Khảo sát về mặt thực vật học và thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm của các dịch chiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Mai Thị Trà Giang KHẢO SÁT VỀ MẶT THỰC VẬT HỌC VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CÁC DỊCH CHIẾT TỪ CÂY TRINH NỮ (MIMOSA PUDICA L.) VÀ QUẢ LỰU (PUNICA GRANATUM L.) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS TRƯƠNG THỊ ĐẸP PGS.TS NGUYỄN ĐINH NGA Thành phố Hồ Chí Minh - 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan luận văn công trình nghiên cứu riêng tơi Kết trình bày luận văn trung thực chưa tác giả cơng bố cơng trình Các trích dẫn bảng biểu, kết nghiên cứu tác giả khác; tài liệu tham khảo luận văn có nguồn gốc rõ ràng theo quy định TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Mai Thị Trà Giang LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Trương Thị Đẹp, PGS.TS Nguyễn Đinh Nga - người tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi q trình học tập, nghiên cứu hoàn thiện luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Giáo sư, Phó giáo sư, Tiến sĩ Hội đồng cấp đọc góp ý cho luận văn tơi Tơi xin gửi lời cảm ơn đến Q thầy phịng mơn Thực vật, mơn Kí sinh trùng Trường Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn Qua đây, xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè giúp đỡ, động viên, cổ vũ tinh thần cho suốt thời gian thực luận văn TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Mai Thị Trà Giang MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU I LÍ DO CHỌN ĐỀ TÀI II MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU .2 III ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU IV NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU .2 V PHẠM VI NGHIÊN CỨU VI Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA LUẬN VĂN Chương TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY TRINH NỮ VÀ CÂY LỰU .4 1.1.1 Cây Trinh nữ 1.1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.1.3 Phân bố, sinh thái 1.1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.1.6 Tính vị, tác dụng 1.1.1.7 Công dụng 1.1.2 Cây Lựu .6 1.1.2.1 Vị trí phân loại 1.1.2.2 Đặc điểm hình thái 1.1.2.3 Phân bố, sinh thái 1.1.2.4 Bộ phận dùng 1.1.2.5 Thành phần hóa học 1.1.2.6 Tính vị, tác dụng 1.1.2.7 Công dụng 1.2 LƯỢC SỬ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CÂY TRINH NỮ VÀ CÂY LỰU 1.2.1 Cây Trinh nữ 1.2.2 Cây Lựu .9 1.3 CÁC VI KHUẨN VÀ NẤM GÂY BỆNH THƯỜNG GẶP 10 1.3.1 Staphylococcus aureus .10 1.3.2 MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) 11 1.3.3 Streptococcus faecalis 12 1.3.4 Escherichia coli .12 1.3.5 Pseudomonas aeruginosa 12 1.3.6 Candida albicans .13 1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 13 1.4.1 Phương pháp chiết lạnh 13 1.4.2 Phương pháp chiết nóng 14 1.4.3 Phương pháp chiết lỏng – lỏng 14 1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT 15 1.5.1 Phương pháp khuếch tán 15 1.5.1.1 Nguyên tắc 15 1.5.1.2 Một số phương pháp thường sử dụng 15 1.5.2 Phương pháp pha loãng 16 1.5.2.1 Nguyên tắc 16 1.5.2.2 Một số phương pháp thường sử dụng 16 1.5.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết thí nghiệm 17 1.5.3.1 Mật độ tế bào .17 1.5.3.2 Môi trường dùng thử pH môi trường .17 1.5.3.3 Nhiệt độ thời gian ủ 17 1.5.3.4 Điểm dừng đọc kết .18 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 VẬT LIỆU 19 2.1.1 Vật liệu khảo sát thực vật học .19 2.1.2 Vi sinh vật thử nghiệm 19 2.1.3 Môi trường thử nghiệm 19 2.1.4 Nguyên liệu 21 2.1.5 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 21 2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP THỬ NGHIỆM 22 2.2.1 Phương pháp khảo sát mặt thực vật học .22 2.2.1.1 Đặc điểm hình thái 22 2.2.1.2 Đặc điểm giải phẫu 22 2.2.2 Phương pháp chiết xuất cao dược liệu .23 2.2.2.1 Chiết xuất cao thô 23 2.2.2.2 Thăm dị dung mơi chiết xuất 23 2.2.3 Phương pháp tinh chế cao toàn phần .24 2.2.3.1 Phương pháp tinh chế cao toàn phần .24 2.2.3.2 Phương pháp tinh chế cao toàn phần .24 2.2.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng vi sinh vật cao dược liệu 25 2.2.4.1 Chuẩn bị vi sinh vật thử nghiệm .25 2.2.4.2 Phương pháp khuếch tán 27 2.2.4.3 Phương pháp pha loãng .28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 KHẢO SÁT VỀ MẶT THỰC VẬT HỌC .30 3.1.1 Cây Trinh nữ 30 3.1.1.1 Đặc điểm hình thái 30 3.1.1.2 Đặc điểm giải phẫu 31 3.1.2 Quả Lựu 39 3.1.2.1 Đặc điểm hình thái 39 3.1.2.2 Đặc điểm giải phẫu 39 3.2 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CAO DƯỢC LIỆU 43 3.2.1 Tác động kháng vi sinh vật Trinh nữ 43 3.2.1.1 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết thô từ Trinh nữ 43 3.2.1.2 Thăm dị dung mơi chiết xuất tồn Trinh nữ 45 3.2.1.3 Tinh chế cao toàn Trinh nữ .45 3.2.1.4 Nồng độ tối thiểu ức chế phát triển S aureus (MIC) cao chiết Trinh nữ 46 3.2.2 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết từ Lựu .48 3.2.2.1 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết thô từ Lựu 48 3.2.2.2 Thăm dị dung mơi chiết xuất vỏ Lựu 50 3.2.2.3 Tinh chế cao chiết vỏ Lựu 50 3.2.2.4 Nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật (MIC) cao chiết vỏ Lựu .51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .53 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chú giải CH2Cl2 Dichloromethan DMSO Dimethyl sulphoxide EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol MeOH Methanol MHA Mueller - Hinton Agar MHB Mueller - Hinton Broth SDA Sabouraud Dextro Agar TSA Trypticase Soy Agar TSB Trypticase Soy Broth DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Bảng đánh giá mức độ đường kính vịng tác động kháng khuẩn, kháng nấm 27 Bảng 3.1 Tác động kháng S aureus cao chiết thô từ Trinh nữ 43 Bảng 3.2 Tác động kháng S aureus cao chiết thơ từ Trinh nữ với ethanol có độ cồn khác 45 Bảng 3.3 Tác động kháng S aureus cao chiết từ Trinh nữ theo phương pháp tinh chế 45 Bảng 3.4 Tác động kháng S aureus cao chiết từ Trinh nữ theo phương pháp tinh chế 45 Bảng 3.5 MIC cao chiết Trinh nữ tác động S aureus 46 Bảng 3.6 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết thô từ Lựu 48 Bảng 3.7 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết thô từ vỏ Lựu với ethanol có độ cồn khác 50 Bảng 3.8 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết từ vỏ Lựu theo phương pháp tinh chế 50 Bảng 3.9 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết vỏ Lựu theo phương pháp tinh chế 50 Bảng 3.10 MIC cao chiết vỏ Lựu vi sinh vật thử nghiệm 51 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ quy trình chiết xuất dược liệu 23 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình tinh chế cao tồn phần 24 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tinh chế cao tồn phần 25 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình chuẩn bị vi sinh vật thử nghiệm 26 Hình 2.5 Tác động kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán 28 Hình 2.6 Sơ đồ quy trình xác định tác động kháng vi sinh vật phương pháp pha loãng 29 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 33 Hình 3.2 Đặc điểm hình thái Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 34 Hình 3.3 Cấu tạo giải phẫu rễ Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 35 Hình 3.4 Cấu tạo giải phẫu thân Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 36 Hình 3.5 Cấu tạo giải phẫu chét Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 37 Hình 3.6 Cấu tạo giải phẫu cuống Trinh nữ (Mimosa pudica L.) 38 Hình 3.7 Đặc điểm hình thái hạt Lựu (Punica granatum L.) 40 Hình 3.8 Cấu tạo giải phẫu vỏ Lựu (Punica granatum L.) 41 Hình 3.9 Cấu tạo giải phẫu hạt Lựu (Punica granatum L.) 42 Hình 3.10 Kết tác động kháng S aureus cao chiết thô từ Trinh nữ vỏ Lựu 44 Hình 3.11 Kết kháng S aureus cao tinh chế từ Trinh nữ cách tủa qua MeOH 46 Hình 3.12 MIC cao chiết Trinh nữ S aureus 47 Hình 3.13 Kết tác động kháng S aureus (A) MRSA (B) cao chiết thô từ Lựu 48 Hình 3.14 Kết tác động kháng S faecalis (A) E coli (B) cao chiết thô từ vỏ Lựu Trinh Nữ .49 Hình 3.15 Kết tác động kháng C albicans cao chiết thô từ vỏ Lựu Trinh nữ 49 Hình 3.16 MIC cao chiết vỏ Lựu C albicans 52 Hình 3.17 MIC cao chiết vỏ Lựu chủng vi khuẩn thử nghiệm .52 ... tính kháng khuẩn kháng nấm Trinh nữ Lựu Chính vậy, đề tài "Khảo sát mặt thực vật học thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm dịch chiết từ Trinh nữ (Mimosa pudica L.) Lựu (Punica granatum L.)" thực. .. thực nhằm mô tả đặc điểm thực vật, khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật cao chiết Trinh nữ Lựu II MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Sàng lọc dược liệu có hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm; góp phần xây dựng thư... 39 3.2 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM CỦA CAO DƯỢC LIỆU 43 3.2.1 Tác động kháng vi sinh vật Trinh nữ 43 3.2.1.1 Tác động kháng vi sinh vật cao chiết thô từ