Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của một số loại cao chiết nước từ thực vật tại vườn quốc gia bidoup núi bà, tỉnh lâm đồng​

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MỘT SỐ LOẠI CAO CHIẾT NƯỚC TỪ THỰC VẬT TẠI VƯỜN QUỐC GIA BIDOUP NÚI BÀ, TỈNH LÂM ĐỒNG Ngành: CÔNG NGHÊ S ̣ INH HOC ̣ Chuyên ngành: CÔNG NGHÊ ̣SINH HOC ̣ Giảng viên hướng dẫn : Th.S Phaṃ Minh Nhưt Sinh viên thực MSSV: 1211100244 : Trần ThịTúVy Lớp: 12DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan nội dung viết đồ án thực hướng dẫn khoa học ThS Phạm Minh Nhựt khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa công bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngồi ra, đồ án cịn sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn chú thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên Trần Thị Tú Vy năm 2016 Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, với lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời tri ân đến thầy Phạm Minh Nhựt tận tình dạy em suốt trình thực đồ án Xin cảm ơn thầy buổi học lớp, buổi nói chuyện, thảo luận, nhờ em củng cố thêm đam mê định hướng nghiên cứu khoa học Ngồi ra, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho em suốt quãng thời gian học tập Trường Đại học Công Nghệ TP.HCM Những kiến thức kinh nghiệm không giúp em thực đồ án tốt nghiệp mà cịn tảng kiến thức cho cơng việc sau Em xin cảm ơn thật nhiều giúp đỡ hỗ trợ từ bạn thực đề tài phịng thí nghiệm – người ln sát cánh, động viên em hồn thành đồ án tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn thầy cô Hội đồng phản biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án Em xin gửi lời chúc sức khỏe đến thầy cô Do kiến thức kinh nghiệm hạn chế nên đồ án tốt nghiệp em có nhiều sơ sót, mong thầy bảo để em hồn thiện đồ án thật tốt củng cố kiến thức cho cơng việc sau Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên Trần Thị Tú Vy Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đăṭvấn đê Tınh hınh nghiên cưu ̀̀ Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Kết cấu cua Đồan tốt nghiêp ̣ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vai trị th́c dân gian đời sớng 1.1.1 Va 1.1.2 Lơ 1.1.3 Tı 1.2 Thành phần hóa học thực vật 1.2.1 Ca 1.2.1.1 1.2.1.2 1.2.1.3 1.2.2 Am 1.2.2.1 1.2.2.2 1.2.2.3 1.2.3 Gl 1.2.3.1 1.2.3.2 1.2.3.3 1.2.4 Alkaloid 1.2.4.1 1.2.4.2 1.2.4.3 1.2.5 Steroids 1.2.5.1 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.5.2 1.2.5.3 1.2.6 Tannin 1.2.6.1 1.2.6.2 1.2.6.3 1.2.7 Isoprenoid (Terp 1.2.7.1 1.2.7.2 1.2.7.3 1.3 Tổng quan vê kháng khuẩn thực vật 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Cơ chế kháng kh 1.3.3 Một số hợp chất 1.3.3.1 1.3.3.2 Terpenoids tinh dầu 1.3.3.3 Phenol đơn acid phenolic 1.3.3.4 1.3.3.5 1.4 Một số vi sinh vật gây bệnh điển hình 1.4.1 Nhóm vi sinh vậ 1.4.1.1 1.4.1.2 1.4.1.3 1.4.1.4 1.4.1.5 1.4.2 Nhóm vi sinh vậ 1.4.2.1 1.4.2.2 1.4.2.3 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ii Đồ án tốt nghiệp 2.1 Địa điểm thời gian 2.1.1 Địa diểm 2.1.2 Thời gian 2.2 Vật liệu 2.2.1 Nguồn mẫu phân tích 2.2.2 Vi sinh vật thị 2.2.3 Hóa chất, mơi trường 2.2.4 Dụng cụ, thiết bị 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 2.3.2 Phương pháp thu xử lý nguồn mẫu Phương pháp tăng sinh VSV chı thi 2.3.3 Phương pháp định lượng tế bào vi sinh vật ph 2.3.4 Phương pháp bảo quản giữ giống 2.3.5 2.3.6 Phương pháp tách chiết cao Chuẩn bi dungc̣ dicḥ cao thuốc khang sinh 2.3.7 Phương pháp khuếch tán giếng thạch (agar we 2.3.8 Phương pháp xác định thành phần hóa học ̉̉ ̉́ 2.3.8.1 Carbohydrate 2.3.8.2 Alkaloid 2.3.8.3 Saponin (thử nghiệm Foam) 2.3.8.4 Cardiac glycosides 2.3.8.5 Anthaquinone glycosides (thử nghiệm Bontrager) 2.3.8.6 Flavonoid 2.3.8.7 Phenolic 2.3.8.8 Tannin 2.3.8.9 Steroid 2.3.8.10 Amino acid 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 2.4 Sơ đồbốtrı thı nghiêṃ tổng quat ̀́ ́ 2.4.1 Thí nghiệm 1: Đanh gia hiêụ qua chiế ̉́ cac mẫu ̉́ 2.4.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá hoạt tính iii Đồ án tốt nghiệp 2.4.2.1 Thuyết minh quy trình 51 2.4.2.2 Đọc kết 51 2.4.3 Thí nghiệm 3: Xác định thành phần hóa học cao chiết 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 54 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi đến hiệu suất tách chiết cao 54 3.2 3.2.1 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn các mẫu cao chiết nước 55 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn E coli 55 ̉́ 3.2.2 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn Listeria 37 3.2.3 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn 3.2.4 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn 3.2.5 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn Vibrio 42 3.2.6 Kết quảđánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn gây 3.2.7 Tổng hơpc̣ kết quảcác kết quảkháng khuẩn 45 ̉́ ̉́ Salmonella 39 ̉́ Shigella 40 ̉́ ̉́ bệnh hôịtrên da 44 3.3 Kết thửnghiêṃ đinḥ tı́nh xác định thành phần hóa học các mẫu cao chiết nươć 48 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Đê nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 iv Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Aco: thuốcAcorus sp Cal: thuốc Calamus sp CIP 8: kháng sinh Cirproflaxacin 8mg/ml CIP 500: kháng sinh Cirproflaxacin 500mg/ml Ele: thuốc Elephatopus sp Euo: thuốc Euodia sp Eup: Eupatorium sp Lan: thuốc Lantana sp Med: thuốc Medinilla sp Pod: thuốc Podocarpus sp Pol: thuốcPolygala sp Ste: thuốc Streptocaulon sp Xid: thuốc Xidi klung VSV: vi sinh vât v Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 1.1 MôtsốGlycoside phổbiến Bảng 3.1 Kết kháng khuẩn cao chiết khác tổng số 20 chủng vi sinh vật khảo sát 47 Bảng 3.2 Bảng kết quảthaǹ h phần hoá hocc̣ cać mẫu cao chiết nươć 49 vi Đồ án tốt nghiệp ̀ DANH SÁCH HÌNH VÀĐƠTHI ̣ Hình 1.1 Một số thuốc nam phổ biến Hình 1.2 Cấu trúc phân tử loại Carbonhydrate Môt Hınh 1.3 Alanine – amino acid ̉̀ Hınh 1.4 Cardenolic vàBufadiennolid 11 ̉̀ Hınh 1.5 Ephedrin vàHyoscyamin 11 ̉̀ Hınh 1.6Testosteron 12 ̉̀ Hınh 1.7 Mô tc̣ số tannin 14 ̉̀ Hınh 1.8 Limonene vàOcimene 15 ̉̀ Hình 1.9 Cać chế kháng sinh 17 Hình 1.10 Solamargine 19 Hình 1.11 Berberine 20 Hình 1.12 Một số Terpenenes Terpenoid 21 Hình 1.13 Một số Quinones thông thường 22 Hình 1.14 Gallotannin vaG ̀ allic acid 23 Hình 1.15 Một số Flavonoid 24 Hınh 1.16 Saponin 24 ̉̀ Hınh 1.17 Các cấu trúc peptide 25 ̉̀ Hình 1.18 Hình ảnh Escherichia coli O157: H7 kính hiển vi 26 Hình 1.19 Hınh ảnh Shigella sp 27 ̉̀ Hình 1.20 Hình ảnh Salmonella typhii vaS ̀ almonella typhimurium 28 Hình 1.21 Hình ảnh vi khuẩn Vibrio cholerae vaV ̀ ibrio harveyi 29 Hình 1.22 Hình ảnh Listeria monocytogenes 30 Hình 1.23 Hình ảnh Pseudomonas aeruginosa 31 Hình 1.24 Cấu trúc hiển vi Staphylococcus aureus 32 Hınh 2.1 Môtsốdungc̣ cu c̣vàthiết bi thıc̣ nghiêṃ 36 ̉̀ ́ Hình 2.2 Quy trình xử lý mẫu 37 Hınh 2.3 Hınh ảnh vềkết quảkháng khuẩn môtmẫu vi khuẩn chı̉thi c̣(bên trái ̉̀ ̀ không cókết quảkháng khuẩn vàvàbên phải làcókết quảkháng khuẩn) 41 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 47 vii Đồ án tốt nghiệp sp Eupatorium sp Polygala sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Podocarpus sp Xidi klung Medinilla sp Elephantopus sp Ciprofloxacin B.14 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn MẫuVibrio alginolyticus Source Ban ̉ g one way Anova Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square P-Value Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Test Streptocaulon sp sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Xidi klung Elephantopus sp Podocarpus sp Eupatorium sp Polygala sp Medinilla sp Ciprofloxacin B.15 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mẫu Vibrio cholerae Bảng one way Anova 68 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Elephantopus sp Xidi klung Polygala sp Podocarpus sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Eupatorium sp Streptocaulon sp Medinilla sp Ciprofloxacin 69 Đồ án tốt nghiệp B.16 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mẫu Vibrio harveyi Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CAY Count Mean Homogeneous Groups Elephantopus sp Xidi klung Streptocaulon sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Polygala sp Eupatorium sp 10.0 XX Medinilla sp 10.3333 XX Podocarpus sp 15.8333 XX Ciprofloxacin sp 18.0 X B.17 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mẫu Vibrio parahaemolyticus Source Between groups Within groups Total (Corr.) 70 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CAY Streptocaulon sp Xidi klung Elephantopus sp Podocarpus sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Eupatorium sp Polygala sp Medinilla sp Ciprofloxacin B.18 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn MẫuPseudomonas (K) Source Ban ̉ g one way Anova Sum of Squares Df Mean F-Ratio P-Value Square Between Within g Total (C Đồ án tốt nghiệp B.19 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mẫu Staphylococcus aureus Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for VALUE by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CAY Streptocaulon sp Xidi klung Polygala sp Elephantopus sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Eupatorium sp Podocarpus sp Medinilla sp Ciprofloxacin B.20 Xử lý thống kê mức độ kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Mẫu E.feacalis Đồ án tốt nghiệp Podocarpus sp Calamus sp Euodia sp Lantana sp Acorus sp Eupatorium sp Medinilla sp Polygala sp Ciprofloxacin 73 Đồ án tốt nghiệp Tên Podocarpus sp Eupatorium sp Elephantopus sp Lantana sp Acorus sp Calamus sp Medinilla sp Polygala sp Xidi klung Streptocaulon sp Euodia sp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests for GIA TRI by CAY Method: 95.0 percent Tukey HSD CAY Count Mean Homogeneous Groups Đồ án tốt nghiệp Calamus sp Xidi klung Eupatorium sp Acorus sp Euodia sp 75 Đồ án tốt nghiệp PHỤLUC ̣ D: KÊT QUẢHOAṬ TINH́ KHANG ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ ́ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn nhom E coli D.1 Kết qua hoaṭtınh khang vi khuẩn nhom E coli ̀̉ 76 Đồ án tốt nghiệp ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ ́ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn nhom Listeria D.2 Kết quảhoaṭtınh kháng vi khuẩn nhóm E coli ̀́ 77 Đồ án tốt nghiệp ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ ́ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn nhom Salmonella D.3 Kết quảhoaṭtınh kháng vi khuẩn nhóm Salmonella ̀́ 78 Đồ án tốt nghiệp D.4 Kết quảhoaṭtınh kháng vi khuẩn nhóm Vibrio ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ ́ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn nhom Vibrio ̀́ 79 Đồ án tốt nghiệp ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ ́ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn nhom Shigella D.5 Kết quảhoaṭtınh kháng vi khuẩn nhóm Shigella ̀́ 80 ̀̉ ̉ c̣ ́ ́ c̣ Bang Kết quahoat tınh khang vi khuẩn gây bênh hôi da Đồ án tốt nghiệp D.6 Kết quảhoaṭtınh kháng vi khuẩn nhóm Shigella ̀́ 81 Đồ án tốt nghiệp 82 ... học có số loại cao chiết nước từ thuốc dân gian Nội dung nghiên cứu - Đánh giá ảnh hưởng dung môi nước đến hiệu suất thu hồi từ thuốc dân gian - Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước thuốc... khuẩn 3.2.4 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn 3.2.5 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn Vibrio 42 3.2.6 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn gây 3.2.7... 55 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn E coli 55 ̉́ 3.2.2 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn Listeria 37 3.2.3 Kết qu? ?đánh giáhoattınh kháng khuẩn nhóm vi khuẩn 3.2.4