Nghiên cứu triển khai mô hình gây hội chứng cai thuốc trên chuột nhắt trắng thông qua việc đánh giá các biểu hiện lệ thuộc thuốc về mặt thể chất. Sử dụng ba chế độ liều morphin tăng dần, mỗi ngày dùng 2 lần trong khoảng 3- 4 ngày để gây lệ thuộc.
www.vanlongco.com H (2000), Suppressive effects of Vietnamese ginseng saponin and its major component majonoside-R2 on psychological stress-induced enhancement of lipid peroxidation in the mouse brain, Pharmacology, Biochemistry and Behavior, 66(3), 661665 Duong Hong To Quyen, Nguyen Thai Minh Truc, Nguyen Thi Thu Huong, Nguyen Minh Duc (2015), Effect of cultivated Vietnamese ginseng extract on endurance capacity in mice, Journal of Medicinal Materials, 20(3), 181- 185 Nguyễn Thị Thu Hương, Chung Thị Mỹ Duyên, Dương Hồng Tố Quyên, Nguyễn Minh Đức (2016), Khảo sát tác dụng cao sâm Việt Nam trồng số chức miễn dịch động vật bị gây stress lập, Tạp chí Dược liệu, 21(1+2), 60-65 Zeng X S., Zhou X S., Luo F C., Jia J J., Qi L., Yang Z X., Zhang W., Bai J (2014), Comparative analysis of the neuroprotective effects of ginsenosides Rg1 and Rb1 extracted from Panax notoginseng against cerebral ischemia, Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 92(2), 102–108 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 98 - 104) TRIỂN KHAI MƠ HÌNH GÂY HỘI CHỨNG CAI MORPHIN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG VÀ ÁP DỤNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA BÀI THUỐC ĐÔNG DƯỢC Nguyễn Thùy Dương*, Nguyễn Thu Hằng, Đào Thị Vui Đại học Dược Hà Nội *Email: duongnt@hup.edu.vn (Nhận ngày 13 tháng năm 2017) Tóm tắt Nghiên cứu triển khai mơ hình gây hội chứng cai thuốc chuột nhắt trắng thông qua việc đánh giá biểu lệ thuộc thuốc mặt thể chất Sử dụng ba chế độ liều morphin tăng dần, ngày dùng lần khoảng 3- ngày để gây lệ thuộc Sau đó, gây hội chứng cai cách tiêm chất đối kháng naloxon mg/kg tiêm màng bụng Phương pháp gây lệ thuộc chế độ liều morphin tăng dần 30, 45, 90 mg/kg ´ lần/ngày (s.c) ngày liên tiếp gây hội chứng cai morphin chuột rõ rệt Các thông số d ng để đánh giá biểu hội chứng cai bao gồm số lần nhảy, số lần run cơ, số lần khám phá, phần trăm giảm cân nặng, tỉ lệ xuất tiêu chảy tổng điểm dựa theo thang điểm Gellert-Holtzman Trên mơ hình triển khai, thuốc đơng dược (gồm vị thuốc đại hoàng, cam thảo, huyền sâm, khang bá bắc, bồ cơng anh, viễn chí, đào nhân, táo nhân, râu mèo) với liều 1600 mg/lần ´ lần/ngày cải thiện thông số tỷ lệ tiêu chảy, phần trăm giảm cân nặng tổng điểm theo thang Gellert & Holtzman Từ khóa: Lệ thuộc morphin, Hội ch ng cai morphin, Bài thuốc đông dược Summary Implementing Naloxone-Precipitated Morphine Withdrawal Signs in Mice and Suppressive Effects of Herbal Remedy A study on the principal withdrawal signs has been performed in mice, evaluating their specificity and particular profile of appearance in physical type of dependence Mice were divided into three groups that received three different increasing doses of morphine twice a day for 3-4 days, and a normal group that received saline Naloxone-induced opiate withdrawal with dose of mg/kg (i.p) was evaluated following short-term exposition to morphine Morphine administration twice a day with increasing dose of 30 mg/kg- 45 mg/kg- 90 mg/kg is more effective in inducing opiate dependence than others Jumping, paw tremor, diarrhea, ptosis, weight loss, exploratory rearing, and the modified Gellert-Holtzman scale for mice are specific patterns of naloxone-induced withdrawal In this model, herbal remedy (Rhizoma Rhei, Radix Glycyrrhizae, Radix Scrophulariae, Cortex Phellodendri, Herba Lactucae indicae, Radix Polygalae, Semen Pruni, Semen Ziziphi mauritianae, Herba Orthosiphonis spiralis) at 1600 mg/kg administered orally twice a day significantly reduced signs of morphine withdrawal compared to the control group in terms of diarrhea, weight loss and the score of modified Gellert-Holtzman scale (p < 0.05) Keywords: Morphine dependence, Morphine withdrawal signs, Herbal remedy Đặt vấn đề Việc điều trị opioid kéo dài dẫn đến lạm dụng, dung nạp, lệ thuộc nghiện thuốc Ước tính năm 2010 giới có 15,4 triệu người lệ thuộc vào chất dạng thuốc phiện [1] 98 Khi đột ngột dừng opioid dùng chất đối kháng opioid, hội chứng cai thuốc (drug withdrawal) xuất hiện, gây triệu chứng khiến người bệnh khó chịu như: vã mồ hôi, chảy nước mắt, ngáp, cảm giác nóng lạnh, chán ăn, Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com đau bụng, buồn nôn, nôn, tiêu chảy, run, ngủ, bồn chồn, đau, nhịp tim nhanh, tăng huyết áp [2] Các thuốc điều trị hội chứng cai opioid bao gồm: buprenorphin, methadon, naltrexon thuốc điều trị triệu chứng diazepam, clonidin Tuy nhiên, hạn chế lớn thuốc tác dụng phụ, khả gây lệ thuộc thuốc hội chứng cai thuốc ngừng điều trị đột ngột [2] Vì vậy, nhiều thuốc nghiên cứu để khắc phục hạn chế trên, thảo dược hướng tiềm nhà khoa học giới quan tâm [3], [4] Tuy nhiên, Việt Nam, cơng bố liên quan đến mơ hình gây hội chứng cai thuốc động vật thực nghiệm cịn tương đối hạn chế Vì vậy, nghiên cứu nhằm mục tiêu triển khai mơ hình gây hội chứng cai morphin chuột nhắt trắng để ứng dụng vào nghiên cứu phát triển thuốc hỗ trợ điều trị hội chứng cai thuốc Nguyên vật liệu, đối tượng phương pháp nghiên cứu Bài thuốc nghiên cứu Bài thuốc đông dược cung cấp Trung tâm cai nghiện ma túy Nhân Chính, Thái Nguyên dạng viên nén 500 mg với cao thành phần gồm: Đại đại hoàng (Rhizoma Rhei) 70 mg, cam thảo (Radix Glycyrrhizae) 25 mg, huyền sâm (Radix Scrophulariae) 30 mg, hồng bá bắc (Cortex Phellodendri) 70 mg, bồ cơng anh (Herba Lactucae indicae) 80 mg, viễn chí (Radix Polygalae) 35 mg, đào nhân (Semen Pruni) 55 mg, táo nhân (Semen Ziziphi mauritianae) 55 mg, râu mèo (Herba Orthosiphonis spiralis) 65 mg Chế phẩm thử xay mịn tạo hỗn dịch đồng với nước chuột uống qua kim đầu tù Động vật thực nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống đực, cân nặng từ 18-22 g, khỏe mạnh Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Động vật nuôi ổn định với điều kiện phịng thí nghiệm Bộ mơn Dược lực, Trường Đại học Dược Hà Nội ngày trước thực nghiên cứu, nuôi dưỡng thức ăn tiêu chuẩn Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp, uống nước tự Phương pháp nghiên cứu Triển khai mơ hình gây lệ thuộc thuốc sau khoảng thời gian chế độ tiêm da (s.c) morphin (ống 10 mg/1 ml, số lô: 070915, hạn dùng: 07/09/2018 công ty VIDIPHA Việt Nam) liều tăng dần gây hội chứng cai morphin tiêm màng bụng (i.p) chất đối kháng naloxon (ống 0,4 mg/1 ml, số lô: 01BZ0513, hạn dùng: 08/05/2017 công ty Warsaw Pharmaceutical works Polfa, Ba Lan) [5], [6] Bằng cách thay đổi thời điểm dùng, chế độ liều naloxon, chế độ liều morphin lô, đánh giá ảnh hưởng lên biểu hội chứng cai morphin chuột nhắt trắng để chọn mơ hình tối ưu nhất, áp dụng đánh giá tác dụng thuốc Khảo sát ảnh hưởng chế độ liều naloxon lên biểu hội ch ng cai morphin chuột nhắt trắng Cố định chế độ liều morphin (30, 45, 60 mg/kg, s.c ´ lần/ngày, liều lặp lại), thay đổi mức liều naloxon đánh giá ảnh hưởng mức liều lên biểu hội chứng cai morphin chuột Chuột thí nghiệm chia ngẫu nhiên thành lơ tiến hành gây lệ thuộc morphin Sau đó, gây hội chứng cai morphin naloxon: sau lần tiêm dung môi morphin (s.c) cuối giờ, tiêm naloxon (i.p) liều mg/kg cho nửa số chuột lô trắng lô gây lệ thuộc, tiêm naloxon mg/kg (i.p) cho số chuột cịn lại lơ Khảo sát ảnh hưởng chế độ liều morphin lên biểu hội ch ng cai morphin chuột nhắt trắng Chuột chia ngẫu nhiên thành lô gồm lô trắng lô gây lệ thuộc morphin cách tiêm morphin (s.c) với liều tăng dần theo ngày, lần/ngày vào thời điểm 16 với chế độ liều sau: Bảng Chế độ liều khảo sát để gây lệ thuộc morphin Chế độ liều Chế độ liều Chế độ liều ngày (mg/kg) ngày (mg/kg) ngày (mg/kg) ngày (mg/kg) ngày (mg/kg) 30 ´ 30 ´ 30 ´ 45 ´ 45 ´ 45 ´ 60 ´ 90 ´ 60 ´ 60 ´ 90 ´ 90 ´ 90 ´ Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 99 www.vanlongco.com Tất lô tiêm naloxon mg/kg (i.p) sau liều morphin cuối Đánh giá tác dụng hỗ trợ điều trị hội ch ng cai morphin thuốc đông dược chuột nhắt trắng Chuột chia ngẫu nhiên vào lô: chứng bệnh uống dung môi pha thuốc; chứng dương uống diazepam 10 mg/kg; lô thử uống thuốc liều 800 mg/kg/lần ´ lần/ngày (1600 mg/kg/ngày) lô thử uống thuốc liều 1600 mg/kg/lần ´ lần/ngày (3200 mg/kg/ngày) Tất lô gây lệ thuộc morphin chế độ liều (Bảng 1) gây hội chứng cai morphin naloxon liều mg/kg (i.p) sau tiêm liều morphin (s.c) cuối Thông số đánh giá Ngay sau tiêm naloxon, chuột đặt vào lồng kính để quan sát, đồng thời bố trí camera ghi lại biểu 30 phút Kết ghi nhận quan sát viên từ video sau thí nghiệm thơng số sau chuột [4], [5], [7]: Số lần nhảy (số lần chuột nhảy chân lên khỏi bề mặt quan sát); Số lần run (số lần chuột run chân trước); Số lần khám phá (tổng số lần chuột đứng chân sau, chân trước chạm thành lồng không chạm thành lồng); Tiêu chảy (tỷ lệ chuột có xuất triệu chứng tiêu chảy, biểu phân lỏng, khơng có hình dạng; Sa mí mắt: tỷ lệ chuột có xuất triệu chứng sa mí mắt; Phần trăm giảm cân nặng sau tiêm naloxon so với trước tiêm 2,5 giờ; Tổng điểm dựa theo thang điểm Gellert & Holtzman [6], [8] (có thay đổi để phù hợp với điều kiện thí nghiệm) với quy đổi điểm sau: Bảng Thang điểm quy đổi dựa theo thang điểm Gellert & Holtzman Dấu hiệu Điểm Dấu hiệu phân loại (graded signs) Số lần trốn thoát (số lần nhảy số lần đứng chân chạm chân trước vào thành lồng) 2-4 5-9 ≥10 Số đau quặn (điểm/cơn) Dấu hiệu kiểm tra (checked signs): có/khơng Tiêu chảy Sa mí mắt Liếm phận sinh dục Những chuột có biểu hội chứng cai thuốc mức độ nặng (ví dụ có triệu chứng đau quặn) loại trừ theo dõi biểu hội chứng cai thuốc mức độ thấp (nhảy, run cơ, khám phá) để đảm bảo tính xác phân tích kết Phương pháp x l số liệu Với số liệu thuộc phân phối chuẩn, kết biểu diễn dạng M ± SE (M: giá trị trung bình lơ, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình lơ oneway ANOVA, dùng hậu kiểm để so sánh lô thử với lô chứng Với số liệu không thuộc phân phối chuẩn/biến phân hạng, kết trình bày dạng trung vị (khoảng min- max), d ng Kruskal Wallis để so sánh lô 100 Mann-Whitney U test để so sánh lô thử với lô chứng Đối với thông số tỉ lệ, kết biểu diễn dạng phần trăm xuất lô, so sánh khác biệt lô test Chi-Square, sau d ng Fisher’s Exact Test Sự khác biệt coi có ý nghĩa thống kê p < 0,05 Kết nghiên cứu Kết triển khai mơ hình gây hội chứng cai morphin chuột nhắt trắng Ảnh hưởng chế độ liều naloxon lên biểu hội ch ng cai morphin chuột nhắt trắng Kết khảo sát ảnh hưởng chế độ liều naloxon lên biểu hội chứng cai morphin chuột nhắt trắng trình bày Bảng Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng chế độ liều naloxon lên biểu hội chứng cai morphin chuột nhắt trắng Thông số Nhảy Run Tiêu chảy Sa mí mắt Khám phá Giảm cân nặng n Số lần n Số lần n (%) n (%) n Số lần n % Tổng điểm n Điểm Naloxon liều mg/kg Lô trắng Lô gây nghiện 13 (0-1) (0-11)* (0-17) (0-20) 14 12 0,0 50,0* 14 12 21,4 12,5 8 34 (20-84) 29 (1-111) 8 4,21 4,95 (0,85-5,95) (0,00-8,72) 14 (0-8) (0-10) Naloxon liều mg/kg Lô trắng Lô gây nghiện 14 (0-0) 12 (1-59)*# 10 (0-2) 16 (0-48)*# 14 7,1 8,3# 14 37,5 75,0# 10 (0-27) 36 (10-84)* 8 3,87 2,68 (2,80-5,68) (1,16-7,77) 14 (2-9) (5-10)* *p < 0,05 so sánh với lô trắng tương ng; #p < 0,05 so sánh với lô gây bệnh dùng naloxon liều mg/kg Lô gây hội chứng cai naloxon mg/kg (i.p), có số lần nhảy, tỉ lệ xuất tiêu chảy tăng so với lô trắng (p