Nghiên cứu sự hình thành synnema của isaria tenuipes (peck ) samson bằng phương pháp lên men bề mặt

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - - TRỊNH THỊ MINH THÀNH NGHIÊN CỨU SỰ HÌNH THÀNH SYNNEMA CỦA Isaria tenuipes (PECK.) SAMSON BẰNG PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN BỀ MẶT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƢ NGÀNH: NƠNG HỌC Vinh – 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - - NGHIÊN CỨU SỰ HÌNH THÀNH SYNNEMA CỦA Isaria tenuipes (PECK.) SAMSON BẰNG PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN BỀ MẶT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƢ NGÀNH: NÔNG HỌC Người thực : Trịnh Thị Minh Thành Lớp : 48K2 – Nông học Người hướng dẫn : PGS.TS Trần Ngọc Lân Vinh – 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực, số liệu thu thập qua thí nghiệm thân tiến hành chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan thí nghiệm để thu thập số liệu luận văn thân tơi tiến hành phịng thí nghiệm Công Nghệ Sinh học Nông nghiệp, khoa Nông Lâm Ngư, trường Đại Học Vinh với đồng ý hướng dẫn PGS TS Trần Ngọc Lân, giáo viên hướng dẫn kĩ thuật viên phụ trách phòng thí nghiệm Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Vinh, ngày 20 tháng năm 2011 Tác giả Trịnh Thị Minh Thành LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập nghiên cứu đề tài luận văn tốt nghiệp ngành kĩ sư Nông học, nhận nhiều giúp đỡ q báu từ phía thầy cơ, bạn bè, người thân Với lòng chân thành biết ơn sâu sắc nhất, xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới PGS TS Trần Ngọc Lân, Th.S Nguyễn Thị Thúy, KS Trần Văn Cảnh, người hướng dẫn từ bước đầu làm nghiên cứu khoa học, tận tâm nhiệt tình hướng dẫn tơi suốt thời gian làm đề tài luận văn tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô giáo tổ môn Bảo vệ thực vật, giáo viên phụ trách, kĩ thuật viên phịng thí nghiệm tạo điều kiện sở vật chất hướng dẫn, giúp đỡ góp ý kiến cho tơi suốt q trình làm đề tài Và tơi xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, bạn bè động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Vinh, ngày 20 tháng năm 2011 Tác giả Trịnh Thị Minh Thành DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Thành phần loài Isaria VQG Pù Mát Khu BTTN Pù Huống 23 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái Isaria tenuipes tự nhiên nhân tạo 33 Bảng 3.2 Khả phát triển sợi nấm bề mặt môi trường 35 Bảng 3.3 Ảnh hưởng môi trường lỏng đến thời gian hình thành synnema 36 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thành phần môi trường đến sản lượng synnema 38 Bảng 3.5 Khả phát triển sợi nấm bề mặt theo thời gian 39 Bảng 3.6 Ảnh hưởng khối lượng chất đến thời gian hình thành 40 synnema Bảng 3.7 Ảnh hưởng khối lượng chất đến sản lượng Synnema 43 Bảng 3.8 Khả phát triển sợi nầm bề mặt chất theo thời gian 44 Bảng 3.9 Ảnh hưởng vật liệu ni đến thời gian hình thành synnma 45 Bảng 3.10 Ảnh hưởng vật liệu nuôi đến sản lượng synnema 47 Bảng 3.11 Ảnh hưởng nguồn vi lượng đến khả phát triển sợi 49 nấm bề mặt chất Bảng 3.12 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng bổ sung đến thời gian hình thành 50 synnema Bảng 3.13 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng bổ sung đến sản lượng 51 synnema DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình Nội dung Trang Hình 1.1 Chu trình xâm nhiễm nấm ký sinh trùng 07 Hình 1.2 Cơ chế xâm nhiễm nấm ký sinh trùng 10 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình nghiên cứu hình thành synnema mơi trường 25 rắn nhân tạo Hình 3.1 Mẫu vật, cấu trúc sinh bào tử PDA I tenuipes 34 Hình 3.2 Khả phát triển sợi nấm bề mặt môi trường lỏng 35 Hình 3.3 Khả bao phủ sợi nấm bề mặt mơi trường 35 Hình 3.4 Thời gian sinh trưởng synnema môi trường lỏng 36 Hình 3.5 Các giai tăng trưởng synnema I tenuipes 37 Hình 3.6 Số synnema mơi trường lỏng 38 Sản lượng synnema môi trường lỏng 38 Hình 3.7 Synnema thu mơi trường lỏng 38 Hình 3.8 Khả phát triển sợi nấm bề mặt chất 39 Hình 3.9 Ảnh hưởng khối lượng chất đế khả hình thành synnema 41 Hình 3.10 Các giai đoạn tăng trưởng synnema 41 Khả bao phủ bề mặt môi trường 41 Sự phát triển hệ sợi nấm 41 Khả phát triển mầm 41 Sự tăng trưởng synnema 41 Hình 3.11 Ảnh hưởng khối chất đến sảnlượng synnnema 43 Hình 3.12 Synnema thu mức chất khác 43 Hình 3.13 Khả phát triển sợi nấm bề mặt chất theo thời gian 44 Hình 3.14 Ảnh hưởng vật liệu ni đến thời gian hình thành synnma 45 Hình 3.15 Kích thước synnma 48 Sản lượng synnema 48 Synnema thu nuôi vật liệu ni khác 48 Hình 3.16 Hình 3.17 Khả phát triển sợi nấm bề mặt chất 49 Hình 3.18 Thời gian hình thành synnema 50 Hình 3.19 Kích thước synnema 52 Sản lượng synnema Hình 3.20 Synnema thu bổ sung nguồn vi lượng khác 52 DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung bt Bào tử C Các bon C Cordyceps CT Công thức Cv% Độ biến động mẫu ĐTHT Đông trùng - Hạ thảo EPF Entomology Pathogenic Fungi - Nấm ký sinh côn trùng Lsd0,05 Phương sai N Ni tơ PDA Potato Dextrose Agar PDB Potato Dextrose Broth VQG Vườn Quốc Gia MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Danh mục bảng số liệu iii Danh mục hình vẽ iv Danh mục chữ viết tắt v MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu 2.1 Mục tiêu tổng quát 2.2 Mục tiêu cụ thể Đối tƣợng, phạm vi nội dung nghiên cứu 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu 3.3 Nội dung nghiên cứu 4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Nấm ký sinh côn trùng 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Chu trình sống lây nhiễm nấm ký sinh côn trùng 1.2 Lƣợc sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng 11 1.2.1 Nghiên cứu đa dạng sinh học nguồn lợi nấm ký sinh côn trùng 11 1.2.2 Nghiên cứu nhân sinh khối nấm ký sinh côn trùng dược phẩm làm 16 thực phẩm chức 1.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng nấm Isaria Tenuipes 17 1.4 Tiềm tình hình nghiên cứu Isaria tenuipes Việt Nam 22 CHƢƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Quy trình nghiên cứu 25 25 10 2.1.1 Quy trình nghiên cứu 25 2.1.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 2.2 Nguyên vật liệu 26 2.2.1 Trang thiết bị, vật tư, hoá chất 26 2.2.2 Chủng nấm phương pháp thu thập, phân lập 26 2.2.2.1 Chủng nấm 26 2.2.2.2 Phương pháp phân lập nuôi cấy 26 2.3 Phƣơng pháp nhân nuôi synnema 28 2.3.1 Thiết kế thí nghiệm 28 2.3.1.1 So sánh mơi trường lỏng khác 28 2.3.1.2 So sánh khối lượng khác vật chứa 28 2.3.1.3 So sánh loại vật liệu chứa 29 2.3.1.4 So sánh nguồn dinh dưỡng bổ sung khác 29 2.4 Chuẩn bị môi trƣờng 29 2.4.1 Giống gốc (trên đĩa PDA) 29 2.4.2 Nhân giống lỏng cho lây nhiễm 30 2.4.3 Chuẩn bị môi trường (cơ chất) rắn 31 2.5 Phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 31 2.5.1 Phương pháp thu tiêu 31 2.5.2 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƢƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 33 So sánh đặc điểm hình thái I tenuipes tự nhiên nhân 33 tạo 3.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng lỏng khác đến hình thành 34 synnema 3.2.1 Ảnh hưởng mơi trường lỏng đến khả phát triển sợi nấm 34 bề mặt môi trường 3.2.2 Ảnh hưởng mơi trường lỏng đến thời gian hình thành synnema 36 63 Bột nhộng tằm 63.33 112.67 206.33 Trọng lượng synnema (g/synnema) Hóa chất 26.78 Trọng lượng Số synnema (synnema/hộp,lọ) Tổng sản lượng 0.1 20 0.09 18 0.08 16 0.07 14 0.06 12 0.05 10 0.04 0.03 0.02 0.01 0 50 100 150 200 250 300 Hình 3.19a Kích thước synnema 350 Bột nhộng tằm Hóa chất Hình 3.19b Sản lượng synnema Synnema bổ sung hóa chất Synnema bổ sung nhộng tằm Synnema bổ sung hóa chất Synnema bổ sung nhộng tằm Hình 3.20 Synnema thu bổ sung nguồn vi lượng khác Tổng sản lượng synnema (g/hộp,lọ) Chiều dài (mm) Nguồn dinh dƣỡng bổ sung 64 Kết nghiên cứu bảng 3.13 hình 3.19a,b cho thấy có khác sản lượng synnema bổ sung nguồn vi lượng dinh dưỡng khác Số lượng chiều dài thu thêm thành phần dinh dưỡng khác có sai khác công thức (Fpr < 0.05) Chiều dài synnema thu bổ sung hàm lượng nhộng tằm cho số lượng cao nhiều (112.67 ± 12.5 mm) so với bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng hóa chất nhân tạo 26.78 ± 6.835 mm Số lượng synnema thu bổ sung nhộng tằm (206.33 ± 5.51 synnema/hộp) cao gần gấp lần so với thêm nguồn dinh dưỡng hóa chất nhân tạo (63.33 ± 13.61 synnema/hộp) Khối lượng synnema thu cho thấy bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng vi lượng nhộng tằm (0.086 ± 0.007 g/synnema) cao bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng hóa chất (0.047 ± 0.005 g/synnema), kết cho thấy tổng sản lượng thu từ hộp nhựa với nguồn dinh dưỡng vi lượng bổ sung bột nhộng tằm cao so với nguồn dinh dưỡng bổ sung nguồn hóa chất nhân tạo 3.6 Quy trình kỹ thuật sản xuất synnema Isaria tenuipes VN1342 (Peck.) Samson Kỹ thuật sản xuất giống Mô tả Các bước Chuẩn bị - Thành phần: dịch chiết khoai tây, glucose, bột nhộng tằm - Dụng cụ ni: bình tam giác 250ml, 500ml - Chia lọ theo tỷ lệ mơi trường/thể tích bình 1/5 - Bịt miệng nút bông, niylon, bao bên ngồi giấy thiếc Hình ảnh 65 - Đem hấp khử trùng 200C, 121 phút - Để nguội buồng cấy có tia cự tím Cấy giống - Vệ sinh vật liệu chứa giống, lọ chứa môi trường cồn 900C - Khử trùng dụng cụ cấy, dụng cụ liên quan - Cấy giống: dùng que cấy lấy lượng nấm khoảng 3-5mm thả vào môi trường Nuôi dưỡng - Các lọ đặt nuôi máy lắc 150 vòng/ phút thời gian 5-7 ngày, 25 ± 10c; RH = 75-80%, điều kiện tối - Kiểm tra hàng ngày để loại bỏ nhiễm => Những lọ đạt yêu cầu có dạng dung dịch hạt li ti, màu vàng Sản xuất synnema Chuẩn bị - Gạo lứt làm tạp bẩn trước cân đong vào vật liệu nuôi 66 - Cân đong môi trường nước cất theo tỷ lệ phù hợp 1:1,2 - Bịt miệng vật liệu nuôi bảng túi nylon, vòng chun - Đem hấp khử trùng 1210C, 15psi 30 phút - Để nguội buồng có tia cực tím Chuẩn bị giống để cấy nấm - Nước cất tiệt trùng - Giống nuôi môi trường lỏng lắc sau 5-7 ngày, kiểm tra kỹ lưỡng, lọc qua lớp lọc vô trùng đếm nồng độ bào tử - Pha loãng cần để đạt 5,0 × 106bt Cấy nấm - Vệ sinh bên lọ giống cồn - Khử trùng dụng cụ cấy cồn đèn cồn - 10% giống/ tồn khối mơi trường cấy vào mơi trường Nuôi dưỡng - Sau cấy, lọ/ hộp môi trường nuôi mức nhiệt độ 25 ± 10c; RH = 80-85 %, điều kiện tối sợi nấm bao phủ tồn khối mơi trường - Sợi nấm phủ tồn khối mơi trường sau 15 ngày - Tiếp tục nuôi để sợi nấm sử dụng hết nguốn dinh dưỡng môi trường 67 Kích thích màu sợi nấm mầm synnema - Hạ thấp nhiệt độ xuống 20 ± 10C - Thay đổi chu kỳ ánh sáng phịng ni - Tiếp tục nuôi điều kiện để thể hình thành - Sau 35-40 ngày dùng tăm chọc lỗ túi nylon (hoặc mở nắp hộp) để thông khí tạo điều kiện cho hình thành bào tử phân nhánh synnema 68 Một số hình ảnh sản phẩm thu đƣợc 69 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Hoạt động nghiên cứu hình thành synnema Isaria tenuipes (Peck.) Samson môi trường nhân tạo thu số kết sau: (1) Đặc điểm I.tenuipes tự nhiên nhân tạo có khác Synnema hình thành chất nhân tạo có phần lớn chiều dài chiều rộng (2) Trên môi trường lỏng công thức (PDB+NT) cho khả hình thành synnema tốt với tổng thời gian thu hoạch 51.7±1.53, sản lượng synnema trung bình 2.89 (g/lọ) (3) Mơi trường có khối lượng chất khác ảnh hưởng đến khả hình thành synnema I tenuipes Công thức CT_40 công thức có lượng chất phù hợp cho hộp nhựa 700ml với thời gian thu hoạch synnema 45.67 ± 1.53 Và tổng sản lượng synnema thu 19.52 ± 0.61 (g/lọ) (4) Vật liệu nuôi khác ảnh hưởng đến hình thành synnema I tenuipes Hộp nhựa 700ml thích hợp với tổng thời gian thu hoạch synnema 43.7 ± 1.53 tổng sản lượng synnema thu 14.51± 2.12 (g/lọ) (5) Kết nghiên cứu thu cho thấy chất dinh dưỡng nhộng tằm thích hợp cho hình thành synnema I tenuipes, với tổng thời gian thu hoạch synnema 43.33 ± 0.58 tổng sản lượng synnema thu 17.82 ± 1.661 (g/lọ) Kiến nghị Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiến môi trường (như nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng), thành phần tỷ lệ hàm lượng dinh dưỡng cho công tác nhân giống môi trường lỏng Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện môi trường (nhiệt độ, ánh sáng, độ ẩm….), thành phần tỷ lệ cho nhân nuôi nấm I tenuipes dựa chất gạo lứt với thành phần bổ sung, vật liệu ni thích hợp để thu synnema đáp ứng theo cầu 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Hà Thị Quyến, Tạ Kim Chỉnh, Hoa Thị Minh Tú, Lại Khánh Linh Nguyễn Ngọc Quyên, 2002 Ảnh hưởng điều kiện bảo quản giống đến đặc tính sinh học vi nấm diệt côn trùng, Metarhizium anisopliae Beauveria bassiana, Báo cáo khoa học Hội nghị côn trùng học toàn quốc lần thứ 4, Hà Nội, 11 - 12 tháng 4, năm 2002, Nxb Nông nghiệp, tr 401 - 405 Nguyễn Dương Khuê, 2005 Sử dụng nấm Metarhizium anisopliae Sorok phòng trừ mối nhà (Coptotetrmes formosanus Shiraki) theo phương pháp lây nhiễm Hội nghị trùng học tồn quốc lần thứ Hà Nội 1112/04/2005 Trang 409 – 414 Nguyễn Mậu Tuấn, Nguyễn Thái Huy, Trương Phi Hùng, 2011 Kết nghiên cứu thành phần sinh hóa nấm Đông trùng hạ thảo tằm dâu Paecilomyces tenuipes Báo cáo khoa học Hội nghị trùng tồn quốc lần thứ 7, Nxb Nông Nghiệp, 2011, pp: 905-912 Nguyễn Thị Lộc, Võ Thị Bích Chi, Nguyễn Thị Nhàn, Phạm Quang Hưng, Huỳnh Văn Nghiệp, Vũ Tiến Khang Nguyễn Đức Thành 2002 Nghiên cứu, sản xuất ứng dụng hai chế phẩm sinh học để quản lý loài sâu hại lúa Viện lúa ĐBSCL Trang 274 – 295 Phạm Thị Thùy, Trần Văn Huy, Nguyễn Duy Mạn 2005 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ sản xuất thuốc trừ sâu vi nấm Beauveria Metarhizium để phòng trừ sâu hại đậu tương đậu xanh Hà Tĩnh năm 2003-2004 Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc Hà Nội 1112/4/2005 Trang 494 -497 Phạm Văn Lầm, 2000 Nấm gây bệnh cho trùng Tạp chí Bảo vệ thực 71 vật, số1/2000, tr 35 - 37 Tạ Kim Chỉnh, Hồ Thị Loan, Nguyễn Thị Hà Chi, 2005 "Một số đặc điểm sinh hóa hai chủng nấm Metarhizium anisopliae Ma.82 Beauveria bassiana Bb.75KC", Báo cáo khoa học, Hội nghị toàn quốc 2005, Nghiên cứu khoa học sống, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 2005, pp 433 - 436 Trần Ngọc Lân cộng sự, 2008 Đa dạng sinh học nấm ký sinh côn trùng Vườn Quốc gia Pù Mát đánh giá khả ký sinh số loài nấm số loài sâu hại trồng, Báo cáo đề tài cấp Bộ Giáo dục Đào tạo (Mã số B2007-27-25), 2008, 120 trang Trần Ngọc Lân, Thái Thị Ngọc Lam, Nguyễn Thị Thành, 2010 Đa dạng nấm ký sinh côn trùng giống Isaria vườn Quốc gia Phù Mát khu bảo tồn thiên nhiên Phù Huống Trần Văn Hai, Trịnh Thị Xuân, Phạm Kim Sơn, 2006 Tạo sinh khối 10 thử nghiệm hiệu lực số loại nấm ký sinh sâu ăn tạp rầy mềm hại rau cải TP Cần Thơ Tạp chí nghiên cứu khoa học, trường ĐHCT Võ Thị Thu Oanh, Lê Đình Đơn, Bùi Cách Tuyến 2007 Đặc điểm sinh học khả gây bệnh nấm Metarhizium anisopliae (Metsch.) 11 Sorokin đối vời sâu khoang (Spodoptera litura F.) hại rau cải xanh (Brassica juncea L.) Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp, số 1&2 Đại học Nông Lâm Tp HCM Trang 58-63 II Tài liệu tham khảo nƣớc Ahn Y J., Park S J., LeeS.C., Shin S C., Choi D H., 2000 Cordycepin: 12 selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridim ssp J Agric Food Chem., 2000, 48: 2744- 72 2748 Akira Sakakura, Kazufumi Shioya et al., 2009 Isolation, structural 13 elucidation and synthesis of a novel antioxidative pseudo-di-peptide, Hanasanagin, and its biogenetic precursor from the Isaria japonica mushroom 2009 Bok J W., Lermer L., Chlton J.; Klingeman H G., Towers G H N, 14 Antitumor Sterols from the Mycelia of Cordyceps sinensis, Phytochemistry, 51, 891 – 898 Brown A H S and Smith G., 1957 The gennus Paecilomyces Bainier and it 15 perfect stage Byssochlamys Westling Transactions of the British Mycological Society, 1957, 40: 17 - 89 16 Choi Y W., Hyde K D and Ho W W H., 1997 Fugal Diversity 2, 29-38 Chiou, W F.; Chang, P C.; Chou, C J.; Chen, C F (2001), Protein 17 Constituent Contributes to the Hypotensive and vasorelaxant Activities of Cordyceps sinensis, Life Sci, 66, 1369 - 1376 Chen Y J., Shiao M S., Lee S S., Wang S Y., 1997 Effect of Cordyceps 18 sinensis on the Proliferation and differentiation of human Leukemic U937 Cells Life Sci., 1997, 60, 2349 - 2359 Chen Y Q., Hu B., Xu F., Zhang W., Zhou H., Qu L H., 2004 Genetic 29 Variation of Cordyceps sinensis, a Fruit - Body - Producing Entomopathogenic Species from Different geographical Regions in China, FEMS Microbial Lett, 2004, 230: 153 - 158 20 Cleaver Phillip D., John C., 2006 Novel method for growing Cordyceps sinensis on a substrate and novel method for hydridizing different strains of 73 Cordyceps sinensis Publication Date, 2006, 13 pp Goettel M S., and Inglis G D., 1997 Fungi: Hyphomycetes, In: Manuals 21 of Techniques in Insect Pathology (ed L Lacey), Academic Press, 213247 Gi - Ho Sung, Nigel L Hywel - Jones, Jae - Mo Sung, Jennifer Luangsa - 22 ard J., Bhushan Shrestha, Joseph W Spatafora, 2007 Phylogenetic classification of Cordyceps and the Clavicipitaceous fungi Studies in Mycology, 2007, 57(1): - 59 23 Hajek, A.E and R.J St Leger 1994 Interactions between fungal pathogens and insect hosts Annu Rev Entomol 39 293-322 Hywel - Jones N L., 1994 Cordyceps khaoyaiensis anh C pseudomilitaris, 24 Two New Pathogens of Lepidopteran Larvae from Thailand Mycol Res., 1994, 98: 939 - 942 Hiroki Sato and Mitsuaki Shimazu, 2002 Stromata production of 25 Cordyceps militaris (Clavicipitales: Clavicipitaceae) by injection of hyphal bodies to alternative host insects Appl Entomol Zool , 2002 37(1): 85 92 Isaka M., Tanticharoen M., Thebtaranonth Y., 2000 Cordyanhydrides A and 26 B Two Unique Anhydrides from the Insect Pathogenic Fungus Cordyceps pseudomilitaris BCC 1620 Tetrahedron Lett, 2000, 41: 1657-1660 Isaka M., Tanticharoen M., Kongsaeree P., Thetaranonth Y., 2001 27 Structures of Cordypyridones A - D, Antimalarial N - Hydroxy - anh N Methoxy - - pyridonesn from the Insect Pathogenic Fungus Cordyceps nipponica J Org Chem, 2001, 66: 4803 - 4808 28 Jannet Jennifer Luangsa-ard, Kanoksri, Suchada Mogkosamrit, Somsak 74 Sivachai, Nigel Hywer-Jones.2006 Workshop on the collection, Isolation, Cutivation an Identification of insect - Pathogenic Fungi, Viet Nam, 2006, 106 p 29 30 John Holliday, matt Cleaver, 2004 On the Trail of The Yak Ancient Cordyceps in the Modern World, 2004, 63 pp Katsuji Yamanaka, Satoshi Inatomi, Mitsuyo Hanaoka, 1998 Cutivation characteristics of Isaria japonica 1998 Kikuchi H., Miyagawa Y., Nakamura K., Sahashi Y., Inatomi S., Oshima Y 32 2004 A Novel Carbon Skeletal Trichothecane, Tenuipesine A, Isolated from an Entomopathogenic fungus, Paecilomyces tenuipes Org Lett, 2004, 6: 4531 – 4533 Kocharin K., P Wongsa, 2006 Semi - defined Medium for in vitro 33 Cultivation of the Fastidious Insect Pathogenic Fungus Cordyceps unilateralis Mycopathologia, 2006, 161(4): 255 - 260 Kuo Y C., Tsai W J., Wang J Y., Chang S C., Lin C Y., Shiao M S., 34 2001 Regulation of Bronchoalveolar Lavage Fluids Cell Function by the Immunomodulatory Agents from Cordyceps sinensis Life Sci, 2001, 68: 1067- 1082 Kiho T., Tabata H., Ukai S., Hara C., A Minor, 1986 Protein - Containing 34 Galactomannan from a Sodium Corbonate Extract of Cordyceps sinensis, Carbohydr Res, 1986, 156: 189 - 198 Kittakoop P., Punya J., Kongsaeree P., Lertwerawat Y., Jintasirikul A., 35 Tanticharoen M., Thebtaranonth Y., 1999 Bioactive Naphthoquinones from Cordyceps unilateralis Phytochemistry, 1999, 52: 453 - 457 36 Kim S W., Xu C P., Hwang H J., Choi J W., Kim C W., Yun J W., 2003 75 Production and Characterization of Exopolysaccharides from an Entomopathogenic Fungus Cordyceps militaris NG3 Biotechnol Prog., 2003, 19(2): 428 - 435 37 Kobayashi Y., 1982 Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Trans Mycol Soc Jpn., 1982, 23: 329–364 Lecay L A and Brooks W M., 1997 Initinal handling and diagnosis of 38 diseased insets In: Manuals of Techniques in Insect Pathology (Ed L.Lacey), Academic Press, 1-15, 1997 Luangsa-ard J.J., Tasanathai K., Mongkolsamrit S., and Hywel-Jones, 39 N.L., 2007 Atlas of Invertebrate-Pathogenic Fungi of Thailand, vol NSTDA publication Themma Group Co., Ltd 82 p ISBN 978-974-229522-6 Mina Masuda, Eriko Urabe, Akihiko Sakurai, Mikio Sakakibara, 2005 40 Production of cordycepin by surface culture using the medicinal mushroom Cordyceps militaris 2005, pp 41 Masahiko I., Prasat K et al, 2005 Bioactive Substances from Insect Pathogenic Fungi Acc Chem Res, 2005, 38: 813 - 823 Panida Unagul, Patcharaporn Wongsa, Prasat Kittakoop, Sutichai Intamas, 42 Prasert Srikitikulchai, Marakot Tanticharoen, 2005 Production of red pigments by the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis BBC 1869, Industrial Microbiology and Biotechnolog, 2005, 32(4): 135 - 140 Patcharaporn Wongsa, Kanoksri Tasanatai, Patricia Watts, Nigel L Hywel – 43 Jones, 2005 Isolation and in vitro cultivation of the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis 2005, 5pp 76 44 45 Richar Alan Miller, 2005 Lab - Grown Cordyceps sinensis Hybrid: A Nano – processed Medicinal Mushroom that Really Delivers, 2005, 23pp Shah, P.A and J.K Pell., 2003 Entomopathogenic fungi as biological control agents Appl Microbiol Biotech 2003, 61: 413-423 Samson R A., Evans H C and Latges J P., 1988 Atlas of 46 Entomopathogenic fungi Springer - Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, 1-187 Sun S., Sun L., 2003 The divice for cultivating Cordyceps sinensis and 47 Method for cultivating it and the uses thereof, Publication Date:01/15/2003, 18 pp Sung - Hom Yeon, Jun - Ran Kim, young - Joon Ahn, 2006 Comparison of 48 growth - inhibiting activities of Cordyceps militaris and Paecilomyces japonica cultured on Bombyx mori pupae towards human gastrointestinal bacteria journal of the Science of Food and Agriculture, 2006, 837(1): 54 - 59 Sung G-H., Sung J-M., Hywel-Jones N.L., Spatafora J.W., 2007 A multi- 49 gene phylogeny of Clavicipitaceae (Ascomycota, Fungi): Identification of localized incongruence using a combinational bootstrap approach Molecular Phylogenetics and Evolution, in press 2007 Taborsky V., 1992 Small-scale processing of microbial pestcides FAO 50 Agric Service Bull 96 Food and Agriculture Organization of the United Nations Rome 51 52 Thomas M B & Read A.F., 2007 Can fungal biopesticides contro malarial Nature Microbiology Reviews, 2007, 5: 337 - 383 Thomadaki H., Scorilas A., Tsiapalis C M., Havredaki M., 2008 The role of cordycepin in cancer treatment via induction or inhibition of 77 apoptosis: implication of polyadenylation in a cell type specific manner Cancer chemotherapy and pharmacology 2008 Feb T Bunyapaiboonsri, S Yoiprommarat, K Intereya, Pranee Rachtawee, 53 Nigel L Hywel-Jones and Masahiko Isaka, 2009 Isariotins E and F, Spirocyclic and Bicyclic Hemiacetals from the Entomopathogenic Fungus Isaria tenuipes BCC 12625 J Nat Prod., 2009, 72(4): 756–759 Weiyun Zhang, Jiaping Chen, Yi Zhen, Jinyu Yang, Jing Li, 2005 Effect of 54 cultured Cordyceps exopolysaccharide (EPS) on some parameters of mouse immune function in vivo and in vitro 2005, pp (http://www.paper.edu.cn) Xian - Bing Mao, Titiporn Eksriwong, Somchai Chauvatcharin, Jian -Jiang 55 Zhong, 2004 Optimization of carbon source and carbon/nitrogen ratio for cordycepin prodection by submerged cultivation of medicinal mushroom Cordyceps militaris Process Biochemistry, 2005, 40: 1667 – 1672 Zhu, J.S., G.M Halpern, and K Jones 1998a The scientific rediscovery 56 of an ancient Chinese herbal medicine: Cordyceps sinensis Part I J Altern Complement Med., 1998, 4(3): 289-303 Zhu, J.S., G.M Halpern, and K Jones 1998b The scientific rediscovery 57 of an ancient Chinese herbal medicine: Cordyceps sinensis Part II J Altern Complement Med 1998, 4(4): 429-457 Zhu J - S., Halpern G M., Jones K., 1998 The Scientific Rediscovery of 58 an Ancient Chinese Herbal Medicine: Cordyceps sinensis Part I J Altern Complement Med., 1998, 4: 289 - 303 59 http://en.wikipedia.org ... phục vụ cho nghiên cứu sâu cần thiết Trên sở chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu hình thành synnema Isaria tenuipes (Peck. ) Samson phƣơng pháp lên men bề mặt? ?? Kết nghiên cứu đề tài... - - NGHIÊN CỨU SỰ HÌNH THÀNH SYNNEMA CỦA Isaria tenuipes (PECK. ) SAMSON BẰNG PHƢƠNG PHÁP LÊN MEN BỀ MẶT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƢ NGÀNH: NÔNG HỌC Người thực : Trịnh Thị Minh Thành Lớp... nuôi khác 48 Hình 3.16 7 Hình 3.17 Khả phát triển sợi nấm bề mặt chất 49 Hình 3.18 Thời gian hình thành synnema 50 Hình 3.19 Kích thước synnema 52 Sản lượng synnema Hình 3.20 Synnema thu bổ