Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm thượng hoàng (phellinus igniarius)

Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN TRÍCH LY DỊCH NẤM THƢỢNG HOÀNG (PHELLINUS TGNIARIUS) GV hướng dẫn : ThS Nguyễn Tân Thành SV thực : Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Lớp : 52K1 - Công nghệ Thực phẩm NGHỆ AN –2016 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Loan Mã số sinh viên:1152040503 Bạch Thị Thanh Tâm Mã số sinh viên: 1152040561 Khóa: 52 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Tên đề tài: ‘‘Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thượng Hồng (Phellinus Igniarius)’’ Nội dung nghiên cứu - Lý thuyết chung nấm - Lý thuyết chung trích ly - Lý thuyết chung hợp chất phenolic - Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thƣợng Hồng (Phellinus Igniarius) - Xác định tổng hàm lƣơng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hoàng(Phellinus Igniarius) Họ tên cán hƣớng dẫn : Th.S: Nguyễn Tân Thành Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2015 Ngày hoàn thành đồ án : Ngày tháng năm 2016 Ngày Chủ nhiệm môn (Ký, ghi rõ họ, tên) tháng năm 2016 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án tốt nghiệp ngày tháng năm 2016 Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Loan Bạch Thị Thanh Tâm Khóa: 52 Mã số sinh viên: 1152040503 Mã số sinh viên: 1152040561 Ngành: Công nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn: Th.S Nguyễn Tân Thành Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………… Ngày tháng năm 2016 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành LỜI CẢM ƠN Đồ án đƣợc hồn thành phịng Trung tâm phân tích chuyển giao cơng nghệ Thực phẩm -Môi trƣờng, trƣờng ĐH Vinh Chúng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Vinh, môn Công Nghệ Thực Phẩm, quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho thời gian học tập trƣờng Để hoàn thành đƣợc đồ án này, chúng tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy giáo – Th.S Nguyễn Tân Thành giao đề tài, hết lòng hƣớng dẫn, bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình hồn thành đồ án Chúng tơi xin bày tỏ lòng biết ơn kỹ thuật viên Trung tâm, cô Ngô Thị Thủy Hà giúp đỡ tạo điều kiện sử dụng máy móc thiết bị nghiên cứu Tuy nhiên, đồ án chắn cịn nhiều thiếu sót, mong q thầy bạn góp ý để đồ án đƣợc hồn thiện hơn, giúp chúng tơi học hỏi, rút kinh nghiệm cho công tác nghiên cứu sau Cuối cùng, lần xin đƣợc gửi đến tất ngƣời quan tâm, giúp đỡ hoàn thành đồ án lời cảm ơn chân thành ! Vinh, tháng năm 2016 Sinh viên Nguyễn Thị Loan Bạch Thị Thanh Tâm SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành TÓM TẮT Mẫu nấm Phellinus igniarius đƣợc lấy từ rừng quốc gia Pù Mát huyện Con Cuông, tỉnh Nghệ An Mấu nấm sau đƣợc xử lí công đoạn (loại bỏ tạp chất, cắt nhỏ, xay nghiền) Đƣợc chiết với dung môi nƣớc theo phƣơng pháp: chiết Thƣờng, chiết Hồi Lƣu, chiết Siêu âm Chúng nghiên cứu khả tách chiết hoạt chất sinh học từ nấm Phellinus Igniarius việc khảo nghiệm dung môi ( loại dung môi chiết với độ phân cực tăng dần là: ethanol, methanol,ethyl acetate, nƣớc); dải thời gian (3,4,5,6,7,8,9,10,11); dải nhiệt độ (30,40,50,60,70,80); dải tỉ lệ nguyên liệu/dung môi (1/40, 1/35, 1/30, 1/25, 1/20, 1/15, 1/10) Sau q trình chiết chúng tơi tiến hành xác định số hiệu suất trích li hàm lƣợng phenolic có dịch chiết Dựa vào hiệu suất trích ly hàm lƣợng pheinolic chúng tơi tìm đƣợc chế độ trích li hoạt chất nấm Phellinus igniarius thích hợp SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ đồ án Đối tƣợng nghiên cứu Phạm vi phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài nghiên cứu CHƢƠNG I TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU Nấm Thƣợng Hoàng 1.1 Nguồn gốc 1.2.Vị trí phân loại 1.3 Tình hình trồng nấm Thƣợng Hoàng Thế giới Việt Nam 1.4 Phân bố 1.5 Hình thái cụ thể 1.6 Các nghiên cứu nấm Thƣợng hoàng 1.6.1 Thành phần hóa học 1.6.2 Tác dụng sinh học nấm Thƣợng Hoàng 16.3 Công dụng hổ trợ điều trị bệnh Tổng quan phenolic 2.1 Giới thiệu hợp chất phenolic thực vật 2.2 Phân loại hợp chất phenolic 2.3 Các hợp chất phenolic nấm 2.4 Hoạt tính sinh học phenolic 10 Chƣơng II 12 TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP 12 Tổng quan phƣơng pháp trích li 12 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 1.1.Giới thiệu chung trích li 12 1.1.1.Định nghĩa 12 1.1.2.Cơ chế q trình trích li 12 1.1.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến hàm lƣợng phenolic 12 1.1.4 Những biến đổi ngun liệu q trình trích li 13 1.1.5 Một số phƣơng pháp trích li 14 1.1.5.1 Phƣơng pháp chiết xuất gián đoạn 14 1.1.5.3 Phƣơng pháp trích li liên tục 16 1.1.6 Dung mơi trích li 16 1.1.6.1 Tiêu chí chọn dung mơi 16 1.1.6.2 Phân loại dung môi 17 1.1.6.3 Độ phân cực dung môi 17 Tổng quan vềp phƣơng pháp trắc quang xác định hàm lƣợng hợp chấtphenolic 18 2.1 Nguyên tắc: 18 2.2 Đánh giá kết phân tích 19 2.2.1 Phƣơng pháp xử lý kết phân tích 19 2.2.2 Phƣơng pháp thống kê xử lý đƣờng chuẩn 21 CHƢƠNG III 22 KỸ THUẬT THỰC NGHIỆM 22 Đối tƣợng nghiên cứu 22 1.1 Nấm Thƣợng Hoàng (Phellinus Igniarius) 22 1.2Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 22 1.2.1 Dụng cụ, thiết bị 22 1.2.2 Hóa chất 23 1.3 Pha chế dung dịch 24 1.3.1 Thuốc thử Folin – Ciocalteu 24 1.3.2.Thuốc thử Folin – Ciocalteu 10% 24 1.3.3 Dung dịch Na2CO3 7,5% 25 1.3.4 Pha chế dãy dung dịch chuẩn 25 Quy trình cơng nghệ trích li hoạt chất sinh học từ nấm Thƣợng hoàng đƣợc nghiên cứu đề tài 26 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 2.1 Sơ đồ quy trình cơng nghệ 26 2.2 Thuyết minh quy trình cơng nghệ 26 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 28 3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly lên hàm lƣợng phenolic 28 3.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hƣớng dung mơi lên hàm lƣợng phenolic.29 3.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣớng nhiệt độ lên hàm lƣợng phenolic 31 3.4 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hƣớng thời gian lên hàm lƣợng phenolic 32 3.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng tỉ lệ nguyên liệu / dung môi lên hàm lƣợng phenolic 33 4.Phƣơng pháp phân tích 34 4.1 Xác định độ ẩm: Phƣơng pháp sấy đến khối lƣợng không đổi 34 4.2 Xác định hàm lƣợng cellulose nguyên liệu 34 4.3 Xác định hàm lƣợng phenollic nguyên liệu phƣơng pháp quang phổ 35 Chƣơng IV 37 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 Nghiên cứu số thành phần nấm Thƣợng Hoàng 37 Xác định tổng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hoàng 37 2.1 Xây dựng phƣơng trình đƣờng chuẩn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ axit gallic 37 2.1.1 Đƣờng chuẩn ethanol 37 2.1.2 Đƣờng chuẩn nƣớc 40 2.2 Kết xác định hàm lƣợng phenolic trong dịch chiết nấm Thƣợng hoàng phƣơng pháp trắc quang 42 2.2.1 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết thƣờng 42 2.2.2 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết siêu âm 45 2.2.3 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết hồi lƣu 46 2.2.4 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm etanol 48 2.2.5 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm etyl acetate 50 2.2.6 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm methanol 52 2.2.7 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm nƣớc 54 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 2.2.8 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát nhiệt độ 56 2.2.9 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát thời gian 56 2.2.10 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 56 2.3 Kết khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thƣợng Hồng (Phellinus Igniarius) 59 2.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly tới hàm lƣợng phenolic 59 2.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic 60 2.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic 60 2.3.4 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic 62 2.3.5 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi tới hàm lƣợng phenolic 63 PHẦN V 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, xã hội ngày phát triển, điều kiện sống nhu cầu ngƣời ngày cao, kéo theo bệnh tật hiểm nghèo xuất ngày nhiều làm tuổi thọ ngƣời giảm xuống nguyên nhân ngƣời mắc phải nhiều bệnh hiểm nghèo nhƣ ung thƣ, tim… Theo nghiên cứu nhà khoa học nƣớc Thƣợng Hoàng đƣợc xem nhƣ loại tiên dƣợc, chữa đƣợc bách bệnh, giúp ngƣời trƣờng thọ Chúng chứa tới 120 chất, bao gồm hợp chất hữu cơ, nguyên tố vi lƣợng vitamin Thƣợng Hồng có tác dụng đặc biệt triệu chứng suy giảm miễn dịch, căng thẳng thần kinh suy sụp tinh thần, giải độc kém, ngủ, triệu chứng hệ tim mạch, ăn khơng ngon, bệnh béo phì, da xấu nhiều nếp nhăn (Garcı'a-Lafuente et al, 2009; Guillamo'n et al, 2010; Puttaraju et al, 2006) Thƣợng Hồng có tác dụng việc ngăn ngừa bệnh AIDS làm chậm trình phát bệnh bệnh nhân mắc phải bệnh Họ sử dụng phƣơng pháp bào chế thông thƣờng ngâm rƣợu, cắt lát nấu lấy nƣớc, nghiền bột để uống, bào chế thành viên nang, viên hoàn thuốc tiêm Ở Nhật Bản, ngƣời ta sử dụng nấm nhƣ nguồn thực phẩm dƣợc phẩm hàng đầu, họ có sức khỏe tốt tuổi thọ cao Không dùng đơn dạng nấm tƣơi mà Nhật nấm đƣợc sản xuất thành nhiều dạng sản phẩm nhƣ: nƣớc tƣơng, bột nấm, nƣớc chao, súp nấm, thực phẩm chức bổ, loại, thuốc, trà để điều trị số bệnh nhƣ: viêm phế quản mãn tính, bệnh tim mạch, viêm gan cấp mãn, viêm khớp, viêm phổi Việc điều trị loại thuốc, hóa chất trị liệu khan đắt tiền so mức thu nhập ngƣời Việt Nam (chƣa kể đến tác dụng phụ) Trong nấm Thƣợng Hồng với giá thành tƣơng đối rẻ có hiệu cao việc điều trị làm thuyên giảm số bệnh nhƣ: ung thƣ, đái đƣờng, vấn đề tim mạch, hô hấp( Hoạt động chống ung thư số basidiomycetes, đặc biệt Phellinus linteus Ikekawa et al Ung thư jpn J Res 1968; 59:155-157) Chính lý nhƣ mà đề xuất đề tài “Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thượng Hồng” nhằm góp phần đa dạng chế phẩm thuốc từ nấm, hạn chế phần bệnh tật hiểm nghèo ngày tràn lan Nhiệm vụ đồ án Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Giới thiệu nấm Thƣợng Hoàng, phƣơng pháp nghiên cứu SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành Để đánh giá độ xác phƣơng pháp, sử dụng hàm phân bố Student để đánh giá kết thu đƣợc xác định hàm lƣợng phenolic mẫu thật Chọn C = 0,007889422; C ≈ X ; yi = xi -C n Ta có: Giá trị trung bình: X  C   i 1 - Phƣơng sai: S X  X n 1 i  yi = 0,007888676 n = 1,9301E-12 - Độ lệch chuẩn trung bình: S X  S2 = 8,02102E-07 n  Xác định độ tin cậy kết phân tích Ta có:   t p, k S X = 3,44904E-06, Với t(0,95;2) = 4,3 Trong t p , k hàm phân bố student ứng với bậc tự k (k= n-1) xác suất p - Khoảng tin cậy: X   a  X  0,007885227≤ Cphenolic ≤ 0,007892125 Nếu  nhỏ X gần tới giá trị thực - Hàm phân bố thực nghiệm ttn  X a SX = 0,007888676- 0,00789│/ 8.02102E- 07= 1,650150231 - So sánh ttn với t p , k ta thấy: ttn = 1,65< t p , k = 4,3 X ≠a nguyên nhân ngẫu nhiên với p = 0,95 - Sai số tƣơng đối q%   X 100  t p , k S X X 100 = 0,043721397% q% = 0,043% < 5% kết nghiên cứu đƣợc chấp nhận áp dụng kết nghiên cứu để xác định hàm lƣợng phenolic số đối tƣợng  Từ bảng ta có mật độ quang trung bình mẫu là: ∆Ai = (0,71658+ 0,71637+ 0,71659)/3 = 0,716513333 Mặt khác, từ phƣơng trình đƣờng chuẩn xây dựng ∆Ai = (0,011104 ± 0,016196124) + (89,421 ± 3,453025217).Ci Chúng tơi tính đƣợc nồng độ phenolic 1ml dung dịch đem phân tích: 0,007420947≤ Cphenolic ≤ 0,008393887 Hàm lƣợng phenolic gam mẫu khô đƣợc tính theo cơng thức: SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 55 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành m phenolicmg / g   C phenolic.V m Trong đó: V: Là thể tích dung dịch mẫu ban đầu m: Là khối lƣợng mẫu Vậy hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm nƣớc là: 2,226284068≤ mphenolic ≤ 2,518166069 (mg/g) 2.2.8 Hàm lượng phenolic dịch chiết nấm khảo sát nhiệt độ Cách tính tƣơng tự 2.2.9 Hàm lượng phenolic dịch chiết nấm khảo sát thời gian Cách tính tƣơng tự 2.2.10 Hàm lượng phenolic dịch chiết nấm khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/ dung mơi Cách tính tƣơng tự Bảng 4.10 Kết đánh giá sai số thống kê phép phân tích Yếu tố thay đổi Nồng độ trung bình Phƣơng sai S2 Độ lệch chuẩn đại lƣợng trung bình SX Sai số tin cậy ᵋ Sai số tƣơng đối q% Chiết thƣờng 0,009396003 4,33475E-11 3,80121E-06 1,6345E-05 0,173953385 Chiết siêu âm 0,010045739 9,6697E-11 5,67735E-06 2,4412E-05 0,243017297 Chiết hồi lƣu 0,001944733 1,73444E-19 2,40447E-10 1,03392E-09 5,31652E-05 ethylacetate 0,002419864 9,71426E-10 1,79947E-05 7,7377E-05 3,197582 metanol 0,003494891 1,407E-09 2,16564E-05 9,3122E-05 2,664534 Nƣớc 0,007888676 1,9301E-12 8,02102E-07 3,4490E-06 0,043721 etanol 0,002166903 5,33551E-11 4,21723E-06 1,81341E-05 0,836866 300C 0,001706317 1,92634E-09 2,534E-05 0,00010896 3,385794 400C 0,001893998 1,55666E-11 2,27791E-06 9,7950E-06 0,51716 50 C 0,002278792 1,53521E-09 2,26216E-05 9,7273E-05 4,268619 600C 0,002616685 1,07423E-10 5,98396E-06 2,5731E-05 0,983344 700C 0,002764064 2,79527E-10 9,65276E-06 4,1506E-05 1,501661 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 56 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 800C 0,003494208 3,29075E-11 3,31197E-06 1,4241E-05 0,407831 3h 0,002172835 5,421E-14 1,34425E-07 5,7802E-07 0,026602 4h 0,002325992 3,86125E-09 3,58759E-05 0,00015426 3,632286 5h 0,00258328 3,50645E-06 0,001081119 0,00464881 1,78226559 6h 0,002723239 6,42792E-10 1,46378E-05 6,2942E-05 2,311306 7h 0,002906111 9,73994E-10 1,80185E-05 7,7479E-05 2,666084247 8h 0,002952565 4,33734E-10 1,20241E-05 5,1703E-05 1,751136 9h 0,002952714 6,11655E-11 4,51536E-06 1,9416E-05 0,657567 10h 0,003073958 6,94171E-10 1,52115E-05 6,5409E-05 2,127861 11h 0,00310315 2,04455E-11 2,61059E-06 1,1225E-05 0,361746098 1/10 0,001422596 2,35476E-10 8,85956E-06 3,8096E-05 2,67793 1/15 0,00508506 1,75903E-10 7,65731E-06 3,2926E-05 0,647513 1/20 0,001779055 2,58206E-11 2,93375E-06 1,2615E-05 0,709091 1/25 0,003193486 1,38611E-11 2,1495E-06 9,2428E-06 0,289428 1/30 0,004785904 3,28179E-12 1,04591E-06 4,4974E-06 0,093972 1/35 0,005600419 7,6853E-12 1,60055E-06 6,8823E-06 0,12289 1/40 0,003651206 4,78299E-12 1,26267E-06 5,4294E-06 0,148703 Kết đánh giá sai số thống kê cho thấy phép phân tích có sai số nhỏ, chứng tỏ độ xác cao hệ số biến động nhỏ, chứng tỏ độ lặp lại tốt Vì kết nghiên cứu đƣợc chấp nhận áp dụng kết nghiên cứu để xác định hàm lƣợng phenolic số đối tƣợng Bảng 4.11 Bảng tính hàm lƣợng phenolic gam mẫu nấm Mật độ quang trung bình Nồng độ phenolic 1ml dung dichj đem phân tích hàm lƣợng phenolic 1g mẫu nấm (A) (mg/ml) (mg/g) Chiết thƣờng 0,8513 [0,008872232 – 0,009961758] [0,266166957-.298852727] Chiết siêu âm 0,9094 [0,009497703-0,010637474] [0,28493108-0,31912423] Chiết hồi lƣu 0,185 [0,001697998-0,002211197] [0,509399293-0,66335908] Yếu tố thay đổi SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 57 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành ethylacetate 0,22749 [0,002155499- 0,002705451 ] [0,646649724-0,81163523] metanol 0,32362 [0,003190521- 0,003823619] [0,95715634- 1,14708573] Nƣớc 0,71651 [0,007420947- 0,008393887] [2,22628406- 2,518166069] etanol 0,20487 [0,002219245- 0,0024391] [0,66577337- 0,731730005] 300C 0,148757 [0,00156101 – 0,00183946] [0,468303 – 0,551838023] 400C 0,165537 [0,00176 – 0,00201879] [0,527358 – 0,605635696] 500C 0,19994 [0,00216 – 0,00238645] [0,648435 – 0,71593482] 600C 0,23015 [0,00252 – 0,0027093] [0,754754 – 0,812789868] 700C 0,243327 [0,00267 – 0,00285012] [0,801127 – 0,855035041] 800C 0,308607 [0,00344 – 0,00354776] [1,03087 – 1,064326585] 3h 0,190467 [0,00205 – 0,00228521] [0,615095 – 0,685562752] 4h 0,20416 [0,00221 – 0,00243155] [0,663286 – 0,729464389] 5h 0,227163 [0,00248 – 0,00267738] [0,744243 – 0,803214438] 6h 0,239677 [0,00263 – 0,00281111] [0,788282 – 0,843332925] 7h 0,256027 [0,00282 – 0,00298584] [0,845823 – 0,895751993] 8h 0,26018 [0,00287 – 0,00303023] [0,86044 – 0,909067825] 9h 0,260193 [0,00287 – 0,00303037] [0,860487 -0,909110573] 10h 0.271033333 [0,002936737– 0,003191972] [0,88102100 – 0,95759169] 11h 0,273643333 [0,002968375 – 0,003219006] [0,8905123 – 0,96570169] 1/10 0,12339 [0,00126 – 0,00156837] [0,441– 0,5489295] 1/15 0,45084 [0,00506778 – 0,0051] [0,5056720 – 0,511910867] 1/20 0,15526 [0,00164 – 0,00190896] [0,49119 – 0,572688095] 1/25 0,28172 [0,00312 – 0,00326042] [ 0,624 – 0,652084] 1/30 0,424093 [0,00478195 – 0,00479] [0,7172925– 0,7185] 1/35 0,496917 [0,0055602 – 0,00565] [1,39005– 1,4125] 1/40 0,322643 [0,0036 – 0,00369776] [1,44 – 1,479104] SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 58 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 2.3 Kết khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thƣợng Hồng (Phellinus Igniarius) 2.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly tới hàm lƣợng phenolic Chúng tơi tiến hành khảo sát loại phƣơng pháp chiết: chiết thƣờng, chiết siêu âm, chiết hồi lƣu Bảng 4.12 Ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng phenolic Phƣơng pháp chiết H/l phenolic (mg/g) Thƣờng 0,282 Siêu âm 0,301 Hồi lƣu 0,583 Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly tới hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Hàm lƣợng phenolic tăng dần tƣơng ứng với cách chiết: chiết thƣờng, chiết siêu âm, chiết hồi lƣu Nhƣ khả thu hồi hàm lƣợng phenolic phƣơng pháp chiết hồi lƣu cao Mặt khác phƣơng pháp chiết hồi lƣu dễ thực Với kết nhƣ vậy, sử dụng phƣơng pháp chiết hồi lƣu cho khảo sát SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 59 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 2.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic Bảng 4.13 Ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic Dung môi Hàm lƣợng phenolic (mg/g) ethylacetate 0,726 Metanol 1,048 Nƣớc 2,366 etanol 0,65 Hình 4.8 Biểu đồ thể ảnh hƣởng dung môi lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Hàm lƣợng chất phenolic thu hồi tăng dần tƣơng ứng với dung môi: etanol, ethylacetate, metanol, nƣớc Nhƣ khả khả thu hồi phenolic nƣớc lớn Nƣớc dung môi rẻ tiền dễ kiếm thân thiện với môi trƣờng 2.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic Chúng tiến hành khảo sát chiết với dung môi etanol dải nhiệt độ 30,40, 50,60, 70, điều kiên SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 60 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành Bảng 4.14 Ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic Nhiệt độ 0C Hàm lƣợng phenolic (mg/g) 30 0,512 40 0,568 50 0,683 60 0,785 70 0,829 80 1,048 Hình 4.9 Biểu đồ thể ảnh hƣởng nhiệt độ lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Hàm lƣợng phenolic thu hồi tăng dần tƣơng ứng với điểm nhiêt độ 30, 40, 50, 60, 70, 80OC Nhƣ vậy, ta thấy nhiệt độ ảnh hƣởng nhiều đến khả trích ly dịch nấm Thƣợng Hồng, khả trích ly dịch khoảng 80OC thích hợp SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 61 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 2.3.4 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic Bảng 4.15 Ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic Thời gian (h) Hàm lƣợng phenolic (mg/g) 0,652 0,697 0,775 0,817 0,873 0,8857 0,8858 10 0,922 11 0,931 s Hình 4.10 Biểu đồ thể ảnh hƣởng thời gian lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Nhìn vào kết nghiên cứu ta nhận thấy thời gian trích ly dài hiệu suất thu hồi hàm lƣợng phenolic cao Tuy nhiên thời gian tăng lên 11h hiệu suất thu hồi tăng nhƣng khơng đáng kể SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 62 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành Vậy thời gian 10h đem lại hiệu cao cho q trình trích lý hàm lƣợng phenolic 2.3.5 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi tới hàm lƣợng phenolic Bảng 4.16 Ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi tới hàm lƣợng phenolic Tỉ lệ (g/ml) Hàm lƣợng phenolic (mg/g) (1/10) 0,498 (1/15) 0,508 (1/20) 0,533 (1/25) 0,638 (1/30) 0,717 (1/35) 1,4 (1/40) 1,46 Hình 4.11 Biểu đồ thể ảnh hƣởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Kết cho thấy hàm lƣợng phenolic giảm dần theo chiều tăng tỉ lệ tỉ lên 1/35 cho hiệu suất trích ly cao, tƣơng đƣơng với tỉ lệ 1/35 lƣợng dung SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 63 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành mơi sử dụng Vì tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 1/35 đƣợc lựa chọn phù hợp  Từ kết khảo sát thu đƣợc kết quả: Chọn phƣơng pháp chiết hồi lƣu Dung môi: Nƣớc Nhiệt độ: 80 C Thời gian: 10h Tỉ lệ nguyên liệu / dung mơi: 1/35 (g/ml) Quy trình cơng nghê: Ngun liệu Làm Chiết: hồi lƣu Т°C = 80°C T = 10 (h) Tỉ lệ : nguyên liệu/ dung môi=1/35 Cắt nhỏ Ф = 1,5 mm Nghiền Ф = 1mm Trích ly Dung mơi Hỗn hợp dịch, bã Lọc Cặn, bã Dịch lọc Dung môi Cô quay Sấy Т°C=50°C Т°C=60°C SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm Bột nấm 64 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Căn vào nhiệm vụ đề tài, dựa kết nghiên cứu, rút kết luận sau: Đã xác định đƣợc số thành phần có nấm nhƣ: độ ẩm, hàm lƣợng cellulose Khả trích li phƣơng pháp chiết, dung môi, nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi khác khác Nghiên cứu đƣợc ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly, dung môi, thời gian, nhiệt độ, tỉ lệ nguyên liệu/ dung mơi Xác đinh đƣợc điều kiện trích ly hoạt chất dịch nấm Thƣợng Hoàng (Phellinuc Igniarius): Phƣơng pháp chiết hồi lƣu, dung môi: nƣớc, nhiệt độ 80 C, thời gian: 10h tỉ lệ nguyên liệu / dung mơi: 1/35 (g/ml) Đã xây dựng đƣợc phƣơng trình đƣờng chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ hợp chất phenolic, theo chất chuẩn axit gallic, dùng thuốc thử FolinKết cho phép áp dụng phƣơng pháp để xác định tổng hàm lƣợng phenolic mẫu nấm với độ xác cao Kiến nghị Do giới hạn mặt thời gian, điều kiện trang thiết bị nhƣ điều kiện kinh tế nên thí nghiệm chƣa đƣợc thực hồn chỉnh Để hồn thiện quy trình nghiên cứu chúng tơi có số đề nghị sau: + Định lƣợng hàm lƣợng cacbohydrat, tạp chất khơng hịa tan nguyên liệu + Nghiên cứu ảnh hƣởng PH lên hiệu suất trích li + Nghiên cứu điều kiện tối ƣu cho q trình trích ly quy hoạch thực nghiệm + Khảo sát lƣợng mẫu lớn để có kết tốt + Thiết kế bao bì để tránh hƣ hỏng sản phẩm SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 65 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đinh Xuân Linh, Thân Đức Nhã, Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn, (2008), Kỹ thuật trồng chế biến nấm ăn nấm dược liệu, Hà Nội Hồ Viết Quý (2002) Cơ sở hóa học phân tích đại - tập II – Các phương pháp phân tích lý – hóa, NXBĐHSP Lê Ngọc Tú, Bùi Đức Hợi, Lƣu Duẩn, Ngô Hữu Hợp, Đặng Thị Thu, Nguyễn Trọng Cần (2001) Hóa thực Phẩm, NXBKHKT BS Nguyễn Bá Nhuận, (2007), Tasly Lingzhi300 với chiến chống ung thư Nguyễn Thị Minh Tú (2009), Quy trình tách chiết hoạt chất sinh học từ nấm linh chi (Ganoderma lucidum), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 47(1) 45-53 Nguyễn Thị Chính (2005), Báo cáo tổng kết Khoa học Kỹ thuật “Phát triển công nghệ sản xuất nấm dược liệu phục vụ tăng cường sức khỏe” Đề tài hợp tác nghiên cứu khoa học nghị định thƣ phủ Việt Nam-Hàn Quốc Nguyễn Thƣợng Dong (2007), Nấm Linh chi, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Tuấn Anh, Trần Thu Hƣơng, Nguyễn Thị Phƣơng Hà (2007), Khảo sát điều kiện chiết hợp chất có hoạt tính sinh học nấm linh chi (Ganoderma lucidum Karst.) Tuyển tập cơng trình - Hội nghị khoa học cơng nghệ Hố học Hữu tồn quốc lần thứ 4, 284-288 Trần Thị Văn Thi, Nguyễn Thị Hoài, Lê Trung Hiếu, (2012), Chiết xuất, xác định hàm lƣợng khảo sát tác dụng dƣợc lý phân đoạn polysaccharid từ nấm linh chi nuôi trồng Thừa Thiên Huế, Tạp chí dƣợc học, số 443, 18-22 10 Trần Tuấn Kha (2013), Nghiên cứu thành phần loài đặc điểm phân bố nấm làm dƣợc liệu mọc gỗ vƣờn Quốc gia Ba Vì, Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn, kỳ 1+2, 183-187 11 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, tập, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội 12 Trịnh Thanh Tâm, Nguyễn Quốc Cƣờng, Từ Phan Nam Phƣơng, Đống Thị Anh Đào, (2011), Nghiên cứu ảnh hƣởng điều kiện sấy đối lƣu đến thành phần dinh dƣỡng bột nấm mèo Auricularia auricula-judae, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 49(6A), 176-182 13 Vũ Kim Thoa, Bùi Thị Hƣơng, Nguyễn Thùy Châu, (2001), Nghiên cứu công nghệ sản xuất nấm linh chi sinh khối, Kết nghiên cứu KH-CN Viện Công nghệ sau thu hoạch, 48-56 Tài liệu tiếng anh 14 Ali Khoddami, Meredith Thomas H Roberts (2013) Review: Techniques for Analysis of Plant Phenolic Compounds, Molecules, 18, 2328-2375 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 66 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 15 L.M Cheung, Peter C.K Cheung * Mushroom extracts with antioxidant activity against lipid peroxidation Food Chemistry 89 (2005) 403–409 16 Zhu T., Kim S.H., Chen C.Y (2008), A medicinal mushroom: Phellinus linteus, Curr Med Chem.,15, 1330-1335 17 Rathee S., Rathee D., Rathee D., Vikash K., Rathee P (2012), Mushrooms as therapeutic agents, Rev Bras Farmacogn Braz J Pharmacogn., 22, 459-574 18 Vojdani A., Erde J (2006), Regulatory T cells, a potent immunoregulatory target for CAM researchers: modulating allergic and infectious disease pathology (II), Evid Based Complement Alternat Med., 3, 209-215 19 Ramberg J.E, Nelson E.D., Sinnott R.A (2010) Immunomodulatory dietary polysacchari des: a systematic review of the literature, Nutr J 54-75 20 Donatini B (2010), Basics on mycotherapy: preliminary concepts on the medicinal use of mycelia, Phytotherapie, 8,191-197 21 Lull C., Wichers H.J., Savelkoul H.R.I (2005), Antiinflammatory and immunomodul ating properties of fungal metabolites, Media Inflam., 2, 63-80 22 Lee I.K., Yun B.S (2007), Highly oxygenated and unsaturated metabolites providing a diversity of hispidin class antioxidants in the medicinal mushrooms Inonotus and Phellinus, Bioorg Med Chem.,15, 3309-14 23 Lee I.K., Yun B.S (2011), Styrylpyrone-class compounds from medicinal fungi Phellinus and Inonotus spp., and their medicinal importance, J Antibiot 64, 349-59 24 Jung J.Y., Lee I.K., Seok S.J., Lee H.J., Kim Y.H., Yun B.S (2008), Antioxidant polyphenols from the mycelia culture of the medicinal fungi Inonotus xeranticus and Phellinus lintrus, J Appl Microbiol., 104, 1824-1832 25 Min B.S., Yun B.S., Lee H.K., Jung H.J., Jung H.A., Choi J.S (2006), Two novel furan derivatives from Phellinus linteus with anti-complement activity, Bioorg Med Chem Lett., 16, 3255-7 26 Lee Y.S., Kang Y.H., Jung J.Y., Kang I.J., Han S.N., Chung J.S (2008), Inhibitory constituents of aldose reductase in the fruiting body of Phellinus linteus, Biol Pharm Bull., 31, 765-8 27 Lee Y.S., Jang Y.H., Jung J.Y., Lee S., Ohuchi K., Shin K.H (2008) Protein glycation inhibitors from the fruiting body of Phellinus linteus Biol Pharm Bull., (1), 1968-72 28 Nagatsu A., Itoh S., Tanaka R., Kato S., Haruna M., Kishimoto, (2004), Identification of novel substituted fused aromatic compounds, meshimakobnol A and B, from natural Phellinus linteus fruit body, Tetrahedron Lett., 45, 59313 SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 67 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 29 Koji ma K., Ohno T., Inoue M., Mizukami H., Nagatsu A.(2008) Phellifuropyranone A: a new furopyranone compound isolated from fruit bodies of wild Phellinus linteus Chem Pharm Bull., 56, 173-175 30 Zheng Y.B., Lu C.H., Shen Y.M ( 2012), New abscisic acid-related metabolites from Phellinus vaninii, J Asian Nat Prod Res., 14(7) 613-617 31 Song A.R., Sun X.L., Kong C., Zhao C., Qin D., Huang F., Yang S (2014), Discovery of a new sesquiterpenoid from Phellinus ignarius with antiviral activity against influenza virus, Arch Virol., 159(4) 753-760 32 Jeon T.I., Jung C.H., Cho J.Y., Park D.K., Moon J.H ( 2013), Identification of an anticancer compound against HT-29 cells from Phellinus linteus grown on germinated brown rice, Asian Pac J Trop Biomed., 3(10) 785-789 33 Chen Y.C., Chang H.Y., Deng J.S., Chen J.J., Huang S.S., Lin I.H., Kuo W.L., Chao W., Huang G.J (2013), Hispolon from Phellinus linteus induces G0/G1 cell cycle arrest and apoptosis in NB4 human leukaemia cells, Am J Chin Med., 41(6) 1439-1457 34 Kubo M., Liu Y., Ishida M., Harada K., Fukuyama Y ( 2014), A new spiroindene pigment from the medicinal fungus Phellinus ribis, Chem Pharm Bull , 62(1) 122-124 35 He J.B., Feng T., Zhang S., Dong Z.J., Li Z.H., Zhu H.J., Liu J.K ( 2014), Seven new drimane-type sesquiterpenoids from cultures of fungus Phellinus tuberculosus, Nat Prod Bioprospect., 4, 21-25 36 Huang S.C., Kuo P.C., Hwang T.L., Chan Y.Y., Chen C.H., Wu T.S.,(2013), Three novel sesquiterpenes from the mycelium of Phellinus linteus, Tetrahedron Letters, 54(26), 3332-3335 37 Hsieha P.W., Wub J.B., Wu C.H., Chemistry and biology of Phellinus linteus (2013), BioMedicine, 3, 106-113 38 Park, H.K., Ko, H.G., Kim, S.H., Park, W.M., 2004 “Molecular identification of Asian isolates of medicinal mushroom Hericium erinaceum by phylogenetic analysis of nuclear ITS rDNA” J Microbiol Biotechnology 14, pp 816–821 39 Sheng - Quan Huang, Jin-Wei Li, Zhou Wang, Hua - Xin Pan, Jiang - Xu Chen and Zheng - Xiang Ning (2010), “Optimization of Alkaline Extraction of Polysaccharides from Ganoderma lucidum and Their Effect on Immune Function in Mice”, Molecules 40 Wilfred Vermerris, Ralph Nicholson Phenolic Compound Biochemistry Springer Pages 1,2; 41 Yilin W., (2010), “Method for extracting Hericium erinaceus polysaccharide”, CN 103044563 A SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 68 Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Tân Thành 42 Aishah M.S, Wan Rosli W.I, (2013), Effect of different drying techniques on the nutritional values of oyster mushroom (Pleurotus sajor-caju), Sains Malaysiana, 42(7), 937-941 43 Diego F Rojas Vahos, Paola A Zapata Ocampo, Ana M Palacio Barrera, Sandra P Ospina Alvarez, Lucía Atehortúa (2013), Basidiomycetes mushroom biotechnology for the development of functional products: The effect of drying processes on biological activity The open conference proceedings journal, 4, 93-98 44 Jo W S., Park S D., Park S C., Chang Z Q., Seo G S., Uhm J Y., Jung H.Y (2009), Changes in quality of Phellinus gilvus mushroom by different drying methods, Mycoscience 50: 70-73 45 Lee, M J., Seog, E J., Lee, J H (2007) Physicochemical properties of Chaga (Inonotus obliquus) mushroom powder as influenced by drying methods Journal of Food Science and Nutrition, 12, 40–45 46 Ma L S, Chen H X., Zhu W C., Wang Z S (2013), Effect of different drying methods on physicochemical properties and antioxidant activities of polysaccharides extracted from mushroom Inonotus obliquus, Food Research International, 50(2) 633–640 47 Tulek Y, (2011), Drying kinetics of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus) in a convective hot air dryer, Journal agriculture science techology 13, 655-664 48 Michel Duubois, K.A Gilles, J.K.Hamilton, P.A Reber and Fred Smith, “Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances” SVTH: Nguyễn Thị Loan – Bạch Thị Thanh Tâm 69 ... ‘? ?Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thượng Hồng (Phellinus Igniarius)? ??’ Nội dung nghiên cứu - Lý thuyết chung nấm - Lý thuyết chung trích ly - Lý thuyết chung hợp chất phenolic - Khảo sát điều. .. việc trích ly hoạt chất nấm Thƣợng Hoàng -Ý nghĩa thực tiễn: Việc nghiên cứu đề tài ? ?Khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thượng Hồng (Phellinus Igniarius)? ?? trƣớc hết giúp cho thân hiểu sâu sắc nấm. .. môi 56 2.3 Kết khảo sát điều kiện trích ly dịch nấm Thƣợng Hồng (Phellinus Igniarius) 59 2.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp trích ly tới hàm lƣợng phenolic 59 2.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng dung