Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn của một số loại cao chiết và bước đầu định tính thành phần hóa học hoa sứ vàng (plumeria rubba f tricilor)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOẠI CAO CHIẾT VÀ BƯỚC ĐẦU ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC HOA SỨ VÀNG (PLUMERIA RUBRA F TRICILOR) Ngành: Công nghệ Sinh học Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS Phạm Minh Nhựt Sinh viên thực MSSV: 1311100485 : Đinh Vũ Nghị Lớp: 13DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thân hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt, giảng viên khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh Những kết có đồ án hồn tồn khơng chép từ đồ án tốt nghiệp người khác hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án tốt nghiệp hoàn toàn trung thực Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm đồ án TP HCM, ngày 27 tháng 07 năm 2017 Sinh viên thực ĐINH VŨ NGHỊ Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để có kiến thức báo cáo tốt nghiệp ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn quý Thầy Cô Bộ môn công nghệ sinh học trường HUTECH giảng dạy kiến thức bổ ích cho em Em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến thầy ThS Phạm Minh Nhựt tận tình hướng dẫn, bảo em trình thực đồ án tốt nghiệp Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy phụ trách phòng thí nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp chúng em hồn thành tốt q trình thực hành Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình chăm sóc, dạy dỗ làm chỗ dựa tinh thần động viên, hỗ trợ kinh tế cho em suốt năm qua trình thực đồ án Em xin cảm ơn đến bạn thực đề tài phòng thí nghiệm quan tâm, hỗ trợ em làm đồ án tốt nghiệp Và em xin cảm ơn Thầy Cô Hội đồng phản biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án Lời cuối em xin gửi lời chúc sức khỏe đến quý Thầy Cơ Tp Hồ Chí Minh, 27 tháng 07 năm 2016 Sinh viên thực ĐINH VŨ NGHỊ Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương Hoa Sứ vàng 1.1.1 Nguồn gốc tên gọi 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Phân bố 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.1.6 Công dụng 1.1.7 Thành phần hóa học dược chất 1.2 Đại cương số hợp chất kháng khuẩn từ thực vật 1.2.1 Khái niệm phân loại 1.2.2 Cơ chế kháng khuẩn hợp chất từ thực vật 1.2.3 Một số hợp chất kháng khuẩn Hoa Sứ vàng 1.2.3.1 Alkaloid 1.2.3.2 Flavonoid 10 1.2.3.3 Tinh dầu 11 1.2.3.4 Saponin 12 1.2.3.5 Tannin 13 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.4 Tình hình nghiên cứu Hoa Sứ giới Việt Nam 14 1.3 Giới thiệu số nhóm vi sinh vật gây bệnh 15 1.3.1 Nhóm vi sinh vật gây bệnh tiêu chảy 15 1.3.1.1 Nhóm vi khuẩn Escherichia coli 15 1.3.1.2 Nhóm vi khuẩn thuộc dòng Salmonella 16 1.3.1.3 Nhóm vi khuẩn Vibrio spp 17 1.4.1.4 Nhóm vi khuẩn Shigella spp 18 1.3.2 Nhóm vi sinh vật gây bệnh hội da 20 1.3.2.1 Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 20 1.3.2.2 Nhóm vi khuẩn Enterococcus faecalis 21 1.3.2.3 Nhóm vi khuẩn thuộc dòng Staphylococcus 22 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 2.1.1 Địa điểm 25 2.1.2 Thời gian 25 2.2 Vật liệu 25 2.2.1 Vật liệu 25 2.2.2 Chủng vi sinh vật 25 2.2.3 Mơi trường ni cấy hóa chất 25 2.2.4 Thiết bị dụng cụ 26 2.2.4.1 Thiết bị 26 2.2.5.2 Dụng cụ 26 2.3 Các phương pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Phương pháp tách chiết hợp chất từ thực vật 27 2.3.2 Phương pháp tăng sinh 27 2.3.3 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 27 2.3.3.1 Phương pháp cấy truyền vi sinh vật 27 ii Đồ án tốt nghiệp 2.3.3.2 Phương pháp bảo quản lạnh sâu 28 2.3.4 Phương pháp xác định mật độ tế bào 28 2.3.5 Phương pháp pha loãng mẫu 28 2.3.6 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 29 2.3.7 Phương pháp xác định thành phần hóa học 29 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 32 2.4 Bố trí thí nghiệm 32 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Hoa Sứ vàng 36 2.4.3 Thí nghiệm 3: Định tính số thành phần hóa học loại cao chiết từ Hoa Sứ vàng 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hàm lượng thu hồi cao từ Hoa Sứ vàng 40 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Hoa Sứ vàng với loại dung môi tách chiết khác chủng vi khuẩn thị 41 3.2.1 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Escherichia coli 41 3.2.2 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Listeria spp 44 3.3.3 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Salmonella spp 46 3.3.4 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Shigella spp 48 3.3.5 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Vibrio spp 50 3.3.6 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn lại 53 3.3.7 Tổng hợp kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết 20 vi khuẩn gây bệnh gây bệnh 55 iii Đồ án tốt nghiệp 3.3 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiết Hoa Sứ vàng từ ethanol 70% 59 Kết luận kiến nghị 62 Kết luận 62 Kiến nghị 62 Tài liệu tham khảo 63 Phụ lục iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TSB: Trypton Soya Broth TSA: Trypticase Soya Agar DMSO: Dimethyl Sulfoxide NA: Non activity DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết đường kính vòng ức chế (mm) loại cao chiết khác từ Hoa Sứ vàng 20 chủng vi sinh vật thị 55 Bảng 3.2 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiêt Hoa Sứ vàng từ ethanol 70% 59 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hoa Sứ vàng Hình 1.2 Cây Hoa Sứ vàng Hình 1.3 Cơng thức hóa học fulvoplumierin plumierid Hình 1.4 Hình thái E.coli kính hiển vi điện tử 16 Hình 1.5 Hình thái Salmonella kính hiển vi điện tử 17 Hình 1.6 Hình thái Vibrio kính hiển vi điện tử 18 Hình 1.7 Hình thái Shigella kính hiển vi điện tử 19 Hình 1.8 Hình thái Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi điện tử 20 Hình 1.9 Hình thái Enterococcus faecalis kính hiển vi điện tử 22 Hình 1.10 Hình thái Staphylococcus kính hiển vi điện tử 23 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 33 Hình 2.2 Quy trình tách chiết thu cao Hoa Sứ vàng từ loại dung môi khác 34 Hình 2.3 Quy trình khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết Hoa Sứ vàng với chủng vi khuẩn thị 36 Hình 2.4 Quy trình định tính thành phần hóa học cao chiết Hoa Sứ vàng 38 Hình 3.1 Hàm lượng thu hồi cao chiết từ Hoa Sứ vàng với loại dung môi 40 Hình 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn Escherichia coli 42 Hình 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn Listeria spp 44 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn Salmonella spp 46 Hình 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn Shigella spp 49 Hình 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn Vibrio spp 51 Hình 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết đối chứng nhóm vi khuẩn lại 53 vii Đồ án tốt nghiệp Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 532.6666667 133.1666667 Error 10 2.1666667 0.2166667 Corrected Total 14 534.8333333 614.62 F Model 411.2666667 102.8166667 Error 10 3.1666667 0.3166667 Corrected Total 14 414.4333333 Bảng The ANOVA Procedure Tukey's Studentized Range (HSD) Test for VKK 18 324.68 F Model 628.9000000 Error 10 0.3333333 Corrected Total 14 629.2333333 157.2250000 4716.75 F Model 430.0666667 Error 10 0.6666667 Corrected Total 14 430.7333333 107.5166667 1612.75 F Model 288.0666667 72.0166667 Error 10 6.1666667 0.6166667 Corrected Total 14 294.2333333 116.78 F Model 420.0666667 105.0166667 Error 10 2.3333333 0.2333333 Corrected Total 14 422.4000000 450.07