Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học và phân lập một số dịch chiết trong thân và rễ cây ngò ôm limnophila chinensis

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM - NGUYỄN THẠCH THẢO NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ PHÂN LẬP MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TRONG THÂN VÀ RỄ CÂY NGỊ ƠM LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC Đà Nẵng – Năm 2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM - NGUYỄN THẠCH THẢO NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ PHÂN LẬP MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TRONG THÂN VÀ RỄ CÂY NGỊ ƠM Chun ngành: HĨA HỮU CƠ Mã số: 84 40 11 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS ĐÀO HÙNG CƢỜNG Đà Nẵng – Năm 2019 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1.MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU ĐỐI TƢỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 4.CẤU TRÚC CỦA KHÓA LUẬN CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu họ mã đề 1.2 Chi Limnonhila 1.2.1 Ngổ trâu (Enhydra fluctuansLour) 1.2.2 Ngị ơm (Limnophila aromatica) 1.3 Tổng quan Ngị ơm 1.3.1 Khái quát ngị ơm 1.3.2 Hình thái thực vật Ngị ơm 1.3.3 Đặc điểm bột dƣợc liệu 1.3.4 Phân bố, thu hái chế biến 1.4 Thành phần hóa học Ngị ơm 1.4.1 Sơ lƣợc hợp chất steroid 1.4.2 Sơ lƣợc hợp chất flavonoid 1.4.3 Sơ lƣợc hợp chất terpen 1.5 Các thuốc kinh nghiệm sử dụng ngị ơm 11 1.6 Tình hình nghiên cứu nƣớc giới ngị ơm 12 1.6.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 12 1.6.2 Tình hình nghiên cứu giới 12 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên liệu, hóa chất dụng cụ 14 2.1.1 Nguyên liệu 14 2.1.2 Hóa chất 14 2.1.3 Dụng cụ 15 2.1.4 Các loại máy móc, thiết bị 15 2.2 Nghiên cứu thực nghiệm 15 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 15 2.3 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết ngị ơm 16 2.3.1.Đo phổ GC-MS 16 2.3.2 Phân lập xác định công thức cấu tạo chất 16 2.3.3 Xác định cấu trúc hợp chất B1 20 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Kết khối lƣợng cao chiết 21 3.1.1 Kết khối lƣợng cao chiết 21 3.1.2 Kết khối lƣợng cao chiết chiết nối tiếp với dung môi 21 3.2 Thành phần định danh hợp chất hữu dịch chiết 24 3.2.1.Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane 24 3.2.2.Thành phần hóa học dịch chiết diethyl ether 25 3.2.3.Thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane 26 3.2.4.Thành phần hóa học dịch chiết cloroform 27 3.2.5.Thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate 28 3.2.6.Thành phần hóa học dịch chiết ethanol 29 3.2.7.Thành phần hóa học dịch chiết buthanol 30 3.2.8.Nhận xét chung thành phần hóa học đƣợc định danh ngị ơm 31 3.3 Phân lập chất 34 3.4 Xác định cấu trúc chất B1 34 3.4.1 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 1H – NMR B1 (TDH 70) 34 3.4.2 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân 13C - NMR hợp chất TDH 70 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN (Bản sao) DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN  TLC  GclH4  CC  ESI-MS  NMR  1HNMR  13CNMR : Thin Layer Chromatography (sắc kí lớp mỏng) : Glucozo : Column Chromatography (sắc kí cột) : Electronspray ionization mass spectroscopy (Phổ khối lƣợng ion hóa phun mù điện tử) : Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân) : Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hƣởng từ proton) : Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hƣởng từ Cacbon-13) DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng 1.1 2.1 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Tên bảng Trang Hoạt tính sinh học cấu tử rau Ngị ơm Danh mục hóa chất Khối lƣợng cao thu đƣợc sau cô quay dịch chiết Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết n-hexane từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết điethyl ete từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết cloroform từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ethanol từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết buthanol từ ngị ơm Hoạt tính cấu tử định danh đƣợc từ dịch chiết rau Ngị ơm Số liệu cộng hƣởng từ hạt nhân 1H – NMR hợp chất TDH 70 11 15 21 24 25 27 28 29 30 31 31 35 37 - Các nguyên tử cacbon vịng C C5’ C6’ có độ dịch chuyển hoá học  = 116,9 ppm,  = 120,8 ppm Phổ DEPT hợp chất TDH 70 - Phổ DEPT hợp chất TDH 70 có tín hiệu nhóm CH, khơng có tín hiệu nhóm CH2 chứng tỏ có nhóm CH, khơng có nhóm CH3, khơng có nhóm CH2 Theo [16] đƣa bảng số liệu cộng hƣởng từ hạt nhân 13C – NMR (100 MHz, DMSO-d6) Quercetin (C15H10O7) bảng 4.4: Bảng 4.4: Số liệu cộng hƣởng từ hạt nhân 13C - NMR hợp chất TDH 70 chất công bố Số cacbon 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 13C–NMR(:ppm) TDH 70 Chất công bố (dung môi CDCl3) (dung môi DMSO-d6) 147,4 146,8 136,2 135.7 176,2 175,6 161,3 160.6 99,7 98,2 165,6 165,8 94,6 93,5 158,3 156,2 103,6 103,0 122,8 122,0 116,4 115.2 146,5 145,0 148,4 147,5 116,9 115,5 120,9 120.1 Nhóm cacbon C C C=O C CH C CH C C C CH C C CH CH Từ số liệu phổ 1H – NMR 13C – NMR hợp chất TDH 70 so với phổ đƣợc công bô xác định cấu tạo hợp chất B là: Quercetin (C15H10O7) có cơng thức cấu tạo là: 5' 6' HO O 1' 10 OH 3' 2' A OH 4' C OH O Quercetin (C15H10O7) OH 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Qua trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết thân rễ Ngị ơm (Limnophila aromatic)”, thu đƣợc kết nhƣ sau: Bằng phƣơng pháp GC–MS định danh đƣợc 79 cấu tử có dịch chiết ngị ơm Trong đó, có số cấu tử chiếm thành phần lớn nhƣ: Stigmasterol, β-Sitosterol, Campesterol, 2-methoxyl-4-vinylphenol, D- Limonene coumaran Một số cấu tử chiếm thành phần lớn có nhiều ứng dụng thực tế thuộc nhóm chất chính: nhóm Phytosterol gồm có Stigmasterol, β-Sitosterol Campesterol, axit palmitic Bằng phƣơng pháp phân lập sắc ký cột tách đƣợc hợp chất B1 từ dịch chiết hexane với khối lƣợng 10mg Bằng cách phân tích phổ cộng hƣởng từ hạt nhân hai chiều xác định đƣợc cấu trúc hợp chất B1 Quercetin (C15H10O7)  Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn, thơng qua kết đề tài, mong muốn đề tài đƣợc phát triển rộng số vấn đề nhƣ sau: – Cây ngị ơm có chứa số chất có ứng dụng y học nhƣ: β- Sitosterol, Campesterol với hàm lƣợng tƣơng đối cao Vì vậy, cần nghiên cứu tách, làm giàu cấu tử phƣơng pháp khác để đạt hiệu tốt nhằm đáp ứng nhu cầu sống – Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa số dịch chiết ngị ơm nhằm tăng giá trị sử dụng dƣợc liệu 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Bài giảng dƣợc liệu, tập (1998), Trƣờng Đại học dƣợc Tp HCM Đại học Dƣợc khoa Hà Nội [2] Nguyễn Xuân Dũng, Đào Hữu Vinh cộng (1985), Các phương pháp sắc ký, Nhà xuất khoa học kỹ thuật [3] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Trung tâm liệu thực vật Việt Nam (2008), Phân biệt hình thái tác dụng dược Rau ngổ Rau om [4] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội [5] Phạm Thị Lan Hƣơng (2007), Bài giảng môn vi sinh thực phẩm - Chương [6] Tạp chí “dƣợc học” (1985,4.8-10) [7]Trang 569, Từ điển Cây thuốc Việt Nam (bộ mới), tập 2, Nhà xuất Y học, 2012 Tài liệu nƣớc [8] Arunya Sribusarakum (năm 2004), Nuntavan Bunyapraphatsara et at; Hoạt động chống oxy hóa ngị ơm Merr., Thái Tạp chí Phytopharmacy Vol^tr [9] Bui ML, Grayer RJ, Veitch NC, Kite GC, Tran H, NguyenK (2004),Uncommon 8oxygenated flavonoids from Limnophila aromática (Scrophulariaceae), Biochem Systemat Ecol [10] Biology and Pharmacy Bulletin (2007,p.4) [11] Chemistry & Biodiversity (2001,p.8) [12] Do OD, Angkawijaya AE, Tran-Nguyen PL, Huynh LH, Soetaredjo F E, Ismadji S, Ju YH (2014),Effect of extraction solvent on total phenol content, total flavonoids content, and antioxidant activity of Limnophila'womatic, Journal of Food and Drug Analysis [13] Inouye, H., Saito, S., Taguchi, H and Endo, T 1969 Zwei neue iridoidglucoside aus gardenia jasminoides: gardenosid und geniposid Tetrahedron Letters, 28, 2347-2350 [14] International Journal of Pharmacology (1991,p.29) [15] J Koyama, I Morita, K Tagahara, M Ogata, T Mukainaka, H Tokuda, H Nishino 2001 Inhibitory effects of anthraquinones and bianthraquinones on Epstein-Barr virus activation Cancer lett., 170, 15-18 [16] Jae Hyeok Lee, Chung Hwan Ku, Sung Hoon Kim, Hee Wook Park and Dae Keun Kim (2003) Phytocchemical constituents from Diodia teres” Arch Pham Res 27(1) pp 40-43 [17] Journal of Medicinal Food (2009,p.12) 40 [18] M Miyagoshi, S Amagaya, and Y Ogihara 1987 The structural transformation of gardenoside and its related iridoid compounds by acid and –glucosidase Planta medica, 462-464 [19] Kapadia, G J., Shukla, Y N., Bose, A K., Fujiwara, H and Lloyd, H A 1979 Revised structure of paederoside, a novel monoterpene S- methyl thiocarbonate Tetrahedron Letters 22, 1937-1938 [20] Pakistan Journal of Biological Sciences (2012,p.15) [21] Sribusarakum A, Bunyapraphatsárà N,VajraguptaO,Watanabe H (2004), Antioxidant activity of Limnophila aromática Merr., Thai J Phytopharm [22] Thai Journal of Phytopharmacy (2014,p.11) ...ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM - NGUYỄN THẠCH THẢO NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ PHÂN LẬP MỘT SỐ DỊCH CHIẾT TRONG THÂN VÀ RỄ CÂY NGỊ ƠM Chun... 3.2.4 .Thành phần hóa học dịch chiết cloroform 27 3.2.5 .Thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate 28 3.2.6 .Thành phần hóa học dịch chiết ethanol 29 3.2.7 .Thành phần hóa học dịch chiết. .. danh thành phần hóa học dịch chiết n-hexane từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết điethyl ete từ ngị ơm Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane từ ngị ơm Kết định