Khảo sát quá trình phát sinh bệnh của virus đốm trắng (white spot syndrome virus wssv) trên tôm sú (penaeus mondon) sử dụng mô hình gây nhiễm thực nghiệm chuẩn và phương pháp hóa mô miễn dịch

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH PHAN VĂN LONG KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH PHÁT SINH BỆNH CỦA VIRUS ĐỐM TRẮNG (White Spot Syndrome Virus – WSSV) TRÊN TƠM SÚ (Penaeus mondon) SỬ DỤNG MƠ HÌNH GÂY NHIỄM THỰC NGHIỆM CHUẨN VÀ PHƢƠNG PHÁP HĨA MƠ MIỄN DỊCH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƢ NI TRỒNG THỦY SẢN NGHỆ AN - 05/2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH =====  ===== KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH PHÁT SINH BỆNH CỦA VIRUS ĐỐM TRẮNG (White Spot Syndrome Virus – WSSV) TRÊN TÔM SÚ (Penaeus mondon) SỬ DỤNG MƠ HÌNH GÂY NHIỄM THỰC NGHIỆM CHUẨN VÀ PHƢƠNG PHÁP HĨA MƠ MIỄN DỊCH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƢ NUÔI TRỒNG THỦY SẢN Người thực hiện: Mssv: Lớp: Người hướng dẫn: Phan Văn Long 1253036046 53K - NTTS ThS Nguyễn Đình Vinh NGHỆ AN - 05/2016 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tốt nghiệp này, trình học tập thực đề tài nhận nhiều giúp đỡ quý báu Với tất trân trọng lòng chân thành tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: BGH trường Đại học Vinh, BCN khoa Nông Lâm Ngư quý thầy cô giáo ngành Nuôi Trồng Thủy Sản tạo điều kiện để chúng em học tập tốt, tận tình giúp đỡ, quan tâm đến việc học tập chúng em suốt năm qua, đặc biệt thầy giáo ThS Nguyễn Đình Vinh, người trực tiếp hướng dẫn tơi với tất tinh thần trách nhiệm lòng nhiệt huyết từ khâu định hướng chọn đề tài đến trình thực nghiên cứu viết khóa luận Xin chân thành cảm ơn BLĐ Công ty TNHH Nghiên Cứu – Sản Xuất Đất Việt, anh chị, bạn bè đồng nghiệp anh KS Trần Văn Hiệu tận tình bảo, giải đáp vướng mắc, khó khăn mà tơi gặp phải q trình thực tập, giúp đỡ tơi nhiều q trình thực đề tài Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ mặt tinh thần vật chất suốt q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn! Vinh, tháng năm 2016 Sinh Viên Phan Văn Long ii MỤC LỤC Trang DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1.Lý chọn đề tài 2.Mục tiêu đề tài CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CỦA HỆ MIỄN DỊCH TÔM SÚ 1.1.1.Cơ chế phòng vệ chung giáp xác 1.1.2.Các tế bào máu tham gia vào đáp ứng miễn dịch giáp xác 1.1.3.Hệ thống prophenoloxidase (proPO) 1.1.4.Hệ thống đông máu 1.1.5.Các chất ức chế proteinase 1.1.6.Hệ thống nhận diện không chuyên biệt 1.1.7.Các peptide kháng khuẩn 1.1.8.Peroxinectin 10 1.2 BỆNH ĐỐM TRẮNG VÀ VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG 10 1.2.1 Bệnh đốm trắng 10 1.2.1.1 Lịch sử phân bố 10 1.2.1.2 Dấu hiệu bệnh tích 11 1.2.2 Virus đốm trắng 12 1.2.2.1 Phân loại tên gọi 12 1.2.2.2 Hình thái 12 1.2.2.3 Cấu trúc 13 1.3 QUÁ TRÌNH PHÁT SINH BỆNH CỦA VIRUS ĐỐM TRẮNG 15 1.3.1 Vật liệu gây bệnh 15 1.3.2 Cơ chế xâm nhiễm 17 1.3.3 Cơ chế lây lan 18 1.4 MÔ HÌNH GÂY NHIỄM THỰC NGHIỆM CHUẨN VIRUS TRÊN TƠM 18 1.4.1 ID50 LD50 19 1.4.2 Một số thí nghiệm gây nhiễm thực nghiệm chuẩn tôm 19 1.5 PHƢƠNG PHÁP HĨA MƠ MIỄN DỊCH 20 1.5.1 Nguyên lý 20 1.5.2 Kháng nguyên 21 1.5.3 Kháng thể 21 1.5.4 Các phƣơng pháp nhuộm (theo IHC world) 22 1.5.4.1 Phương pháp trực tiếp 23 1.5.4.2 Phương pháp gián tiếp 23 1.5.4.3 Phương pháp PAP (peroxidase anti – peroxidase method) 24 1.5.4.4 Phương pháp avidin – biotin complex (ABC method) 24 1.5.4.5 Phương pháp đánh dấu Streptavidin Biotin (LSAB) 25 iii CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 26 2.1.1 Thời gian 26 2.1.2 Địa điểm 26 2.2 VẬT LIỆU VÀ ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 26 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 26 2.2.2 Vật liệu dụng cụ sử dụng trình gây nhiễm thực nghiệm chuẩn 26 2.2.2.1 Vật liệu 26 2.2.2.2 Dụng cụ 27 2.2.3 Các hóa chất dụng cụ sử dụng IHC 27 2.2.3.1 Hóa chất 27 2.2.3.2 Vật tư 27 2.2.3.3 Thiết bị 28 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 28 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.4.1 Bố trí thí nghiệm 28 2.4.1.1 Tơm điều kiện thí nghiệm 28 2.4.1.2 Virus đốm trắng dòng Việt Nam (WSSV-VN) 29 2.4.1.3 Gây nhiễm virus đốm trắng tôm sú 29 2.4.1.4 Thời gian theo dõi thu mẫu để khảo sát trình phát sinh bệnh 30 2.4.2 Phƣơng pháp pha loãng dịch virus 30 2.4.3 Phƣơng pháp thu mẫu tôm 31 2.4.4 Phƣơng pháp nhuộm IHC 32 2.4.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 36 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 ĐỘC LỰC CỦA DỊNG WSSV-VN TRÊN TƠM SÚ 37 3.1.1 Kết theo dõi thực nghiệm 37 3.1.2 Tỷ lệ nhiễm WSSV-VN tơm thí nghiệm IHC theo thời gian 39 3.2 KHẢO SÁT Q TRÌNH PHÁT SINH BỆNH CỦA DỊNG WSSV-VN 40 1,5 3.2.1 Quá trình phát sinh bệnh WSSV-VN tôm sú liều gây nhiễm thấp (10 SID50/ml) 41 3.2.2 Quá trình phát sinh bệnh WSSV-VN tơm sú liều cao (104,0SID50/ml) 45 3.2.3 So sánh hai liều gây nhiễm trình phát sinh bệnh 48 3.3 THẢO LUẬN 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 Tài liệu Tiếng Việt 54 Tài liệu Tiếng Anh 54 iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT CHỮ VIẾT TẮT DIỄN TẢ NGHĨA WSSV White Spot Syndrome Virus WSSV - VN White Spot Syndrome Virus – Việt Nam WSSV - TL White Spot Syndrome Virus – Thailand WSD White Spot Disease MBV Monodon Baculovirus YHV Yellow Head Virus proPO Prophenoloxidase PO Phenoloxidase AMPs Antimicrobial Peptides 10 LPS Lipopolysaccharide 11 PG Peptidoglycan 12 PPAE Prophenoloxidase Activating Enzyme 13 CP Clotting Protein 14 TGase Transglutaminase 15 PAMPS Pathogen-associated Molecular Patterns 16 PRR (PRP) Pattern Recognition Receptor (protein) 17 β GBP Beta Glucan Binding Protein 18 LPBP Lipopolysaccharide binding protein 19 ICTV International Committee on Taxonomy for Virus 20 SDS-PAGE Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel 21 RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism 22 SID Shrimp Infectious Dose 23 LD Lethal Dose 24 IHC Immunohistochemistry 25 ctv cộng tác viên v DANH MỤC CÁC BẢNG trang Bảng 1.1: Các dạng bạch cầu giáp xác chức chúng Bảng 2.1: Thời gian theo dõi thu mẫu tôm sú để khảo sát trình phát sinh bệnh 30 Bảng 3.1: Tỷ lệ phần trăm (%) tôm biểu dấu hiệu lâm sàng thời điểm sau gây nhiễm 37 Bảng 3.2: Tỷ lệ nhiễm tơm thí nghiệm liều cao liều thấp theo thời điểm 39 Bảng 3.3: Kết theo dõi tỷ lệ xâm nhiễm WSSV-VN quan khảo sát liều thấp (%) 41 Bảng 3.4: Kết theo dõi tỷ lệ xâm nhiễm WSSV-VN quan khảo sát liều cao (%) 45 Bảng 3.5: Kết so sánh thống kê liều cao liều thấp quan khảo sát (với độ tin cậy 95 %) 50 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Tôm bị bệnh đốm trắng (Vlak, 2008) 12 Hình 1.2: Hình thái virus đốm trắng quan sát dƣới kính hiển vi điện tử (Vlak, 2008) 13 Hình 1.3: Cấu trúc virus đốm trắng 14 Hình 1.4: Genome virus đốm trắng (Yang ctv, 2001) 15 Hình 1.5: Kháng thể đa dịng kháng thể đơn dòng (Boenisch ctv, 2002) 21 Hình 1.6: Các phƣơng pháp nhuộm IHC 23 Hình 2.1: Hệ thống bể thí nghiệm 28 Hình 2.2: Gây nhiễm virus tơm thí nghiệm 30 Hình 2.3: Tiêm dung dịch Davidson vào đầu tôm 31 Hình 2.4: Quy trình bƣớc thực IHC 32 Hình 2.5: Các giai đoạn xử lý mẫu 33 Hình 2.6: Các bƣớc thực IHC 34 Hình 3.1: Tơm bị nhiễm virus đốm trắng 38 Hình 3.2: Tỷ lệ nhiễm tơm thí nghiệm liều cao liều thấp theo thời điểm 39 Hình 3.3: Các quan khảo sát trình phát sinh bệnh WSSV-VN 40 Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn tỷ lệ xâm nhiễm WSSV-VN quan liều thấp 42 Hình 3.5: Các tế bào quan bị nhiễm WSSV tơm thí nghiệm liều thấp 44 Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn tỷ lệ xâm nhiễm WSSV-VN quan liều cao 46 Hình 3.7: Các quan bị nhiễm WSSV liều cao sau nhuộm IHC 48 Hình 3.8: Đồ thị so sánh tỷ lệ nhiễm quan khảo sát 49 vii MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Bệnh đốm trắng (White Spot Disease) virus gây hội chứng đốm trắng (White Spot Syndrome Virus – WSSV) gây tôm sú nuôi Đây bệnh truyền nhiễm nguy hiểm cho nhóm tơm he, bệnh có sức tàn phá lớn, làm tôm chết thời gian ngắn, gây chết 100 % khoảng thời gian từ – ngày (Leong, 2005) có khả lây lan nhanh Chính virus làm suy giảm sản lƣợng tôm năm giới, gây thiệt đáng kể đến kinh tế nhiều quốc gia giới, có Việt Nam Hiện nay, giới có nhiều cơng trình nghiên cứu bệnh đốm trắng WSSV nhiều khía cạnh khác nhƣ hình thái, cấu trúc, di truyền, yếu tố nguy xảy dịch bệnh, phát triển thuốc, vaccine… Trong cơng trình nghiên cứu trình phát sinh bệnh WSSV lại hạn chế Kết nghiên cứu trình phát sinh bệnh mức độ tế bào, phân tử giúp hiểu rõ chế tƣơng tác quan trọng giai đoạn virus tiếp cận, xâm nhập, nhân bản, hình thành hạt virus bên phát tán tế bào vật chủ Từ kết quan trọng giúp cho tìm đƣợc thời điểm hay giai đoạn mấu chốt q trình nơi mà phát triển giải pháp can thiệp, ngăn chặn khác (thuốc, vaccine, yếu tố lý hoá ) Đây hƣớng tiếp cận cho WSSV trƣờng đại học Ghent-Bỉ đề xuất, sử dụng mơ hình gây nhiễm thực nghiệm chuẩn kỹ thuật nhuộm miễn dịch đặc hiệu sử dụng kháng thể đơn dòng kháng protein VP28 WSSV để khảo sát trình phát sinh bệnh mức độ quan, mô, tế bào phân tử Với phƣơng pháp này, cho phép biết đƣợc trình xâm nhiễm WSSV theo thời gian, tiến trình, mức độ xâm nhiễm virus quan đích khác Việc nghiên cứu trình phát sinh bệnh virus đốm trắng tôm sú cần thiết, làm tảng cho nghiên cứu chuyên sâu thí nghiệm đánh giá độ mẫn cảm dịng tơm virus, hay tác dụng thuốc, chế phẩm, vaccine hệ miễn dịch tôm việc đề kháng lại virus, đồng thời nhằm phát triển chiến lƣợc kiểm soát WSSV bùng nổ bệnh đốm trắng mức độ khác tôm sú (ở mức độ cá thể, quần thể, ao nuôi, khu nuôi, khu vực nuôi, vùng nuôi quốc gia) Từ sở quan trọng đó, đƣợc phân cơng Bộ mơn Ni Trồng Thủy Sản – Khoa Nông Lâm Ngƣ chấp thuận Công ty TNHH Nghiên Cứu – Sản Xuất Đất Việt, thực đề tài: “Khảo sát trình phát sinh bệnh virus đốm trắng (White Spot Syndrome Virus – WSSV) tôm sú (Penaeus mondon) sử dụng mơ hình gây nhiễm thực nghiệm chuẩn phương pháp hóa mơ miễn dịch” Mục tiêu đề tài Thực gây nhiễm thực nghiệm chuẩn virus tôm sú sử dụng liều virus SID50/ml đƣợc chuẩn độ xác định nhằm khảo sát trình phát sinh bệnh virus đốm trắng tôm phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch + + - + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + ++ 48 60 + + + + ++ + + ++ + ++ + + + + + + + + j + + + + ++ + + + + + + + ++ + + + + + + + + + + + + ++ + + + + + + + ++ + + + + ++ + + + + + + ++ + + + ++ ++ + + ++ + + ++ + ++ ++ ++ + ++ ++ Bảng: số lƣợng tôm biểu dấu hiệu lâm sàng thời điểm sau gây nhiễm (con) Liều Liều thấp Liều cao Thời điểm thu mẫu sau tiêm (h) 12 18 24 36 48 60 12 18 24 36 48 60 D/C Hoạt động bất thƣờng 0 0 0 0 Xuất đốm trắng Đỏ thân Bỏ ăn 0 0 0 0 0 2 0 0 0 1 0 0 0 Hấp hối 0 0 0 0 0 0 Chết 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Tỷ lệ nhiễm tơm thí nghiệm liều thấp liều cao theo thời điểm Thời điểm ghi nhận sau gây nhiễm (h) Tỷ lệ nhiễm theo thời gian liều thấp (%) Tỷ lệ nhiễm theo thời gian liều cao (%) 12 18 24 36 48 60 0 33.3 33.3 66.7 66.7 83.3 100 0 50 83.3 100 100 100 100 SỰ XÂM NHIỄM CỦA WSSV-VN TRÊN CÁC CƠ QUAN KHẢO SÁT Ở LIỀU THẤP (con) k CƠ QUAN 0 0 0 0 0 Lympho Ruột Mô liên kết gan Tim Mang Mô tạo máu Ruột trƣớc Tuyến anten Dạ dày Biểu mô dƣới vỏ 0 0 0 0 0 12 0 0 0 0 THỜI GIAN (h) 18 24 36 0 0 0 1 0 4 4 48 3 5 3 60 4 6 6 SỰ XÂM NHIỄM CỦA WSSV-VN TRÊN CÁC CƠ QUAN KHẢO SÁT Ở LIỀU CAO (con) CƠ QUAN 0 0 0 0 0 Lympho Ruột Mô liên kết gan Tim Mang Mô tạo máu Ruột trƣớc Tuyến anten Dạ dày Biểu mô dƣới vỏ 0 0 0 0 0 12 0 1 1 0 THỜI GIAN (h) 18 24 36 1 4 6 5 6 4 6 48 5 6 6 KẾT QUẢ TỶ LỆ XÂM NHIỄM CỦA WSSV-VN TRÊN CÁC CƠ QUAN KHẢO SÁT Ở LiỀU THẤP CƠ QUAN Lympho Ruột Mô liên kết gan Tim Mang Mô tạo máu Ruột trƣớc Tuyến anten Dạ dày Biểu mô dƣới vỏ 0h 0 0 0 0 0 6h 0 0 0 0 0 THỜI GIAN (h) 18h 24h 36h 0 66.7 0 66.7 0 16.7 33.3 66.7 16.7 16.7 66.7 0 66.7 16.7 33.3 66.7 16.7 66.7 16.7 50 66.7 50 66.7 12h 0 33.3 0 0 0 48h 50 50 83.3 83.3 83.3 50 50 66.7 83.3 60h 66.7 66.7 66.7 100 100 83.3 100 83.3 100 KẾT QUẢ TỶ LỆ XÂM NHIỄM CỦA WSSV-VN TRÊN CÁC CƠ QUAN KHẢO SÁT Ở LIỀU CAO l 60 6 6 6 6 CƠ QUAN Lympho Ruột Mô liên kết gan Tim Mang Mô tạo máu Ruột trƣớc Tuyến anten Dạ dày Biểu mô dƣới vỏ 0h 0 0 0 0 0 6h 0 0 0 0 0 THỜI GIAN (h) 18h 24h 36h 83.3 100 50 66.7 50 16.7 16.7 83.3 66.7 66.7 100 100 83.3 83.3 50 100 66.7 33.3 100 83.3 66.7 100 66.7 66.7 100 100 12h 0 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 0 48h 83.3 83.3 50 83.3 100 100 83.3 100 66.7 100 60h 100 83.3 100 100 100 100 100 100 100 100 BẢNG THEO DÕI CÁC CHỈ TIÊU MÔI TRƯỜNG Ngày 3/26/2016 3/27/2016 3/28/2016 3/29/2016 Chỉ tiêu nhiệt độ (0C) pH DO (mg/l) Amoniac (mg/l) nhiệt độ (0C) pH DO (mg/l) nhiệt độ (0C) pH DO (mg/l) nhiệt độ (0C) pH DO (mg/l) Amoniac (mg/l) Lần (8h) 28 7.9 4.37 29 7.8 4.25 28 7.9 4.17 28 7.8 4.67 Lần (14h) 29 8.0 4.4 30 8.0 4.21 28 8.0 4.66 29 7.8 4.54 0.05 Phụ Lục 5: Kết xử lý thống kê One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Lymphoid Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.139455 1.1394548 4.965 0286 Within groups 19.048780 83 2295034 m Total (corrected) 20.188235 84 11 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Lymphoid by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 41 2682927 0700556 0748174 1630453 3735401 44 5000000 0762493 0722218 3984039 6015961 Total 85 3882353 0519619 0519619 3151393 4613313 Multiple range analysis for KETQUA.Lymphoid by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 41 2682927 X 44 5000000 X contrast difference +/limits - -0.23171 0.20688 * * denotes a statistically significant difference n One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Ruot_giua Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 392912 3929119 1.856 1766 Within groups 18.416077 87 2116790 Total (corrected) 18.808989 88 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Ruot_giua by KETQUA.Lieu_tiem -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 46 2391304 0635867 0678360 1437689 3344920 43 3720930 0745845 0701624 2734610 4707251 Total 89 3033708 0487690 0487690 2348129 3719287 Multiple range analysis for KETQUA.Ruot_giua by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 46 2391304 X 43 3720930 X contrast difference +/limits - -0.13296 0.19402 * denotes a statistically significant difference o One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Mo_lien_ket Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.822625 1.8226250 15.682 0001 Within groups 10.808954 93 1162253 Total (corrected) 12.631579 94 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Mo_lien_ke by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 48 0208333 0208333 0492073 0482778 0899445 47 2978723 0674286 0497280 2280298 3677148 Total 95 1578947 0349775 0349775 1087692 2070202 Multiple range analysis for KETQUA.Mo_lien_ke by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 48 0208333 X 47 2978723 X contrast difference +/limits - -0.27704 0.13896 * * denotes a statistically significant difference p One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Tim Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 315837 3158366 1.287 2596 Within groups 22.329325 91 2453772 Total (corrected) 22.645161 92 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Tim by KETQUA.Lieu_tiem -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 47 3617021 0708449 0722550 2601913 463213 46 4782609 0744651 0730362 3756526 5808692 Total 93 4193548 0513660 0513660 3471910 4915187 Multiple range analysis for KETQUA.Tim by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 47 3617021 X 46 4782609 X contrast difference +/limits - -0.11656 0.20412 * denotes a statistically significant difference q One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Mang Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.500000 1.5000000 6.278 0139 Within groups 22.458333 94 2389184 Total (corrected) 23.958333 95 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Mang by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 48 3541667 0697614 0705512 2550922 4532411 48 6041667 0713322 0705512 5050922 7032411 Total 96 4791667 0498872 0498872 4091104 5492229 Multiple range analysis for KETQUA.Mang by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 48 3541667 X 48 6041667 X contrast difference +/limits - -0.25000 0.19815 * * denotes a statistically significant difference r One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Mo_tao_mau Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 578126 5781262 2.399 1248 Within groups 22.411348 93 2409822 Total (corrected) 22.989474 94 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Mo_tao_mau by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 48 3333333 0687614 0708552 2338179 4328487 47 4893617 0737043 0716050 3887932 5899302 Total 95 4105263 0503652 0503652 3397889 4812637 Multiple range analysis for KETQUA.Mo_tao_mau by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 48 3333333 X 47 4893617 X contrast difference +/limits - -0.15603 0.20009 * denotes a statistically significant difference s One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Ruot_truoc Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.431499 1.4314993 6.122 0153 Within groups 20.343782 87 2338366 Total (corrected) 21.775281 88 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Ruot_truoc by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 46 3043478 0685922 0712980 2041194 4045762 43 5581395 0766283 0737432 4544738 6618053 Total 89 4269663 0512579 0512579 3549095 4990230 Multiple range analysis for KETQUA.Ruot_truoc by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 46 3043478 X 43 5581395 X contrast difference +/limits - -0.25379 0.20392 * * denotes a statistically significant difference t One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Tuyen_anten Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.757709 1.7577089 7.620 0070 Within groups 21.221014 92 2306632 Total (corrected) 22.978723 93 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Tuyen_anten by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 48 2916667 0663000 0693216 1942913 3890420 46 5652174 0738988 0708126 4657477 6646871 Total 94 4255319 0495365 0495365 3559485 4951153 Multiple range analysis for KETQUA.Tuyen_anten by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 48 2916667 X 46 5652174 X contrast difference +/limits - -0.27355 0.19686 * * denotes a statistically significant difference u One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Da_day Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 981579 9815788 4.055 0471 Within groups 21.545894 89 2420887 Total (corrected) 22.527473 90 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Da_day by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 46 3478261 0709997 0725451 2458768 4497754 45 5555556 0749111 0733468 4524797 6586314 Total 91 4505495 0515782 0515782 3780654 5230335 Multiple range analysis for KETQUA.Da_day by KETQUA.Lieu_tiem Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 46 3478261 X 45 5555556 X contrast difference +/limits - -0.20773 0.20503 * * denotes a statistically significant difference v One-Way Analysis of Variance Data: KETQUA.Bieu_mo_duoi_vo Level codes: KETQUA.Lieu_tiem Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1.041667 1.0416667 4.273 0415 Within groups 22.916667 94 2437943 -Total (corrected) 23.958333 95 missing value(s) have been excluded Table of means for KETQUA.Bieu_mo_duoi_vo by KETQUA.Lieu_tiem Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 48 3750000 0706166 0712674 2749197 4750803 48 5833333 0719124 0712674 4832530 6834136 -Total 96 4791667 0503937 0503937 4083992 5499341 Multiple range analysis for KETQUA.Bieu_mo_duoi_vo by KETQUA.Lieu_tiem -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 48 3750000 X 48 5833333 X a -contrast difference +/limits - -0.20833 0.20016 * -1 * denotes a statistically significant difference b ... Việt, thực đề tài: ? ?Khảo sát trình phát sinh bệnh virus đốm trắng (White Spot Syndrome Virus – WSSV) tơm sú (Penaeus mondon) sử dụng mơ hình gây nhiễm thực nghiệm chuẩn phương pháp hóa mơ miễn dịch? ??... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH =====  ===== KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH PHÁT SINH BỆNH CỦA VIRUS ĐỐM TRẮNG (White Spot Syndrome Virus – WSSV) TRÊN TƠM SÚ (Penaeus mondon) SỬ DỤNG MƠ HÌNH GÂY NHIỄM THỰC... đề tài Thực gây nhiễm thực nghiệm chuẩn virus tôm sú sử dụng liều virus SID50/ml đƣợc chuẩn độ xác định nhằm khảo sát trình phát sinh bệnh virus đốm trắng tơm phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch CHƢƠNG