Nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp nano bạc của vi khuẩn bacillus licheniformis phân lập từ phân chim cút

ĈҤI HӐ&Ĉ¬1 ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH ±0Ð,75Ѭ ӠNG 3+$13+Ѭ ӞC THANH THUҰN NGHIÊN CӬU KHҦ1Ă1*6,1+7 ӘNG HӦP NANO BҤC CӪA VI KHUҬN BACILLUS LICHENIFORMIS PHÂN LҰP TӮ PHÂN CHIM CÚT KHOÁ LUҰN TӔT NGHIӊP Chuyên ngành: CƠNG NGHӊSINH HӐC GiҧQJYLrQKѭ ӟng dүn: TS Ĉ2¬17+ ӎVÂN Ĉj1 ҹ ng, Tháng 04 QăP 2019 LӠ,&$0Ĉ2$1 7{LFDPÿRDQÿk\OjF{QJWUuQKQJKLrQ ӭu cӫa riêng tơi Các sӕliӋ u kӃ t quҧÿѭ ӧc trình bày khóa luұ n trung thӵFYjFKѭDW ӯng ÿѭ ӧc cơng bӕtrong bҩ t kì cơng trình khác Ĉj1 ̽QJWKiQJQăP Tác giҧluұQYăQ 3+$13+Ѭ ӞC THANH THUҰN LӠI CҦ0Ѫ1 Tơi xin bày tӓlịng biӃ WѫQFKkQWKjQKQK ҩ Wÿ Ӄ n 76ĈRjQ7K ӏVân ÿmW ұ n tình Kѭ ӟng dү n, trӵc tiӃ p truyӅ Qÿ ҥ t nhӳng kinh nghiӋ m q báu ÿӇem hồn thiӋ Qÿѭ ӧc khóa luұ n tӕt nghiӋ pFNJQJQKѭ F{ÿm ln tìm kiӃ PFѫK ӝLÿ Ӈnhóm nghiên cӭu vi sinh chúng HPQkQJFDRÿѭ ӧc kiӃ n thӭc kӻQăQJQJK ӅnghiӋ p sau Cҧ PѫQF{ÿmÿ ӝng viên em suӕt trình thӵc hiӋ n khóa luұ n Xin cҧ PѫQ TS Phҥ m ThӏMӻ(giáo viên chӫnhiӋ m) thҫ y cô Khoa Sinh ±0{L7Uѭ ӡQJĈ ҥ i hӑF6ѭ3K ҥ m ±Ĉҥ i hӑFĈj1 ҹ ng ÿmJL~Sÿ ӥem trình thӵc nghiӋ Pÿ Ӆtài nghiên cӭu Cuӕ i xin gӱi lӡi cҧ PѫQÿ Ӄ n bҥ n nhóm nghiên cӭu vi sinh ӭng dө ng ÿmK ӛtrӧnhiӋ t tình suӕt thӡi gian qua Cҧ PѫQW ұ p thӇlӟp 15CNSH, bҥ n bè YjJLDÿuQKÿmÿ ӝng viên thӡi gian thӵc hiӋ n khóa luұ n Xin chân thành cҧ PѫQ Sinh viên thӵc hiӋ n 3KDQ3Kѭ ӟc Thanh Thuұn MӨC LӨC DANH MӨC BҦNG DANH MӨC HÌNH ҦNH MӢ ĈҪU Ĉһ t vҩ Qÿ Ӆ MөFWLrXÿ Ӆtài éQJKƭDF ӫDÿ Ӆtài éQJKƭDNKRDK ͕ c éQJKƭDWK ͹c ti͍ n &+ѬѪ1*7 ӘNG QUAN TÀI LIӊU 1.1 Tәng quan vӅcông nghӋnano nano bҥ c 1.1.1 Vұ t liӋ u nano 1.1.2 Hҥ t nano bҥ c 10 1.1.3 Mӝt sӕӭng dөng cӫ a nano bҥ c 12 1.1.4 Các SKѭѫQJ pháp chӃtҥ o nano bҥ c nhұ n diӋ n nano bҥ c 13 1.2 Khái quát chung vӅBacillus licheniformis 18 1.2.1 Phân loҥ i khoa hӑ c vi khuҭ n Bacillus licheniformis 18 1.2.2 Ĉһ c ÿL Ӈ m phân bӕ 18 1.2.3 Ĉһ c ÿL Ӈ m hình thái, sinh hóa 18 1.2.4 Ĉһ c ÿL Ӈ m nuôi cҩ y 19 1.2.5 &ѫ chӃtә ng hӧp nano bҥ c nhұ n diӋ n nano bҥ c 19 1.3 Mӝt sӕnghiên cӭu sinh tәng hӧp nano bҥ c tӯvi sinh vұ t ӣWURQJQѭ ӟc thӃgiӟi 20 1.3.1 Mӝt sӕnghiên cӭu thӃgiӟi 20 1.3.2 Mӝt sӕnghiên cӭu Qѭ ӟc 22 &+ѬѪ1*Ĉ Ӕ,7Ѭ ӦNG, NӜ,'81*9¬3+ѬѪ1*3+È31*+, ӬU 23 Ĉ ӕ LWѭ ӧng phҥ m vi nghiên cӭu 23 2.1.1 Ĉӕi Wѭ ӧng nghiên cӭu 23 2.1.2 Phҥ m vi nghiên cӭu 23 2.2 Nӝ i dung nghiên cӭu 23 3KѭѫQJSKiSQJKLrQF ӭu 24 2.3.1 6ѫ ÿ ӗbӕtrí thí nghiӋ m 24 2.3.2 3KѭѫQJ pháp thu mү u phân lұ p 25 2.3.3 3KѭѫQJ pháp ÿ ӏ nh danh chӫ ng vi khuҭ n bҵ ng Nƭ thuұ t sinh hӑc phân tӱ 26 2.3.4 3KѭѫQJ pháp phá vӥtӃbào vi khuҭ n 26 2.3.5 Khҧ o sát thӡi gian sinh tәng hӧp nano bҥ c cӫ a Bacillus licheniformis 26 2.3.6 Khҧ o sát ҧ nh Kѭ ӣng cӫ a nӗng ÿӝAgNO3 (1mM, 2mM) ÿӃ n trình sinh tә ng hӧp nano bҥ c cӫ a Bacillus licheniformis 26 2.3.7 Phân tích phәtӱngoҥ i phәkhҧkiӃ n (UV ±Vis) 27 2.3.8 Phân tích giҧ nÿ ӗnhiӉ u xҥtia X (XRD) 27 2.3.9 Phân tích kích WKѭ ӟc hҥ t hình dҥ ng hҥ t nano bҥ c tҥ o thành thông qua kính hiӇ n vi ÿL Ӌ n tӱtruyӅ n qua (TEM) 27 2.3.10 3KѭѫQJ pháp xӱlý sӕliӋ u 28 &+ѬѪ1* 3: KӂT QUҦVÀ BIӊN LUҰN 29 3.1 Phân lұ p, ÿӏ nh danh vi sinh vұ t 29 3.1.1 Phân lұ p, ÿ ӏ nh danh chӫng vi khuҭ n 29 3.2 Khҧ o sát thӡLJLDQÿ Ӄ n trình sinh tәng hӧp nano bҥ c 32 3.2.1 Phân tích phәtӱngoҥ i phәkhҧkiӃ n (UV ±Vis) 32 3.3 Khҧ o sát ҧ QKKѭ ӣng cӫ a nӗ QJÿ ӝAgNO3 ÿӃ n trình sinh tә ng hӧp nano bҥ c 37 3.3.1 Khҧ o sát kháng khuҭ n theo SKѭѫQJ pháp khuӃ ch tán qua giӃ ng thҥ ch 37 3.4 KӃ t quҧphân tích nhiӉ u xҥtia X (XRD) 41 3.5 KӃ t quҧphân tích kính hiӇ QYLÿL Ӌ n tӱtruyӅ n qua (TEM) 42 KӂT LUҰN VÀ KIӂN NGHӎ 44 KӃ t luұ n 44 KiӃ n nghӏ 44 TÀI LIӊU THAM KHҦO 46 '$1+0Ө&7Ӯ9,ӂ77Ҳ7 Abs Absorbance CT &{QJWKӭF LB Luria ±Bertani NCBI National Center for Biotechnology Information PCR Polymerase Chain Reaction PTN 3KzQJWKtQJKLӋP UV ±Vis Ultraviolet ±Visible TEM Transmission Electron Microscopy XRD X-ray diffraction DANH MӨC BҦNG tKLӋX 7rQEҧQJ Trang EҧQJ 2.1 25 %ӕWUtFiFO{WKtQJKLӋP 3.1 36 9ӏWUtÿӍQKKҩSWKXYjFѭӡQJÿӝK QDQREҥFWәQJKӧSWӯ&7 3.2 ĈѭӡQJNtQKYzQJ NKiQJNKXҭQ Jk\UDEӣLQDQRE ҥF WәQJ38 KӧSӣQӗQJÿӝP0 AgNO3 WKHR&7YjÿӕLFKӭQJ (ĈѫQ Yӏ mm) 3.3 ĈѭӡQJNtQKYzQJ NKiQJNKXҭQ Jk\UDEӣLQDQRE ҥF WәQJ40 KӧSӣQӗQJÿӝP0 AgNO3 WKHR&7YjÿӕLFKӭQJ (ĈѫQ Yӏ mm) DANH MӨC HÌNH ҦNH 6ӕ 7rQKuQKҧQK KLӋX 1.1 &ѫFK ӃdiӋ t khuҭ n cӫ a nano bҥ c Trang 11 1.2 17 3Kә89 ±9LVFӫDGXQJGӏFKQDQREҥF 1.3 18 3Kә;5'FӫDQDQREҥF1JXӗQ &{QJW\71++QJKLrQFӭ NKRDKӑFYjSKiWWULӇQF{QJQJKӋ+( ) 1.4 20 &ѫFKӃWәQJKӧSQDQREҥFӣYLNKXҭQ 2.1 6ѫÿ ӗsinh tәng hӧp nano bҥ c tӯvi khuҭ n Bacillus licheniformis 3.1 29 KXҭQOҥFFӫDFKӫQJYLVLQKYұW SKkQOұSWӯSKkQFKLP 3.2 7ӃEjRFKӫQJ TT01 NKLQKXӝP*UDP 3.3 30 ӃWTXҧWUDFӭXWUrQ%/$671&%, 3.4 31 ӃWTXҧFKҥ\Fk\SKiWVLQK loài 3.5 Màu sҳ c cӫ a dung dӏ ch sinh tәng hӧp nano bҥ c sau ngày ӫ 3.6 3Kә89 ±Vis sau QJj\NKҧRViWVLQKWәQJKӧ p nano bҥFWӯ 33 24 30 32 CT1 WәQJKӧSӣQӗQJÿӝP0$J12 D ӣQJӗQJÿӝP0 AgNO3 (b) 3.7 3Kә89 ±Vis sau QJj\NKҧRViWVLQKWәQJKӧ p nano bҥFWӯ 34 CTWәQJKӧSӣQӗQJÿӝP0$J12 D ӣQJӗQJÿӝP0 AgNO3 (b) 3.8 35 3Kә89 ±Vis sau QJj\NKҧRViWVLQKWәQJKӧ ҥFWӯ CT2 (tә ng hӧp ӣnӗ QJÿ ӝ1mM AgNO3) 3.9 35 3Kә89 ±Vis sau QJj\NKҧRViWVLQKWәQJKӧ ҥFWӯ CT2 WәQJKӧSӣQӗQJÿӝP0$J12 3) 3.10 37 'ӏFKQDQREҥFWәQJKӧSD +ѫQQ ӳa, tinh thӇbҥ c nano bҥ c phân tán tӕWQP ÿѭ ӧc tәng hӧp bҵ ng cách sӱdөng vi khuҭ n Bacillus licheniformis (Kalishwaralal cӝ ng sӵ2008a) Saifuddin (Saifuddin cӝ ng sӵ, 2009) [33] ÿmP{W ҧmӝ t cách tiӃ p cұ n mӟi tә ng hӧp tәng hӧSÿ Ӈhình thành hҥ t nano bҥ c bҵ ng cách sӱdө ng sӵkӃ t hӧp cӫDP{LWUѭ ӡng bӅmһ t cӫ a B subtilis bӭc xҥYLVyQJWURQJQѭ ӟc HӑÿmEiRFiRV ӵtә ng hӧp tӃbào ngoҥ i bào cӫ a hҥ t nano Ag phân tán (5-50nm) bҵ ng cách sӱdө ng chҩ t siêu phӫcӫa B subtilisQKѭQJÿ Ӈ WăQJW ӹlӋphҧ n ӭng giҧ m sӵkӃ t hӧp cӫa hҥ WQDQRÿѭ ӧc tҥ o ra, hӑÿmV ӱdөng bӭc xҥvi sóng có thӇcung cҩ p sӵQyQJOrQÿ ӗng nhҩ t xung quanh Các hҥ t nano có thӇhӛ trӧq trình chín cӫ a hҥ t khơng có sӵtәng hӧp Các tinh thӇnano bҥ c cӫa chӃ phҭ PNKiFQKDXÿѭ ӧc tәng hӧp thành công bӣi Pseudomonas stutzeri AG259 (Klaus cӝ ng sӵ, 1999) [9] Các chӫng vi khuҭ n kháng bҥ c, Pseudomonas stutzeri AG259, phân lұ p tӯmӝ t mӓbҥ c, tích tөcác hҥ t nano bҥ c bên nӝi tҥ ng, vӟi mӝt sӕsulfua bҥ c, có NtFKWKѭ ӟc tӯÿ Ӄ n 46nm (Slawson cӝ ng sӵ, 1992) Các hҥ t lӟQKѫQÿѭ ӧc hình thành P stutzeri AG259 thӱthách vӟi nӗQJÿ ӝcao cӫa ion bҥ c q trình ni cҩ y, dү Qÿ Ӄ n sӵtҥ o thành hҥ t nano bҥ c tӃbào FyNtFKWKѭ ӟc khác tӯ YjLQPÿ Ӄ n 200 nm (Klaus-Joerger et al 2001, Klaus cӝng sӵ, 1999) [9] Trong mӝt nghiên cӭXNKiFÿmÿѭ ӧc báo cáo vӅsӵtәng hӧp nhanh hҥ t nano kim loҥ i bҥ c bҵ ng cách sӱdө ng sӵgiҧ m ion Ag+ dung dӏ ch bӣi siêu vi trùng cӫ a Klebsiella pneumonia, E coli, Enterobacter cloacae (Enterobacteriacae) (Shahverdi cӝ ng sӵ, 2007) [36] Quá trình tәng hӧp nhanh hҥ t nano bҥ Fÿmÿѭ ӧc hình thành vịng phút cӫa ion bҥ c tiӃ p xúc vӟi tӃbào lӑc Enzyme nitrat reductase có thӇcó trách nhiӋ m cho viӋ c hҩ p thөcác ion bҥ F1Jѭ ӡLWDFNJQJFKREL Ӄ t phát xҥánh sáng nhìn thҩ y có thӇOjPWăQJW әng hӧp hҥ t nano bҥ c (1-6 nm) bӣi chҩ t siêu phӫ cӫ a K pneumoniae (Mokhtari cӝng sӵ, 2009) [32] Các hҥ t nano bҥ c phân tán ә n ÿӏ QK FNJQJ ӧc tәng ÿѭ hӧp thành công vӟi công nghӋsinh hӑc [Ag (NH3)2]+ sӱdө ng Aeromonas sp SH10 Corynebacterium sp SH09 (Mouxing cӝ ng sӵ 1J ӡi WDÿmWLrQÿRiQU ҵ ng [Ag (NH3)2]+ phҧ n ӭQJÿ ҫ u tiên vӟi OH- tҥ o Ag22VDXÿyFK Ӈ n KyDWKjQKÿ ӝc lұ p giҧ Pÿ Ӄ n hҥ t nano bҥ c bҵ ng sinh khӕi Các dòng Lactobacillus, 21 tiӃ p xúc vӟi ion bҥ c, dү Qÿ Ӄ n sӵtәng hӧp hҥ t nano tӃbào vi khuҭ n (Nair Pradeep 2002) [32]1Jѭ ӡi WDÿmEiRFiRU ҵ ng sӵSKѫLQKL Ӊ m cӫ a vi khuҭ n lactic có sӳa chua vӟi hӛ n hӧp ion bҥ c có thӇÿѭ ӧc sӱdө QJÿ Ӈphát triӇ n hҥ t nano bҥ c Sӵtҥ o mҫ m cӫ a hҥ t nano bҥ c xҧ y bӅmһ t tӃEjRTXDÿѭ ӡng enzyme thành tӃEjRYjVDXÿy hҥ t nhân kim loҥ Lÿmÿѭ ӧc vұ n chuyӇ n vào tӃEjRQѫL FK~QJÿѭ ӧc tә ng hӧp phát triӇ n thành nhӳng hҥ t lӟQKѫQ Các vi sinh vұ t sӱdө ng hӋenzyme khӱQLWUDWH ӇÿѭDÿ $J12 o nên vӅAg tҥ nhӳng hҥ WQDQRFyNtFKWKѭ ӟc rҩ t nhӓ, chӍkhoҧ QJGѭ ӟi 4QPGRÿy OjPWăQJKL Ӌ u quҧ kháng khuҭ n so sánh vӟLSKѭѫQJSKiSKRi ±lý cәÿL Ӈ n [8] 1.3.2 Mӝ t sӕnghiên cӭXWURQJQѭ ӟc HiӋ QQD\Kѭ ӟng sinh tә ng hӧp nano bҥ c ӭng dөng công nghӋvi sinh vұ WÿDQJ ÿѭ ӧc nghiên cӭu mӟi phát triӇ n tҥ i ViӋ t Nam Mӝt sӕnghiên cӭu tiêu biӇ X QKѭ Nghiên cӭu sinh tә ng hӧp bҥ c nano bҵ ng nҩ m Fusarium oxysporum (NguyӉ n Hoàng NgӑF3KѭѫQJYjF ӝ ng sӵ(2009)), Nghiên cӭu sinh tәng hӧp nano bҥ c bҵ ng sinh khӕ i vi khuҭ n B.subtilis B.licheniformis (3KDQ+Xr3KѭѫQJ  ӭXQj\ÿmP ӣ UDFRQÿѭ ӡng sinh tәng hӧp nano bҥ c bҵ ng cách khҧ o sát sinh khӕi ӫvӟi AgNO3 Nghiên cӭu sӱdө ng dӏ ch nӝ i bào Bacillus subtilis ÿӇtәng hӧp hҥ t nano bҥ c (AgNP ±silver nanoparticle) Nhóm tác giҧTrҫ Q ĈăQJ Ĉӛ KRD Thөy Thӫ\ 7LrQ ҥ i NghiӋ 1J{ p Ĉ (Khoa Sinh hӑF7Uѭ ӡQJĈ ҥ i hӑ c Khoa hӑc Tӵnhiên TP.HCM) sӱdөng dӏ ch nӝi bào vi khuҭ n Bacillus subtlis chuyӇ n hóa AgNO3 thành dung dӏ ch AgNP Hҥ t nano bҥ Fÿѭ ӧc tәng hӧp tӕ t nhҩ t ӣ600C vӟi pH = 7.0 tӹlӋdӏ ch nӝi bào vӟi bҥ c nitrate 3:17 1KѭY ұ y, nano bҥ c tә ng hӧp tӯvi sinh vұ WFyQKѭQJѭXÿL Ӈ PQKѭӟcNtFK hình cҫ Xÿѭ ӧc bҧ o vӋbӣi protein nӝi bào, không sӱdөng hóa chҩ Wÿ ӝc hҥ i, thân thiӋ n vӟLP{LWUѭ ӡng CyêQJKƭD viӋ c ӭng dөng sҧ n xuҩ t nano bҥ c phө c vөFiFOƭQK vӵFÿL Ӆ u trӏtrong vұ t liӋ u Y ±6LQKGѭ ӧc phҭ m, loҥ i chӃphҭ m nông nghiӋ p ViӋ c nghiên cӭu khҧQăQJә VLQK ng hӧp nanoWbҥ c tӯ chӫng vi khuҭ n Bacillus licheniformis phân lұ p tӯphân chim cút nghiên cӭu cҫ n thiӃ t 22 &+ѬѪ1* ĈӔ,7Ѭ ӦNG, NӜ,'81*9¬3+ѬѪ1*3+È31*+ ӬU Ĉ ӕ LWѭ ӧng phҥm vi nghiên cӭu Ĉ ӕ LWѭ ӧng nghiên cӭu - Mү XSKkQFKLPF~Wÿѭ ӧc lҩ y tҥ L[mĈL Ӌ n Thҳ ng, thӏ[mĈL Ӌ n Bàn, tӍ nh Quҧ ng Nam - Vi khuҭ n Bacillus licheniformis phân lұ p tӯphân chim cút ӫ25 ±30 ngày - Ba dòng vi khuҭ n gây bӋ QK ӧcÿѭ dùng kiӇ Pӏ nh ÿ nghiên cӭu bao gӗm E.coli, Bacillus cereus, Ralstonia solanacearum (giӕng bҧ o quҧ n lҥ nh sâu -22oC) ÿѭ ӧc cung cҩ p bӣi khoa sinh ±P{LWUѭ ӡQJĈ ҥ i hӑF6ѭSK ҥ m ±Ĉҥ i hӑ FĈj1 ҹ ng 2.1.2 Phҥm vi nghiên cӭu Ĉ͓ DÿL ͋ m thu m̳u ͧth͹Fÿ ͓ a: ;mĈL Ӌ n Thҳ ng, thӏ[mĈL Ӌ n Bàn, tӍ nh Quҧ ng Nam Ĉ͓ DÿL ͋ m nghiên cͱu phòng thí nghi͏ m: Phịng thí nghiӋ m Vi sinh ±hóa sinh ±sinh lý thӵc vұ t, PTN Công nghӋsinh hӑ c, PTN sinh hӑc phân tӱthuӝc khoa Sinh ±0{LWUѭ ӡQJWUѭ ӡQJĈ ҥ i hӑF6ѭ3K ҥ m ±Ĉҥ i hӑ FĈj1 ҹ ng 2.2 Nӝ i dung nghiên cӭu 1ӝLGXQJ 3KkQOұS ÿӏQKGDQK FKӫQJYLNKXҭQ Bacillus licheniformis WӯSKkQ chim cút 1ӝLGXQJ KҧRViWNKҧQăQJVLQKWәQJKӧS NKӕL Bacillus licheniformis: - KҧRViWWKӡLJLDQVLQKWәQJKӧSQDQ Bacillus licheniformis; - KҧR ViW ҧQK KѭӣQJ FӫD P0  QӗQJ ÿӃQ ÿӝ $J12 TXi P0 WәQJKӧSQDQREҥFFӫD Bacillus licheniformis; - 3KkQWtFKJLҧQÿӗQKLӉX[ҥWLD;;5 - 3KkQWtFKKuQKGҥQJKҥWQDQREҥFWK (TEM) 23 3KѭѫQJSKiSQJKLrQF ӭu 6ѫÿ ӗbӕtrí thí nghiӋ m Các thí nghiӋ m sinh tәng hӧp nano bҥ c ÿѭ ӧc bӕWUtWKHRVѫÿ ӗVDXÿk\ 3KkQOұSYLNKXҭQWӯPүXSKk FKLPF~WӫKRDL ĈӏQKGDQKFKӫQJYLVLQK YұW *LӳJLӕQJ +RҥWKyDJLӕQJ 1X{LFҩ\FKuPWURQJP{LWUѭӡQJ (30oC, 150rpm, 24h) Ly tâm 6000rpm/15 phút 7UӝQPOGӏFK 7UӝQJVLQKNKӕL ѭӟW 7UӝQJVLQKNK ѭӟW QJRҥLEjRYӟLPO YӟLPO$J12 YӟLPOQѭӟF AgNO3 (1mM, 150rpm, 1-2 ngày (1mM, 2mM) 2mM) /\WkPWKXGӏ &KHNtQEuQKOҳF &KHNtQEuQKOҳF WUӝQYӟLP 150rpm, ngày 150rpm, ngày AgNO3 (1mM, 2mM) &KHNtQEuQ 150pm, ngày Hình 2.1 6ѫÿ ӗsinh tә ng hӧp nano bҥ c tӯvi khuҭ n Bacillus licheniformis 24 Bҧng 2.1 Bӕtrí lơ thí nghiӋ m, [25], [35] &{QJWKӭF (CT2) &{QJWKӭF (CT3) &{QJWKӭF (CT1) 'ӏFKQJRҥLEjR (vi sinh 6LQKNKӕL 'XQJGӏFK 'ӏFKOӑF YLVLQKYұW WLӃWUDP{LWUѭӡQJ + AgNO3 (1mM, 2mM) 'XQJGӏFK AgNO3 UDQѭӟFFҩW  'XQJGӏFK AgNO3 (1mM, 2mM) (1mM, 2mM) Ӣ&7POGӏFKQәLVDXO\WkPGӏF YӟLPO AgNO3 P0YjP0FiFEuQKӫVӁÿѭӧFFKHNt ± QJj\WKXGӏFKWәQJKӧS Ӣ&7WUӝQJVLQKNKӕLѭӟWYӟLP P0YjP0FiFEuQ ÿѭӧFFKHNtQOҳFӣUSPWURQJWKӡLJL ±QJj\VDXÿyW LӃQKjQKSKi EjRYLNKXҭQEҵQJFiFKFKRYjRPi\VLrX SK~WFKLDWKjQKFKXNǤPӛLFKXNǤ WKXGӏFKWәQJKӧS Ӣ&7VLQKNKӕLVDXNKLOҳFYӟLQѭӟF ±QJj\GӏFKOӑF  WkPEӓVLQKNKӕLYjGӏFKOӑFVӁӫYӟL$J P0YjP0FiFEuQKӫ NtQOҳFӣUSPWURQJWKӡLJLDQ ±QJj\WKXGӏFKWәQJKӧS Sau WKXÿѭӧFGӏFK WәQJKӧSQDQREҥF WӯFiFF{QJWKӭFWUr WLӃQKjQK quét SKә89 ±9LVӣEѭӟFVyQJ ±700nm, NLӇPWtQKWUDNKiQJNKX EҥFSKkQWtFK QKLӉX[ҥWLD;;5' FKөSNtQKKLӇQYLÿLӋQ 3KѭѫQJSKiSWKXP үu phân lұp - Thu mү u: Mү u phân chim cút sau 25 ±QJj\ÿѭ ӧc thu tҥ L[mĈL Ӌ n Thҳ ng ± thӏ[mĈL Ӌ n Bàn ±tӍ nh Quҧ ng Nam, mү Xÿѭ ӧc bҧ o quҧ n nhiӋ Wÿ ӝphòng - Phân lұ p: Các mү Xÿѭ ӧc phân lұ SWUrQP{LWUѭ ӡng thҥ ch Luria ±Bertani (LB), pH7 bao gӗm: pepton 10g/l, cao nҩ m men 5g/l, NaCl 10g/l, agar 20g/l Mү Xÿѭ ӧc rӱa sҥ FKWURQJQѭ ӟc cҩ t vô trùng tiӃ n hành pha loãng mү u vӟLQѭ ӟc cҩ t vơ trùng ӣcác nӗ QJÿ ӝtӯ10-3 ±10-7 Hút 100µl dӏ ch pha loãng mӛi mү XWUDQJÿ Ӆ u khҳ p mһ t thҥ FK/%WUrQÿƭDSHWUL1X{L ӣtӫҩ m ӣnhiӋ Wÿ ӝ30 ±32oC khoҧ ng 18 ± 20 giӡÿ ӇWKXFiFÿѭ ӧc khuҭ n lҥ c riêng lӁ 25 Mү XSKkQFKLPF~WVDXÿyV Ӂÿѭ ӧc ӫtheo quy trình ӫtҥ o phân hӳXFѫYLVLQ tiӃ n hành phân lұ p chӫ ng vi khuҭ n tӯSKkQFKLPF~Wÿm ӫthô ;iFÿ ӏ nh chi Bacillus dӵDWUrQÿ һ FÿL Ӈ m hình thái, nhuӝ m gram 3KѭѫQJSKiSÿ ӏ nh danh chӫng vi khuҭn bҵQJNƭWKX ұt sinh hӑ c phân tӱ KӃ t hӧp vӟLFiFÿ һ FÿL Ӈ PKuQKWKiLYjVLQKKyDÿmÿ ӧF[iFÿ ӏ nh TiӃ QKjQKÿ ӏ nh danh dӵa trình tӵÿR ҥ n gen 16S - rRNA, ÿѭ ӧc khuӃ FKÿ ҥ i bҵ ng kӻthuұ t PCR giҧ i trình tӵÿR ҥ n gen 16S rRNA, nhұ p kӃ t quҧtrên BLAST NCBI, xây dӵng phát sinh loài 3KѭѫQJSKiSSKiY ӥtӃbào vi khuҭn Phá vӥtӃbào vi khuҭ n bҵ ng sóng siêu âm có tҫ n sӕtӯ.+]ÿ Ӄ n 1MKHz [7] Cho mү u vào máy có tҫ n sӕ37 KHz, mү u phá vӥtӃEjRÿѭ ӧc siêu âm vòng 15 phút chia thành chu kǤ , mӛi chu kǤ3 phút 2.3.5 Khҧo sát thӡi gian sinh tә ng hӧp nano bҥc cӫa Bacillus licheniformis Các thí nghiӋ Pÿѭ ӧc thӵc hiӋ n theo công thӭc QKѭKuQK bҧ ng 2.1 6DXNKLWKXÿѭ ӧc dӏ ch tәng hӧp tӯcác công thӭc: CT1, CT2, CT3 TiӃ n hành tiӃ n hành lҩ y dӏ ch tәng hӧp ӣQJj\QJj\QJj\QJj\ ӇkiӇ m tra phәUV ±Vis 2.3.6 Khҧ o sát ҧQKKѭ ӣng cӫa nӗQJÿ ӝAgNO3 (1mM, 2mM) ÿӃ n trình sinh tәng hӧp nano bҥc cӫa Bacillus licheniformis Các thí nghiӋ Pÿѭ ӧc thӵc hiӋ n theo công thӭc QKѭKuQK bҧ ng 2.1 6DXNKLWKXÿѭ ӧc dӏ ch tә ng hӧp tӯcác công thӭc: CT1, CT2, CT3 TiӃ n hành thӱ hoҥ t tính kháng khuҭ n vi sinh vұ t: E.coli, B.cereus, R.solanacearum theo SKѭѫQJSKiSNKX Ӄ ch tán qua giӃ ng thҥ ch 3K˱˯QJSKiSNKX ͇ ch tán qua gi͇ ng th̩ ch (Well diffusion assay) [19] Các chӫ ng vi sinh vұ t kiӇ m ÿӏ nh QKѭ ÿm nêu ӣphҫ n ÿӕ i Wѭ ӧng nghiên cӭu ÿѭ ӧc trang ÿ Ӆ u môi WUѭ ӡng thҥ ch ÿһ c WUѭQJ cho vi khuҭ n (môi WUѭ ӡng LB) ÿƭD Petri TiӃ n hành hút 100ȝl dӏ ch vi sinh vұ t kiӇ m ÿӏ nh trang ÿӅ u lên mһ t thҥ ch Dùng ӕ ng nghiӋ m ÿѭ ӡng kính khoҧ ng 2cm vô trùng ÿөc lӛthҥ ch ÿӕ i xӭng Dùng pipet hút khoҧ ng 300 ±400µl dӏ ch nano bҥ c thô cho vào lӛthҥ ch ӪÿƭD thҥ ch tӫҩ m ӣ30oC, Sau 24 giӡquan sát vòng kháng khuҭ n thu ÿѭ ӧc .Kҧ QăQJ kháng khuҭQ FӫD GӏFKVLQKWәQJKӧS ÿѭӧc xác ÿ ӏ nh bҵ ng Vӵ hiӋ n diӋQ FӫD vòng kKiQJNKXҭQ xung quanh lӛ +RҥW tính kháng khuҭQ ÿӝ lӟQ cӫa vịng kháng 26 ... hӧp nano bҥc cӫa vi khuҭn Bacillus licheniformis phân lұp tӯSKkQFKLPF~W´ MөFWLrXÿ Ӆtài Ĉánh giá ÿѭ ӧc khҧQăQJә VLQK ng hӧp nanoW bҥ c cӫa vi khuҭ n Bacillus licheniformis phân lұ p t? ?phân. .. FKӫQJYLNKXҭQ Bacillus licheniformis WӯSKkQ chim cút 1ӝLGXQJ KҧRViWNKҧQăQJVLQKWәQJKӧS NKӕL Bacillus licheniformis: - KҧRViWWKӡLJLDQVLQKWәQJKӧSQDQ Bacillus licheniformis; - KҧR ViW... tӍ nh Quҧ ng Nam - Vi khuҭ n Bacillus licheniformis phân lұ p t? ?phân chim cút ӫ25 ±30 ngày - Ba dòng vi khuҭ n gây bӋ QK ӧcÿѭ dùng kiӇ Pӏ nh ÿ nghiên cӭu bao gӗm E.coli, Bacillus cereus, Ralstonia