm giảm rõ rệt số lượng bạch cầu máu ngoại vi chuột Levamisol có tác dụng làm tăng bạch cầu máu ngoại vi so với lơ mơ hình Livganic liều khơng có tác dụng làm tăng bạch cầu máu ngoại vi so với lơ mơ hình (p > 0,05) »Công thức bạch cầu Kết công thức bạch cầu: Ở lô dùng Livganic liều 0,6 g/kg, số lượng bạch cầu lypho bạch cầu trung tính giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Ở lơ Livganic liều 1,8 g/kg, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê số lượng lympho so với lơ mơ hình, số lượng bạch cầu trung tính giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình 3.1.1.2 Kết đánh giá miễn dịch dịch thể Bảng 3.3 Ảnh hưởng thuốc thử lên nồng độ IgG máu ngoại vi Lô Nồng độ IgG n Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg ( X ± SE, mg/mL) 84,98 ± 0,55 77,20 ± 1,14*** 81,47 ± 0,62***Δ 82,87 ± 0,50* Δ Δ Δ 83,35 ± 1,20Δ Δ 8 8 Chú thích: *: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001; Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05; Δ Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,01 Kết bảng 3.3 cho thấy: CY làm giảm rõ rệt nồng độ IgG máu ngoại vi so với lô chứng sinh học (p < 0,001) Levamisol làm tăng nồng độ IgG máu ngoại vi so với lơ mơ hình Livganic liều có tác dụng làm tăng nồng độ IgG máu ngoại vi tương đương với levamisol so với lơ mơ hình với khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 3.1.1.3 Kết đánh giá miễn dịch qua trung gian tế bào »Phản ứng bì với kháng nguyên OA: Bảng 3.4 Ảnh hưởng thuốc thử đến phản ứng bì với kháng nguyên OA Lô n Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 8 8 Phản ứng bì: chiều dày bàn chân chuột ( X ± SE, mm) 2,95 ± 0,07 3,04 ± 0,10 2,93 ± 0,11 3,27 ± 0,16 3,48 ± 0,09*** Δ Δ Δ Chú thích: ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001 Δ Δ Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,001 Kết trình bày bảng 3.4 cho thấy: Livganic liều cao 1,8 g/kg làm tăng chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình lơ chứng dương levamisol (p < 0,001) Livganic liều 0,6 g/kg không làm tăng có ý nghĩa thống kê chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình 17 Bảng 3.19 Ảnh hưởng thuốc thử đến hoạt độ AST, ALT nồng độ bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần ALT AST ( X ± SE, mmol/L) Albumin ( X ± SE, g/dL) Bilirubin ( X ± SE, mmol/L) Cholesterol ( X ± SE, mmol/L) 3,09 ± 0,10 1,33 ± 0,11 Lô n Lơ 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lô 3: Silymarin 10 10 10 305,4 ± 50,2 152,2 ± 29,2 2,51 ± 0,08 1,74 ± 0,12 2,09 ± 0,11*** 260,2 ± 33,3* 144,6 ± 17,7** 2,78 ± 0,13 1,29 ± 0,16 Δ 3,15 ± 0,31 Δ Δ Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 13 289,7 ± 31,5** 144,2 ± 10,9*** 2,82 ± 0,07* Δ 2,02 ± 0,17* 2,45 ± 0,10* Δ 16 286,1 ± 30,1* 143,1 ± 18,3* ( X ± SE, mmol/L) 172,2 ± 10,1 74,0 ± 5,8 * * *** 3,03 ± 0,05 Δ Δ Δ 2,96 ± 0,15 * 1,79 ± 0,20 2,54 ± 0,13 Δ Chú thích: *; **;***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01; 0,001 Δ, Δ Δ, Δ Δ Δ : Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05; 0,01; 0,001 Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tác dụng Livganic liều 0,6 g/kg liều 1,8 g/kg tất số bảng 3.32 »Công thức máu: Kết nghiên cứu cho thấy CCl4 làm gia tăng số lượng bạch cầu, làm giảm số lượng hồng cầu huyết sắc tố có ý nghĩa thống kê lơ mơ hình so với lơ chứng sinh học Silymarin có xu hướng làm cải thiện số khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Livganic liều 0,6 g/kg làm tăng số lượng hồng cầu số lượng huyết sắc tố có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình, nhiên khơng làm giảm số lượng bạch cầu có ý nghĩa thống kê Livganic liều 1,8 g/kg làm cải thiện có ý nghĩa thống kê số so với lơ mơ hình, khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh học 3.2.3 Ảnh hưởng lên số đánh giá mức độ xơ gan Bảng 3.20 Ảnh hưởng thuốc thử lên hàm lượng hydroxyprolin lượng collagen typ IV Lô Lô 1: Chứng sinh học n Hydroxyprolin ( X ± SE, mg/g) Collagen typ IV ( X ± SE, %) 10 336,3 ± 19,6 0,1205 ± 0,0056 *** 6,3441 ± 0,2879*** Lơ 2: Mơ hình 10 553,4 ± 29,1 Lơ 3: Silymarin 10 505,3 ± 37,1** 6,3536 ± 0,9556*** Lô 4: Livganic 0,6 g/kg 13 512,7 ± 23,2*** 5,7145 ± 0,6265*** 16 *** 5,3212 ± 0,5392*** Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 497,0 ± 23,6 Chú thích: *; **;***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01; 0,001 Kết bảng 3.34 cho thấy CCl4 làm gia tăng rõ rệt lượng hydroxyprolin collagen typ IV lơ mơ hình so với lơ chứng sinh học 16 »Trọng lượng gan: Bảng 3.18 Ảnh hưởng thuốc thử lên trọng lượng gan Lô Lô 1: Chứng sinh học n 10 Trọng lượng gan tuyệt đối Trọng lượng gan tương đối ( X ± SE, g) ( X ± SE, % g/g) 1,84 ± 0,13 3,69 ± 0,14 *** Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Silymarin 10 10 3,12 ± 0,26 2,56 ± 0,17** 6,28 ± 0,43*** 5,04 ± 0,18***Δ Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 13 16 2,30 ± 0,12* Δ Δ 2,19 ± 0,18 Δ Δ 4,56 ± 0,13*** Δ Δ Δ 4,79 ± 0,19 ***Δ Δ Chú thích: *; **;***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01; 0,001 Δ, Δ Δ, Δ Δ Δ : Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05; 0,01; 0,001 Kết trình bày bảng 3.18 cho thấy: CCl4 làm gia tăng rõ rệt trọng lượng gan tuyệt đối tương đối Ở hai lô uống Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg, trọng lượng gan tuyệt đối tương đối giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lơ uống Livganic »Hình thái đại thể: Ở lơ mơ hình: Nhiều mẫu bệnh phẩm thể rõ rệt tình trạng tổn thương gan theo kiểu xơ hóa gan (gan độ bóng, nhạt màu, khối xơ bề mặt) Ở lơ cịn lại, hầu hết mẫu bệnh phẩm cho hình ảnh gan tổn thương so với lơ mơ hình, nhiều mẫu gan có hình ảnh đại thể gần mẫu gan bình thường »Hình thái vi thể: Khơng có tổn thương gan lơ chứng sinh học CCl4 gây tình trạng xâm nhập viêm, xơ hóa gan 4/5 mẫu bệnh phẩm với mức độ khác Ở lơ uống silymarin, có 1/5 mẫu bệnh phẩm quan sát rõ hình ảnh xơ hóa tế bào gan mức nhẹ Ở tất mẫu bệnh phẩm lô uống Livganic liều 0,6 g/kg 1,8 g/kg khơng quan sát thấy hình ảnh xơ hóa gan cịn tình trạng xâm nhập viêm, thối hóa nhẹ tế bào gan 3.2.2 Kết đánh giá chức gan thông qua xét nghiệm máu » Hoạt độ ALT, AST, bilirubin, albumin, cholesterol toàn phần máu: Kết bảng 3.19 cho thấy sau 18 tuần tiêm CCl4 hoạt độ ALT, AST nồng độ bilirubin tăng lên rõ rệt nồng độ albumin cholesterol tồn phần lại giảm rõ rệt lơ mơ hình Silymarin làm giảm hoạt độ ALT, AST, nồng độ bilirubin tồn phần tăng cholesterol tồn phần có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình tăng albumin khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Livganic hai liều không làm giảm hoạt độ ALT, AST, nồng độ bilirubin tồn phần có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình lại làm tăng nồng độ albumin, cholesterol có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh học »Định lượng cytokin máu Bảng 3.5 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ IL – TNF - α Lô n Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 8 8 Nồng độ IL – Nồng độ TNF - α ( X ± SE, pg/ml) 7,73 ± 0,23 2,97 ± 0,46*** 7,21 ± 1,51 Δ 5,61 ± 0,78**Δ Δ 7,46 ± 0,98 Δ Δ ( X ± SE, pg/ml) 5,01 ± 0,59 16,55 ± 2,75*** 8,33 ± 1,40* Δ 9,95 ± 0,75*** Δ 10,53 ± 0,88*** Chú thích: **: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,01; ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001; Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05 ; Δ Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,01 Kết nghiên cứu bảng 3.5 cho thấy: CY gây tình trạng giảm rõ rệt nồng độ IL-2 máu ngoại vi Levamisol có tác dụng làm tăng nồng độ IL – so với lơ mơ hình Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg có tác dụng làm tăng nồng độ IL -2 so với lơ mơ hình (p < 0,05) CY gây gia tăng rõ rệt nồng độ TNF – α máu ngoại vi chuột nhắt Levamisol có tác dụng làm giảm có ý nghĩa thống kê TNF – α so với lơ mơ hình (p < 0,05) Livganic 0,6 g/kg làm giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ TNF – α so với lơ mơ hình Livganic 1,8 g/kg khơng làm giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ TNF – α so với lơ mơ hình 3.1.1.4 Giải phẫu vi thể lách tuyến ức Kết luận giải phẫu bệnh: CY gây tổn thương rõ rệt quan lympho trung ương tuyến ức lách Levamisol có tác dụng hạn chế tổn thương gây CY so với lơ mơ hình Chưa có khác biệt tổn thương hình ảnh vi thể lách tuyến ức lơ dùng Livganic so với lơ mơ hình 3.1.2 Mơ hình suy giảm miễn dịch CY kéo dài 3.1.2.1 Kết đánh giá tình trạng chung hệ miễn dịch »Trọng lượng lách tương đối Bảng 3.6 Ảnh hưởng thuốc thử lên trọng lượng lách tuyến ức tương đối Lô n Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10 10 10 10 10 Trọng lượng lách tương đối ( X ± SE, 1:1000, mg/g) 4,88 ± 0,43 3,14 ± 0,61* 3,26 ± 0,60** 3,73 ± 0,39 3,04 ± 0,48** Trọng lượng tuyến ức tương đối ( X ± SE, 1:1000, mg/g) 2,85 ± 0,25 1,22 ± 0,15*** 1,04 ± 0,07*** 1,65 ± 0,29** 1,37 ± 0,13 *** Chú thích: *; **: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01 Kết trình bày bảng 3.6 cho thấy: Cyclophosphamid liều 50 mg/kg 10 ngày liên tục làm giảm trọng lượng lách rõ rệt so với lô chứng sinh học Lemamisol 50 mg/kg, Livganic liều 0,6 g/kg 1,8 g/kg khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê trọng lượng lách tương đối so với lơ mơ hình 10 Tuy nhiên lơ Livganic liều 0,6 g/kg, trọng lượng lách tương đối không khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh học Trọng lượng tuyến ức tương đối lô mô hình giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh học (p < 0,001) Levamisol không làm gia tăng trọng lượng tuyến ức tương đối Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg làm tăng trọng lượng tuyến ức tương đối so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê » Số lượng bạch cầu: Bảng 3.7 Ảnh hưởng thuốc thử lên số lượng bạch cầu Lô Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg Số lượng bạch cầu ( X ± SE, G/l) 1,94 ± 0,16 0,54 ± 0,09*** 0,61 ± 0,13*** 0,68 ± 0,14*** 0,77 ± 0,12*** n 10 10 10 10 10 Chú thích: ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001 Kết trình bày bảng 3.7 cho thấy: Cyclophosphamid dùng kéo dài liên tục làm giảm rõ rệt số lượng bạch cầu máu ngoại vi chuột Levamisol có tác dụng hạn chế giảm bạch cầu nhiên khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg làm hạn chế giảm bạch cầu nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình » Cơng thức bạch cầu: Cyclophosphamid nhiều liều nhỏ gây giảm rõ rệt bạch cầu trung tính bạch cầu lympho Levamisol 50 mg/kg làm tăng số lượng bạch cầu trung tính lympho so với lơ mơ hình nhiên khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê Livganic 0,6 g/kg khơng làm thay đổi cơng thức bạch cầu có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Livganic 1,8 g/kg làm tăng bạch cầu trung tính lympho so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 3.1.2.2 Kết đánh giá miễn dịch dịch thể Bảng 3.8 Ảnh hưởng thuốc thử lên nồng độ IgG máu ngoại vi Lô Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg Nồng độ IgG ( X ± SE, mg/mL) 75,89 ± 0,74 70,44 ± 2,34* 76,97 ± 1,09 Δ 76,07 ± 0,86 Δ 73,53 ± 1,46 n 10 10 10 10 10 Chú thích: *: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05 Kết bảng 3.7 cho thấy: Cyclophosphamid liều 50 mg/kg liên tục 10 ngày làm giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ IgG máu lơ mơ hình Levamisol làm gia tăng nồng độ IgG có ý nghĩa thống kê so với lô mô 15 3.1.3.4 Các dấu ấn miễn dịch CD4, CD8a CD19 Bảng 3.17 Ảnh hưởng Livganic lên dấu ấn miễn dịch CD19+ Lô n Lô 1: Chứng sinh học 10 Lơ 2: Mơ hình 10 Lô 3: Levamisol 10 Lô 4: Livganic 0,6 g/kg 10 Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10 CD4+ CD8a+ ( X ± SE, G/l) 0,259 ± 0,061 0,014 ± 0,003*** 0,015 ± 0,003 0,009 ± 0,002 0,011 ± 0,002 0,770 ± 0,109 0,082 ± 0,015*** 0,065 ± 0,006 0,048 ± 0,010 0.055 ± 0,007 0,347 ± 0,076 0,020 ± 0,003*** 0,021 ± 0,004 0,012 ± 0,002 0,023 ± 0,002 Tỷ lệ CD4+/CD8a+ ( X ± SE) 2,61 ± 0,39 4,22 ± 0,35** 3,88 ± 0,75 4,23 ± 0,45 2,60 ± 0,46 Δ Chú thích: **,***: Khác biệt so với lơ chứng với p < 0,01; 0,001; Δ: Khác biệt so với lơ mơ hình với p < 0,05 Kết bảng 3.17 cho thấy: Chiếu xạ làm giảm rõ rệt số lượng dấu ấn miễn dịch CD19+, CD4+ CD8a+ chuột nhắt trắng lơ mơ hình Chiếu xạ làm gia tăng tỉ lệ CD4+/CD8a+ có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Levamisol chưa làm thay đổi có ý nghĩa thống kê số lượng dấu ấn miễn dịch CD19+, CD4+, CD8a+ so với lô mô hình Levamisol làm giảm tỉ lệ CD4+/Cd8a+ so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Livganic hai liều 0,6 g/kg 1,8 g/kg khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê số CD19+, CD4+ CD8a+ Tuy nhiên Livganic liều 1,8 g/kg làm giảm có ý nghĩa thống kê tỉ lệ CD4+/CD8a+ so với lơ mơ hình 3.1.3.5 Giải phẫu vi thể lách tuyến ức Kết luận giải phẫu bệnh: Chiếu xạ làm tổn thương rõ rệt cấu trúc lách tuyến ức hình ảnh vi thể Levamisol có tác dụng rõ rệt cải thiện tổn thương lách tuyến ức gây chiếu xạ hình ảnh vi thể Livganic liều 0,6 g/kg có tác dụng cải thiện tổn thương lách tuyến ức gây chiếu xạ (2/3 mẫu có hình ảnh vi thể lách tuyến ức khơng có thay đổi rõ rệt gần bình thường) Ở lơ uống Livganic liều 1,8 g/kg, có 1/3 mẫu có hình ảnh vi thể lách tuyến ức gần bình thường 3.2 Tác dụng viên nén Livganic mơ hình viêm gan mạn tính 3.2.1 Kết ảnh hưởng tỷ lệ chuột chết, trọng lượng hình thái gan »Tỷ lệ chuột chết: Kết cho thấy sau 18 tuần, CCl4 gây chết 37,5% (6/16) lơ mơ hình Tỷ lệ chuột chết khơng cải thiện lơ sử dụng silymarin có cải thiện rõ rệt lô chuột uống Livganic, chí khơng có chuột chết lơ uống Livganic liều 1,8 g/kg 14 3.1.3.3 Kết đánh giá miễn dịch qua trung gian tế bào »Phản ứng bì với kháng nguyên OA: Bảng 3.15 Ảnh hưởng thuốc thử đến phản ứng bì với kháng ngun OA Lơ n Lơ 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg Phản ứng bì: chiều dày bàn chân chuột ( X ± SE, mm) 2,70 ± 0,10 2,21 ± 0,06** 2,50 ± 0,08 Δ Δ 2,43 ± 0,07* Δ 2,29 ± 0,09** 10 10 10 10 10 Chú thích: *; **: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01; Δ; Δ Δ:Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05; 0,01 Kết trình bày bảng 3.15 cho thấy: Chiếu xạ làm giảm rõ rệt chiều dày bàn chân chuột so với lô chứng sinh học (p < 0,01) Levamisol làm tăng có ý nghĩa thống kê chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình (p < 0,01) Livganic liều 0,6 g/kg làm tăng chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình (p < 0,05) Livganic liều 1,8 g/kg khơng làm tăng có ý nghĩa thống kê chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình »Định lượng cytokin máu Bảng 3.16 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ IL – IFN - α Lô Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Mô hình Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lơ 5: Livganic 1,8 g/kg n 10 10 10 10 10 Nồng độ IL – ( X ± SE, pg/ml) 79,73 ± 7,43 91,14 ± 7,09 90,35 ± 3,37 85,76 ± 7,34 97,88 ± 6,93 Nồng độ IFN - α ( X ± SE, pg/ml) 248,86 ± 33,14 535,44 ± 43,87*** 440,66 ± 52,37** 481,24 ± 47,97** 482,14 ± 47,48** Chú thích: **, ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,01; 0,001 Kết nghiên cứu bảng 3.16 cho thấy: Nồng độ IL-2 máu không bị thay đổi có ý nghĩa thống kê chiếu xạ Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lô sử dụng levamisol Livganic 0,6 g/kg so với lơ mơ hình Livganic liều 1,8 g/kg làm tăng nồng độ IL-2 máu chưa có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Chiếu xạ gây gia tăng rõ rệt nồng độ IFN – α máu ngoại vi chuột nhắt (P < 0,001) Levamisol khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê IFN – α so với lơ mơ hình Livganic 0,6 g/kg Livganic 1,8 g/kg có xu hướng làm giảm khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê nồng độ IFN – α so với lô mơ hình 11 hình Livganic liều 0,6 g/kg làm tăng có ý nghĩa thống kê nồng độ IgG máu Livganic liều 1,8 g/kg có xu hướng làm tăng nồng độ IgG so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 3.1.2.3 Kết đánh giá miễn dịch quan trung gian tế bào » Phản ứng bì với kháng nguyên OA: Bảng 3.9 Ảnh hưởng thuốc thử đến phản ứng bì với kháng nguyên OA Lô n Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg 10 10 10 10 Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10 Phản ứng bì: chiều dày bàn chân chuột ( X ± SE, mm) 2,68 ± 0,06 2,49 ± 0,04* 2,54 ± 0,05* 2,68 ± 0,07 Δ 2,53 ± 0,06 Chú thích: *: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; Δ: Khác biệt so với Mô hình với p < 0,05 Kết trình bày bảng 3.9 cho thấy: Cyclophosphamid nhiều liều nhỏ làm giảm rõ rệt chiều dày bàn chân chuột so với lô chứng sinh học (p < 0,05) Levamisol làm tăng chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình nhiên khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê Livganic liều 0,6 g/kg làm gia tăng có ý nghĩa thống kê chiều dày chân chuột so với lô mô hình Livganic liều 1,8 g/kg làm tăng chiều dày bàn chân chuột so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê » Định lượng cytokin máu Bảng 3.10 Ảnh hưởng thuốc thử đến nồng độ IL – IFN - α Lô n Nồng độ IL – Nồng độ IFN - α ( X ± SE, pg/ml) Lô 1: Chứng sinh học 10 ( X ± SE, pg/ml) 74,89 ± 6,96 Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol 10 10 99,48 ± 13,60 152,14 ± 27,42* Lô 4: Livganic 0,6 g/kg 10 115,80 ± 16,98* 480,21 ± 65,25 Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10 125,78 ± 37,18 560,44 ± 80,30* 389,92 ± 29,77 591,16 ± 50,59** 224,13 ± 94,00 Δ Chú thích: *: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05 Kết nghiên cứu bảng 3.16 cho thấy: Levamisol 50 mg/kg, Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg làm gia tăng nồng độ IL-2 so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết nghiên cứu bảng 3.17 cho thấy: Cyclophosphamid gây gia tăng rõ rệt nồng độ IFN – α máu ngoại vi chuột nhắt (P < 0,05) Levamisol 50 mg/kg làm giảm gia tăng nồng độ IFN - α có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình Livganic 0,6 g/kg Livganic 1,8 g/kg làm giảm nồng độ IFN – α so với lơ mơ hình nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê » Số lượng tế bào CD4+, CD8a+ CD19+ 12 Bảng 3.11 Ảnh hưởng Livganic lên dấu ấn miễn dịch CD19+ Lô Lô 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg n 10 10 10 10 10 CD4+ CD8a+ ( X ± SE, G/l) 0,403 ± 0,056 0,013 ± 0,004*** 0,029 ± 0,011*** 0,028 ± 0,012*** 0,016 ± 0,005*** 0,719 ± 0,083 0,308 ± 0,045*** 0,393 ± 0,087* 0,439 ± 0,094* 0,486 ± 0,092 0,252 ± 0,022 0,023 ± 0,003*** 0,016 ± 0,003*** 0,029 ± 0,015*** 0,024 ± 0,004*** Tỷ lệ CD4+/CD8a+ ( X ± SE) 2,96 ± 0,31 14,18 ± 1,97*** 26,84 ± 4,20*** 31,69 ± 9,00** Δ 21,78 ± 4,06*** Chú thích: *;**;***: Khác biệt so với lô chứng với p < 0,05; 0,01; 0,001; Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05 Kết bảng 3.18 cho thấy: Livganic liều 0,6 g/kg làm tăng tất số CD19+, CD4+ CD8a so với lơ mơ hình khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Chỉ số CD4+/CD8a+ lô Livganic liều 0,6 g/kg tăng cao có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình cho thấy Livganic làm tăng CD4+ nhiều CD8a+ Livganic liều 1,8 g/kg khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê số CD19+, CD8a+ số CD4+/CD8a+ so với lơ mơ hình Chỉ số CD4+ lơ Livganic liều 1,8 g/kg khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh học nhiên khơng tăng có ý nghĩa thống kê so với lơ mơ hình 3.1.2.4 Giải phẫu vi thể lách tuyến ức Kết luận giải phẫu bệnh: Cyclophosphamid nhiều liều nhỏ gây tổn thương rõ ràng mơ lách tuyến ức hình ảnh giải phẫu bệnh lơ mơ hình Levamisol 50 mg/kg, Livganic 0,6 g/kg Livganic 1,8 g/kg không cho thấy thay đổi rõ ràng hình ảnh giải phẫu bệnh so với lơ mơ hình 3.1.3 Mơ hình suy giảm miễn dịch tia xạ 3.1.3.1 Kết đánh giá chung hệ miễn dịch Bảng 3.12 Ảnh hưởng thuốc thử lên trọng lượng lách tuyến ức tương đối Trọng lượng tuyến ức Trọng lượng lách tương tương đối đối ( X ± SE, 1:1000, mg/g) ( X ± SE, 1:1000, mg/g) Lô 1: Chứng sinh học 10 8,8 ± 0,89 3,29 ± 0,18 Lơ 2: Mơ hình 10 4,98 ± 0,73** 2,48 ± 0,22* Lô 3: Levamisol 10 3,66 ± 0,32*** 2,61 ± 0,21* Lô 4: Livganic 0,6 g/kg 10 3,69 ± 0,64*** 2,30 ± 0,26** Lô 5: Livganic 1,8 g/kg 10 3,66 ± 0,32*** 2,41 ± 0,29* Chú thích: *; **,***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,05; 0,01; 0,001 Lô n Kết trình bày bảng 3.12 cho thấy: Chiếu xạ làm giảm trọng lượng lách tương đối chuột nhắt trắng Lemamisol Livganic liều 0,6 g/kg 1,8 g/kg 13 khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê trọng lượng lách tương đối so với lơ mơ hình Trọng lượng tuyến ức tương đối lơ mơ hình khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh học (p < 0,05) Levamisol, Livganic 0,6 g/kg 1,8 g/kg khơng làm thay đổi có ý nghĩa thống kê trọng lượng tuyến ức tương đối so với lơ mơ hình » Số lượng bạch cầu: Bảng 3.13 Ảnh hưởng thuốc thử lên số lượng bạch cầu Lơ Lơ 1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình Lô 3: Levamisol Lô 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg n 10 10 10 10 10 Số lượng bạch cầu ( X ± SE, G/l) 3,16 ± 0,37 0,29 ± 0,02*** 0,41 ± 0,04*** Δ 0,37 ± 0,05*** 0,38 ± 0,03*** Δ Chú thích: ***: Khác biệt so với Chứng sinh học với p < 0,001 Δ: Khác biệt so với Mơ hình với p < 0,05 Kết trình bày bảng 3.13 cho thấy: Chiếu xạ làm giảm rõ rệt số lượng bạch cầu máu ngoại vi chuột Levamisol có tác dụng rõ rệt làm tăng bạch cầu máu ngoại vi so với lơ mơ hình (p < 0,05) Livganic 1,8 g/kg có tác dụng rõ rệt làm tăng bạch cầu máu ngoại vi so với lơ mơ hình (p < 0,05), Livganic 0,6 g/kg khơng làm tăng có ý nghĩa thống kê số lượng bạch cầu máu ngoại vi so với lô mơ hình » Cơng thức bạch cầu: Kết công thức bạch cầu: Chiếu xạ làm giảm rõ rệt bạch cầu lympho BCTT so với lô chứng sinh học (p < 0,001 Levamisol làm tăng bạch cầu lympho BCTT so với lơ mơ hình Levamisol khơng làm tăng có ý nghĩa thống kê số lượng bạch cầu acid, base, mono NK so với lơ mơ hình Livganic liều 0,6 g/kg khơng làm tăng có ý nghĩa thống kê số lượng loại bạch cầu so với lơ mơ hình Livganic liều 1,8 g/kg làm tăng bạch cầu lympho BCTT so với lơ mơ hình 3.1.3.2 Kết đánh giá miễn dịch dịch thể Bảng 3.14 Ảnh hưởng thuốc thử lên nồng độ IgG máu ngoại vi Lô Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Mơ hình CY Lơ 3: Levamisol Lơ 4: Livganic 0,6 g/kg Lô 5: Livganic 1,8 g/kg n 10 10 10 10 10 Nồng độ IgG ( X ± SE, mg/mL) 85,79 ± 4,92 90,49 ± 5,03 86,15 ± 4,60 80,79 ± 5,35 76,24 ± 7,00 Kết bảng 3.14 cho thấy: Nồng độ IgG máu khơng bị thay đổi có ý nghĩa thống kê chiếu xạ Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê lơ sử dụng levamisol lô sử dụng Livganic so với lơ mơ hình  ... chung tác dụng kích thích miễn dịch Livganic Từ kết nghiên cứu sử dụng mơ hình khác nhau, thấy Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào, nhiên mức độ tác dụng khác nghiên. .. 0,6 g/kg có tác dụng kích thích miễn dịch miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào, tác dụng kích thích miễn dịch khơng quan sát đầy đủ nhóm sử dụng Livganic liều 1,8 g/kg Nói cách khác, Livganic dùng... Kết nghiên cứu cho thấy viên nén Livganic có tác dụng kích thích miễn dịch dịch thể miễn dịch tế bào mơ hình suy giảm miễn dịch khác nhau: Mơ hình suy giảm miễn dịch cấp CY, mơ hình suy giảm miễn