Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Ethanol 70% từ lá chùm ngây (Moringa oleifera)

Bài viết tiến hành đánh giá hoạt tính kháng khuẩn và chỉ số MIC của cao chiết này với 15 chủng vi khuẩn chỉ thị bằng phương pháp khuếch tán trên giếng thạch ở nồng độ mg/ml. Kết quả cho thấy cao chiết ức chế 11/15 chủng vi khuẩn với đường kính vòng kháng từ 8,3 – 10,8 mm. Kết quả MIC, nồng độ của MoEE từ 12,5 mg/ml đến 50 mg/ml. Mời các bạn cùng tham khảo!

NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CAO CHIẾT ETHANOL 70% TỪ LÁ CHÙM NGÂY (Moringa oleifera) Phạm Minh Nhựt Viện Khoa học Ứng dụng HUTECH, trường Đại học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh TĨM TẮT Trong xã hội phát triển nay, thảo dược xem giải pháp an toàn hiệu việc điều trị bệnh, chùm ngây xem đối tượng có nhiều tiềm Trong nghiên cứu này, chùm ngây (Moringa oleifera) thu tỉnh Vĩnh Long phơi khô, xay nhuyễn tách chiết cao dung môi ethanol 70% phương pháp ngấm kiệt Dịch chiết cô 400C thu cao Tiến hành đánh giá hoạt tính kháng khuẩn số MIC cao chiết với 15 chủng vi khuẩn thị phương pháp khuếch tán giếng thạch nồng độ mg/ml Kết cho thấy cao chiết ức chế 11/15 chủng vi khuẩn với đường kính vòng kháng từ 8,3 – 10,8 mm Kết MIC, nồng độ MoEE từ 12,5 mg/ml đến 50 mg/ml Trong cao chiết, có diện carbohydrate, alkaloid, saponin, cardiac glycoside, flavonoid, hợp chất phenol, tannin, steroid amino acid Từ khóa: Cao chiết ethanol, chùm ngây, hoạt tính kháng khuẩn, MIC, thành phần hóa học GIỚI THIỆU Từ xa xưa, người biết sử dụng loại cỏ thiên nhiên nhằm mục đích trị bệnh, liệu pháp an tồn, dễ tìm, đồng thời mang đến hiệu cao Khi xã hội ngày phát triển với tiến khoa học kỹ thuật nhà khoa học không ngừng nghiên cứu tạo loại thuốc tây y giúp hỗ trợ điều trị bệnh tốt hơn, đó, phần lớn loại thuốc kháng sinh Mặc dù kháng sinh giải nhiều vấn đề liên quan đến trị bệnh mang lại lợi ích lớn cho người, việc sử dụng kháng sinh dẫn đến tượng kháng thuốc xảy nhiều Nguyên nhân chủ yếu việc lạm dụng, sử dụng thuốc kháng sinh tùy tiện, tràn lan người Dẫn đến tượng xuất ngày nhiều chủng vi khuẩn kháng kháng sinh, kể loại kháng sinh hệ Để giải vấn đề sử dụng nhóm chất kháng khuẩn có nguồn gốc từ thực vật kết hợp với y học thay dần loại kháng sinh vừa mang lại hiệu điều trị bệnh vừa đảm bảo an tồn đồng thời phịng ngừa tượng kháng thuốc vi sinh vật gây bệnh Cây chùm ngây (Moringa oleifera) thảo dược mọc hoang khắp nước ta, dược liệu dễ trồng trọt, thu hái, chế biến Thuộc nhóm thân mộc cao cỡ trung bình, độ tuổi trưởng thành mọc cao hàng chục mét tuổi khơng cắt cao tới 5-6m có đường kính 10 cm 34 năm tuổi độ tuổi trưởng thành Thân óng chuốt, khơng có gai Lá kép dài 30–60 cm, hình lơng chim, màu xanh mốc; chét dài 12–20 mm hình trứng, mọc đối có 6-9 đơi Cây trổ hoa vào tháng 1–2 Hoa trắng kem, có cuống, hình dạng giống hoa đậu, mọc thành chùy nách lá, có lơng tơ, nhiều mật Quả dạng nang treo, dài 25–40 cm, ngang cm, có cạnh, chỗ có hạt gồ lên, dọc theo có khía rãnh Hạt màu đen, trịn có cạnh, lớn cỡ hạt đậu Hà Lan Mặc dù chùm ngây sử dụng từ lâu đời cơng trình nghiên cứu cịn hạn chế Việc đánh giá hoạt tính sinh học chùm ngây điều cần thiết, góp phần hồn thiện phương thuốc dân gian có tiềm sử dụng điều trị bệnh Với sở khoa học ý nghĩa thực tiễn 715 trên, nghiên cứu thực để đánh giá số hoạt tính sinh học bao gồm hoạt tính kháng khuẩn để làm sở cho nghiên cứu VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1 Nguồn mẫu thuốc tách chiết cao Lá chùm ngây thu xã An Bình, huyện Long Hồ, tỉnh Vĩnh Long Các mẫu phơi khô, xay nhuyễn tách chiết với cồn 70% phương pháp ngâm dầm với tỷ lệ 1:20 (trọng lượng/thể tích) (Milosevic et al., 2007) Dịch lọc sau quay chân không nhiệt độ 400C bảo quản 40C 2.2 Chủng vi khuẩn thị Vi sinh vật thị sử dụng nghiên cứu 15 chủng vi khuẩn cung cấp Trường Đại học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh, gồm có: E coli, E coli 0208, E coli O157:H7, ETEC; Salmonella dublin, S enteritidis, S typhi, S typhimurium; Shigella boydii, S flexneri, S sonnei; Vibrio cholerae, V harveyi, V alginolyticus, V parahaemolyticus 2.3 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch Cao chiết cồn 70% từ chùm ngây sau hòa tan DMSO 1% nồng độ 100 mg/ml tiến hành đánh giá mức độ kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch (well diffusion agar) (Sen, Batra, 2012) Tiến hành tăng sinh chủng vi khuẩn khảo sát môi trường TSB bổ sung NaCl với nồng độ 15 g/l Vibrio sp môi trường TSB chủng vi khuẩn lại nhiệt độ 370C 24 Đo OD600nm xác định mật độ pha loãng để đạt mật độ 106 cfu/ml Hút 100 l dịch vi khuẩn sau pha lỗng cho vào mơi trường TSA TSA bổ sung NaCl (15g/l) trang đến khô dịch đục lỗ có đường kính mm Hút 100 μl dịch cao nồng độ khảo sát cho vào giếng Đối chứng DMSO 1% Đem ủ nhiệt độ 370C 24 Tiến hành đo đường kính vịng kháng khuẩn (mm) xung quanh giếng Mỗi nghiệm thức lặp lại lần 2.4 Xác định sơ thành phần hóa học cao chiết Mẫu cao chiết tiến hành thử nghiệm định tính thành phần hóa học theo phương pháp Jayaveera et al (2010) Các thành phần hóa học xác định bao gồm: carbohydrate (thử nghiệm Molisch, Fehling Barfoed), alkaloid (thử nghiệm Mayer, Dragendorff, Hager, Wagner); saponin (thử nghiệm tạo bọt), cardiac glycoside (thử nghiệm Legal; Keller – Killiani); anthraquinone glycoside (thử nghiệm Borntrager); flavonoid (thử nghiệm alkaline, Ferric Chloride); tannin (thử nghiệm Ferric chloride, lead acetate), steroid (thử nghiệm Salkowski, Libermann Burchard), amino acid (thử nghiệm Ninhydrin) 2.5 Trình bày kết quả: Thí nghiệm lặp lại ba lần kết trình bày dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (SD) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết hiệu suất tách chiết cao chiết chùm ngây Bột Moringa oleifera sau ngâm dung môi ethanol 70%, lọc, thu dịch cô dịch lọc 70oC, kết thúc trình thu cao chiết ethanol 70% với hiệu suất 18,89% 716 3.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 717hum ngây Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn MoEE nồng độ 100 mg/ml chủng vi khuẩn thị cho thấy cao chiết thể hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn thị Ở nồng độ 100 mg/ml kháng 11/15 chủng vi khuẩn khảo sát với đường kính vịng ức chế từ 8,20 mm đến 10,80 mm Theo nghiên cứu Aibinu et al (2007), đánh giá khả kháng khuẩn S flexneri E coli số loại cao chiết từ Bryophyllum pinnatum Kalanchoe crenata kết cho thấy rằng, cao methanol Kalanchoe crenata nồng độ 512 mg/ml cho đường kính vịng kháng khuẩn 17 mm 12 mm Trong đó, đường kính vịng kháng khuẩn MoEE nồng độ 100 mg/ml E coli S flexneri 9,5 mm 9,3 mm so sánh đường kính lỗ Mặc dù đường kính vịng kháng khuẩn MoEE thể hoạt tính kháng khuẩn S flexneri thấp so với cao methanol Kalanchoe crenata MoEE sử dụng nồng độ 100 mg/ml cao methanol Kalanchoe crenata sử dụng nồng độ 512 mg/ml Khi so sánh hoạt tính kháng khuẩn V.parahaemolyticus V.harveyi MoEE nồng độ 100 mg/ml với cao ethanol Salichornia brachiata nồng độ 500 mg/ml cho thấy MoEE nồng độ 100 mg/ml cho đường kính vịng kháng khuẩn 8,5 mm 13 mm so với 14 mm 12 mm cao chiết ethanol từ Salichornia brachiata Bảng Đường kính vịng kháng khuẩn MoEE vi khuẩn thị (mm) Vi sinh vật MoEE (100 mg/ml) Ciprofloxacin (500 µg/ml) S dublin 9,8 ± 0,6 12,2 ± 0,8 S enteritidis 8,5 ± 0,0 13,2 ± 0,3 S typhimurium 8,2 ± 0,8 13,2 ± 0,3 S typhii NA 12,2 ± 0,3 S boydii 9,2 ± 0,8 0,00 S sonnei NA 14,2 ± 0,3 S flexneri 9,3 ± 0,8 13,3 ± 0,5 ETEC 10,8 ± 1,0 13,2 ± 0,3 E.coli 9,5 ± 0,5 13,2 ± 0,3 E coli O157:H7 NA 13,2 ± 0,3 E coli 0208 NA 13,0 ± 0,3 V.alginolyticus 8,3 ± 0,3 14,2 ± 0,3 V.cholerae 8,7 ± 0,3 12,3 ± 0,3 V.harveyi 10,0 ± 0,5 13,0 ± 0,5 V.parahaemolyticus 8,5 ± 0,0 12,2 ± 0,3 NA: no activity Từ kết so sánh nhận thấy MoEE nồng độ 100 mg/ml có phổ kháng khuẩn rộng có hoạt tính kháng khuẩn cao Các chủng vi khuẩn thị sử dụng đánh giá kháng khuẩn nhóm vi khuẩn gây tiêu chảy điển hình, S enteritidis gây viêm dày ruột, S typhii S typhimurium gây sốt thương hàn, E Coli gây tiêu chảy, vi khuẩn thuộc nhóm Shigella sp gây 717 bệnh lỵ trực trùng, V cholerae gây bệnh dịch tả Do đó, cao chiết ethanol từ chùm ngây có khả ức chế chủng vi khuẩn nên có tiềm việc điều trị bệnh tiêu chảy 3.3 Kết xác định số MIC cao chiết ethanol Kết xác định số MIC cao chiết MoEE thực phương pháp khuếch tán giếng thạch trình bày bảng Qua bảng nhận thấy giá trị MIC MoEE 11 chủng khảo sát biến động từ 12,5 mg/ml đến 50 mg/ml khảo sát phương pháp khuếch tán giếng thạch Giá trị MIC cao chiết ethanol M oleifera khác tùy theo chủng vi khuẩn khảo sát Đối với nhóm E coli, giá trị MIC MEE biến thiên từ nồng độ 12,5 mg/ml đến 25 mg/ml, giá trị MIC thấp chủng ETEC 12,5 mg/ml Đối với nhóm Salmonella spp Shigella spp., giá trị MIC xác định từ 25 mg/ml đến 50 mg/ml giá trị MIC cao hai chủng S typhimurium Riêng nhóm Vibrio spp., giá trị MIC MoEE biến thiên từ 12,5 mg/ml đến 50 mg/ml Như vậy, kết khảo sát nồng độ ức chế tối thiểu MEE phương pháp khuếch tán giếng thạch 15 chủng vi sinh vật cho thấy có 4/11 chủng vi khuẩn khảo sát bị ức chế MoEE nồng độ 50 mg/ml; 5/11 chủng khảo sát bị ức chế nồng độ 25 mg/ml; 2/11 chủng bị ức chế nồng độ 12,5 mg/ml Điều chứng tỏ rằng, giá trị MIC thấp ức chế vi sinh vật cao ethanol 70% 12,5 mg/ml cao 50 mg/ml đánh giá phương pháp khuếch tán giếng thạch Bảng Giá trị MIC cao chiết ethanol từ chùm ngây Chủng STT Giá trị MIC (mg/ml) E coli 25 ETEC 12,5 S dublin 25 S enteritidis 25 S typhimurium 50 S boydii 25 S flexneri 25 V alginolyticus 50 V cholerae 50 10 V harveyi 12,5 11 V parahaemolyticus 50 3.4 Kết xác định thành phần hóa học loại cao chiết ethanol từ chùm ngây Kết định tính thành phần hóa học MoEE cho thấy dung mơi EtOH 70% có khả tách chiết nhiều hợp chất từ chùm ngây bao gồm hợp chất thông thường hợp chất có hoạt tính sinh học Các hợp chất tìm thấy cao chiết cồn 70% chùm ngây có diện hầu hết nhóm carbohydrate (thử nghiệm Molisch, Fehling Barfoed dương tính) đồng thời có diện amino acid Trong cao MoEE có diện nhiều nhóm hợp 718 chất có hoạt tính sinh học bao gồm loại hợp chất nhóm alkaloid, saponin, cardiac glycoside, flavonoid, tannin, nhóm steroid (Bảng 4) Bảng Thành phần hóa học cao chiết từ chùm ngây Nhóm hợp chất Thử nghiệm Carbohydate Thử nghiệm Molisch Thử nghiệm Fehling + + Thử nghiệm Barfoed + Thử nghiệm Mayer Thử nghiệm Dragendorff Thử nghiệm Hager + Thử nghiệm Wagner + Thử nghiệm xà phòng + Thử nghiệm Legal + Thử nghiệm Keller Killiani + Anthraquinone Glycoside Thử nghiệm Bontrager - Flavonoid Thử nghiệm Alkaline Thử nghiệm Shinoda + + Thử nghiệm Ferric chloride + Thử nghiệm Chì acetate Thử nghiệm Gelatin + + Thử nghiệm Ferric chloride + Thử nghiệm Chì acetate + Steroid Thử nghiệm Salkowski Thử nghiệm Libermann Burchard + + Amino Acid Thử nghiệm Ninhydrin + Alkaloid Saponin Cardiac Glycoside Phenolics Tannin Kết + + (+): Dương tính; (-): Âm tính Hoạt tính kháng khuẩn thực vật nói chung cao chiết chùm ngây nói riêng chúng có thành phần flavonoid, hợp chất phenol, tannin triterpenoid định, Từ kết định tính kết luận cao chiết chùm ngây từ EtOH 70% có hoạt tính kháng khuẩn cao chủng vi khuẩn thị Do đó, chùm ngây loại thảo dược có hoạt tính sinh học cao tạo tiền đề cho nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học chùm ngây 719 KẾT LUẬN Cao chiết ethanol 70% từ Chùm ngây (Moringa oleifera) nồng độ 100 mg/ml cho hoạt tính kháng khuẩn 11/15 chủng vi khuẩn thị Trong cao có diện carbohydrate, alkaloid, saponin, cardiac glycoside, flavonoid, tannin, steroid amino acid TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Aibinu, I.E., Akinsulire, O.R., Adenipekun, T and Odugbemi, T.A.T (2007) In vitro antimicrobial activity of crude extracts from plants Bryophyllum pinnatum and Kalanchoe crenata Afr J Trad Compl Alter Med 4:338-344 [2] Jayaveera, K.N., Yoganandham, R.K., Govindarajula, Y., Kumanan, R (2010) Phytochemical screenings, antibacterial activity and physical chemical constants of ethanolic extract of Euphorbia thymifolia Linn Int J Pharm Pharm Sci 2:81–82 [3] Milosevic, T., Solujic, S., Sukdolak, S (2007) In vitro study of ethanolic extract of Hypericum perforatum L on growth and sporulation of some bacteria and fungi Turk J Biol 31:237–241 [4] Sen, A., Batra, A (2012) Evaluation of antibacterial activity of different solvent extracts of medical plants: Melia azedarach L Int J Curr Pharm Res 4:67–73 720 ... cao chiết chùm ngây từ EtOH 70% có hoạt tính kháng khuẩn cao chủng vi khuẩn thị Do đó, chùm ngây loại thảo dược có hoạt tính sinh học cao tạo tiền đề cho nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học chùm ngây. .. đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 717hum ngây Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn MoEE nồng độ 100 mg/ml chủng vi khuẩn thị cho thấy cao chiết thể hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn thị...trên, nghiên cứu thực để đánh giá số hoạt tính sinh học bao gồm hoạt tính kháng khuẩn để làm sở cho nghiên cứu VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 2.1 Nguồn mẫu thuốc tách chiết cao Lá chùm ngây thu xã