Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây cỏ rươi lá bắc

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ======  ====== ĐỖ THỊ THANH HƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ RƯƠI LÁ BẮC (Murdannia Bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ======  ====== ĐỖ THỊ THANH HƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ RƯƠI LÁ BẮC (Murdannia Bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH.2016.Y NGƯỜI HƯỚNG DẪN: PGS TS VŨ ĐỨC LỢI Hà Nội – 2021 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn PGS TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Trường đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Thầy trực tiếp bảo, hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt q trình nghiên cứu để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Thầy cung cấp cho em kiến thức học thuật, mà cịn giúp em có thêm nhiều kỹ cần thiết để bước sang trang sau cánh cửa đại học Em xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền, Bộ môn Bào chế Công nghệ dược phẩm Trường đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em cung cấp đầy đủ trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến tất quý thầy cô Trường đại học Y Dược thầy cô đơn vị liên kết đào tạo với Trường đại học Y Dược nhiệt tình dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường Em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Trường đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Do kiến thức em hạn hẹp, kinh nghiệm chưa nhiều nên báo cáo em khơng thể tránh sai sót Kính mong đóng góp ý kiến bảo thầy để khóa luận em hồn thiện Nghiên cứu hỗ trợ kinh phí để thực từ đề tài KHCN cấp Nhà nước mã số: ĐTĐLCN-27/21 PGS.TS Vũ Đức Lợi làm chủ trì đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2021 Sinh viên Đỗ Thị Thanh Hương DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT STT Ký hiệu Tên tiếng anh Tên tiếng việt H Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ Resonance Spectroscopy hạt nhân proton 1 13 H-NMR 13 C-NMR C Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ Resonance Spectroscopy hạt nhân cacbon-13 Độ dịch chuyển hóa học  (ppm)  (ppm = part per million) ALT Alanine transaminase AST Aspartate transaminase DEPT D-GalN DPPH EC50 10 ESI-MS 11 FTIR 12 GC-MS 13 IC50 14 Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT D-galactosamin N 2,2′-diphenyl-1picrylhydrazyl Half Maximal Effective Nồng độ cho 50% tác dụng Concentration tối đa Electrospray Ionization- Khối phổ đo phương Mass Spectrometry pháp ion hóa phun điện tử Fourier transfer infrared Gas chromatography–mass spectrometry Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier Sắc ký khí- Khối phổ Half Maximal Inhibitory Nồng độ ức chế tối đa Concentration nửa IR Infrared Tia hồng ngoại 15 TNFα Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử u 16 UPLC Ultra Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu Chromatography DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Phân bố loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR1 chất tham khảo Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR2 chất tham khảo Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR3 chất tham khảo 28 30 31 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Tên hình Đặc điểm thực vật số loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Hoa số loài thuộc chi Murdannia Trà Rumput Beijing Tea – Thành phần chính: Murdannia bracteata Trang 14 Hình 3.1 Đặc điểm quan sinh dưỡng 19 Hình 3.2 Đặc điểm quan sinh sản Murdannia bracteata 20 Hình 3.3 Đặc điểm vi phẫu thân 22 Hình 3.4 Đặc điểm vi phẫu 23 Hình 3.5 Đặc điểm bột dược liệu 24 Hình 3.6 Đặc điểm bột dược liệu thân 25 Hình 3.7 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Cỏ rươi bắc 26 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn ethyl acetat 27 Hình 3.9 Cấu trúc hóa học hợp chất CR1 29 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất CR2 31 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất CR3 33 Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Murdannia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Murdannia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Murdannia 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Murdannia 1.2 Tổng quan loài Murdannia bracteata 1.2.1 Đặc điểm hình thái lồi Murdannia bracteata 1.2.2 Đặc điểm phân bố loài Murdannia bracteata 1.2.3 Thành phần hóa học loài Murdannia bracteata 1.2.4 Tác dụng sinh học Murdannia bracteata 10 1.2.5 Công dụng Murdannia bracteata theo y học cổ truyền 14 1.2.6 Sản phẩm có thành phần Murdannia bracteata thị trường 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.1 Nguyên liệu 15 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 15 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp mô tả đặc điểm thực vật 17 2.2.2 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 18 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Kết mô tả đặc điểm thực vật Cỏ rươi bắc 19 3.1.1 Đặc điểm hình thái 19 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 21 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 24 3.2 Kết chiết xuất, phân lập số hợp chất 26 3.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 28 3.3.1 Hợp chất CR1: Acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic 28 3.3.2 Hợp chất CR2: Acid 3-amino butanoic 30 3.3.3 Hợp chất CR3: Acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-Oβ-D-glucopyranosid 31 3.4 Bàn luận 34 3.4.1 Hợp chất 1: Acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic 34 3.4.2 Hợp chất 2: Acid 3-amino butanoic 34 3.4.3 Hợp chất 3: Acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-βD-glucopyranosid 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Nhờ điều kiện khí hậu nhiệt đới gió mùa đa dạng địa hình, Việt Nam sở hữu hệ sinh thái vô phong phú với tiềm lớn tài nguyên thuốc nói riêng tài nguyên dược liệu (thực vật, động vật, khống vật,…) nói chung Theo thống kê, nước ta có 12000 lồi thực vật bậc cao, số có khoảng 4000 lồi sử dụng làm thuốc.Từ xa xưa, ông cha ta biết sử dụng cỏ để chữa bệnh phòng bệnh, chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian tùy vào địa phương Ngày nay, người dân ngày trọng đến việc chăm sóc sức khỏe từ sản phẩm có nguồn gốc từ tự nhiên nhu cầu thuốc có nguồn gốc dược liệu ngày tăng Đây sở cho nhà khoa học dược tập đoàn dược phẩm dược nghiên cứu trọng vào sàng lọc từ tự nhiên để tìm hoạt chất sinh học có dược tính mạnh hơn, độc chi phí cho nghiên cứu phát triển thấp so với tổng hợp hóa học Việt Nam đất nước biết đến với: “rừng vàng, biển bạc”- giàu nguồn tài nguyên thiên nhiên, xu hướng phát triển sản phẩm từ tự nhiên hướng đắn Mỗi thuốc có chứa đặc điểm thực vật thành phần chất có hoạt tính khác nhau, việc nghiên cứu sâu loại mang lại ý nghĩa khoa học giá trị thực tiễn cao Cây Cỏ rươi bắc thuộc chi Murdannia, chi lớn họ Thài lài (Commelinaceae) Một số nghiên cứu giới ghi nhận lồi chứa nhóm chất như: flavonoid, saponin, steroid, acid béo,…có tác dụng kháng khuẩn [23], chống viêm [22], bảo vệ gan [25], hỗ trợ điều trị ung thư gan tiểu đường [19] Ở Trung Quốc Malaysia, người dân sử dụng Cỏ rươi bắc để chữa bệnh tiêu hóa, cảm lạnh, tiểu đường, ung thư,… Ở Việt Nam, theo kinh nghiệm dân gian dùng để chữa bệnh đau dày Tuy nhiên, nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học tác dụng sinh học Cỏ rươi bắc Việt Nam hạn chế Để góp phần xây dựng sở khoa học cho việc ứng dụng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh, lựa chọn thực đề tài: “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong)” với mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm thực vật Cỏ rươi bắc - Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Cỏ rươi bắc - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 3.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 3.3.1 Hợp chất CR1: Acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic Chất bột màu trắng, tnc = 122- 124oC Độ quay cực: [α] D24 = −20.8(c 2, H2O) Bảng 3.1: Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR1 chất tham khảo [28] STT Carbon a) DEPT δCCR1 δCAa,b δHCR1 (ppm) δHAa,c (ppm) HMBC (ppm) (ppm) (Mult, J=Hz) (Mult, J=Hz) (H→ C) 4,11 (1H, dd, J = 4,10 (1H, dd, 6,5; 4,0 Hz) J=6,5;4,0 Hz) 2,95 (1H, dd, J = 2,94 (1H, dd, J C-1’, C-2’, 7,0; 3,5 Hz) = 7,0; 3,5 Hz) C-6’, C-1 2,18 (1H, dd,J = 2,17 (1H, dd, J 8,0; 7,5 Hz) = 8,0; 7,5 Hz) 7,12 (2H, brd, J 7,11 (2H, brd, C-3, C-4’, = 7,0 Hz) J= 7,0 Hz) C-6’ 7,34 (2H, m) 7,35 (2H, m) C-1’, C-5’ 7,27 (1H, t, J = 7,28 (1H, t, 7,5 Hz) J=7,5 Hz) 7,34 (2H, m) 7,35 (2H, m) C-1’, C-3’ 7,12 (2H, brd, J 7,11 (2H, brd, C-3, C-4’, = 7,0 Hz) J= 7,0 Hz) C-2 C 167,4 167,3 CH 56,6 56,5 CH2 40,2 40,3 1ꞌ C 135,5 135,6 2ꞌ CH 130,3 130,2 3ꞌ CH 129,1 129,1 4ꞌ CH 127,5 127,6 5ꞌ CH 129,1 129,1 6ꞌ CH 130,3 130,2 C-1’, C-1 C-2’, C-6’ đo CDCl3&CD3OD, b) 125 MHz, c) 500 MHz, A) chất tham khảo acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic Phổ 1H-NMR hợp chất CR1 xuất tín hiệu proton vịng benzen mono hệ ABX: δH 7,34 (2H, m, H-3’,5’), 7,27 (1H, t, J = 7,5 28 Hz, H-4’), 7,12 (2H, brd, J = 7,0 Hz, H-2’,6’), proton oxygen methin δH 4,11 (1H, dd, J = 6,5; 4,0 Hz, H-2), hai proton methylen δH 2,95 (1H, dd, J = 7,0; 3,5 Hz, H-3a), 2,18 (1H, dd, J = 8,0; 7,5 Hz, H-3b) Phổ 13C-NMR hợp chất CR1 cho thấy tín hiệu carbonyl carbon δC 167,4 (C-1), sáu carbon thơm δC 135,5 (C-1’), 130,3 (C-2’,6’), 129,1 (C-3’,5’), 127,5 (C-4’), carbon oxygen δC 56,6 (C-2), carbon methylen δH 40,2 (C-3) Phổ HMBC hợp chất CR1 cho thấy tín hiệu tương tác xa H-2 với C-1/C-1’; H3 với C-1’/C-1/C-2’/C-6’ tương tác vòng thơm Căn vào số liệu phổ nêu so sánh với liệu phổ tham khảo [28], xác định hợp chất CR1 acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic Hình 3.9: Cấu trúc hóa học hợp chất CR1 29 3.3.2 Hợp chất CR2: Acid 3-amino butanoic Chất bột không màu, tnc = 189- 190oC Bảng 3.2: Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR2 chất tham khảo [28] STT Carbon DEPT δC δCBd,b δH (ppm) δHBe,c (ppm) (ppm) (ppm) (Mult, J=Hz) (Mult, J=Hz) 2,61 (1H, dd, J = 7,0; 2.60 (1H, dd, J = 7,0; 7,0 Hz) 7,0 Hz) 2,46 (1H, dd, J = 7,0; 2.47 (1H, dd, J =7,0; 7,0 Hz) 7,0 Hz) 5,24 (1H, dt, J = 6,5 5.25 (1H, dt, J = 6,5; Hz) 13,0 Hz) 1,26 (3H, d, J = 6,5 1.27 (3H, d, J = 6,5 Hz) Hz) C 169,1 169,2 CH2 40,9 40,8 CH 67,6 67,6 CH3 19,7 19,8 d) đo DMSO,e) đo CDCl3, b) 125 MHz, c) 500 MHz, B) chất tham khảo acid 3-amino butanoic Phổ 1H-NMR hợp chất CR2 xuất proton, bao gồm proton carbon liên kết với nhóm amino 5,24 (1H, dt, J = 6,5 Hz, H-3), proton nhóm methylene 2,61 (1H, dd, J = 7,0; 7,0 Hz, H-2) 2,46 (1H, dd, J = 7,0; 7,0 Hz, H-2), proton nhóm methyl 1,26 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-4) Ngoài ra, phổ 13C-NMR DEPT hiển thị tổng cộng tín hiệu bốn carbon, bao gồm carbon carbonyl 169,1 (C1), carbon nitrogen 67,6 (C-3), carbon methylene 40,9 (C-2) carbon methyl 19,7 (C-4) Căn vào số liệu phổ nêu so sánh với liệu phổ tham khảo [28], xác định hợp chất CR2 acid 3-amino butanoic 30 Hình 3.10: Cấu trúc hóa học hợp chất CR2 3.3.3 Hợp chất CR3: Acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-Oβ-D-glucopyranosid Chất bột màu trắng, tnc : 199- 200oC Độ quay cực: [α]D31 = -110 (c 1,0, MeOH) Bảng 3.3: Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CR3 chất tham khảo [29] STT DEPT Carbon δC (ppm) δCCf,b (ppm) δH (ppm) δHCf,c (ppm) (Mult, J=Hz) (Mult, J=Hz) 5,84(s) 5,81 (s) C 174,5 175,0 CH 126,8 127,9 C 142,6 139,2 CH 132,9 132,3 7,79(d, J = 16 Hz) 7.69(d, J= 16 Hz) CH 131,0 129,0 6,32(d, J = 16 Hz) 6.21(d, J= 16 Hz) CH3 20,6 19,5 2,18(s) 1,91 (s) 1ꞌ C 49,8 48,3 2ꞌ CH2 42,9 41,9 1,96(m) 2,13 (m) 1,80 (m) 3ꞌ CH 74,1 73,2 4,28(m) 4,20 (m) 4ꞌ CH2 42,8 41,9 1,19(m) 1,93 (m) 2,18(m) 1,75 (m) 5ꞌ C 87,6 86,7 6ꞌ C 83,2 82,2 31 7ꞌ CH2 77,2 76,3 3,76(d, J =7,5 Hz) 3,82(dd, J = 2,0; 7,5Hz) 3,77 (m) 3,70 (m) 8ꞌ CH3 16,3 15,4 0,94(s) 0,90 (s) 9ꞌ CH3 19,7 18,8 1,17(s) 1,13 (s) 1ꞌꞌ CH 103,2 102,3 4,37(d, J = 8,0 Hz) 4.33(d, J= 8,0 Hz) 2ꞌꞌ CH 75,1 74,2 3,16(dd, J = 8,0; 3.11(dd, J= 9,6; 9,0Hz) 8,0 Hz) 3ꞌꞌ CH 78,1 77,2 3,30(m) 4ꞌꞌ CH 71,7 70,8 3,29(m) 5ꞌꞌ CH 77,9 77,0 3,39(m) 3,32(m) 6ꞌꞌ CH2 62,8 61,9 3,29(dd, J = 2,0 Hz, 3.83(dd, J= 11,6; 12,0Hz) 2,0 Hz) 3,90(dd, J = 5,0 Hz, 3.64(dd, J= 11,6; 12,0Hz) 1,6 Hz) 3ꞌ-OGlc f) đo CD3OD, b) 3.24(dd, J= 9,6; 8,4 Hz) 3.25(dd, J= 8,4; 8,0 Hz) 125 MHz, c) 500 MHz, C) chất tham khảo acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D-glucopyranosid Phổ 1H-NMR hợp chất CR3 xuất tín hiệu nhóm methyl bậc δH 0,94 (3H, s), 1,17 (3H, s) 2,18 (3H, s), proton olefin δH 5,84 (1H, s), 6,32 (1H, d, J = 16,0 Hz), 7,79 (1H, d, J = 16,0 Hz), proton anome δH 4,37 (1H, d, J = 8,0 Hz), tín hiệu gợi ý có mặt cấu trúc khung megastigmane phân tử đường Phổ 13C-NMR DEPT hợp chất CR3 xuất tín hiệu 21 cacbon: carboxyl, carbon bậc 4, nhóm methine, nhóm methylene nhóm methyl Số liệu phổ 1H-NMR 13 C-NMR hợp chất CR3 tương đồng với hợp chất acid 32 (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D-glucopyranosid Trên phổ HMBC, tương tác H-5 (δH 6,32) với C-3 (δC 142,6)/C-4 (δC 132,9)/C-6′ (δC 83,2); H-6 (δH 2,18) với C-2 (δC 126,8)/C-3 (δC 142,6)/C-4 (δC 132,9); H-2 (δH 5,84) với C-1 (δC 174,5)/C-3 (δC 142,6)/C-6 (δC 20,6) khẳng định hai liên kết đôi C-2/C-3 C-4/C-5 Bên cạnh đó́ , số tương tác J H-4 H-5, J = 16,0 Hz khẳng định cấu hình liên kết đơi C-4/C-5 E Tương tác HMBC H-8′ (δH 0,94) với C-1′ (δC 49,8)/C-2′ (δC 42,9)/C-6′ (δC 83,2)/C-7′ (δC 77,2); H-9′ (δH 1,17) với C-4′ (δC 42,8)/C-5′ (δC 87,6)/C-6′ (δC 83,2) khẳng định vị trí hai nhóm methyl C-1′ C-5′ Vị trí cầu epoxy C-5′ C-7′ xác định dựa tương tác HMBC H-7′ (δH 3,76 3,82) với C-1′ (δC 49,8)/C-2′ (δC 42,9)/C-5′ (δC 87,6)/C-6′ (δC 83,2)/C-8′ (δC 16,3) Thêm vào đó́ , tương tác HMBC glc H-1″ (δH 4,37) với C-3′ (δC 74,1) gợi ý phân tử đường glucopyranosyl liên kết với aglycone megastigmane C-3′ So sánh liệu phổ NMR hợp chất CR3 với số liệu phổ hợp chất acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)dihydrophaseic 3′-O-β-D-glucopyranoside [29] cho thấy tương đồng Từ kiện nêu trên, hợp chất CR3 xác định acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D-glucopyranosid Hình 3.11: Cấu trúc hóa học hợp chất CR3 33 3.4 Bàn luận 3.4.1 Hợp chất 1: Acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic Hợp chất acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic acid hữu tồn mật ong với hàm lượng cao nhiều so với acid phenolic khác [30] Hợp chất tạo số chủng vi khuẩn lactic (LAB) [31] loại vi sinh vật khác như: họ trực khuẩn (Bacillus coagulans), nấm (Geotrichum candidum), họ vi khuẩn Brevibacteriaceae, G.candidum B.lactofermentum hình thức lên men [30] Năm 2012, Wanmeng Mu cộng chứng minh hợp chất acid 2hydroxyl-3-phenylpropanoic có hoạt động chống nấm kháng khuẩn rộng rãi [30] Nó ức chế số loại vi khuẩn Gram dương (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus Enterococcus faecalis) vi khuẩn Gram âm (Salmonella enterica, Escherichia coli, Providencia stuartii Klebsiella oxytoca) [30, 32] Ngoài ra, hợp chất chứng minh có đặc tính ức chế, chống lại nấm men (Candida pulcherrima, Candida parapsilosis Rhodotorula mucilaginosa) loạt loài nấm mốc phân lập từ sản phẩm bánh mì, bột mì ngũ cốc (Aspergillus ochraceus, Penicillium roqueforti, Penicillium citrinu, v.v.) [30] Năm 1991, Wang cộng chứng minh hợp chất acid 2-hydroxyl3-phenylpropanoic có tiềm trở thành thuốc điều trị bệnh mạch vành [42] Năm 1997, Yu R Van Scott E cho thấy hợp chất cấp sáng chế để sử dụng thành phần bảo vệ da để giảm nếp nhăn da [42] Ngồi ra, sử dụng làm chất phụ gia thức ăn chăn nuôi để thay kháng sinh thức ăn chăn nuôi [30] 3.4.2 Hợp chất 2: Acid 3-amino butanoic Hợp chất acid 3-amino butanoic acid amin không chứa protein tạo hóa học tổng hợp, chất chiếm vị trí đặc biệt hoạt động 34 phổ rộng Nó giúp tăng cường khả chống tác nhân sinh học phi sinh học thực vật việc tăng tín hiệu thích hợp để chống lại tác nhân định [36] Năm 2001, Jakab cộng chứng minh hợp chất acid 3-amino butanoic tạo sức đề kháng chống lại số lượng lớn căng thẳng sinh học như: công virus, vi khuẩn, nấm, giun tròn động vật chân đốt; căng thẳng phi sinh học như: nóng, lạnh muối [44] Nhiều nghiên cứu cho thấy, hợp chất acid 3-amino butanoic có tác dụng chủ yếu thực vật như: tăng sức đề kháng nhiều loại trồng chống lại số loại mầm bệnh [34], chống lại bệnh sương mai nho [33], chống lại bệnh phấn trắng bí [35],… Năm 2013, Arasimowicz-Jelonek cộng chứng minh hợp chất acid 3-amino butanoic trực tiếp gây tích tụ protein khoai tây điều trị với nitric oxid (NO) [45] Năm 2010, DubreuilMaurizi cộng nghiên cứu ảnh hưởng hợp chất acid 3-amino butanoic protein kinase kích hoạt mitogen (MAPKs) [46] Trong đó, MAPK đóng vai trị tín hiệu quan trọng tương tác trồng mầm bệnh, chúng chuyển kích thích ngoại bào thành phản hồi [47] Cần tiến hành nghiên cứu thêm tác dụng hợp chất acid 3amino butanoic thể người 3.4.3 Hợp chất 3: Acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-Dglucopyranosid Hợp chất acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-Dglucopyranosid chiết xuất từ Cỏ rươi bắc (M Bracteata) cịn chiết xuất từ vỏ thân Ginkgo biloba [29], Annona glabra (cây na biển) [37], hạt Nelumbo nucifera (cây sen) [38] Scaphium Macropodum [39] Một số nghiên cứu đồng phân hợp chất như: hợp chất (2Z,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic acid 3′-O-β-Dglucopyranosid chiết xuất từ vỏ Lycii radicis ứng cử 35 viên điều trị loãng xương [40]; từ chiết xuất chloroform Canarium album phân lập đồng phân là: (1′S, 3′ R, 5′S, 6′R, 2Z, 4E)-acid hydrohydrophaseic-3′-O-β-D-glucopyranoside (1′R, 3′S, 5′R, 8′R, 2Z, 4E) -dihydrophaseic acid-3′-O–β–D-glucopyranoside [41] Năm 2012, Nguyen Thi Thanh Ngan cộng đánh giá tác dụng chống viêm chuyển dịch PPAR thành phần vỏ Ginkgo biloba Hoạt hóa yếu tố hạt nhân cảm ứng kappa-B (NF-κB) cytokine gây viêm (yếu tố hoại tử u (TNFα), IL-1, tín hiệu hoạt hóa tế bào T, yếu tố tăng trưởng chất cảm ứng gây phiên mã vị trí κB) có ảnh hưởng đến số bệnh: ung thư, AIDS rối loạn viêm nhiễm Do đó, ức chế tín hiệu NF-κB trở thành mục tiêu điều trị để điều trị bệnh viêm nhiễm ung thư Hoạt động chống viêm hợp chất đánh giá thông qua ức chế NF-κB suy giảm gen gây viêm (iNOS COX-2) biểu tế bào HepG2 TNFα gây Kết cho thấy hợp chất acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D- glucopyranosid ức chế đáng kể hoạt động phiên mã NF-κB tế bào HepG2 TNFα gây phụ thuộc vào liều lượng với giá trị IC50 =9,1µM Các thụ thể kích hoạt chất tăng sinh peroxisome (PPAR) điều chỉnh biểu gen liên quan đến điều hịa chuyển hóa glucose, lipid cholesterol cách liên kết với yếu tố phản ứng chất tăng sinh peroxisome cụ thể (PPRE) vị trí tăng cường gen điều chỉnh Kết hợp chất acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D- glucopyranosid hoạt hóa hoạt động phiên mã PPARs phụ thuộc vào liều lượng với EC50 =10,4 µM, tăng hoạt động phiên mã PPARα với EC50 =12,4 µM, hoạt hóa PPARγ với giá trị EC50 =11,9 µM, tăng hoạt hóa PPARβ (δ) với giá trị EC50 =10,7 μM [29] 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau: - Đã mô tả đặc điểm thực vật Cỏ rươi bắc - Đã chiết xuất, phân lập hợp chất từ Cỏ rươi bắc: Sử dụng phương pháp ngâm chiết với dung môi EtOH 80% phương pháp sắc ký cột để chiết xuất phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Cỏ rươi bắc - Đã xác định cấu trúc hợp chất phân lập được: Thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan, hợp chất xác định là: acid 2-hydroxyl-3-phenylpropanoic (CR1), acid 3-amino butanoic (CR2), acid (2E,4E,1′R,3′S,5′R,6′S)-dihydrophaseic 3′-O-β-D-glucopyranosid (CR3) Đây lần hợp chất phân lập từ Cỏ rươi bắc Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu, chiết xuất phân lập thêm hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Cỏ rươi bắc - Thử nghiệm chiết xuất từ phận khác Cỏ rươi bắc (thân, rễ,…) phân đoạn khác (n-hexan, nước,…) để tìm kiếm thêm thành phần có hoạt tính - Đánh giá tác dụng chống viêm, kháng khuẩn, giảm đau phân đoạn dịch chiết từ Cỏ rươi bắc 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Tập 2, NXB Y học Phạm Hoàng Hộ (2003), Cây cỏ Việt Nam, Tập 3, NXB Trẻ, tr 376 380 Lê Phương Thảo (2019), “Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong)”, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Đại học, Trường đại học Y Dược, ĐHQGHN Tài liệu tiếng Anh Atkinson J, Epand RF, Epand RM (2008), "Tocopherols and tocotrienols in membranes: a critical review", Free radical biology and medicine, 44(5), tr 739-764 Bermudez Y, Ahmadi S, Lowell NE cộng (2007), "Vitamin E suppresses telomerase activity in ovarian cancer cells", Cancer Detection and Prevention, 31(2), tr 119-128 Betti M, Minelli A, Canonico B cộng (2006), "Antiproliferative effects of tocopherols (vitamin E) on murine glioma C6 cells: homologue-specific control of PKC/ERK and cyclin signaling", Free Radical Biology and Medicine, 41(3), tr 464-472 Birringer M, Lington D, Vertuani S cộng (2010), "Proapoptotic effects of long-chain vitamin E metabolites in HepG2 cells are mediated by oxidative stress", Free Radical Biology and Medicine, 49(8), tr 1315-1322 Byng JW, Smets EF, van Vugt R cộng (2018), "The phylogeny of angiosperms poster: a visual summary of APG IV family relationships and floral diversity", The Global Flora, Ch’ng YS, Tan CS, Loh YC cộng (2016), "Vasorelaxation study and tri-step infrared spectroscopy analysis of Malaysian local herbs", Journal of pharmacopuncture, 19(2), tr 145 10 de Oliveira Pellegrini MO, Faden RB, de Almeida RF (2016),"Taxonomic revision of Neotropical Murdannia Royle (Commelinaceae)", PhytoKeys(74), tr 35-78 11 Faden RB, Inman KE (1996), "Leaf anatomy of the African genera of Commelinaceae: Anthericopsis and Murdannia", The biodiversity of African plants, tr 464-471 12 Govaerts R (2004), "World Checklist of Monocotyledons Database in ACCESS: 1–54382", The Board of Trustees of the Royal Botanic Gardens, Kew 13 Hao J, Zhang B, Liu B cộng (2009), "Effect of α‐tocopherol, N‐acetylcysteine and omeprazole on esophageal adenocarcinoma formation in a rat surgical model", International Journal of Cancer, 124(6), tr 1270-1275 14 Khan TH, Sultana S (2006), "Apigenin induces apoptosis in Hep G2 cells: possible role of TNF-α and IFN-γ", Toxicology, 217(2-3), tr 206212 15 Kwon YI, Apostolidis E, Shetty K (2008), "Inhibitory potential of wine and tea against α‐Amylase and α‐Glucosidase for management of hyperglycemia linked to type diabetes", Journal of Food Biochemistry, 32(1), tr 15-31 16 Li DL, Zheng XL, Duan L cộng (2017), "Ethnobotanical survey of herbal tea plants from the traditional markets in Chaoshan, China", Journal of Ethnopharmacology, 205, tr 195-206 17 Miyoshi N, Naniwa K, Kumagai T cộng (2005), "αTocopherol-mediated caspase-3 up-regulation enhances susceptibility to apoptotic stimuli", Biochemical and biophysical research communications, 334(2), tr 466-473 18 Naik MC, Rao BRP (2017), "A new species of dewflower Murdannia sanjappae (Commelinaceae) from Andaman Islands, India", Journal of Threatened Taxa, 9(11), tr 10909-10913 19 Ooi KL, Loh SI, Tan ML cộng (2015), "Growth inhibition of human liver carcinoma HepG2 cells and α-glucosidase inhibitory activity of Murdannia bracteata (CB Clarke) Kuntze ex JK Morton extracts", Journal of Ethnopharmacology, 162, tr 55-60 20 Panigo E, Ramos J, Lucero L cộng (2011), "The inflorescence in Commelinaceae", Flora-Morphology, Distribution, Functional Ecology of Plants, 206(4), tr 294-299 21 Shyur LF, Feng JH, Apaya MK (2019), “Galactolipids-enriched plant extracts and the uses thereof”, US Patent Application Publication 22 Wang GJ, Chen SM, Chen WC cộng (2007), "Selective inducible nitric oxide synthase suppression by new bracteanolides from Murdannia bracteata", Journal of Ethnopharmacology, 112(2), tr 221227 23 Wang YC, Huang TL (2005), "Screening of anti-Helicobacter pylori herbs deriving from Taiwanese folk medicinal plants", FEMS Immunology & Medical Microbiology, 43(2), tr 295-300 24 Wu Z, Al-Shehbaz IA (2000), “Flora of China 24 Flagellariaceae through Marantaceae”, Science Press, tr 25-31 25 Yam MF, Ang LF, Lim CP cộng (2010), "Antioxidant and hepatoprotective effects of Murdannia bracteata methanol extract", Journal of acupuncture and meridian studies, 3(3), tr 197-202 26 Mayur D Nandikar & Rajaram V Gurav (2015), “Revision of the genus Murdannia (Commelinaceae) in India”, Phytodiversity, 2(1), tr 56-112 27 Guei Jane Wang cộng (2007), “Selective inducible nitric oxide synthase suppression by new bracteanolides from Murdannia bracteata”, Journal of Ethnopharmacology, 112, 221–227 28 Nguyen Ngoc Tuan (2016), “Chemical constituents from the mycelium of isaria japonica yasuda”, VietNam Journal of Science and Technology, 54(2C), tr 334-340 29 Ngan N.T.T, Quang T.H, cộng (2012), “Anti-inflammatory and PPAR transactivational effects of components from the stem bark of Ginkgo biloba”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 60, tr 2815–2824 30 Mu W, Yu S cộng (2012), “Recent research on 3-phenyllactic acid, a broad-spectrum antimicrobial compound”, Applied Microbiology and Biotechnology, 95(5), tr 1155–1163 31 O Cortés-Zavaleta, A López-Malo cộng (2014), “Antifungal activity of lactobacilli and its relationship with 3-phenyllactic acid production”, International Journal of Food Microbiology, 173, tr 30– 35 32 Dieuleveux V, Lemarinier S, & Guéguen M (1998), “Antimicrobial spectrum and target site of d-3-phenyllactic acid”, International Journal of Food Microbiology, 40(3), tr 177–183 33 Slaughter A R, Hamiduzzaman M M cộng (2008), “Betaaminobutyric acid-induced resistance in grapevine against downy mildew: involvement of pterostilbene”, European Journal of Plant Pathology, 122(1), tr 185–195 34 Bengtsson T, Weighill D cộng (2014), “Proteomics and transcriptomics of the BABA-induced resistance response in potato using a novel functional annotation approach”, BMC Genomics, 15(1), tr 315 35 Zeighaminejad R, Sharifi-Sirchi G.R cộng (2016), “Induction of resistance against powdery mildew by Beta aminobutyric acid in squash”, Journal of Applied Botany and Food Quality 89, tr 176 – 182 36 Thevenet D, Pastor V cộng (2016), “The priming molecule βaminobutyric acid is naturally present in plants and is induced by stress”, New Phytologist, 213(2), 552–559 37 Hien N T T, Nhiem N X cộng (2015), “Chemical constituents of the Annona glabrafruit and their cytotoxic activity”, Pharmaceutical Biology, 53(11), 1602–1607 38 U J Youn, J Lee cộng (2011), “Identification of a New Isomer of Dihydrophaseic Acid 3'-O-β-D-Glucopyranoside from Nelumbo Nucifera”, Bulletin of the Korean Chemical Society, 32(11), tr 40834085 39 Tu V.A, Diep C.N cộng (2016), “Glucosides and urea derivatives from the seeds of Scaphium Macropodum (Miq.) Beumée”, VietNam Journal of Science and Technology, 54(2), tr 207-213 40 Park E, Kim MC cộng (2016), “Effects of Dihydrophaseic Acid 3′-O-β-d-Glucopyranoside Isolated from Lycii radicis Cortex on Osteoblast Differentiation”, Molecules, 21(9), tr 1260 41 Yang LP, Gu XL cộng (2018), “Chemical constituents from Canarium album Raeusch and their anti-influenza A virus activities” Journal of Natural Medicines, 72(3), tr 808–815 42 Wang J, Shao Y cộng (1991), “Experimental studies of βphenyllactic acid on the coronary system”, Acta Universitatis Medicinalis Secondae Shanghai 18, tr 295–297 43 Yu R, Van Scott E (1997), “Method of using 3-phenyllactic acid for treating wrinkles”, US Patent Application Publication 44 Jakab G, Cottier V cộng (2001), “β-Aminobutyric acid-induced resistance in plants”, European Journal of Plant Pathology 107, tr 29– 37 45 Arasimowicz-Jelonek M, Kosmala A cộng (2013), “The proteome response of potato leaves to priming agents and Snitrosoglutathione”, Plant Science 198, tr 83–90 46 Dubreuil-Maurizi C, Trouvelot S cộng (2010), “β-Aminobutyric acid primes an NADPH oxidase-dependent reactive oxygen species production during grapevine-triggered immunity”, Molecular Plant Microbe Interactions 23, tr 1012–1021 47 Bigeard J, Colcombet J, Hirt H (2015), “Signaling mechanisms in pattern-triggered immunity (PTI)”, Molecular Plant 8, tr 521–539 ... sinh học Cỏ rươi bắc Việt Nam hạn chế Để góp phần xây dựng sở khoa học cho việc ứng dụng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh, lựa chọn thực đề tài: “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Cỏ rươi. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ======  ====== ĐỖ THỊ THANH HƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ RƯƠI LÁ BẮC (Murdannia Bracteata... KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau trình nghiên cứu thực nghiệm, đề tài khóa luận thu số kết sau: - Đã mô tả đặc điểm thực vật Cỏ rươi bắc - Đã chiết xuất, phân lập hợp chất từ Cỏ rươi bắc: Sử