THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH KHÁNG VI KHUẨN E. coli

THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH KHÁNG VI KHUẨN E. coli

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH

KHÁNG VI KHUẨN E coli

Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2001-2005

Sinh viên thực hiện: NGUYỄN VÂN ANH

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005

ii

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH

KHÁNG VI KHUẨN E coli

Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:

TS NGUYỄN NGỌC HẢI NGUYỄN VÂN ANH PGS TSKH NGUYỄN LÊ TRANG

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005

iii

LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn:

- Ban Giám Hiệu trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh đã tạo mọi điều kiện cho tôi trong suốt thời gian học tập

- Các Thầy Cô trong Bộ môn Công nghệ sinh học cùng các Thầy Cô đã luôn tận tình hướng dẫn, giảng dạy, giúp đỡ và động viên tôi

- TS Nguyễn Ngọc Hải và PGS TSKH Nguyễn Lê Trang đã trực tiếp hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp - Các chị Nguyễn Thị Nguyệt Thu, Đỗ Thị Châm, Dương Ngọc Diễm, Võ Thị

Mỹ Duyên, Lạc Thị Thêm, Doãn Thị Sim thuộc phòng Miễn dịch viện Pasteur Tp HCM đã tận tình giúp đỡ, chỉ bảo tôi trong suốt thời gian thực hiện khoá luận

- Thầy Lê Anh Phụng, cô Nguyễn Thị Kim Loan phụ trách phòng thí nghiệm Vi Sinh và các thầy cô thuộc Bệnh xá Thú y đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua

- Toàn thể lớp CNSH27 đã hỗ trợ, giúp đỡ và động viên tôi trong suốt thời gian làm đề tài

Con thành kính ghi ơn ba mẹ cùng những người thân trong gia đình luôn tạo điều kiện và động viên con trong suốt quá trình học tập tại trường

Chân thành cảm ơn

Tháng 08 năm 2005 Nguyễn Vân Anh

iv

TÓM TẮT

NGUYỄN VÂN ANH, Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Tháng 8/2005 “THỬ

NGHIỆM SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH KHÁNG VI KHUẨN E coli”

Hội đồng hướng dẫn:

1 TS Nguyễn Ngọc Hải

2 PGS TSKH Nguyễn Lê Trang

Thời gian nghiên cứu: từ tháng 2/2005 đến tháng 8/2005 Địa điểm nghiên cứu:

Staphylococcus aureus và hấp phụ với kháng nguyên vi khuẩn K88+ Kết quả đạt được:

1 Cả hai qui trình ngắn ngày và dài ngày đều gây đáp ứng miễn dịch trên thỏ 2 Phát hiện được kháng thể trong kháng huyết thanh sau khi tiêm mũi mẫn cảm 14 ngày bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính

3 Xác định được nồng độ S aureus thích hợp để gắn với KHT nhằm tăng độ

nhạy của phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính KHT được xử lí gắn với

S aureus (nồng độ 1014 tế bào/ ml) và tỉ lệ thể tích KHT : S aureus là 1:4

4 Hiệu giá kháng thể ngưng kết ở qui trình dài ngày cao hơn qui trình ngắn ngày

5 Tách kháng thể ra khỏi kháng huyết thanh bằng cách tủa trong muối amonium sulfate bão hòa

6 Hấp phụ các kháng thể không đặc hiệu trong kháng huyết thanh

v

MỤC LỤC

CHƯƠNG TRANG Trang tựa

Lời cảm ơn iii

Danh sách các biểu đồ xii

Danh sách các sơ đồ xiii

2.1.3.2 Cấu trúc của một phân tử immunoglobulin 4

2.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng đáp ứng miễn dịch của động vật 5

2.1.4.1 Loài động vật 5

2.1.4.2 Yếu tố di truyền 5

2.2.3.2 Kháng nguyên bề mặt hay kháng nguyên vỏ K 15

2.2.3.3 Kháng nguyên lông roi H 15

3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 21

3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 21

3.1.1 Thời gian thực nghiệm 21

3.1.2 Địa điểm 21

3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 21

3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 21

3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

3.4.1 Gây đáp ứng miễn dịch trên thỏ 22

3.4.1.1 Chuẩn bị dịch tiêm 22

3.4.1.2 Tiêm thú thí nghiệm 22

vii

3.4.2 Thu nhận kháng huyết thanh 25

3.4.2.1 Tách kháng thể bằng amonium sulfate bão hoà 26

3.4.4.1 Định tính (bằng phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính) 30

3.4.4.2 Định lƣợng (định hiệu giá bằng phản ứng ngƣng kết chậm trong ống nghiệm) 31

3.5 CHỈ TIÊU THEO DÕI 32

4.1.2.2 Qui trình dài ngày 36

4.1.2.3 Hiệu quả gây đáp ứng miễn dịch ở 2 qui trình 37

4.1.3 Xử lí tăng độ nhạy của kháng huyết thanh 38

4.1.3.1 Xác định nồng độ S aureus thích hợp gắn với kháng huyết thanh 38 4.1.3.2 Kiểm tra phản ứng ngƣng kết với kháng huyết thanh xử lí gắn

viii

4.2.4 Xử lí tăng độ đặc hiệu của kháng huyết thanh 44

5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46

5.1 KẾT LUẬN 46 5.2 ĐỀ NGHỊ 46

6 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 7 PHỤ LỤC 49

ix

DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

APC Antigen-presenting cell

(Tế bào trình diện kháng nguyên)

E coli Escherichia coli

Ig Immunoglobulin (Globulin miễn) IL Interleukine KHT Kháng huyết thanh

S aureus Staphylococcus aureus

SIg Surface immunoglobulin (Globulin miễn màng tế bào) TCR T cell receptor

(Thụ quan bề mặt tế bào T) TH lympho T helper cell

(tế bào lympho T hỗ trợ)

x

DANH SÁCH CÁC HÌNH

HÌNH TRANG

Hình 2.1 Cấu trúc tổng quát phân tử kháng thể 4

Hình 2.2 KN được tế bào B tóm bắt, phân cắt, gắn với MHC lớp II và biểu lộ trên bề mặt tế bào 10

Hình 2.3 Phức hợp KN- MHC lớp II gắn với phức hợp thụ thể TCR/CD4+ trên tế bào TH 10

Hình 2.4 Cấu trúc đặc trưng của tế bào tương 11

Hình 2.5 Đáp ứng của tế bào B với kháng nguyên và mối liên hệ giữa sự đáp ứng này với hàm lượng kháng thể trong huyết thanh 12

Hình 2.6 Sự khác biệt giữa KN phụ thuộc tuyến ức và KN không phụ thuộc tuyến ức trong kích hoạt đáp ứng ở tế bào B 13

Hình 2.7 Đáp ứng tạo kháng thể khác nhau tùy vào KN phụ thuộc tuyến ức hay không phụ thuộc tuyến ức KN không phụ thuộc vào tuyến ức không gây ra sự thay đổi từ sản xuất IgM sang IgG 13

Hình 2.8 Trên bao thẩm tích có các lỗ nhỏ cho phép các phân tử muối đi ra ngoài còn KT bị giữ lại 17

H ình 2.9 Phản ứng ngưng kết do kháng thể tạo nên 19

Hình 2.10 Kháng thể IgG gắn với protein A của S aureus 20

Hình 3.1 Tủa kháng huyết thanh 26

Hình 3.2 Dịch kháng huyết thanh tủa trong amonium sulfate trước và sau thẩm tích 27

xi

DANH SÁCH CÁC BẢNG

BẢNG TRANG

Bảng 3.1 Gây miễn dịch thu kháng thể theo qui trình ngắn ngày 23

Bảng 3.2 Gây miễn dịch thu kháng thể theo qui trình dài ngày (qui trình viện

Pasteur Tp HCM) 24

Bảng 4.1 Kết quả thử phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết thanh của thỏ 1 và thỏ 2 33 Bảng 4.2 Kết quả thử phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết

Bảng 4.5 Trung bình hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong kháng huyết thanh thỏ ở

qui trình ngắn ngày và dài ngày 37

Bảng 4.6 Kết quả phản ứng ngƣng kết trên phiến kính với kháng huyết thanh gắn

S aureus ở các nồng độ khác nhau 38

Bảng 4.7 Kết quả thử phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết

thanh đƣợc xử lí và không đƣợc xử lí với S aureus của thỏ 1 và thỏ 2

39

Bảng 4.8 Kết quả thử phản ứng ngƣng kết nhanh trên phiến kính với kháng huyết

thanh đƣợc xử lí và không đƣợc xử lí với S aureus của thỏ 3, thỏ 4 và

thỏ 5 39

Bảng 4.9 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của kháng huyết thanh sau khi hấp

phụ của thỏ 1 và thỏ 2 (qui trình ngắn ngày) 40

Bảng 4.10 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của kháng huyết thanh sau khi hấp phụ của thỏ 3 và thỏ 4 (qui trình dài ngày) 41

xii

DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ

BIỂU ĐỒ TRANG Biểu đồ 4.1 Biến đổi hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong kháng huyết thanh của

thỏ 1 và thỏ 2 theo thời điểm lấy mẫu 35

Biểu đồ 4.2 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong huyết thanh lúc đầu và KHT đã

thẩm tích của thỏ 2 36

Biểu đồ 4.3 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong kháng huyết thanh của thỏ 3 và

thỏ 4 ở các thời điểm khác nhau 36

Biểu đồ 4.4 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong huyết thanh lúc đầu và KHT đã

thẩm tích của thỏ 4 37

Biểu đồ 4.5 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong huyết thanh đƣợc hoặc không

đƣợc hấp phụ của thỏ 1 và thỏ 2 ở qui trình ngắn ngày 41

Biểu đồ 4.6 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết trong huyết thanh đƣợc hoặc không

đƣợc hấp phụ của thỏ 3 và thỏ 4 ở qui trình dài ngày 42

xiii

DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ

SƠ ĐỒ TRANG

Sơ đồ 3.1 Qui trình tạo dịch huyền phù kháng nguyên E coli 22

Sơ đồ 3.2 Qui trình chung về xử lí kháng huyết thanh 25 Sơ đồ 3.3 Qui trình hấp phụ các kháng thể không đặc hiệu 28

Sơ đồ 3.4 Qui trình gắn kháng thể với protein A của Staphylococcus aureus 29

Sơ đồ 3.5 Qui trình chuẩn bị dịch kháng nguyên thực hiện phản ứng ngƣng kết

chậm trong ống nghiệm 31

PHẦN 1 MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong chăn nuôi việc chẩn đoán, phát hiện bệnh sớm để điều trị kịp thời sẽ làm giảm đáng kể những thiệt hại gây ra về kinh tế cũng như sức khỏe của người tiêu dùng Tùy theo từng tác nhân gây bệnh mà có các phương pháp chẩn đoán bệnh khác nhau Thông thường để chẩn đoán bệnh do vi sinh vật người ta dùng phương pháp cổ điển là nuôi cấy phân lập tế bào vi sinh vật, định danh chúng bằng các phản ứng huyết thanh học Kĩ thuật hiện đại như PCR (Polymerase Chain Reaction) có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn các phương pháp kinh điển do đó giúp chẩn đoán nhanh và chính xác hơn Nhưng kĩ thuật này đòi hỏi phải có trang thiết bị và nguyên liệu riêng, đắt tiền, kĩ thuật thực hiện còn phức tạp, cán bộ kĩ thuật phải có trình độ kĩ thuật nhất định

Các kĩ thuật chẩn đoán miễn dịch học mà điển hình là kĩ thuật ELISA linked immunosorbent assay) cũng tỏ ra rất hiệu quả trong việc chẩn đoán nhanh và chính xác các vi sinh vật gây bệnh không thua kém phương pháp PCR Nguyên tắc của kĩ thuật này dựa trên sự kết hợp giữa kháng nguyên với một kháng thể đặc hiệu Dựa vào nguyên tắc này các nhà sản xuất tạo ra các bộ kít chẩn đoán phát hiện vi sinh vật gây bệnh để người chăn nuôi có thể tự mình kiểm tra xem vật nuôi có mang mầm bệnh hay không như bộ kit chẩn đoán bệnh đốm trắng cho tôm

(Enzyme-Hiện nay ở Việt Nam việc sản xuất kháng huyết thanh và kháng thể phục vụ cho việc chẩn đoán bệnh bằng miễn dịch học trong chăn nuôi còn ít, chỉ mới áp dụng cho một số bệnh

Xuất phát từ yêu cầu thực tế đó chúng tôi đi vào nghiên cứu đề tài “Thử nghiệm

sản xuất kháng huyết thanh kháng vi khuẩn E coli” để phục vụ cho việc chẩn đoán

nhanh và điều trị bệnh kịp thời Ngoài ra có thể ứng dụng vào sản xuất kháng huyết thanh kháng các vi sinh vật gây bệnh quan trọng khác

1.2 MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích

Xây dựng và hoàn thiện quy trình sản xuất kháng huyết thanh phục vụ cho công tác chẩn đoán bệnh

1.2.2 Yêu cầu

 Xây dựng quy trình tiêm thỏ thí nghiệm

 Thu nhận kháng huyết thanh từ thỏ thí nghiệm  Đánh giá chất lƣợng kháng huyết thanh thu đƣợc

PHẦN 2

TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH

2.1.1 Khái niệm miễn dịch

Miễn dịch là khả năng đề kháng của sinh vật chống lại một sinh vật khác và các chất mang trên bản thân chúng với những dấu hiệu thông tin di truyền ngoại lai

Khả năng miễn dịch của một cơ thể phụ thuộc vào nhiều yếu tố di truyền của loài, sức đề kháng của mỗi cá thể, điều kiện ngoại cảnh (dinh dưỡng, vệ sinh, môi trường…)

2.1.2 Kháng nguyên [2] 2.1.2.1 Định nghĩa

Kháng nguyên (KN) là tất cả các chất, đôi khi kể cả thành phần cấu tạo của cơ thể, khi xâm nhập vào cơ thể sinh vật sẽ gây nên một đáp ứng miễn dịch, tức một quá trình sinh học phức tạp dẫn đến sự tổng hợp một phân tử đặc biệt gọi là kháng thể dịch thể hoặc kháng thể tế bào và chúng có đặc tính liên kết đặc hiệu với KN đó.

2.1.2.2 Khái niệm về epitop (biểu vị)

Epitop là những cấu trúc trên bề mặt của phân tử KN, có khả năng tạo kháng thể riêng biệt hoặc những thụ thể đặc hiệu trên bề mặt của một số tế bào lympho

Epitop có 2 đặc tính:

Tính KN: là đặc tính của một epitop có cấu trúc ba chiều liên kết bổ sung với

phần cấu trúc ba chiều của phân tử kháng thể (KT) Phần cấu trúc này của phân tử KT hoặc của thụ thể được gọi là paratop

Tính miễn dịch: của một epitop là đặc tính gây ra một đáp ứng miễn dịch

trong một cơ thể

Nếu KN là protein thì kích thước của một epitop KN vào khoảng 5-10 gốc acid amin Một phân tử KN có thể có một hoặc nhiều epitop Số lượng epitop phụ thuộc vào kích thước của phân tử KN và thường có khoảng 1 epitop cho mỗi 5 kDa

2.1.3 Kháng thể dịch thể [2] 2.1.3.1 Định nghĩa

Kháng thể dịch thể hay immunoglobulin (Ig) là protein “dạng cầu” được tổng hợp bởi tế bào tương (plasma cell) khi bị kích thích bởi KN Nó được tạo ra để giúp sinh vật chống đỡ các yếu tố KN có hại xâm nhập vào cơ thể

2.1.3.2 Cấu trúc của một phân tử immunoglobulin

Phân tử Ig gồm một hay nhiều đơn vị với cấu trúc tương đối giống nhau Mỗi đơn vị là một phân tử protein có 4 chuỗi polypeptid giống nhau từng đôi một: 2 chuỗi nhẹ và 2 chuỗi nặng, chúng được nối với nhau bằng những cầu nối disulfua (-S-S-) (hình 2.1).

Chuỗi nhẹ L (light chain)

Chuỗi nhẹ có trọng lượng phân tử khoảng 23.000 Da Có hai loại chuỗi nhẹ chung cho tất cả các lớp Ig:

Chuỗi nhẹ Kappa (kí hiệu K hay κ)

Chuỗi nhẹ Lambda (kí hiệu λ)

Tỉ lệ mang chuỗi nhẹ κ và λ của các Ig khác nhau giữa các loài Chuỗi nhẹ được chia thành hai phần dài bằng nhau:

 Phần hằng định: kí hiệu CL (constant) có tận cùng –COOH với trình tự acid amin tương đối không đổi

 Phần thay đổi: kí hiệu VL (variable) có tận cùng là –NH2 Trật tự acid amin trong vùng này thay đổi từng nhóm một, rất khác nhau từ cá thể này đến cá thể khác và ngay trong một cá thể, phần này được kí hiệu Vκ (cho type kappa) và Vλ (cho type lambda)

Chuỗi nặng H (heavy chain)

Chuỗi nặng có trọng lượng phân tử từ 50.000 Da đến 70.000 Da tùy theo lớp Ig (IgM, IgG, IgA, IgE…) Chuỗi nặng cũng chia thành 2 vùng: vùng hằng định (CH) và vùng thay đổi (VH)

Hình 2.1 Cấu trúc tổng quát phân tử kháng thể

(http://www.accessexcellence.org/

RC/VL/GG/antiBD_mol.html)

Người ta phân biệt 5 lớp Ig chủ yếu dựa vào sự khác nhau của các mạch polypepptid trong chuỗi nặng Nếu trong chuỗi nặng của Ig có các chuỗi:

Gamma (γ) thì Ig đó được gọi là IgG Muy (μ) thì Ig đó được gọi là IgM Alpha (α) thì Ig đó được gọi là IgA Delta (δ) thì Ig đó được gọi là IgD Epsilon (ε) thì Ig đó được gọi là IgE

Ngoài các phần bất biến và siêu biến, chuỗi nặng còn một nhóm glucid được gọi là oligosaccharide có nhiệm vụ cố định bổ thể giúp cho kháng thể dễ dàng bám vào bề mặt của tế bào thực bào và quyết định tính KN của phân tử KT

Theo quan điểm ngày nay thì vùng siêu biến của chuỗi nặng và chuỗi nhẹ tham gia vào sự hình thành cấu trúc bổ sung đặc hiệu trong sự kết hợp với KN (paratop)

Paratop không phải là một đoạn peptid liên tục, dài mà chỉ là một (hoặc một số) acid amin nằm cách quãng Đó là những “điểm” mà paratop tiếp xúc với epitop, thông thường mỗi paratop có từ 3-6 “điểm” như vậy

2.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng đáp ứng miễn dịch của thú [2] [13] 2.1.4.1 Loài thú

Đáp ứng miễn dịch càng tăng khi có sự khác biệt di truyền giữa thú gây miễn dịch (túc chủ) với loài được sử dụng làm kháng nguyên càng lớn vì kháng nguyên sẽ có nhiều epitop lạ đối với túc chủ

Đối với hầu hết các kháng nguyên protein, thỏ là thú thuận tiện để gây miễn dịch thực nghiệm

2.1.4.2 Yếu tố di truyền

Khả năng đáp ứng miễn dịch của thú còn phụ thuộc vào yếu tố di truyền vì với cùng một loại kháng nguyên nếu đưa vào các cá thể khác nhau sẽ cho đáp ứng miễn dịch khác nhau Thông thường các thú lai khác dòng có khả năng kích thích miễn dịch cao hơn các thú lai cùng dòng

b Cấu tạo hóa học của kháng nguyên

 Protein và polysaccharide

Là 2 nhóm kháng nguyên thông thường nhất vì các vỏ vi khuẩn hoặc các độc tố là các protein hoặc glycoprotein Chúng đều cho tính miễn dịch cao khi ở dạng hòa tan hay liên kết trong các cấu trúc phức tạp

Đặc tính kháng nguyên của nhiều loại glycoprotein trước hết được biểu hiện bởi các phần gốc đường của chúng

Protein ở dạng kết tụ (aggregation) gây đáp ứng miễn dịch tốt hơn protein ở dạng hòa tan

 Lipid và acid nucleic

Là 2 nhóm kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch kém Thông thường, lipid chỉ biểu hiện tính kháng nguyên khi ở dạng kết hợp với polysaccharide hoặc protein…

c Kích thước của phân tử kháng nguyên

Kháng nguyên có kích thước lớn và cấu trúc càng phức tạp thì chúng càng dễ bị đại thực bào phát hiện và xử lí nên có tính sinh miễn dịch cao, những kháng nguyên có cấu trúc phân tử nhỏ dễ bị đại thực bào bỏ qua nên có tính sinh miễn dịch thấp

Ngoài ra, các KN có kích thước nhỏ có thể gắn với các protein mang để tạo đáp ứng miễn dịch

d Khả năng bị chuyển hóa của phân tử kháng nguyên

Sự chuyển hóa kháng nguyên trong cơ thể vật chủ là yếu tố quan trọng cho tính sinh miễn dịch, vì khi được chuyển hóa các kháng nguyên dễ bộc lộ các quyết định KN ra ngoài

Các phân tử không bị phân hủy bởi tế bào (không được tế bào nhận biết và cải biến) thì không gây ra đáp ứng miễn dịch

Ví dụ: D-amino acid là một kháng nguyên yếu vì enzyme của động vật hữu nhũ không phân hủy amino acid dạng này

e Liều lượng kháng nguyên

Nếu lượng kháng nguyên quá ít thì không đủ gây đáp ứng miễn dịch Ngược lại nếu lượng kháng nguyên nhiều quá sẽ gây ức chế miễn dịch.

Ở các mũi nhắc nên giảm lượng kháng nguyên 2 – 3 lần so với gây mẫn cảm để tăng ái lực của kháng thể cần tạo nên.

f Đường xâm nhập của kháng nguyên vào cơ thể

Kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch mạnh nhất khi chúng được tiêm trực tiếp vào hạch bạch huyết vùng kheo của thú Tuy nhiên cách này đòi hỏi trình độ tay nghề cao

Tiêm kháng nguyên nhiều mũi dưới da, trong da hoặc tiêm một mũi trong bắp thịt được áp dụng rộng rãi hơn vì đơn giản dễ thực hiện và cho kết quả mong muốn

Ngoài ra với các kháng nguyên mạnh (vi khuẩn, virus, tế bào…) khi đưa vào đường mạch máu có thể dễ dàng gây ra đáp ứng miễn dịch Nhưng với kháng nguyên hòa tan thì phải có qui trình gây đáp ứng miễn dịch thích hợp, tốt nhất là tiêm trong da, dưới da và phải tiêm nhắc lại nhiều lần

g Hiệu ứng cộng lực kháng nguyên

Nếu cùng một lúc gây mẫn cảm nhiều loại kháng nguyên cho con thú thì kháng thể đặc hiệu được sinh ra tương ứng với mỗi loại kháng nguyên sẽ ít nhất ngang bằng hoặc nhiều hơn khi kháng nguyên đó kích thích một mình Hiện tượng này gọi là sự cộng lực kháng nguyên hay cộng kích thích kháng nguyên

Tuy nhiên cũng có trường hợp cùng một lúc gây mẫn cảm cho thú với hai loại kháng nguyên: một liều mạnh, một liều nhẹ thì con thú có thể chỉ phản ứng với kháng nguyên liều mạnh Hiện tượng này gọi là sự cạnh tranh kháng nguyên, chỉ xảy ra ở hai kháng nguyên có cấu trúc hóa học gần giống nhau

2.1.4.4 Qui trình gây miễn dịch

Qui trình gây miễn dịch có ảnh hưởng lớn đến đáp ứng miễn dịch đối với phân tử kháng nguyên Cùng một loại kháng nguyên, gây miễn dịch trên hai lô thí nghiệm qua hai qui trình chủng ngừa khác nhau thì đáp ứng miễn dịch cũng khác nhau Mỗi loại kháng nguyên thích hợp với một loại qui trình gây miễn dịch riêng Với những kháng nguyên yếu thường phải chủng ngừa bằng qui trình hết sức nghiêm ngặt và chủng

nhiều lần mới có đáp ứng miễn dịch mạnh Trong khi đó, những kháng nguyên mạnh có khi chỉ cần chủng ngừa một lần cũng gây đáp ứng miễn dịch

Nếu cho mẫn cảm kháng nguyên với một con vật đã được mẫn cảm với kháng nguyên đó một lần, thì hàm lượng kháng thể sẽ tăng sớm và nhiều hơn lần đầu (có những trường hợp gấp hàng trăm lần) Ngoài ra khi tiêm nhắc lại nhiều lần thì sẽ có sự chọn lọc các dòng tế bào lympho B sản xuất kháng thể và chỉ tăng sinh những dòng sản xuất kháng thể có ái lực cao với kháng nguyên nếu giới hạn tối đa kháng nguyên đưa vào

Thường tiêm mũi nhắc lại lần một sau khi đáp ứng miễn dịch ở mũi gây mẫn cảm giảm xuống (đối với thỏ khoảng 4-6 tuần) Các mũi tiêm nhắc lại tiếp theo nên cách nhau một khoảng thời gian nhất định để thú có khả năng đáp ứng miễn dịch cao nhất với kháng nguyên

Khoảng 10-15 ngày sau mỗi lần tiêm nhắc lại ta có thể lấy máu (20-40 ml), kháng huyết thanh nên được kiểm tra sự hiện diện của kháng thể Nếu thú đáp ứng miễn dịch yếu sau mũi nhắc lại lần hai thì nên loại bỏ

2.1.4.5 Chất bổ trợ

Các tá chất được sử dụng rộng rãi để tăng hiệu quả của các loại vaccine, tăng khả năng thực bào của đại thực bào đối với kháng nguyên Ngoài ra, tá chất còn gây một phản ứng viêm không đặc hiệu làm tăng tính sinh miễn dịch

Các nghiên cứu gần đây đã kết luận tá chất có tác dụng làm tăng lympho hỗ trợ (lympho T helper - TH) Khi bổ sung tá chất vào kháng nguyên sẽ làm kháng nguyên tồn tại lâu hơn trong cơ thể túc chủ Kháng nguyên được giải phóng dần dần có tác dụng giống như kích thích miễn dịch nhiều lần

Một số loại tá chất: Freund’s Complete Adjuvant (FCA) và Freund’s Incomplete Adjuvant (FIA), Aluminum hydroxide (ALUM), Rabi Adjuvant System (RAS), Syntex Adjuvant Formulation (SAF)…

2.1.5 Cơ chế đáp ứng miễn dịch dịch thể [3] [6] [8] [13]2.1.5.1 Các tế bào tham gia đáp ứng miễn dịch dịch thể

a Tế bào trình diện kháng nguyên (APC: antigen-presenting cell)

Tế bào trình diện kháng nguyên có 2 đặc tính: có các kháng nguyên phù hợp tổ chức chính lớp II (Major histocompatibility complex class II antigens – MHC class II antigens) trên bề mặt tế bào và tiết interleukine 1 (IL-1) (ngoài ra nó còn tiết nhiều cytokine khác

Có 2 nhóm tế bào trình diện kháng nguyên:

 Tế bào trình diện kháng nguyên “chuyên nghiệp” (“professional” APC): chủ

động bắt và trình diện KN Bao gồm các tế bào: đại thực bào, tế bào tua (dendritic cell), tế bào B

 Các tế bào khác, chỉ trình diện kháng nguyên khi tế bào bị nhiễm

Khi xâm nhập vào cơ thể các KN được các APC “chuyên nghiệp” tóm bắt bằng cách thực bào (đại thực bào) hay gắn với các thụ quan đặc hiệu (specific receptor) Ig trên bề mặt tế bào (tế bào B)

Đối với KN protein ngoại bào

Sau khi các APC bắt giữ KN, KN sẽ được đưa vào các nang endosome bên trong tế bào Các APC cũng có thể ẩm bào để hút các protein hòa tan (kích thước ≤ 1 µm) vào các endosome này Ở đây, các KN sẽ được xử lí trong khu vực acid nội bào nhờ các protease phân cắt protein thành các peptid ngắn Các peptid thẳng này gắn với phân tử MHC lớp II tạo thành phức hợp kháng nguyên – MHC (KN – MHC) và được biểu lộ trên bề mặt tế bào (hình 2.2)

Đối với KN có bản chất là lipid hoặc polysaccharide (KN không phụ thuộc tuyến ức)

Các KN này chỉ trình diện được với tế bào B và không thể xử lí đến dạng kết hợp được với các phân tử MHC nên không được các tế bào T nhận biết, không gây được các đáp ứng miễn dịch tế bào

Ngoài ra khi KN bị bắt giữ vào trong tế bào APC nó sẽ kích thích tế bào tiết ra interleukin 1 hay còn gọi là yếu tố hoạt hóa tế bào lympho LAF (lymphocyte activating factor) là một trong hai yếu tố cần thiết để hoạt hóa tế bào lympho TH (yếu tố kia là sự nhận biết phức hợp KN-MHC của thụ thể tế bào T)

c Tế bào lympho B

Tế bào lympho B là tế bào sinh kháng thể, quá trình biệt hóa tế bào B thành tế bào tương (plasma cell) sản xuất kháng thể có thể chia thành 2 giai đoạn:

 Giai đoạn 1: các tế bào nguồn trong tủy xương được biệt hóa thành tiền

lympho B, sau đó thành các lympho B chưa chín và cuối cùng phát triển thành lympho B chín với các immunoglobulin bề mặt SIg (Surface immunoglobulin) Giai đoạn này không cần sự kích thích của kháng nguyên và sự có mặt của tế bào lympho TH

Hình 2.2 KN được tế bào B tóm bắt, phân cắt, gắn với MHC lớp II và biểu lộ trên bề mặt tế bào

(trích dẫn liệu của Tizard, 1992) [13]

Hình 2-1 KN được tế bào B tóm bắt, phân cắt, gắn với MHC lớp II và biểu

Hình 2.3 Phức hợp KN- MHC lớp II gắn với phức hợp thụ thể TCR/CD4+

trên tế bào TH.

(trích dẫn liệu của Tizard, 1992) [13]

Hình 2-1 KN được tế bào B tóm bắt,

 Giai đoạn 2: các tế bào lympho B chín biệt hóa thành tế bào tương sản xuất

kháng thể Quá trình này cần sự kích thích của kháng nguyên, một số interleukin và sự kết hợp của tế bào TH với lympho B

Tế bào plasma là những tế bào hình trứng, đường kính 8-9 µm, có nhân tròn lập dị với các chromatin không đồng dạng Chúng có tế bào chất lớn với mạng lưới nội chất hạt dày đặc (hình 2.4)

Hình 2.4 Cấu trúc đặc trưng của tế bào plasma

(trích dẫn liệu của Tizard, 1992) [13]

2.1.5.2 Cơ chế hình thành đáp ứng miễn dịch dịch thể

a Đối với kháng nguyên phụ thuộc vào tuyến ức (KN có bản chất protein)

Khi KN xâm nhập vào cơ thể, chúng bị các tế bào trình diện KN bắt giữ, phân cắt chúng thành những đoạn nhỏ và gắn vào các phân tử MHC lớp II tạo thành phức hợp kháng nguyên – phân tử MHC (KN-MHC) biểu lộ trên bề mặt tế bào APC Đồng thời KN cũng kích thích APC tiết IL-1

Phức hợp KN-MHC và IL-1 được nhận biết bởi phức hợp thụ thể TCR/CD4+ và thụ thể IL-1 trên bề mặt tế bào TH Khi đó tế bào lympho T được hoạt hóa sẽ tăng sinh và tiết IL-2, IL-4, IL-5 để kích thích sự phát triển của tế bào B thành tế bào plasma sản xuất immunoglobulin

Khi kháng nguyên gắn với SIg thích hợp trên tế bào B chín với sự hiện diện của tế bào TH, IL-2, IL-4 thì tín hiệu được truyền vào trong tế bào Lúc này tế bào B sẽ trải qua quá trình tăng sinh và biệt hóa thành dòng tế bào plasma tổng hợp kháng thể dịch thể hay immunoglobulin, chúng có cấu trúc giống như SIg mà KN đã chọn lọc để gắn

nhưng với ái tính cao hơn khi kết hợp với KN đặc hiệu Tế bào plasma có khả năng tổng hợp 300 phân tử Ig mỗi giây IgM là loại KT xuất hiện đầu tiên khi cơ thể bị kích thích bởi KN, sau đó một vài ngày thì IgG, IgA và IgE xuất hiện (trong đó IgG là chủ yếu) và dần thay thế IgM Thông thường khi IgG xuất hiện thì IgM sẽ tiêu biến, nhưng cũng có trường hợp IgM tồn tại rất lâu (ví dụ KT IgM chống lại KN O của vi khuẩn

Samonella)

Trong khi một số biệt hóa thành tế bào plasma thì một số tế bào B khác chuyển

thành tế bào nhớ giúp cho đáp ứng lần sau với chính KN đó nhanh hơn và mạnh hơn

Đáp ứng thứ phát: khi có sự tiếp xúc với kháng nguyên lần đầu và nếu cho tiếp

xúc lần sau với chính kháng nguyên đó thì KN gắn với các thụ thể tương ứng là các phân tử KT trên bề mặt của tế bào B nhớ làm tế bào nhớ tăng sinh và biệt hoá thành tế bào plasma sản xuất KT do đó chúng ta sẽ thấy rõ hàm lượng kháng thể tăng nhanh và cao hơn nhiều lần so với lần đầu

Hình 2.5 Đáp ứng của tế bào B với kháng nguyên và mối liên hệ giữa sự đáp ứng này với hàm lượng kháng thể trong huyết thanh

(http://www.uccs.edu/~rmelamed/MicroFall2002/Chapter%2017/Antibody%20Time%20Course.jpg)

b Đối với kháng nguyên không phụ thuộc vào tuyến ức

KN không phụ thuộc vào tuyến ức thường là các trình tự polimer lặp lại như

lipopolysaccharide của Escherichia coli, flagellin của Salmonella, vỏ polysaccharide của vi khuẩn Pneumococcus, dextrans, levans và polyglutamic acid Bởi vì chúng là

những trình tự polimer lặp lại nên một phân tử có thể gắn với nhiều thụ thể immunoglobulin trên bề mặt tế bào B do đó không cần tế bào T helper cung cấp thêm tín hiệu để gây ra đáp ứng tạo kháng thể của tế bào B như KN phụ thuộc vào tuyến ức (hình 2.6) KN không phụ thuộc tuyến ức gắn trực tiếp vào các SIg trên bề mặt tế B và kích thích tế bào B tiết ra kháng thể

Kháng nguyên không phụ thuộc vào tuyến ức chỉ gây ra đáp ứng tạo IgM ở tế bào B và không biệt hóa thành tế bào nhớ vì chúng không kích hoạt tế bào T helper tiết interleukine nên không chuyển từ sản xuất IgM sang IgG Như vậy, đối với KN không phụ thuộc tuyến ức, đáp ứng thứ phát không tạo ra lượng KT nhiều hơn đáp ứng nguyên phát (hình 2.7)

Hình 2.7 Đáp ứng tạo kháng thể khác nhau tùy vào KN phụ thuộc tuyến ức hay không phụ thuộc tuyến ức KN không phụ thuộc vào tuyến ức không gây ra sự thay đổi từ sản xuất IgM sang IgG

(trích dẫn liệu của Tizard, 1992) [13]

Hình 2.6 Sự khác biệt giữa KN phụ thuộc tuyến ức và KN không phụ thuộc tuyến ức trong kích hoạt đáp ứng ở tế bào B

(trích dẫn liệu của Tizard, 1992) [13]

2.2 VI KHUẨN E coli [1] [9]

2.2.1 Định nghĩa

Escherichia coli còn được gọi là faecal coli, thuộc nhóm coliform phân, có hình

que, gram âm, có kích thước khoảng 2-3 x 1,5 ; có khả năng di động nhờ các tiên mao, không tạo bào tử, hiếu khí hoặc hiếu khí tùy nghi Chúng có mặt thường xuyên trong ruột của động vật và người, ở phần cuối của ruột non hoặc ruột già

Các kháng nguyên O có bản chất lipopolysacharide (LPS) Những kháng nguyên này bền với nhiệt độ và cồn Theo Leminor, kháng nguyên O thường đặc trưng cho từng loài (trích dẫn bởi Nguyễn Ngọc Hải, 1999) Các kháng nguyên O có thể được phát hiện bằng phản ứng ngưng kết Để thực hiện phản ứng này, huyễn dịch vi khuẩn phải được đun nóng ở nhiệt độ 100oC trong vòng 1 giờ, sau đó cho thử với phản ứng với kháng huyết thanh đặc hiệu Chúng giữ vai trò nhất định đối với khả năng gây bệnh của các dòng vi khuẩn và một trong số các kháng nguyên này có tính chất chuyên biệt cho từng loài vật chủ

Hiện nay người ta đã phát hiện hơn 160 loại kháng nguyên O (R.J.Gross và B.Rowe, 1985) [9]

2.2.3.2 Kháng nguyên bề mặt hay kháng nguyên vỏ K

Kháng nguyên K nằm ở bề mặt tế bào nên là nguyên nhân không tạo ra phản ứng ngưng kết kháng nguyên O

Hiện nay người ta đã phát hiện hơn 100 loại kháng nguyên K (Øiskov et al, 1971) [9] Kauffmann chia kháng nguyên K thành 3 nhóm dựa vào ảnh hưởng của nhiệt độ đến phản ứng ngưng kết, tính kháng nguyên và khả năng vi khuẩn gắn kết với kháng thể

b Kháng nguyên K type A

Là kháng nguyên vỏ có bản chất là polysaccharide, vi khuẩn có kháng nguyên này khi mọc trên môi trường sẽ cho khuẩn lạc dạng nhầy và chỉ cho kết quả ngưng kết của kháng nguyên O sau khi huyễn dịch vi khuẩn đã được đun nóng 121oC trong 2h

c Ngoài ra còn một nhóm kháng nguyên K type B, nhưng sự tồn tại của nhóm KN này chưa được xác định chính xác

2.2.3.3 Kháng nguyên lông roi H

Là kháng nguyên có bản chất protein, không bền với nhiệt độ, bị hủy bởi cồn

nhưng đề kháng với formone Kháng nguyên này có ở những dòng E coli di động

Theo Morris J.A (1985) và Sussman M (1985), hiện nay người ta đã phát hiện được 56 loại kháng nguyên H (trích dẫn bởi Nguyễn Ngọc Hải, 1999)

2.3 TÁCH KHÁNG THỂ BẰNG AMMONIUM SULFATE [10] [11]

Kháng huyết thanh thu được không những chứa kháng thể mà còn có một số chất khác Để tách kháng thể ra khỏi kháng huyết thanh ta có thể dùng phương pháp sắc kí, kết tinh hay tủa trong muối…

Phương pháp tủa kháng thể trong amonium sulfate là một trong những phương pháp phổ biến nhất để tách protein ra khỏi dung dịch Trong dung dịch, protein liên kết với nước bằng các liên kết hydrogen thông qua các nhóm ion tích điện của chúng Khi ta thêm vào một lượng lớn các ion nhỏ, tích điện lớn như amonium hay sulfate thì

những nhóm này cạnh tranh với protein để gắn vào các phân tử nước, do đó làm giảm khả năng hòa tan của protein và chúng kết tủa lại Protein kết tủa có thể hòa tan lại trong môi trường có nồng độ amonium sulfate thấp hơn Khả năng kết tủa của các protein khác nhau thì khác nhau tùy thuộc vào số lượng và vị trí các nhóm cực tích điện, trọng lượng phân tử của protein, pH của dung dịch, nhiệt độ xảy ra sự kết tủa

Để tủa kháng thể người ta thường sử dụng amonium sulfate (đôi khi dùng sodium sulfate) Nồng độ muối để kháng thể kết tủa ở các loài khác nhau thì khác nhau Hầu hết các kháng thể của thỏ có thể kết tủa ở dung dịch muối bão hòa 40%, còn ở chuột phải từ 45-50% Bởi vì hầu hết các thành phần khác của huyết thanh không kết tủa ở khoảng nồng độ muối này và không có sự khác biệt lớn giữa hai nồng độ trên nên nồng độ muối bão hòa 50% là mức thích hợp nhất cho hầu hết các ứng dụng khác nhau

Một điểm bất lợi của kháng thể tủa trong amonium sulfate bão hòa là kháng thể không được tinh sạch vì khi kết tủa ngoài kháng thể còn có các phân tử protein có trọng lượng phân tử lớn khác Do đó, ngoài việc tủa trong muối amonium sulfate cần phải kết hợp với một số phương pháp khác nếu yêu cầu kháng thể cuối cùng phải được tinh sạch hoàn toàn

2.4 HỒI CHẾ KHÁNG THỂ BẰNG PHƯƠNG PHÁP THẨM TÍCH [7]

Một trong các phương pháp cổ điển để loại muối ra khỏi protein kháng thể là thẩm tích Dung dịch protein được chứa trong bao thẩm tích làm bằng cellulose có thắt nút ở hai đầu Bao này được đặt trong cốc lớn chứa dung dịch đệm có ái lực thấp và để ở nhiệt độ lạnh có khuấy trộn vừa phải Trên bao thẩm tích có những lỗ nhỏ cho phép những phân tử muối có kích thước nhỏ đi ra ngoài còn các phân tử protein kháng thể có kích thước lớn được giữ lại trong bao thẩm tích Sự khuếch tán các phân tử muối vào trong dung dịch đệm thẩm tích vẫn tiếp tục cho đến khi nồng độ muối bên trong và bên ngoài bao thẩm tích đạt trạng thái cân bằng (thường khoảng 5-6 giờ) Nếu sau khi đạt trạng thái cân bằng mà dung dịch protein chưa loại hết muối thì ta đặt bao thẩm tích trên vào một dung dịch đệm mới và cứ tiếp tục như thế cho đến khi loại hết muối ra khỏi dung dịch protein Trong quá trình thẩm tích, ngoài muối còn có các chất chuyển hóa có kích thước nhỏ như ATP, coenzyme… cũng bị loại ra khỏi bao thẩm tích

Hình 2.8 Trên bao thẩm tích có các lỗ nhỏ cho phép các phân tử muối đi ra ngoài còn KT bị giữ lại

(http://www.bio.mtu.edu/campbell/bl482/lectures/lec5/482w52.htm)

2.5 PHẢN ỨNG KHÁNG NGUYÊN – KHÁNG THỂ [2] [5] 2.5.1 Các lực liên kết kháng nguyên – kháng thể (KN-KT)

Sự liên kết một paratop của KT với một epitop của KN tương ứng được thiết lập và duy trì nhờ các lực hấp dẫn có năng lượng nhỏ (<10 Kcal/mol) nhưng không phải là liên kết cộng hóa trị Các lực liên kết KN-KT:

 Lực tĩnh điện giữa các nhóm COO

và NH3+ đối diện nhau của acid amin trong các chuỗi polypeptid

 Các liên kết hydro giữa các nguyên tử H+ và N- hoặc O-  Các liên kết kị nước giữa các acid amin kị nước

 Lực Van der Waals do sự di động của các điện tử giữa hai phân tử

2.5.2 Các đặc tính chung của sự liên kết KN-KT

Sự liên kết KN-KT có 3 đặc điểm là: phản ứng phát nhiệt, có tính đặc hiệu và thuận nghịch

 Phản ứng phát nhiệt

Sự liên kết giữa các KN-KT là một phản ứng phát nhiệt, giải phóng ra năng lượng từ khoảng 2 đến 40 Kcal/mol

 Tính đặc hiệu

Tính đặc hiệu của phản ứng KN-KT thể hiện ở chỗ một vị trí paratop của KT chỉ kết hợp với một epitop của KN do đó nếu ta biết một trong hai yếu tố của phản ứng KN-KT thì có thể nhận biết được yếu tố còn lại Tuy nhiên tính đặc hiệu của phản ứng chỉ là tương đối

 Tính chất thuận nghịch

Phức hệ KN-KT có thể bị phân li do nhiệt, môi trường acid (pH<3), hoặc do môi

trường có lực ion cao Do đó có thể rửa chiết để tách riêng KT in vitro ngay cả khi phức hệ KN-KT được hình thành in vivo

2.5.3 Phản ứng ngưng kết KN-KT

Vì KT hòa tan trong dung dịch nên đặc tính của phản ứng KN-KT phụ thuộc rất lớn vào hình dạng KN Nếu KN ở dạng hạt (vi khuẩn hoặc hồng cầu) kết hợp với KT tương ứng sẽ tạo thành các hạt ngưng kết thấy được bằng mắt thường

2.5.3.1 Phản ứng ngưng kết KN-KT xảy ra theo 2 pha

Pha thứ nhất: đặc trưng bởi sự gắn phần Fab của KT với các quyết định KN

trên bề mặt KN dạng hạt nên không nhìn thấy được bằng mắt thường Pha này xảy ra nhanh được gọi là pha đặc hiệu hay pha không nhìn thấy

Pha thứ hai: đặc trưng bởi sự liên kết chéo của các kháng thể đa hóa trị, các

KN dạng hạt đa hóa trị để tạo thành dạng khối đủ lớn có thể quan sát bằng mắt thường Pha này xảy ra chậm hơn và theo nguyên lí lí hóa đơn thuần, nên còn gọi là pha không đặc hiệu hay pha nhìn thấy được

Mạng lưới ngưng kết chỉ có thể hình thành đối với các KT có ít nhất hai hóa trị KT IgG khó xảy ra phản ứng ngưng kết hơn so với KT IgM, vì IgG chỉ có hai vị trí gắn kết với KN trong khi đó IgM có tới năm vị trí liên kết với KN Khả năng ngưng kết của IgM cao hơn 100 lần so với IgG

(A) Không xảy ra khi cả hai vị trí của IgG đều gắn vào một thể vi khuẩn (B) Xảy ra khi IgG trở thành cầu nối giữa các thể vi khuẩn

(C) Rất dễ xảy ra khi kháng thể là loại IgM

 Lực ion (nồng độ của muối): nếu giảm lực ion thì sự hấp thụ KT được tăng cường

 Trở ngại do sự sắp xếp các phân tử trong không gian (Steric Hindrance): khi các KN khác nhau nằm sát nhau thì các KT tương ứng với mỗi loại KN có thể cản trở sự gắn kết do sự cạnh tranh với các phân tử khác

2.6 PROTEIN A

Protein A là một loại protein bề mặt của thành tế bào Staphylococcus aureus có

khối lượng phân tử 42 kDa Nó gắn với vùng hằng định của immunoglobulin Phân tử này có thể gắn với KT ở hai vị trí Fcγ (vùng hằng định của IgG liên quan đến chức