Khảo sát thành phần hóa học và quy trình trích ly flavonod từ cây diếp cá ù (houttuynia cordata thumb ), họ lá giấp(saururaceae)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA LÊ THỊ KIM OANH KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ QUY TRÌNH TRÍCH LY FLAVONOID TỪ CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia cordata Thumb.), họ Lá giấp (Saururaceae) CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ HỮU CƠ MÃ SỐ NGÀNH : 02.10.04 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, THÁNG 12 NĂM 2006 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập- Tự Do- Hạnh Phúc Tp HCM, ngaøy …… tháng……… năm 200 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: LÊ THỊ KIM OANH Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 28/ 09/ 1981 Nơi sinh: Long An Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ HỮU CƠ MSHV: 00503132 I-TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát thành phần hóa học quy trình trích ly Flavonoid từ Diếp cá (Houttuynia cordata Thumb.), họ Lá giấp (Saururaceae) II-NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xác định thành phần hóa học Diếp cá (Houttuynia cordata Thumb.) Xác định phương pháp điều kiện thích hợp để trích ly hợp chất từ Diếp cá (Houttuynia cordata Thumb.) Nghiên cứu phương pháp cô lập, tinh chế xác định cấu trúc hợp chất thu Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa kháng khuẩn cao trích ly III-NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: IV-NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: V-HỌ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS Trần Thị Việt Hoa CÁN BỘ HƯỚNG DẪN BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH PGS TS Trần Thị Việt Hoa Nội dung đề cương luận văn thạc só Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua Ngày PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH tháng năm 200 KHOA QUẢN LÝ NGÀNH CÔNG TRÌNH ĐƯC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS TS TRẦN THỊ VIỆT HOA Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày………… tháng………… năm 200 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn: - Cô Trần Thị Việt Hoa truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm trình học tập tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực luận văn - Các Thầy Cô Hội đồng Bảo vệ Luận văn đóng góp nhận xét chân thành cho kết đạt luận văn - Các Thầy Cô Khoa Công Nghệ Hóa Học & Dầu Khí, trường Đại Học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy, truyền đạt kiến thức q báu năm qua - Các bạn môn Hóa Hữu Cơ trường Đại Học Bách Khoa cô chú, anh chị Viện Kiểm nghiệm thuốc giúp đỡ suốt trình thực luận văn - Gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ hỗ trợ nhiệt tình để hoàn thành luận văn TÓM TẮT Rau Diếp cá thường dùng loại rau gia vị, ăn sống ăn Việt Nam Diếp cáù có nhiều công dụng y học dân tộc Vì vậy, Luận văn này, tiến hành khảo sát thành phần hóa học nghiên cứu trích ly số hợp chất Diếp cá nhằm phục vụ cho ngành dược phẩm Kết Luận văn: - Xác định thành phần hóa học Diếp cá (Houttuynia cordata Thumb.): flavonoid, tinh dầu, carotenoid, phytosterol, tanin, đường khử, saponin, coumarin - Xác định phương pháp điều kiện thích hợp để trích ly hợp chất từ Diếp cá - Xác định hàm lượng flavonoid tổng (1.21%) tanin tổng (4.40%) Diếp cá (tính nguyên liệu khô tuyệt đối) - Xác định hàm lượng beta-caroten tỉ lệ thành phần cao ete dầu hỏa không xà phòng hóa - Cô lập hai hợp chất tinh khiết từ cao ete dầu hỏa xác định cấu trúc hợp chất sesamin β-sitosterol - Cô lập hợp chất tinh khiết từ cao etyl acetat xác định cấu trúc hợp chất quercitrin - Xác định tính kháng oxy hóa hợp chất DPPH (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) loại cao thu - Xác định tác dụng diệt khuẩn nhẹ loại cao vi khuẩn S aureus, Salmonella, P aeruginosa Cần có nghiên cứu việc ứng dụng kết Luận văn dược phẩm ABSTRACT Houttuynia cordata Thumb is used as seasoning, fresh vegetable in Vietnamese cooking It also has application in traditional medecine Thus, in this thesis, we study some methods to investigate chemical composition and extract some compounds from Houttuynia cordata Thumb to serve in medecine This result of thesis: - Determined chemical composition in Houttuynia cordata Thumb.: flavonoid, essential oil, carotenoid, phytosterol, tanin, reducing cacbohydrate, saponin, coumarine - Determined appropriate methods and conditions to extract compounds from Houttuynia cordata Thumb - Determined the sum of flavonoid (1.21%) and tanin (4.40%) in Houttuynia cordata Thumb (based on absolute dry wieght) - Determined the beta-carotenoid content and the ratio of composition in the non-saponified petroleum ether fraction - Isolated and identified the structure of two compounds from petroleum ether fraction with high purity: sesamin and β-sitosterol - Isolated and identified the structure of the compound from ethyl acetate fraction: quercitrin - Determined the anti-oxidization activity on DPPH (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) of fractions from Houttuynia cordata Thumb - Determined the mild anti-bacterial activity on S aureus, Salmonella, P.aeruginosa of fractions from Houttuynia cordata Thumb It is required to have following studies in application of these results in medecine MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ- SƠ ĐỒ – HÌNH – PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY DIẾP CÁ 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Trồng trọt thu hoạch rau Diếp cá 1.1.5 Tính vị tác dụng 1.1.6 Coâng dụng đơn thuốc 1.1.7 Thành phần hóa học công trình nghiên cứu 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ FLAVONOID 10 1.2.1 Định nghóa 10 1.2.2 Phân loại 12 1.2.3 Sự phân bố flavonoid thực vật 14 1.2.4 Tính chất vật lý 15 1.2.5 Tính chất hóa học 15 1.2.6 Vai trò flavonoid 17 1.2.7 Các phương pháp xác định khả kháng oxy hóa 20 1.2.8 Phương pháp chiết xuất flavonoid 22 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 25 2.1 XỬ LÝ VÀ ĐÁNH GIÁ NGUYÊN LIỆU 26 2.1.1 Xử lý nguyên liệu 26 2.1.2 Xác định độ ẩm 26 2.1.3 Xác định độ tro 27 2.1.4 Xác định hàm lượng ion vô 28 2.1.5 Xaùc định thành phần hóa học Diếp cá 29 2.2 KHẢO SÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC TỪ CÂY DIẾP CÁ 32 2.2.1 Phương pháp trích nguội 32 2.2.1.1 Khảo sát tỉ lệ nguyên liệu (g)/thể tích dung môi (ml) (R/L) 33 2.2.1.2 Khảo sát thời gian trích ly 33 2.2.2 Phương pháp trích ly hệ thống Soxhlet 33 2.2.2.1 Dung moâi ete dầu hỏa 60-90oC 35 2.2.2.2 Dung moâi etyl acetat 35 2.2.2.3 Dung moâi etanol 90o 35 2.2.2.4 Dung moâi etanol 70o 36 2.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯNG FLAVONOID TỔNG TRONG CÂY DIẾP CÁ 37 2.4 XÁC ĐỊNH HÀM LƯNG TANIN TỔNG TRONG CÂY DIẾP CÁ 39 2.5 NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT VÀ CÔ LẬP CÁC HP CHẤT TỪ CAO ETE DẦU HỎA 60-90oC 40 2.5.1 Xà phòng hóa 40 2.5.2 Phân lập cao ete dầu hỏa không xà phòng hóa sắc ký cột chậm 41 2.5.3 Tinh chế phân đoạn gộp E9 sau sắc ký cột chậm 43 2.6 NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT VÀ CÔ LẬP CÁC HP CHẤT TỪ CAO ETYL ACETAT 43 2.6.1 Phân lập cao etyl acetat sắc ký cột nhanh hệ thống lọc hút chân không 43 2.6.2 Phân lập phân đoạn gộp cao etyl acetat sắc ký cột chậm 44 2.6.3 Tinh chế phân đoạn gộp V sau sắc ký cột chậm 45 2.7 NHẬN DANH CÁC HP CHẤT THU ĐƯC 45 2.7.1 Xaùc định hàm lượng β-caroten cao ETDH không xà phòng hóa 45 2.7.2 Xác định thành phần cao ETDH không xà phòng hóa 46 2.7.3 Đo nhiệt độ nóng chảy 46 2.7.4 Xaùc định phổ hồng ngoại (IR) 46 2.7.5 Xác định phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 47 2.7.6 Xác định phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS) 47 2.7.7 Xác định phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 47 2.8 KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA CÁC LOẠI CAO THU ĐƯC 47 2.8.1 Nguyên tắc 48 2.8.2 Cách tiến haønh 49 2.9 KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC LOẠI CAO THU ĐƯC 49 2.9.1 Nguyên taéc 49 2.9.2 Cách tiến hành 50 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ – BÀN LUẬN 3.1 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU 51 3.1.1 Xử lý nguyên liệu 51 3.1.2 Xác định độ ẩm 51 3.1.3 Xác định độ tro 51 3.1.4 Xác định hàm lượng ion vô 51 3.1.5 Xác định thành phần hóa học Diếp cá 52 3.2 KHẢO SÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CÁC HP CHẤT TỪ CÂY DIẾP CÁ 54 3.2.1 Phương pháp trích nguội 54 3.2.1.1 Trích ly hợp chất ete dầu hỏa 60-90oC 54 3.2.1.2 Trích ly hợp chất etyl acetat 56 3.2.1.3 Trích ly hợp chất etanol 90o 58 3.2.1.4 Trích ly hợp chất etanol 70o 60 3.2.2 Phương pháp trích ly hệ thống Soxhlet 63 3.2.3 So sánh phương pháp trích ly 64 3.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯNG FLAVONOID VÀ TANIN TỔNG TRONG CÂY DIẾP CÁ 66 3.4 TRÍCH LY VÀ CÔ LẬP CÁC HP CHẤT TỪ CAO ETDH 60-90oC 67 3.4.1 Xà phòng hóa 67 3.4.2 Xác định hàm lượng beta-caroten tỉ lệ thành phần cao ETDH không xà phòng hoùa 67 3.4.2.1 Khảo sát hàm lượng beta-caroten 67 3.4.2.2 Khảo sát thành phần hóa học cao ETDH không xà phòng hóa phương pháp GC-MS (phụ luïc 3) 68 3.4.3 Phân lập cao ete dầu hỏa không xà phòng hóa sắc ký cột chậm 69 3.4.4 Tinh chế phân đoạn E9 71 3.4.5 Nhaän danh 72 3.5 NGHIEÂN CỨU TÁCH CHIẾT VÀ CÔ LẬP CÁC HP CHẤT TỪ CAO ETYL ACETAT 77 3.5.1 Phân lập cao etyl acetat sắc ký cột nhanh hệ thống lọc hút chân không 77 3.5.2 Phân lập phân đoạn gộp cao etyl acetat sắc ký cột chậm 78 3.5.3 Tinh chế phân đoạn V 79 3.5.4 Nhaän danh 80 3.6 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC LOẠI CAO 83 3.6.1 Khảo sát tính kháng oxy hóa 83 3.6.2 Khảo sát tính kháng khuẩn 85 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO 89 PHỤ LỤC TÓM TẮT LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Phụ lục 8: KẾT QUẢ PHỔ IR CỦA MẪU OANH-04 Phụ lục 9: KẾT QUẢ PHỔ GC-MS CỦA MẪU OANH-04 Phụ lục 10: KẾT QUẢ PHỔ 1H-NMR CỦA MẪU OANH-04 Phụ lục 11: KẾT QUẢ PHỔ 13C-NMR CỦA MẪU OANH-04 Phụ lục 12: KẾT QUẢ PHỔ DEPT CỦA MẪU OANH-04 Phụ lục 13: KẾT QUẢ PHỔ IR CỦA MẪU OANH-8 Phụ lục 14: KẾT QUẢ PHỔ LC-MS CỦA MẪU OANH-8 Phụ lục 15: KẾT QUẢ PHỔ 1H-NMR CỦA MẪU OANH-8 Phụ lục 16: KẾT QUẢ PHỔ 13C-NMR CỦA MẪU OANH-8 Phụ lục 17: KẾT QUẢ PHỔ DEPT CỦA MẪU OANH-8 Phụ lục 18: KẾT QUẢ PHỔ 1H-NMR VÀ PHỔ 13C-NMR CỦA SESAMIN Phụ lục 19: KẾT QUẢ PHỔ 13C-NMR CỦA β-sitosterol Phụ lục 20: KẾT QUẢ PHỔ 13C-NMR CỦA Quercitrin Phụ lục 21: KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC LOẠI CAO TÓM TẮT LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: LÊ THỊ KIM OANH Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 28/ 09/ 1981 Nơi sinh: Long An Địa liên lạc: Tuệ Tónh, phường 13, quận 11, Tp Hồ Chí Minh QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: - Từ 9/1998 đến 2003: học kỹ sư Đại học Quốc gia Tp HCM-Trường Đại học Bách Khoa, khoa Công Nghệ Hóa Học Dầu Khí - Từ 9/2003 đến 2006: học Cao học chuyên ngành Công Nghệ Hữu cơ, Đại học Quốc gia Tp HCM-Trường Đại học Bách Khoa QUÁ TRÌNH CÔNG TÁC: - Từ 3/ 2004 đến nay: kiểm nghiệm viên Khoa Kiểm nghiệm Đông dược-Dược liệu, Viện kiểm nghiệm thuốc Tp Hồ Chí Minh, Bộ Y teá ... TÀI: Khảo sát thành phần hóa học quy trình trích ly Flavonoid từ Diếp cá (Houttuynia cordata Thumb. ), họ Lá giấp (Saururaceae) II-NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xác định thành phần hóa học Diếp cá (Houttuynia. .. định thành phần hóa học Diếp cá 29 2.2 KHẢO SÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC TỪ CÂY DIẾP CÁ 32 2.2.1 Phương pháp trích nguội 32 2.2.1.1 Khảo. .. định thành phần hóa học Diếp cá 52 3.2 KHẢO SÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY CÁC HP CHẤT TỪ CÂY DIẾP CÁ 54 3.2.1 Phương pháp trích nguội 54 3.2.1.1 Trích ly