Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của một số loại cao chiết nước từ thực vật tại vườn quốc gia bidoup núi bà, tı̉nh lâm đồng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOẠI CAO CHIẾT NƯỚC TỪ THỰC VẬT TẠI VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP NÚI BÀ, TINH LÂM ĐỒNG Ngành: CÔNG NGHÊ SINH HOC Chuyên ngành: CÔNG NGHÊ SINH HOC Giảng viên hướng dẫn : Th.S Pham Minh Nhưt Sinh viên thực MSSV: 1211100244 : Trân Thi Tu Vy Lớp: 12DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan nội dung viết đồ án thực hướng dẫn khoa học ThS Phạm Minh Nhựt khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa công bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngồi ra, đồ án sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên Trần Thị Tú Vy năm 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, với lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời tri ân đến thầy Phạm Minh Nhựt tận tình dạy em suốt trình thực đồ án Xin cảm ơn thầy buổi học lớp, buổi nói chuyện, thảo luận, nhờ em củng cố thêm đam mê định hướng nghiên cứu khoa học Ngồi ra, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Mơi trường tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho em suốt quãng thời gian học tập Trường Đại học Công Nghệ TP.HCM Những kiến thức kinh nghiệm không giúp em thực đồ án tốt nghiệp mà tảng kiến thức cho cơng việc sau Em xin cảm ơn thật nhiều giúp đỡ hỗ trợ từ bạn thực đề tài phòng thí nghiệm – người ln sát cánh, động viên em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn thầy cô Hội đồng phản biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án Em xin gửi lời chúc sức khỏe đến thầy cô Do kiến thức kinh nghiệm hạn chế nên đồ án tốt nghiệp em có nhiều sơ sót, mong thầy bảo để em hoàn thiện đồ án thật tốt củng cố kiến thức cho công việc sau Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên Trần Thị Tú Vy năm 2016 Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Đăt vân đê Tınh hınh nghiên cưu Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Kêt câu cua Đô an tôt nghiêp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vai trò thuốc dân gian đời sống 1.1.1 Vai tro cua thuôc nam đơi sông 1.1.2 Lơi ıch cua viêc sư dung thuôc 1.1.3 Tınh hınh sư dung thuôc nam 1.2 1.2.1 Thành phần hóa học thực vật Carbohydrate 1.2.1.1 Khái niệm 1.2.1.2 Tính chất 1.2.1.3 Vai trò 1.2.2 Amino acid 1.2.2.1 Khái niệm 1.2.2.2 Tính chất 1.2.2.3 Vai trò 1.2.3 Glycosides 1.2.3.1 Khái niệm 1.2.3.2 Tính chất 10 1.2.3.3 Tac dung 11 1.2.4 Alkaloid 11 1.2.4.1 Khái niệm 11 1.2.4.2 Tính chất 11 1.2.4.3 Vai trò 12 1.2.5 Steroids 12 1.2.5.1 Khái niệm 12 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.5.2 Tính chất 12 1.2.5.3 Vai trò 12 1.2.6 Tannin 14 1.2.6.1 Khái niệm 14 1.2.6.2 Tınh chât 14 1.2.6.3 Vai trò 15 1.2.7 Isoprenoid (Terpene) 15 1.2.7.1 Khái niệm 15 1.2.7.2 Tính chất 16 1.2.7.3 Vai trò 16 1.3 Tổng quan kháng khuẩn thực vật 16 1.3.1 Khái niệm 16 1.3.2 Cơ chế kháng khuẩn 16 1.3.3 Một số hợp chất kháng khuẩn thực vật 18 1.3.3.1 Alkaloids 18 1.3.3.2 Terpenoids tinh dầu 20 1.3.3.3 Phenol đơn acid phenolic 21 1.3.3.4 Saponin 24 1.3.3.5 Lectin polypeptide 25 1.4 1.4.1 Một số vi sinh vật gây bệnh điển hình 25 Nhóm vi sinh vật gây bệnh tiêu chảy 25 1.4.1.1 Escherichia coli 25 1.4.1.2 Shigella 26 1.4.1.3 Salmonella 27 1.4.1.4 Vibrio 28 1.4.1.5 Listeria 29 1.4.2 Nhóm vi sinh vật gây bệnh hội da 30 1.4.2.1 Pseudomonas aeruginosa 30 1.4.2.2 Staphylococcus aureus 32 1.4.2.3 Enterococcus feacalis 33 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 ii Đồ án tốt nghiệp 2.1 Địa điểm thời gian 34 2.1.1 Địa diểm 34 2.1.2 Thời gian 34 2.2 Vật liệu 34 2.2.1 Nguồn mẫu phân tích 34 2.2.2 Vi sinh vật thị 35 2.2.3 Hóa chất, mơi trường 36 2.2.4 Dụng cụ, thiết bị 36 2.3 Phương pháp nghiên cứu 37 2.3.1 Phương pháp thu xử lý nguồn mẫu 37 2.3.2 Phương pháp tăng sinh VSV chı thi 37 2.3.3 Phương pháp định lượng tế bào vi sinh vật phương pháp đo OD 38 2.3.4 Phương pháp bảo quản giữ giống 39 2.3.5 Phương pháp tách chiết cao 39 2.3.6 Chuân bi dung dich cao thuôc khang sinh 39 2.3.7 Phương pháp khuếch tán giếng thạch (agar well diffusion method) 39 2.3.8 Phương pháp xác định thành phần hóa học 41 2.3.8.1 Carbohydrate 41 2.3.8.2 Alkaloid 41 2.3.8.3 Saponin (thử nghiệm Foam) 42 2.3.8.4 Cardiac glycosides 42 2.3.8.5 Anthaquinone glycosides (thử nghiệm Bontrager) 43 2.3.8.6 Flavonoid 43 2.3.8.7 Phenolic 43 2.3.8.8 Tannin 45 2.3.8.9 Steroid 45 2.3.8.10 2.3.9 2.4 Amino acid 45 Phương pháp xử lý số liệu 46 Sơ đô bô trı thı nghiêm tông quat 47 2.4.1 Thí nghiệm 1: Đanh gia hiêu qua chiêt cao chua dung môi nươc đôi vơi cac mâu 48 2.4.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước 50 Đồ án tốt nghiệp 2.4.2.1 Thuyết minh quy trình 51 2.4.2.2 Đọc kết 51 2.4.3 Thí nghiệm 3: Xác định thành phần hóa học cao chiết 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 54 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi đến hiệu suất tách chiết cao54 3.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cac mâu cao chiêt nươc 55 3.2.1 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân E coli 55 3.2.2 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân Listeria 37 3.2.3 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân Salmonella 39 3.2.4 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân Shigella 40 3.2.5 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân Vibrio 42 3.2.6 Kêt qua đanh gia hoat tınh khang khuân đôi vơi nhom vi khuân gây bệnh hôi da 44 3.2.7 Tông hơp kêt qua cac kêt qua khang khuân 45 3.3 Kết thư nghiêm đinh tınh xác định thành phần hóa học cua cac mâu cao chiêt nươc 48 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Đề nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Aco: thuôc Acorus sp Cal: thuôc Calamus sp CIP 8: khang sinh Cirproflaxacin 8mg/ml CIP 500: khang sinh Cirproflaxacin 500mg/ml Ele: thuôc Elephatopus sp Euo: thuôc Euodia sp Eup: Eupatorium sp Lan: thuôc Lantana sp Med: thuôc Medinilla sp Pod: thuôc Podocarpus sp Pol: thuôc Polygala sp Ste: thuôc Streptocaulon sp Xid: thuôc Xidi klung VSV: vi sinh vât Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Bang 1.1 Môt sô Glycoside phô biên Bang 3.1 Kết kháng khuẩn cao chiết khác tổng số 20 chủng vi sinh vật khảo sát 47 Bang 3.2 Bang kêt qua phân hoa hoc cua cac mẫu cao chiêt nươc 49 Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH HÌNH VA ĐƠ THI Hình 1.1 Một số thuốc nam phổ biến Hình 1.2 Cấu trúc phân tử loại Carbonhydrate Hınh 1.3 Alanine – Môt amino acid Hınh 1.4 Cardenolic va Bufadiennolid 11 Hınh 1.5 Ephedrin va Hyoscyamin 11 Hınh 1.6Testosteron 12 Hınh 1.7 Môt sô tannin 14 Hınh 1.8 Limonene va Ocimene 15 Hình 1.9 Cac chế kháng sinh 17 Hình 1.10 Solamargine 19 Hình 1.11 Berberine 20 Hình 1.12 Một số Terpenenes Terpenoid 21 Hình 1.13 Một số Quinones thơng thường 22 Hình 1.14 Gallotannin va Gallic acid 23 Hình 1.15 Một số Flavonoid 24 Hınh 1.16 Saponin 24 Hınh 1.17 Cac câu truc cua peptide 25 Hình 1.18 Hình ảnh Escherichia coli O157: H7 kính hiển vi 26 Hình 1.19 Hınh anh cua Shigella sp 27 Hình 1.20 Hình ảnh Salmonella typhii va Salmonella typhimurium 28 Hình 1.21 Hình ảnh vi khuân Vibrio cholerae va Vibrio harveyi 29 Hình 1.22 Hình anh cua Listeria monocytogenes 30 Hình 1.23 Hình ảnh Pseudomonas aeruginosa 31 Hình 1.24 Cấu trúc hiển vi Staphylococcus aureus 32 Hınh 2.1 Môt sô dung cu va thiêt bi thı nghiêm 36 Hình 2.2 Quy trình xử lý mẫu 37 Hınh 2.3 Hınh anh vê kêt qua khang khuân cua môt mâu vi khuân chı thi (bên trai la không co kêt qua khang khuân va va bên phai la co kêt qua khang khn) 41 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 47 vii Đồ án tốt nghiệp sp Eu 0X pat X Pol yg Ca 0X la X Eu odi X La nta Ac 0X oru 3.8 X Po 9.3 33 XX Xi di Me 33 9.3 X din 12 33 X X Ele ph 163 X Ci pro B.14 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Vibrio alginolyticus S o Bu e tW i To t tal Bang one way Anova SDf M F P u e - m 1a R6 V0 1316 70 823 Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CCo MHo unt e mo Str a0ge X ept Ca 0X la X Eu odi X La nta Ac 0X oru X Xi di X Ele ph X Po Eu 0X pat X Pol yg Me 16 10 X din Ci 16 X pro B.15 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Vibrio cholerae Bang one way Anova 68 Đồ án tốt nghiệp S SDf M F P o u e - Bu 6m7 8a R5 V0 e tW 9 16 i 23 To t tal Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD Co MHo unt e mo Ele a 0gen X ph X Xi di X Pol yg Po X X Ca la X Eu odi La X nta X Ac oru X Eu pat Str X ept Me X din 130 X Ci pro 69 Đồ án tốt nghiệp B.16 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Vibrio harveyi Bang one way Anova S S Df M F P ou e - u m Be 1a R1 V0 tw 016 W itT 523 o Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD Co MHo unt e mo Ele a 0gen X ph Xi X di Str X ept X Ca la X Eu odi La X nta X Ac oru X Pol yg Eu X pat 100 XX Me din 15 X Po Ci 81 X X pro B.17 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Vibrio parahaemolyticus Bang one way Anova S SDf o u Bu 5m7 e tW 8216 i To t 5523 tal M e 8a F R5 P V0 70 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CCo MHo unt e mo Str a0ge X ept Xi 0X di X Ele ph X Po Ca 0X la X Eu odi X La nta Ac 0X oru Eu 0X pat X Pol yg Me 16 X din Ci 83 11 X pro B.18 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Pseudomonas (K) Bang one way Anova SSu om Beuof tw W itT o D f M e 8a 3.0 F R3 P V0 Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD Co MHo unt e mo ge Str a 0X ept X Xi di Ele 0X ph X Po X Ca la Eu 0X odi La 0X nta X Ac oru Eu 0X pat Pol X yg 16 X Me din Ci 66 12 X pro 71 Đồ án tốt nghiệp B.19 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu Staphylococcus aureus Bang one way Anova S S D MF P u uf e - ce m B 8a R2 V0 etW iT 86 o 43 Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD Co MHo unt e mo Str a0ge X ept Xi 0X di Pol 0X yg X Ele ph Ca 0X la Eu 0X odi X La nta X Ac oru Eu X pat 16 X Po 66 X Me din Ci 83 12 X X pro B.20 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mâu E.feacalis Bang one way Anova S o u B e Wit thi T ot S u 6m 15 D M F P f e - a R2 V0 98 32 34 Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD Co Me Ho unt an mo Str ge X ept 0 X Xi di 0 X El ep 72 Đồ án tốt nghiệp Po X 0 X Ca la Eu 0 X od La 0 X nta 0 X Ac or 0 X Eu pat M X edi 11 X Po ly 12 X Ci pr 73 Đồ án tốt nghiệp PHU LUC C: KÊT QUA HIÊU SUÂT THU HÔI CAO Tên Podocarpus sp Eupatorium sp 2 Lần Lần Lần 12,45 11,92 11,6 46 Elephantopus sp 14,73 La 1 0 nt Ac 2 or Ca 2 1 la M 2 ed Po ly , Xi 2 di Streptocaulon 11 26 21 2 21 sp 14,56 Eu od So Su Df urc 10 m 10 Be tw Wi 63 47 22 thi 11 61 32 To tal 11 30 ANOV Me F- A Pan 49 Ra 0.0 Val 10 6.3 14 00 2.1 64 Multiple Range Tests for GIA TRI by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CA Co Me Ho Y unt an mo X La 11 gen nta Po 11 XX 15 99 XX Ele ph Str 15 16 X ept Me 20 X din 20 18 Pol X yg 52 74 Trung binh 11,99 Đồ án tốt nghiệp X Ca 21 la 21 X Xi di 25 66 Eu pat Ac 46 26 oru 30 Eu odi 00 75 Đồ án tốt nghiệp PHU LUC D: KÊT QUA HOAT TINH KHANG KHUÂN CUA CAC CAO CHIÊT NƯƠC Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n nhom E coli D.1 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom E coli 76 Đồ án tốt nghiệp Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n nhom Listeria D.2 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom E coli 77 Đồ án tốt nghiệp Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n nhom Salmonella D.3 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom Salmonella 78 Đồ án tốt nghiệp Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n nhom Vibrio D.4 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom Vibrio 79 Đồ án tốt nghiệp Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n nhom Shigella D.5 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom Shigella 80 Đồ án tốt nghiệp Bang Kế t qua hoaṭ tınh khang vi khuẩ n gây bênh ̣trên da hôi D.6 Kêt qua hoat tınh khang vi khuân nhom Shigella 81 Đồ án tốt nghiệp 82 ... số loại cao chiết nước từ thực vật vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, tınh Lâm Đồng Tınh hınh nghiên cưu Tư thơi xa xưa, cao chiêt nươc đa đươc dân sư dung rông rai cac bai thuôc tri bênh dân gian Tuy... Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn số thuốc dân gian với dung môi nước Đồ án tốt nghiệp - Xác định thành phần hóa học có số loại cao chiết nước từ thuốc dân gian Nội dung nghiên cứu - Đánh giá ảnh... hưởng dung môi nước đến hiệu suất thu hồi từ thuốc dân gian - Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước thuốc dân gian - Xác định thành phần hóa học cao chiết nước số thuốc dân gian Phạm vi