Azithromycin là kháng sinh thuộc nhóm Macrolid. Có phổ kháng khuẩn trên vi khuẩn Gram (+) và vi khuẩn Gram (). Được dùng trong các trường hợp như: nhiễm khuẩn da, mô mềm, nhiễm khuẩn tiết niệu, nhiễm khuẩn hô hấp...sự ra đời của Azithromycin đã đem lại hiệu quả cao trong điều trị nhiễm khuẩn. Tuy nhiên, trên thị trường vẫn xuất hiện các loại kháng sinh giả, thuốc không đạt chất lượng vẫn còn lưu hành. Do đó, để đảm bảo chất lượng và nâng cao hiệu quả sử dụng kháng sinh thì công tác kiểm tra chất lượng rất quan trọng. Để kiểm tra các chỉ tiêu về thuốc có thể dựa vào Dược điển Việt Nam V, hoặc dược điển của các quốc gia có nền Y học phát triển như: Mỹ, Anh, EU.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠ KHOA DƯỢC BÁO CÁO KIỂM NGHIỆM DƯỢC PHẨM Chuyên đề: SO SÁNH CHUYÊN LUẬN AZITHROMYCIN CAPSULES GIỮA DĐVN V, DƯỢC ĐIỂN ANH VÀ MỸ Cần Thơ, 2021 SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên MỤC LỤC Trang Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên CHƯƠNG I: PHẦN MỞ ĐẦU ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, nhu cầu sử dụng chế phẩm kháng sinh để điều trị bệnh phổ biến Sự đời nhiều dòng kháng sinh mạnh, phổ rộng Cephalosporin, Macrolid, Quinolon, Phenicol… thành tựu vĩ đại y học, đem lại hiệu cao điều trị nhiễm khuẩn Tuy nhiên, thuốc kháng sinh giả, thuốc không đạt chất lượng lưu hành thị trường Do đó, để đảm bảo chất lượng nâng cao hiệu sử dụng kháng sinh cơng tác kiểm tra chất lượng kháng sinh quan trọng Azithromycin kháng sinh nhóm Macrolid, có cấu trúc 15 nguyên tử cacbon Có phổ tác dụng vi khuẩn gram (+): streptococus pneumonia, Staphylococus aureus, phổ tác dụng Gram (-): Haemophilus influenzae, Moraxella catahalis, Acinobacter, Neisseria gonorrhoea…một số chủng vi khuẩn khác nhạy với Azithromycin: Corynebacterium diphtheriae, Clostriduim perfringens, Probionibacterium ances Nó tác dụng cách gắn vào tiểu đơn vị 50S Ribosom vi khuẩn, ngăn cản trình hình thành protein Cần sử dụng kháng sinh cách khoa học hợp lý để mang lại hiểu tối ưu điều trị bệnh tránh vi khuẩn đề kháng thuốc Bên cạnh cơng tác kiểm tra chất lượng chế phẩm kháng sinh chứa hoạt chất Azithromycin bên thị trường cần thiết góp phần đảm bảo an tồn chất lượng đến tay người tiêu dùng mang lại hiệu Để kiểm tra tiêu thuốc dựa vào Dược điển Việt Nam V, dược điển quốc gia có Y học phát triển như: Mỹ, Anh, EU MỤC TIÊU • Mục tiêu tổng quát: So sánh chuyên luận thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) yếu tố liên quan Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ • Mục tiêu cụ thể: So sánh chuyên luận thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ So sánh yêu cầu kiểm nghiệm thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ Từ kết thu chuyên đề so sánh thuốc này, ta biết thêm điểm giống khác thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) quy trình kiểm nghiệm thuốc ba Dược Điển Việt Nam V, Anh Mỹ đưa Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên CHƯƠNG II: TỔNG QUAN VỀ AZITHROMYCIN 2.1 Nguồn gốc, công thức cấu tạo: Azithromycin kháng sinh macrolid hệ 2, bán tổng hợp từ erythromycin A (chứa vòng lacton 15 cấu tử), phát vào năm 1980 Công thức phân tử: C38H72N2O12 Phần tử lượng: 749,0 Công thức cấu tạo: Hình 1: Cơng thức cấu tạo Azithromycin Danh pháp: (2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-Dideoxy-3-C-methyl-3-Omethyl-α-L-ribo-hexopyranosyl)oxy]-2-ethyl-3,4,10-trihydroxy-3,5,6,8,10,12,14heptamethyl-11-[[3,4,6-trideoxy-3-(dimethylamino)-B-D-xylo-hexopyranosyl]oxy]-1-oxa-6azacyclopentadecan-15-one 2.2 Tính chất vật lý, tính chất hóa học: 1.2.1 Tính chất vật lý: - Dạng bột màu trắng (hoặc trắng ngà), không mùi, vị đắng Năng suất quay cực từ -45°C đến -49°C (dung dịch 20 mg/ml ethanol) Không tan nước, tan dung môi hữu methanol, ethanol, aceton, diethyl ether, chloroform dung dịch acid hydrocloric lỗng 2.2.2 Tính chất hóa học: - Tính base: osamin (đường amin) tạo ra, pKa = 8,74 Tạo muối dễ tan nước với acid vô hữu Phản ứng màu: với acid HCI, H2SO4 đậm đặc cho màu nâu đỏ (do diện phần đường 2-desoxy) Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên - Hấp thụ UV: có vịng lacton có nhiều dây nối A hấp thụ ánh sáng vùng từ ngoại xa 2.3 Dược động học, chế tác dụng dược lý: 2.3.1 Dược động học: Hấp thu: Azithromycin hấp thu nhanh có sinh khả dụng đường uống khoảng 40% Nồng độ thuốc tế bào cao huyết tương, dùng điều trị vi khuẩn nội bào tốt Thức ăn làm giảm thu thuốc Phân bố: Thuốc phân bố rộng khắp thể, chủ yếu môi như: phổi, amidan, tiền liệt tuyến, bạch cầu hạt đại thực bảo,…, cao máu nhiều lần Tuy nhiên, nồng độ thuốc hệ thống thần kinh trung ương thấp Chuyển hóa: Một lượng nhà azithromycin bị khử methyl gan, thải trừ qua mật dạng không biến đổi phần dạng chuyển hóa Thải trừ: Khoảng 6% liều uống thải trừ qua nước tiểu vòng 72 dạng không biến đổi 2.3.2 Cơ chế, tác dụng dược lý: Tác dụng: Azithromycin kháng sinh có phổ kháng khuẩn rộng thuộc nhóm macrolid Thuốc có tác dụng diệt khuẩn mạnh, có tác dụng tốt vi khuẩn Gram dương như: Streptococcus, Pneumococcus, Staphylococcus aureus,… Có tác dụng tốt vi khuẩn Gram âm như: Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Có tác dụng vừa phải E.coli, Salmonella enteritis, Salmonella typhi, Enterobacter, Cơ chế tác dụng: Azithromycin gắn kết với tiểu đơn vị 50S ribosom vi khuẩn gây bệnh, qua ức chế q trình tổng hợp protein chúng 2.4 Chỉ định, tác dụng không mong muốn: 2.4.1 Chỉ định Azithromycin định dùng trường hợp nhiễm khuẩn vi khuẩn nhạy cảm với thuốc như: nhiễm khuẩn đường hô hấp (viêm phế quản, viêm phổi, nhiễm khuẩn da mô mềm, viêm tai giữa), đường hô hấp (viêm xoang, viêm họng, viêm amidan), nhiễm khuẩn đường sinh dục chưa biến chứng Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae không đa kháng (vi khuẩn hội bệnh nhân nhiễm HIV/AIDS) 2.4.2 Tác dụng không mong muốn Azithromycin dung nạp tốt, tỷ lệ tác dụng không mong muốn thấp Hay gặp rối loạn tiêu hóa với triệu chứng buồn nôn, đau bụng, co cứng bụng, nôn, đầy hơi, tiêu chảy thường nhẹ xảy so với dùng erythromycin Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Ảnh hưởng thính giác: sử dụng lâu dài liều cao, azithromycin làm giảm sức nghe có hồi phục số người bệnh 2.5 Liều lượng, cách dùng: - Dùng lần ngày, uống trước bữa ăn sau ăn Người lớn: Ngày đầu uống liều 500 mg, dùng tiếp ngày với liều đơn 250 - mg/ngày Trẻ em: Liều gợi ý cho trẻ em ngày 10 mg/kg thể trọng mg/kg ngày, từ ngày thứ đến ngày thứ 5, uống lần ngày 2.6 Dạng bào chế, số chế phẩm: 2.6.1 Dạng bào chế - Viên nang azithromycin dihydrat tương đương azithromycin 250 mg 500 mg Bột pha hỗn dịch uống azithromycin dihydrat tương đương 200 mg azithromycin/5 ml, - lọ bột đông khô pha tiêm 500 mg Viên nén viên nén bao phim tương đương azithromycin 125 mg, 500 mg; viên nén phân tán tương đương azithromycin 100 mg 2.6.2 Một số chế phẩm Một số dạng chế phẩm chứa hoạt chất azithromycin thị trường như: viên nén bao phim Azithromycin 250, viên nang Azissel 250, thuốc bột pha hỗn dịch uống Azithromycin 200, viên nang Azithrox 250, Viên nén bao phim Azithromycin 250 Viên nang Azissel 250 Thuốc bột pha hỗn dịch uống Viên nang Azicine Azithromycin 200 Hình 2: Một số chế phẩm chứa hoạt chất azithromycin có thị trường Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên CHƯƠNG III: KIỂM NGHIỆM THUỐC VIÊN NANG AZITHROMYCIN 3.1 TÍNH CHẤT Nang cứng, bột thuốc nang màu trắng trắng ngà, không mùi, vị đắng 3.2 ĐỘ ĐỒNG ĐỀU KHỐI LƯỢNG Dược điển Việt Nam V Phép thử độ đồng khối lượng đánh giá kết thuốc nang thực theo phương pháp phụ lục 11.3, DĐVN V Cân riêng biệt 20 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình Khơng có q hai đơn vị có khối lượng có khối lượng nằm ngồi giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình khơng có đơn vị có khối lượng vượt gấp đơi giới hạn Cân khối lượng nang Tháo rời hai nửa vỏ nang, dùng lau vỏ cân khối lượng vỏ Khối lượng thuốc nang hay gói hiệu số khối lượng nang thuốc khối lượng vỏ nang Tiến hành tương tự với 19 đơn vị khác lấy ngẫu nhiên Tính khối lượng trung bình nang thuốc Khối lượng trung bình Phần trăm chênh lệch Nhỏ 300mg ± 10% Bằng lớn 300mg ± 7.5% Bảng 3.2 Giới hạn cho phép chênh lệch khối lượng với viên nang Dược điển Anh 2020 Phép thử độ đồng khối lượng đánh giá kết thuốc nang thực theo phương pháp 2.9.5 theo dược điển Anh 2020 Cách tiến hành tương tự phần mô tả dược điển Việt Nam V Dược điển Mỹ 2020 Phép thử độ đồng khối lượng đánh giá kết thuốc nang thực theo phụ lục 905, USP Volume Cân riêng biệt 10 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình Khơng có q hai đơn vị có khối lượng có khối lượng nằm ngồi giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình (±7.5%) khơng có đơn vị có khối lượng vượt gấp đơi giới hạn Cân khối lượng nang Tháo rời hai nửa vỏ nang, dùng lau vỏ cân khối lượng vỏ Khối lượng thuốc nang hay gói hiệu số khối lượng nang thuốc khối lượng vỏ nang Tiến hành tương tự với đơn vị khác lấy ngẫu nhiên Tính khối lượng trung bình nang thuốc Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Hình 3: Bảng so sánh độ đồng khối lượng DĐ Việt Nam – Anh – Mỹ 3.3 ĐỊNH TÍNH Dược điển Việt Nam V Trong phần Định lượng, pic sắc ký đổ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic sắc ký đị dung dịch chuẩn Dược điển Anh 2020 A Hòa tan lượng viên nang chứa 0,5 g Azithromycin với 50 ml Diclometan Lọc (phù hợp với lọc nylon 0,45 um) làm bay dịch lọc đến khô dòng nitơ Phổ hấp thụ hồng ngoại, Phụ lục II A, phù hợp với phổ tham chiếu Azithromycin (RS 487) Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên B Trong phần định lượng, thời gian lưu pic sắc ký đồ dung dịch (1) tương tự thời gian lưu pic sắc ký đồ dung dịch (2) Dược điển Mỹ 2020 Trong phần Định lượng, pic sắc ký đổ dung dịch thử phải có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic sắc ký đị dung dịch chuẩn 3.4 ĐỘ HÒA TAN Dược điển Việt Nam V Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường hòa tan: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,0 Pha dung dịch đệm phosphat pH 6,0: Pha 6l dung dịch dinatri hydrophosphat 0,1 M điều chỉnh tới pH 6,0 ± 0,1 khoảng 40 ml acid hydrocloric (TT), thêm vào 600 mg trypsin (TT), trộn Tốc độ quay: 100 r/min • Thời gian: 45 Cách tiến hành: Xác định lượng azithromycin hoà tan phương pháp sắc ký lỏng với điều kiện sắc ký pha động mô tả mục Định lượng Pha động: Methanol - nước - amoniac (80 : 19,9 : 0,1) Dung dịch thử: Sau thời gian hòa tan qui định, lấy phần dịch hòa tan, lọc Dung dịch chuẩn: Cân xác lượng thích hợp azithromycin chuẩn hịa tan mơi trường hịa tan pha lỗng bước cần với mơi trường hịa tan để thu dung dịch có nồng độ tương đương với dung dịch thử • • Điều kiện sắc ký: Cột kích thước (25 cm × 4,6 mm) nhồi pha tĩnh B (5 μm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 215 nm Tốc độ dịng: 1,5 ml/min Thể tích tiêm: 20 l u cầu: Khơng 75% (Q) lượng azithromycin, C38H72N2O12 , so với lượng ghi nhãn hòa tan 45 Dược điển Anh 2020 Tuân thủ yêu cầu phép thử độ hòa tan viên nén viên nang, Phụ lục XII B1 Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường hòa tan: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,0 Pha dung dịch đệm phosphat pH 6,0: Pha 6l dung dịch dinatri hydrophosphat 0,1 M điều chỉnh tới pH 6,0 ± 0,1 khoảng 40 ml acid hydrocloric (TT), thêm vào 600 mg trypsin (TT), trộn Tốc độ quay: 100 v/phút • Thời gian: 45 Cách tiến hành: Xác định lượng azithromycin hoà tan phương pháp sắc ký lỏng Kiểm nghiệm dược phẩm Trang Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Dung môi A: 0.67% mg/ml Kali hydrophosphat điều chỉnh đến pH 8.0 acid phosphoric axetonitril R1 (40;60) (1) Sau 45 phút, lấy mẫu dung dịch chứa Azithromycin MTHT, lọc (2) 0.027% mg/ml Azithromycin chuẩn mơi trường hịa tan (3) 0.05% mg/ml Azithromycin chuẩn tạp chất A dung môi A Pha động: 0.67% mg/ml kali hydrophosphat điều chỉnh đến pH 11.0 Kali hydroxit 56% mg/ml Axetonitril R1 (40;60) • Điều kiện sắc ký: (a) Sử dụng cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi polyme vinyl octadecylsilyl để sắc ký (5 μm) (b) Sử dụng dung dịch rửa giải đẳng cấp pha động mơ tả phía (c) Sử dụng tốc độ dòng ml/ phút (d) Sử dụng nhiệt độ cột 40°C (e) Sử dụng bước sóng phát 210 nm (f) Bơm 20 μL dung dịch • Tính phù hợp hệ thống: - Trên sắc ký đồ dung dịch (2), hệ số đối xứng pic Azithromycin nằm - khoảng từ 0,8 đến 2,0; Trên sắc ký đồ dung dịch (3), độ phân giải pic tạp chất A Azithromycin tạo 1,5 • u cầu: Khơng 75% (Q) lượng azithromycin, C38H72N2O12 , so với lượng ghi nhãn hòa tan 45 Dược điển Mỹ 2020 Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Mơi trường hịa tan: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,0 Pha dung dịch đệm phosphat pH 6,0: Pha 6l dung dịch dinatri hydrophosphat 0,1 M điều chỉnh tới pH 6,0 ± 0,1 khoảng 40 ml acid hydrocloric (TT), thêm vào 600 mg trypsin (TT), trộn Tốc độ quay: 100 v/phút • Thời gian: 45 Cách tiến hành: Xác định lượng Azithromycin hoà tan phương pháp sắc ký lỏng với pha động điều kiện sắc ký mô tả phần Định lượng Pha động: Hòa tan 5,8 g kali photphat 2130 ml nước thêm 870 ml axetonitril khoảng ml kali hydroxit 10 N đến pH 11,0 ± 0,1, qua lọc thích hợp Dung dịch gốc chuẩn: 0,165 mg / ml Azithromycin chuẩn axetonitril Quay siêu âm Dung dịch chuẩn: 3,84 µg / ml Azithromycin từ dung dịch gốc chuẩn pha động Dung dịch thử: Lấy phần dung dịch thử đem lọc qua lỗ 0.5µg Lấy ml dịch lọc vào bình định mức 25 ml thêm pha động đến vạch Lấy 4,0 ml dung dịch vào bình định mức 25 ml thứ hai thêm pha động đến vạch • Điều kiện sắc ký: Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 10 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Qun - Máy dị: Máy dị điện hóa amperometric Điện cực: Điện cực carbon thủy tinh kép + Điện cực 1: + 0,70 ± 0,05 V + Điện cực 2: + 0,82 ± 0,05 V Cột kích thước: 4,6 mm x cm; L29 Tốc độ dòng: 1,5 ml / phút Thể tích tiêm mẫu: 50 μl • Phân tích Mẫu: Dung dịch chuẩn dung dịch thử - Cơng thức tính lượng Azithromycin (C38H72N2O12) hịa tan rU = đáp ứng peak dung dịch thử rS = đáp ứng peak dung dịch Chuẩn CS = nồng độ Azithromycin chuẩn dung dịch chuẩn (mg /ml) L = yêu cầu nhãn (mg/Capsule) D = hệ số pha lỗng dung dịch mẫu V = thể tích mơi trường, 900 ml • u cầu: Khơng 75% (Q) lượng azithromycin, (C 38H72N2O12), so với lượng ghi nhãn hòa tan 45 Bảng 3.4: Bảng so sánh độ hòa tan theo Dược điển Việt Nam – Anh – Mỹ Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 11 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên 3.5 ĐỊNH LƯỢNG Dược điển Việt Nam V Định lượng theo phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Methanol - nước - amoniac (80 : 19,9 : 0,1) Dung dịch chuẩn: Hòa tan lượng Azithromycin chuẩn pha động để thu dung dịch có nồng độ Azithromycin khoảng 1,0 mg ml Dung dịch thử: Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 50 mg azithromycin vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml pha động lắc siêu âm 15 phút Pha loãng pha động vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc • • Điều kiện sắc ký: Cột kích thước (25 cm × 4,6 mm) nhồi pha tĩnh B (5 μm) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 215 nm Tốc độ dịng: 1,5 ml/min Thể tích tiêm: 20 l Cách tiến hành: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng Azithromycin, C38H72N2O12, có đơn vị chế phẩm dựa vào diện tích pic azithromycin thu từ sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C38H72N2O12 azithromycin chuẩn • Kết quả: Hàm lượng Azithromycin C38H72N2O12 từ 90.0% - 100.0% so với lượng ghi nhãn Dược điển Anh 2020 Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng, Phụ lục III D, sử dụng dung dịch sau Dung môi C: 0.67 % mg/ml dung dịch dipotassium hydrophosphat điều chỉnh đến pH 8,0 axit axit phosphoric axetonitril R1 (40; 60) (1) Lắc lượng hỗn hợp 20 viên nang chứa 0,5 g Azithromycin với 40 ml dung mơi C, pha lỗng thành 100 ml với dung môi lọc (lọc nylon 0,45 μm) Pha loãng 1ml dịch lọc thành 10ml dung môi C (2) 0,05% mg/ml Azithromycin chuẩn dung môi C (3) 0,05% mg/ml Azithromycin chuẩn tạp chất azithromycin A dung môi C Pha động: 0.67% mg/ml kali hydrophosphat điều chỉnh đến pH 11.0 Kali hydroxit 56% mg/ml Axetonitril R1 (40;60) • Điều kiện sắc ký: - Sử dụng cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi polyme vinyl - octadecylsilyl để sắc ký (5 μm) Sử dụng dung dịch rửa giải đẳng cấp pha động mơ tả phía Sử dụng tốc độ dịng ml/ phút Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 12 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Sử dụng nhiệt độ cột 40°C Sử dụng bước sóng phát 210 nm Bơm 10 μL dung dịch • Tính phù hợp hệ thống: - Trên sắc ký đồ dung dịch (3), độ phân giải pic tạp chất A - Azithromycin 1,5 • Kết quả: Hàm lượng Azithromycin C38H72N2O12 từ 95.0% - 105.0% so với lượng ghi nhãn Dược điển Mỹ 2020 Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng Pha động: Hòa tan 5,8g kali photphat 2130 ml nước thêm 870 ml axetonitril khoảng ml kali hydroxit 10 N đến pH 11,0 ± 0,1, qua lọc thích hợp Dung dịch gốc chuẩn: 0,165 mg / ml Azithromycin chuẩn axetonitril Dung dịch chuẩn: 3,3 µg/ml Azithromycin chuẩn từ dung dịch gốc chuẩn pha động Dung dịch gốc phù hợp với hệ : 0,16 mg/ml Azaerythromycin A Acetonitril Pha động (1: 9) Hòa tan Acetonitril, sử dụng 10% thể tích cuối Quay ly tâm Dung dịch phù hợp hệ: 3,2 µg /ml azaerythromycin A từ dung dịch gốc phù hợp với hệ 3,3 µg /ml Azithromycin từ dung dịch gốc chuẩn pha động Dung dịch gốc thử: lấy lượng tương ứng 20 chế phẩm Chuẩn bị dung dịch Azithromycin khan mg/ml Acetonitril Hòa tan phần lượng viên nang trộn trước 70% thể tích Acetonitril cuối lắc phương pháp học 30 phút Pha loãng axetonitril đến vạch mức Cho 40 mL thu vào ống ly tâm ly tâm Sử dụng phần phía để chuẩn bị dung dịch thử Dung dịch thử: 3,2 µg / mL Azithromycin từ dung dịch gốc mẫu pha động • Điều kiện sắc ký: - Máy dị: Máy dị điện hóa amperometric - Điện cực: Điện cực carbon thủy tinh kép + Điện cực 1: + 0,70 ± 0,05 V + Điện cực 2: + 0,82 ± 0,05 V Cột kích thước: 4,6 mm x cm; L29 Tốc độ dòng: 1,5 ml / phút Thể tích tiêm mẫu: 50 μl • Tính phù hợp hệ thống: Mẫu: Dung dịch chuẩn dung dịch phù hợp với hệ - Thời gian lưu tương đối azaerythromycin A azithromycin với cột L29 - - 0,7 1,0 Thời gian lưu giữ tương đối Azaerythromycin A Azithromycin với cột L49 tương ứng 0,8 1,0 Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 13 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Độ phân giải: không nhỏ 2.5 Azaerythromycin A Azithromycin Độ lệch chuẩn tương đối: không lớn 2.0%, dung dịch chuẩn • Phân tích Mẫu: Dung dịch chuẩn dung dịch thử - Công thức tính % lượng Azithromycin (C38H72N₂O12) viên nang: rU = đáp ứng peak dung dịch thử rS = đáp ứng peak dung dịch Chuẩn CS = nồng độ Azithromycin chuẩn dung dịch chuẩn (mg /ml) CU = nồng độ lý thuyết Azithromycin dung dịch mẫu (µg /ml) P = hiệu lực azithromycin USP Azithromycin RS (µg /mg) F = hệ số chuyển đổi, 0,001 mg /μg • Kết quả: Hàm lượng Azithromycin C38H72N2O12 từ 90.0% - 100.0% so với lượng ghi nhãn Bảng 3.5 Bảng so sánh định lượng theo Dược điển VN- Anh – Mỹ 3.6 TẠP CHẤT LIÊN QUAN Dược điển Anh 2020 Phương pháp săc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động A: Hòa tan 1,8 g dinatri hydrophosphat khan (TT) vào 1000 ml nước điều chỉnh đên pH 8.9 dung dịch acid phosphoric loãng (TT) dung dịch natri hydroxyd loãng (TT) Pha động B: Methanol (TT1) – Acetonitril (TT1) (250: 750) Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 14 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Hỗn hợp dung môi: Dung dịch đệm pH 10.0 – acetonitril (TT 1) – Methanol (TT1) (350:300:350) Dung dịch đệm pH 10.0: Dung dịch amoni dihydrophosphat 0.173% điều chỉnh đến pH 10.0 amoniac (TT) Dung dịch thử: Hịa tan 0.2g chế phẩm hỗn hợp dung mơi pha lỗng thành 25ml với dung mơi Dung dịch đối chiếu (1): Pha loãng 1ml dung dịch thử thành 100ml hỗn hợp dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Hòa tan azithromycin chuẩn dùng để đánh giá tính phù hợp hệ thống (chứa tạp chất F H J) cỏ lọ chuẩn 1,0 ml hỗn hợp dung môi, siêu âm Dung dịch đổi chiều (3): Hòa tan 8,0 mg azithromycín chuẩn dùng để định tính pic (chửa tạp chất A, B, C, E, F, G, I, J, L, M, N, O P) 1,0ml hỗn hợp dung mơi • - Điều kiện sắc ký: Cột kích thước (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh endcapped octadecyỉsỉìyl atnorphous • organosiỉica poỉymer dùng cho phổ khối (5 pin) Nhiệt độ cột: 60 °C Detector quang phổ hỉ ngoại đặt bước sóng 210 nm Tốc độ dịng: 1,0 ml/min Thể tích tiêm: 50 μl Cách tiến hành: Tiến hành sắc ký theo chương trình dung mơi sau: Thời gian (Phút) 0-25 25-30 30-80 80-81 81-93 Pha động A (% tt/tt) 50-45 45-50 40-25 25-50 50 Pha động B (% tt/tt) 50-55 55-60 60-75 75-50 50 Định tính tạp chất: Sử dụng sắc ký đồ cung cấp kèm theo azithromycin chuẩn dùng để định tính pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (3) để xác định pic tạp chất A, B, C, E, F, G, I, I, L, M, N, O P Sử dụng sắc ký đồ cung cấp kèm theo azithromycin chuẩn dùng để đánh giá tính phù hợp hệ thống sắc ký đồ dung địch đối chiếu (2) để xác định pic tạp chất H, Thời gian lưu tương đối so với Azithromycin (thời gian lưu khoảng 45 phút đến 50 phút): Tạp chất L khoảng 0,29; tạp chất M khoảng 0,37; tạp chất E khoảng 0,43; tạp chất F khoảng Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 15 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên 0,51; tạp chẩt D khoảng 0,54; tạp chất J khoảng 0,54; tạp chất I khoảng 0,61; tạp chất C khoảng 0,73; tạp chất N khoảng 0,76; tạp chất H khoảng 0,79; tạp chất A khoảng 0,83; tạp chất P khoảng 0,92; tạp chất O khoảng 1,23; tạp chất G khoảng 1,26; tạp chất B khoảng 1,31 Kiểm tra tính phù hợp hệ thống: Trên sắc ký đồ dung dich đối chiếu (2), tỷ sổ đỉnh–hõm (Hp/Hv) 1,4 Hp chiều cao đỉnh pic tạp chất J so với đường Hv chiều cao đáy hõm tách hai pic tạp chất J tạp chất F so với đường • Giới hạn: Hệ số hiệu chỉnh: Để tính hàm lượng, nhân diện tích pic tạp chất sau với hệ sổ hiệu chỉnh tương ứng: Tạp chất F 0,3; tạp chất G 0,2; tạp chất H 0,1; tạp chất L 2,3; tạp chất M 0,6; tạp chất N 0,7 - Tạp chất B: Diện tích pic tạp chất B khơng lớn lần diện tích pic thu - sắc ký đồ dung dịch đối chiếu ( 1) (2,0 %) Tạp chất A, C, E, F, H, I, L, M, N, , P: Với tạp chất, diện tích píc hiệu chỉnh (nếu cần) khơng lớn 0,5 lần diện tích pic thu sắc ký đồ - dung dịch đối chiếu (1) (0,5 %) Tổng diện tích pic tạp chất D J không lớn 0,5 lần điện tích pic thu - sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) (0,5 %) Tạp chất G: Diện tích pic tạp chất G hiệu chỉnh khơng lớn 0,2 lần diện tích - pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) (0,2 %) Các tạp chất khác: Diện tích pic tạp chất khơng lớn 0,2 lần diện tích - pic sắc ký đồ dung địch đối chiếu (1) (0,2 %) Tổng diện tích pic tất tạp chất khơng lớn lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) (3,0%) Bỏ qua pic có diện tích nhỏ 0,1 lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu ( 1) (0,1 %); bỏ qua pic rửa giải trước tạp chất L sau tạp chất B 3.7 TỔNG KẾT Nhìn chung yêu cầu kỹ thuật viên nang Azithromycin dược điển Việt Nam V; Dược điển Anh 2020; Dược điển Mỹ 2020 tương đối giống nhau: Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 16 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên Bảng 3.7: Bảng so sánh yêu cầu tiêu DĐVN - DĐ Anh – DĐ Mỹ Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 17 Azithromycin Capsules SVTH: Nguyễn Thị Ngọc Quyên TÀI LIỆU THAM KHẢO Dược điển Việt Nam: Hội đồng Dược điển (2017), “Chuyên luận 114, Azithromycin, nang”, Dược điển Việt Nam V, tập 1, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 128-129 Hội đồng Dược điển (2017), “Phụ lục 1.13 – Thuốc nang”, Dược điển Việt Nam V, tập 2, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr PL-19-PL20 Hội đồng Dược điển (2017), “Phụ lục 11.2 – Phép thử độ đồng hàm lượng”, Dược điển Việt Nam V, tập 2, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr PL-249 Hội đồng Dược điển (2017), “Phụ lục 11.3 – Phép thử độ đồng khối lượng”, Dược điển Việt Nam V, tập 2, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr PL-249-PL250 Dược điển Anh: The British Pharmacopoeia Commission (2020), “Volume III - Azithromycin Capsules”, British Pharmacopoeia (2020), pp 179-180 The British Pharmacopoeia Commission (2020), “Volume III – General Monographs (Capsules)”, British Pharmacopoeia (2020), pp 42-44 The British Pharmacopoeia Commission (2020), “Volume V – Appendix XII C”, British Pharmacopoeia (2020), pp A408-A409 Dược điển Mỹ: U.S Pharmacopeia (2020), “Volume I - Azithromycin Capsules”, The United States Pharmacopeia (2020), USP 43 NF 38, pp 450-451 U.S Pharmacopeia (2020), “Volume IV – General test and assays”, The United States Pharmacopeia (2020), USP 43 NF 38, pp 6410 – Hết – Kiểm nghiệm dược phẩm Trang 18 Azithromycin Capsules ... quan Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ • Mục tiêu cụ thể: So sánh chuyên luận thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ So sánh. .. nghiệm thuốc azithromycin nang (azithromycin capsules) Dược Điển Việt Nam V, Dược Điển Anh Dược Điển Mỹ Từ kết thu chuyên đề so sánh thuốc này, ta biết thêm điểm giống khác thuốc azithromycin nang. .. kiểm tra tiêu thuốc dựa vào Dược điển Việt Nam V, dược điển quốc gia có Y học phát triển như: Mỹ, Anh, EU MỤC TIÊU • Mục tiêu tổng quát: So sánh chuyên luận thuốc azithromycin nang (azithromycin