Phân lập các chủng nấm mốc có khả năng phân giải tinh bột cao từ nước thải miến dong của làng nghề so xã cộng hòa huyện quốc oai hà nội

LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực khóa luận tốt nghiệp nhận đƣợc quan tâm giúp đỡ nhiều tập thể cá nhân Nhân dịp hồn thiện báo cáo khóa luận tốt nghiệp, tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trƣờng, Ban lãnh đạo Khoa Quản lý tài nguyên rừng môi trƣờng Trung tâm đa dạng sinh học quản lí rừng bền vững cho phép tạo điều kiện thuận lợi để thực tập trƣờng, nhƣ tạo điều kiện tốt mặt trang thiết bị để đợt thực tập đƣợc thuận lợi Để có đƣợc kết nhƣ ngày hơm nay, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Thị Mai Lƣơng giành nhiều thời gian hƣớng dẫn tận tình, cung cấp nhiều kiến thức tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Mặc dù cố gắng nhiều xong kiến thức cịn hạn chế nên q trình nghiên cứu nhƣ viết báo cáo không tránh khỏi thiếu xót , tơi mong nhận đƣợc đóng góp q báu thầy để báo cáo khóa luận tơi đƣợc hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Đại học Lâm nghiệp, ngày 18 tháng 05 năm 2019 Sinh viên thực Vũ Việt Dũng i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I.TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1.Tổng quan làng nghề So xã Cộng Hòa, huyện Quốc Oai, TP Hà Nội 1.1.1 Điều kiện tự nhiên 1.1.2 Điều kiện kinh tế - xã hội 1.2 Giới thiệu dong riềng 1.2.1 Nguồn gốc 1.2.2 Đặc điểm sinh học dong riềng 1.2.3 Giá trị sử dụng 1.3 Quy trình sản xuất miến dong 1.4.1 Đặc điểm nƣớc thải sản xuất miến 1.4.2 Một số ví dụ nhiễm nƣớc thải làng nghề chế biến tinh bột 1.5 Tổng quan vi sinh vật phân hủy tinh bột 10 1.5.1 Tổng quan tinh bột 10 1.5.2 Quá trình thủy phân tinh bột 11 1.5.3 Hệ enzyme tham gia vào trình phân hủy tinh bột 11 1.5.4 Vi sinh vật phân hủy tinh bột 13 MỤC TIÊU, NỘI DUNG,VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Vật liệu nghiên cứu 15 2.3.1 Nguồn mẫu vi sinh vật 15 2.3.2 Hóa chất dụng cụ 15 2.3.3 Môi trƣờng nuôi cấy 16 ii 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Phƣơng pháp thu thập số liệu 16 2.4.2 Phƣơng pháp lấy mẫu,xử lí mẫu bảo quản mẫu 16 2.4.3 Phƣơng pháp phân tích thơng số nƣớc thải 18 2.4.4 Phƣơng pháp pha loãng mẫu 19 2.4.5 Phƣơng pháp phân lập chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao 19 2.4.6 Phƣơng pháp tuyển chọn chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao 19 2.4.7 Phƣơng pháp định danh chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao 20 2.4.8 Phƣơng pháp xử lí số liệu 21 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Kết phân tích tiêu nhiễm nƣớc mẫu nƣớc thải thu thập đƣợc 22 3.2 Kết phân lập nấm mốc phân giải tinh bột từ mẫu nƣớc thải 24 3.3 Kết tuyển chọn chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao 26 3.4 Kết định danh chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao đƣợc tuyển chọn 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BOD : Biochemical Oxygen Demand BTNMT : Bộ tài nguyên môi trƣờng COD : Chemical Oxygen Demand DO : Dissolved Oxygen MN : Mẫu nƣớc MT : Mơi trƣờng PTN : Phịng thí nghiệm QCVN : Quy chuẩn Việt Nam TSS : Tol Suspended Solid TP : Thành phố VK : Vi khuẩn VSV : Vi sinh vật iv DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 : Thải lƣợng chất ô nhiễm nƣớc thải 10 số làng nghề chế biến lƣơng thực, thực phẩm Bảng 1.2: Một số VSV có hệ enzyme amylase 13 Bảng 2.1: Hóa chất dụng cụ - thiết bị sử dụng 15 trình nghiên cứu Bảng 2.2: Vị trí lấy mẫu nƣớc thải 17 Bảng 2.3: Phƣơng pháp phân tích thơng số nƣớc 18 thải PTN Bảng 3.1: Giá trị thông số nƣớc thải sản xuất miến 22 làng nghề So xã Cộng Hòa Bảng 3.2: Kết chủng nấm mốc phân lập 25 đƣợc Bảng 3.3: Đƣờng kính vịng phân giải tinh bột chủng nấm mốc v 26 DANH MỤC HÌNH ẢNH STT Tên hình Trang Hình 1.1: Cây củ dong riềng Hình 1.2: Quy trình sản xuất miến dong làng nghề So Hình 1.3: Quá trình chuyển hóa tinh bột vi sinh vật 11 Hình 1.4: Các giai đoạn trình thủy phân tinh bột αamylase 12 Hình 1.5: Cơ chế thủy phân tinh bột 13 Hình 3.1: Hàm lƣợng COD nƣớc thải làng nghề So 23 Hình 3.2: Hàm lƣợng BOD5 nƣớc thải làng nghề So 23 Hình 3.3: Hàm lƣợng TSS nƣớc thải làng nghề So 24 Hình 3.4: Hình thái tế bào ( 40) chủng nấm mốc F5 27 10 Hình 3.5: Trình tự gen 28S rRNA chủng nấm mốc F5 28 11 Hình 3.6: Kết chi tiết trình tự tƣơng đồng chủng F5 đƣợc tra cứu NCBI 29 12 Hình 3.7: Hình thái tế bào ( 20) chủng nấm mốc F6 30 13 Hình 3.8: Trình tự gen 28S rRNA chủng nấm mốc F6 31 14 Hình 3.9: Kết chi tiết trình tự tƣơng đồng chủng F6 đƣợc tra cứu NCBI vi 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Tinh bột dong riềng miến dong hai loại đặc sản đƣợc chế biến từ củ dong riềng làng nghề vùng nông thôn Việt Nam Hiện sản phẩm có sức tiêu thụ lớn thị trƣờng nƣớc xuất khẩu, góp phần tích cực việc chuyển dịch cấu kinh tế - xã hội địa phƣơng Trong năm gần đây, hoạt động làng nghề phát triển mạnh giúp ngƣời dân làng nghề xóa đói giảm nghèo, tạo cơng ăn việc làm giải lao động dƣ thừa, giảm tệ nạn xã hội sống kinh tế ngƣời dân ổn định phát triển Bên cạnh mặt tích cực, hoạt động sản xuất làng nghề có nhiều bất cập, đặc biệt chất lƣợng môi trƣờng làng nghề bị suy thoái nghiêm trọng tác động trực tiếp tới sức khỏe ngƣời dân, gây nhiều xúc cho xã hội, ảnh hƣởng không nhỏ tới phát triển bền vững làng nghề phát triển kinh tế đất nƣớc Thực trạng công nghệ thiết bị sản xuất làng nghề sản xuất tinh bột dong riềng cịn thơ sơ nên sau sản xuất khối lƣợng nƣớc thải bã thải lớn chƣa đƣợc xử lý mà xả toàn cống nƣớc chung đổ lƣu vực sơng, suối lân cận Nguồn chất thải chứa hàm lƣợng hữu cao gây ô nhiễm nghiêm trọng tới môi trƣờng làng nghề vùng phụ cận, bao gồm môi trƣờng đất, ô nhiễm nguồn nƣớc mặt (hàm lƣợng hữu nƣớc thải cao: SS, BOD5, COD, TN, TP, đặc biệt khâu lọc bột tách bã tiêu vƣợt TCCP đến 200 lần), ô nhiễm nƣớc ngầm (nồng độ NH4+, H2S, coliform cao TCCP hàng trăm lần) ô nhiễm khơng khí (do phân hủy chất hữu nƣớc thải tạo ra: SO2, NO2, H2S, NH3, CH4 khí có mùi khác) Có nhiều cơng trình nghiên cứu đánh giá mức độ nhiễm - đặc tính chất thải nghiên cứu lựa chọn, áp dụng công nghệ để xử lý chất thải làng nghề Kết thu đƣợc thành công đáng kể vấn đề cải thiện môi trƣờng làng nghề nhƣng cịn gặp nhiều khó khăn q trình vận hành (chi phí vận hành cao, diện tích xây dựng đầu tƣ ban đầu lớn, địi hỏi trình độ kỹ thuật cao, ý thức môi trƣờng ngƣời dân cịn thấp, thời gian mùa vụ nên tình trạng chất thải biến động lớn ) Do đó, chất lƣợng mơi trƣờng làng nghề nƣớc ta điểm nóng nhiễm xúc xã hội Vì thế, việc tìm quy trình xử lý thích hợp loại nƣớc thải có ý nghĩa to lớn Có nhiều biện pháp xử lý, nhiên biện pháp sử dụng vi sinh vật (VSV) để phân hủy chất ƣu chúng có ƣu điểm kinh tế - kỹ thuật, đồng thời không sinh chất độc hại khác ảnh hƣởng tới sức khỏe ngƣời thân thiện với môi trƣờng cách xử lí nƣớc thải, phế thải trình chế biến để tạo nguồn hữu có ích khác Trên sở đó, tơi thực đề tài có tên: ”Phân lập chủ có khả ă phâ ốc iải tinh bột cao từ ước thải miến dong làng nghề So, xã Cộng Hòa, huyện Quốc Oai, Hà Nội.” CHƢƠNG I TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1.Tổng quan làng nghề So xã Cộng Hòa, huyện Quốc Oai, TP Hà Nội 1.1.1 Điều kiện tự nhiên a Vị trí địa lí Xã Cộng Hịa nằm phía Đơng Nam huyện Quốc Oai, cách trung tâm huyện km cách Thành phố Hà Nội 20 km phía Đơng - Phía Đơng giáp với xã Tân Hịa - Phía Tây giáp với xã Đồng Quang - Phía Bắc giáp huyện Hồi Đức - Phía Nam giáp huyện Chƣơng Mỹ b Đất đai, địa hình Tổng diện tích đất tự nhiên: 447 Trong đó: - Đất nơng nghiệp: 306,78 + Đất trồng lúa chiếm tỉ lệ cao: 242,57 + Đất nuôi trồng thủy sản: 29,58 - Đất phi nông nghiệp: 76,30 - Đất nông thôn: 64,39 Bình quân đạt 90 m2/ ngƣời + Thổ nhƣỡng vùng chủ yếu đất feralit, thay đổi từ nâu vàng đến nâu đỏ vàng đất xám bạc màu phù sa cổ, đất màu mỡ Đất có thành phần giới nhẹ với kết cấu rời rạc, chất dinh dƣỡng, chua, khả giữ nƣớc phân Tại khu vực trũng đồi, gị có đất tích tụ phù sa, có phù sa + Địa hình tƣơng đối phẳng, địa hình đƣợc chia thành 02 vùng gồm: Vùng đồng vùng bãi , có đồi 60 80 c Thời tiết, khí hậu Làng So có chung chế độ khí hậu thời tiết chịu ảnh hƣởng khí hậu nhiệt đới gió mùa, có mùa đơng lạnh khơ cịn mùa hè nóng ẩm, mƣa nhiều Trên quy mô sản xuất hầu hết thủ công làng nghề sản lƣợng sản phẩm phụ thuộc nhiều vào thời tiết Các hộ sản xuất phơi miến chủ yếu dựa vào nhiệt độ tự nhiên Nên ngày mƣa kéo dài khoảng ngày tháng mƣa dầm hoạt động sản xuất miến làng bị ngƣng lại, ảnh hƣởng tới lƣợng miến đƣợc cung cấp thị trƣờng chất lƣợng môi trƣờng [4] 1.1.2 Điều kiện kinh tế - xã hội a Dân số - Số hộ: 1.935 hộ với nhân - Nhân khẩu: 7.650 ngƣời - Dân cƣ tập trung thôn: Thôn , Thôn 2, Thôn 3, Thôn 4, Thôn 5, Thôn - Lao động độ tuổi: 4.255 ngƣời - Lao động qua đào tạo: 426 ngƣời chiếm 10% - Số lao động chƣa qua đào tạo: 3.829 ngƣời chiếm tỷ lệ 90% b Đời sống kinh tế - xã hội Nhìn chung kinh tế xã năm qua phát triển theo chiều hƣớng thuận lợi hƣớng Hệ thống sở hạ tầng kinh tế - xã hội nhƣ: điện, đƣờng, trƣờng, trạm, thủy lợi, bƣu viễn thơng… đƣợc đầu tƣ tập trung theo hƣớng đồng bộ, kiên cố đại Tiềm lực kinh tế xã đƣợc tăng lên đáng kể môi trƣờng đầu tƣ ngày đƣợc cải thiện hiệu Thu nhập ngƣời dân tăng lên đáng kể Trong sơ cấu kinh tế, tỉ lệ cơng nghiệp, thƣơng mại dịch vụ có nhiều chuyển hƣớng tăng nhanh Quá trình thực phấn đấu giá trị sản xuất hàng hóa giảm dần theo hƣớng nông lâm nghiệp tăng tỉ trọng công nghiệp dịch vụ Trong sản xuất nơng nghiệp có bƣớc đột phá chăn nuôi, xuất nhiều mô hình theo hƣớng trang trại, sản phẩm chăn ni mang tính hàng hóa góp phần nâng cao thu nhập ngƣời dân xã [4] Sau sơ xác định hoạt tính chủng, quan sát thấy có hai chủng nấm mốc F5 F6 có vòng phân giải tinh bột Đề tài tuyển chọn đƣợc chủng F4 F6 để gửi mẫu định danh 3.4 Kết định danh chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao đƣợc tuyển chọn Từ kết tuyển chọn trên, để xác định tên giống – loài – chủng chủng nấm mốc phân lập đƣợc phƣơng pháp xác định trình tự 28S rDNA Sau gửi mẫu định danh Công ty TNHH DV & TM Nam Khoa thu đƣợc kết nhƣ sau:  Đối với chủng F5 Chủng nấm mốc F5 đƣợc nuôi cấy môi trƣờng PDA thạch đĩa, hình thái khuẩn lạc có đặc điểm nhƣ sau: khuẩn lạc mọc gọn, màu xanh lục sẫm, rìa khuẩn lạc viền trắng, hệ sợi nấm mọc dày chắc, không tiết sắc tố môi trƣờng Khuẩn ti phân nhánh mạnh, cuống sinh bào tử trần phân hóa thứ cấp dạng bàn tay (hình 3.4) Hình 3.4: Hình thái tế bào chủng n m mốc F5 Kết phân tích trình tự đoạn gen 28S rRNA chủng F5 phần mềm Sequecing Analysis 5.3 (Hình 3.5), đồng thời so sánh trình tự với sở liệu GenBank NCBI phần mềm BLAST (Hình 3.6) cho thấy trình tự tƣơng đồng 100% với trình tự đoạn gen 28S rRNA chủng Penicillium citrinum (mã số truy cập KM491892.1) Vì chủng F5 đƣợc xếp vào chi Penicillium , loài Penicillium citrinum Trong nghiên cứu này, chủng nấm mốc F5 đƣợc định danh Penicillium citrinum F5 27 CCGATTGATGGCTCAGTGAGGCCTTCGGACTGGCGCCGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCAGCGCCGGAAA GTTGGTCAAACTCGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAG GATCATTACCGAGTGCGGGCCCCTCGGGGCCCAACCTCCCACCCGTGTTGCCCGAACCTATGTTGCCTCG GCGGGCCCCGCGCCCGCCGACGGCCCCCCTGAACGCTGTCTGAAGTTGCAGTCTGAGACCTATAACGAAA TTAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAC TAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGA GGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGCCCCGTCCCCCCCGCC GGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCACCCG CTCTAGTAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACCCCCAACCTTTAATTATCTCAGGTTGACCTCGGATCAGGT AGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGCCCTAGTAA CGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCCCCCTCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGA GGATGCTTCGGGAACGGCCCCCATCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCT GGGATGGGGTGGCCGCGCCCG Hình 3.5: Trình tự gen 28S rRNA chủng n m mốc F5 Score Expect Identities Gaps Strand 1591 bits(861) 0.0 861/861(100%) 0/861(0%) Plus/Plus Score Expect Identities Gaps 1591 bits(861) 0.0 861/861(100%) 0/861(0%) Query Strand Plus/Plus CCGATTGATGGCTCAGTGAGGCCTTCGGACTGGCGCCGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCA 60 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct CCGATTGATGGCTCAGTGAGGCCTTCGGACTGGCGCCGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCA 60 Query 61 GCGCCGGAAAGTTGGTCAAACTCGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTC 120 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 61 Query 121 GCGCCGGAAAGTTGGTCAAACTCGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTC 120 CGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGCGGGCCCCTCGGGGCCCAACCTCCC 180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 121 CGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGCGGGCCCCTCGGGGCCCAACCTCCC 180 Query 181 ACCCGTGTTGCCCGAACCTATGTTGCCTCGGCGGGCCCCGCGCCCGCCGACGGCCCCCCT 240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 181 ACCCGTGTTGCCCGAACCTATGTTGCCTCGGCGGGCCCCGCGCCCGCCGACGGCCCCCCT 240 Query 241 GAACGCTGTCTGAAGTTGCAGTCTGAGACCTATAACGAAATTAGTTAAAACTTTCAACAA 300 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 241 GAACGCTGTCTGAAGTTGCAGTCTGAGACCTATAACGAAATTAGTTAAAACTTTCAACAA 300 Query 301 CGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAAT 360 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 28 Sbjct 301 CGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAAT 360 Query 361 TGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGA 420 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 361 Query 421 TGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGA 420 GGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGCCCCGT 480 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 421 GGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGCCCCGT 480 Query 481 cccccccGCCGGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGC 540 Sbjct 481 CCCCCCCGCCGGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGC 540 Query 541 GTATGGGGCTTCGTCACCCGCTCTAGTAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACCCCCAACCTT 600 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 541 GTATGGGGCTTCGTCACCCGCTCTAGTAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACCCCCAACCTT 600 Query 601 TAATTATCTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA 660 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 601 TAATTATCTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA 660 Query 661 TAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGCCCTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGA 720 Sbjct 661 TAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGCCCTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGA 720 Query 721 GCTCAAATTTGAAAGCTGGCCCCCTCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCG 780 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 721 GCTCAAATTTGAAAGCTGGCCCCCTCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCG 780 Query 781 GGAACGGCCCCCATCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCT 840 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 781 Query 841 GGAACGGCCCCCATCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCT GGGATGGGGTGGCCGCGCCCG 840 861 ||||||||||||||||||||| Sbjct 841 GGGATGGGGTGGCCGCGCCCG 861 Hình 3.6: Kết chi tiết trình tự tươ đồng chủng F5 tra cứu NCBI  Đối với chủng F6 Chủng nấm mốc F6 đƣợc ni cấy mơi trƣờng PDA thạch đĩa, hình thái khuẩn lạc có đặc điểm nhƣ sau: khuẩn lạc phát triển theo kiểu phóng xạ mạnh, tơi, khơng chặt, màu sắc thay đổi trình sinh trƣởng phát triển, từ trắng đến vàng, tơi, không tiết sắc tố mơi trƣờng Khuẩn ti phân 29 hóa thành vách ngăn, phân nhánh, thể bình sơ cấp, bào tử trần có hình cầu, cuống bào tử hình hoa hƣớng dƣơng (Hình 3.7) Hình 3.7: Hình thái tế bào chủng n m mốc F6 Kết phân tích trình tự đoạn gen 28S rRNA chủng F6 phần mềm Sequecing Analysis 5.3 (hình 3.8), đồng thời so sánh trình tự với sở liệu GenBank NCBI phần mềm BLAST (hình 3.9) cho thấy: trình tự tu o ng đồng 100% với trình tự đoạn gen 28S rRNA chủng Aspergillus oryzae (mã số truy cập AP007173.1) GGTCGTCTCGCTGTGCCTCGTCGCCAAAGGTACCCGCTCGTCGGGCCTCGCGTGAGGAAACGGGGACGCC CGCCCACCCCAGCCGCGCTTATACCCGCCGAGGCCGTGAAACGTCTCGGTGGTGCGGTCTGGGGTGACCG AAGCCCGGTGGCCGTTTGGTCGCCGGCACCGTTGGGGTCTGTGGATCGTTGGCCGCTGGCCATCATCGAA AAGCAGATTCCAGGGGGGAGCCGCCCTGCGGTAGCCGCCGTTCGTCGGCGTGTCCGCAGGGTCTGGTCCC CCCACCCGAGGGCCGTATGCCGCAGGCCTGTCTCCGCCCTTTGGGGTGGTCACGACGGGAACAACCTTGC GTGCGGACCGGATCCTGAGGGGTTCCAGTGGGGGCAATTGGATGGTCGCATGTGTGCCGCCGGTGCGCCG GTGGTGTCGCTGTGACCGGGCGCTCGTTCGCCCCGATCGGAGTAAACTCCTTGAAGCCAAACTTCTGCTCCTCC GGGGGCTGATGGGCACCGTGGGACGCCAGCGCTTCGCGCCGGCCCCTGCGGTGCCCGCCAGGAACAAGGTA TCTGGTTGATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCACTTTAT ACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATACCTGTGG TAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCTCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAATGCC CTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATAATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTCAAAT TTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCTACCATGGTGGCAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTT CGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAAT CCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACGGGGCTCTTTTGGGTCTCGTAATTGGAATGAGTACA ATCTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAAT AGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGTCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACC GCGAGTACTGGTCCGGCTGGACCTTTCCTTCTGGGGAACCTCATGGCCTTCACTGGCTGTGGGGGGAACCAGG ACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTTTGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATA GGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGGCGTCAGTA 30 TTCAGCTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGCTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTCGCCAAGGATGTTTT CATTAATCAGGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGC CGACTAGGGATCGGGCGGTGTTTCTATGATGACCCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTTTTTGGGTTCT GGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACAAGGCGTGGAGCCTGC GGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACAAAATAAGGATTGACAGATTGAGAGCTCTT TCTTGATCTTTTGGATGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACG AACGAGACCTCGGCCCTTAAATAGCCCGGTCCGCGTTTGCGGGCCGCTGGCTTCTTAGGGGGACTATCGGCTC AAGCCGATGGAAGTGCGCGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTAC ACTGACAGGGCCAGCGAGTACATCACCTTGGCCGAGAGGTCCGGGTAATCTTGTTAAACCCTGTCGTGCT GGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATGCCTAGTAGGCACGAGTCATCAGCTCGTGC CGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTCGGTGAGGCCTTCGGAC TGGCCCAGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCAGGGCCGGAAAGTTGGTCAAACCCGGTCATTTAGAGGAAGTAA AAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCA ACCTCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGC CCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAA TCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAG TGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCAT GCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGA CGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGG CCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTG AACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACCGGGATTGCCTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGC AAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCTCCTTCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCC CCTGTCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGGGTGTCCGCGCCCG TGTGAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCTAAAGCTA AATACTGGCCGGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTCAACATTAGGGTCAACATTAGGGTCA Hình 3.8: Trình tự gen 28S rRNA chủng n m mốc F6 Score Expect Identities Gaps Strand 6008 bits(3253) 0.0 3253/3253(100%) 0/3253(0%) Plus/Plus Query GGTCGTCTCGCTGTGCCTCGTCGCCAAAGGTACCCGCTCGTCGGGCCTCGCGTGAGGAAA 60 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct GGTCGTCTCGCTGTGCCTCGTCGCCAAAGGTACCCGCTCGTCGGGCCTCGCGTGAGGAAA 60 Query 61 CGGGGACGCCCGCCCACCCCAGCCGCGCTTATACCCGCCGAGGCCGTGAAACGTCTCGGT 120 Sbjct 61 Query 121 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGGGGACGCCCGCCCACCCCAGCCGCGCTTATACCCGCCGAGGCCGTGAAACGTCTCGGT 120 GGTGCGGTCTGGGGTGACCGAAGCCCGGTGGCCGTTTGGTCGCCGGCACCGTTGGGGTCT 180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 121 GGTGCGGTCTGGGGTGACCGAAGCCCGGTGGCCGTTTGGTCGCCGGCACCGTTGGGGTCT 31 180 Query 181 GTGGATCGTTGGCCGCTGGCCATCATCGAAAAGCAGATTCCAGGGGGGAGCCGCCCTGCG 240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 181 GTGGATCGTTGGCCGCTGGCCATCATCGAAAAGCAGATTCCAGGGGGGAGCCGCCCTGCG 240 Query 241 GTAGCCGCCGTTCGTCGGCGTGTCCGCAGGGTCTGGTCCCCCCACCCGAGGGCCGTATGC 300 Sbjct 241 GTAGCCGCCGTTCGTCGGCGTGTCCGCAGGGTCTGGTCCCCCCACCCGAGGGCCGTATGC 300 Query 301 CGCAGGCCTGTCTCCGCCCTTTGGGGTGGTCACGACGGGAACAACCTTGCGTGCGGACCG 360 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 301 Query 361 CGCAGGCCTGTCTCCGCCCTTTGGGGTGGTCACGACGGGAACAACCTTGCGTGCGGACCG 360 GATCCTGAGGGGTTCCAGTGGGGGCAATTGGATGGTCGCATGTGTGCCGCCGGTGCGCCG 420 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 361 GATCCTGAGGGGTTCCAGTGGGGGCAATTGGATGGTCGCATGTGTGCCGCCGGTGCGCCG 420 Query 421 GTGGTGTCGCTGTGACCGGGCGCTCGTTCGCCCCGATCGGAGTAAACTCCTTGAAGCCAA 480 Sbjct 421 Query 481 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTGGTGTCGCTGTGACCGGGCGCTCGTTCGCCCCGATCGGAGTAAACTCCTTGAAGCCAA 480 ACTTCTGCTCCTCCGGGGGCTGATGGGCACCGTGGGACGCCAGCGCTTCGCGCCGGCCCC 540 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 481 ACTTCTGCTCCTCCGGGGGCTGATGGGCACCGTGGGACGCCAGCGCTTCGCGCCGGCCCC 540 Query 541 TGCGGTGCCCGCCAGGAACAAGGTATCTGGTTGATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCT 600 Sbjct 541 Query 601 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGCGGTGCCCGCCAGGAACAAGGTATCTGGTTGATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCT 600 CAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCACTTTATACTGTGAAACTGCGAATGGC 660 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 601 Query 661 CAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCACTTTATACTGTGAAACTGCGAATGGC 660 TCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATACCTGTGGTAATT 720 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 661 TCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATACCTGTGGTAATT 720 Query 721 CTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCTCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAA 780 Sbjct 721 Query 781 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCTCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAA 780 ACCAATGCCCTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATAATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTG 840 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 781 ACCAATGCCCTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATAATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTG 840 Query 841 CGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCC 900 Sbjct 841 Query 901 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCC 900 TACCATGGTGGCAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGA 960 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 901 TACCATGGTGGCAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGA 32 960 Query 961 Sbjct 961 Query 1021 AACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGG 1020 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGG 1020 AGGTAGTGACAATAAATACTGATACGGGGCTCTTTTGGGTCTCGTAATTGGAATGAGTAC 1080 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1021 Query 1081 AGGTAGTGACAATAAATACTGATACGGGGCTCTTTTGGGTCTCGTAATTGGAATGAGTAC 1080 AATCTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTA 1140 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1081 AATCTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTA 1140 Query 1141 ATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCT 1200 Sbjct 1141 Query 1201 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCT 1200 TGGGTCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGAGTACTGGTCCGGCTGGACCTTTCCTTCT 1260 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1201 TGGGTCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGAGTACTGGTCCGGCTGGACCTTTCCTTCT 1260 Query 1261 GGGGAACCTCATGGCCTTCACTGGCTGTGGGGGGAACCAGGACTTTTACTGTGAAAAAAT 1320 Sbjct 1261 Query 1321 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGGGAACCTCATGGCCTTCACTGGCTGTGGGGGGAACCAGGACTTTTACTGTGAAAAAAT 1320 TAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTTTGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACG 1380 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1321 TAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTTTGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACG 1380 Query 1381 TGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGG 1440 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1381 TGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGG 1440 Query 1441 CGTCAGTATTCAGCTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGCTGAAGACTAACTACTGCGA 1500 Sbjct 1441 Query 1501 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGTCAGTATTCAGCTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGCTGAAGACTAACTACTGCGA 1500 AAGCATTCGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGA 1560 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1501 AAGCATTCGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGA 1560 Query 1561 TCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGGTGTTTCT 1620 Sbjct 1561 Query 1621 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGGTGTTTCT 1620 ATGATGACCCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTTTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATG 1680 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1621 Query 1681 ATGATGACCCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTTTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATG 1680 GTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACAAGGCGTGGAGCCTGCG 1740 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1681 GTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGGCACCACAAGGCGTGGAGCCTGCG 1740 Query 1741 GCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACAAAATAAGGATTGACAGA 1800 33 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1741 Query 1801 GCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACAAAATAAGGATTGACAGA 1800 TTGAGAGCTCTTTCTTGATCTTTTGGATGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGT 1860 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1801 TTGAGAGCTCTTTCTTGATCTTTTGGATGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGT 1860 Query 1861 GATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTCGGCCCTTAAATAGCCCGGTCCGC 1920 Sbjct 1861 Query 1921 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GATTTGTCTGCTTAATTGCGATAACGAACGAGACCTCGGCCCTTAAATAGCCCGGTCCGC 1920 GTTTGCGGGCCGCTGGCTTCTTAGGGGGACTATCGGCTCAAGCCGATGGAAGTGCGCGGC 1980 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1921 GTTTGCGGGCCGCTGGCTTCTTAGGGGGACTATCGGCTCAAGCCGATGGAAGTGCGCGGC 1980 Query 1981 AATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGGG 2040 Sbjct 1981 Query 2041 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AATAACAGGTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGGG 2040 CCAGCGAGTACATCACCTTGGCCGAGAGGTCCGGGTAATCTTGTTAAACCCTGTCGTGCT 2100 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2041 Query 2101 CCAGCGAGTACATCACCTTGGCCGAGAGGTCCGGGTAATCTTGTTAAACCCTGTCGTGCT 2100 GGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATGCCTAGTAGGCACGAGTCAT 2160 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2101 GGGGATAGAGCATTGCAATTATTGCTCTTCAACGAGGAATGCCTAGTAGGCACGAGTCAT 2160 Query 2161 CAGCTCGTGCCGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTG 2220 Sbjct 2161 Query 2221 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAGCTCGTGCCGATTACGTCCCTGCCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTG 2220 AATGGCTCGGTGAGGCCTTCGGACTGGCCCAGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCAGGGCCG 2280 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2221 AATGGCTCGGTGAGGCCTTCGGACTGGCCCAGGAGGGTTGGCAACGACCCCCCAGGGCCG 2280 Query 2281 GAAAGTTGGTCAAACCCGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG 2340 Sbjct 2281 Query 2341 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAAAGTTGGTCAAACCCGGTCATTTAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG 2340 TGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCC 2400 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2341 Query 2401 TGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCC 2400 GTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTC 2460 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2401 GTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTC 2460 Query 2461 AGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGA 2520 Sbjct 2461 AGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGA 2520 Query 2521 GTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGA 2580 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 34 Sbjct 2521 GTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGA 2580 Query 2581 TGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAG 2640 Sbjct 2581 Query 2641 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAG 2640 TCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATT 2700 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2641 TCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATT 2700 Query 2701 GCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCgggggggACGGGC 2760 Sbjct 2701 Query 2761 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGC 2760 CCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCT 2820 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2761 Query 2821 CCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCT 2820 CTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGA 2880 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2821 CTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGA 2880 Query 2881 TCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACC 2940 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2881 TCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACC 2940 Query 2941 GGGATTGCCTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCTCCT 3000 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 2941 GGGATTGCCTCAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAAATTTGAAAGCTGGCTCCT 3000 Query 3001 TCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTGTCTAAGTGCCC 3060 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3001 TCGGGGTCCGCATTGTAATTTGCAGAGGATGCTTCGGGTGCGGCCCCTGTCTAAGTGCCC 3060 Query 3061 TGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGGGTGTCCGCGCCCGTGT 3120 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3061 TGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGGGTGTCCGCGCCCGTGT 3120 Query 3121 GAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTC 3180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3121 Query 3181 GAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTC 3180 ATCTAAAGCTAAATACTGGCCGGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTCAACATTAGGGTC 3240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 3181 ATCTAAAGCTAAATACTGGCCGGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTCAACATTAGGGTC Query 3241 AACATTAGGGTCA Sbjct 3241 3240 3253 ||||||||||||| AACATTAGGGTCA 3253 Hình 3.9: Kết chi tiết trình tự tươ đồng chủ F6 tra cứu NCBI Vì chủng F6 đƣợc xếp vào chi Aspergillus, loài Aspergillus oryzae Trong nghiên cứu này, chủng nấm mốc F6 đƣợc định danh Aspergillus oryzae F6 35 CHƢƠNG KẾT LUẬN – TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua trình thực nghiên cứu, phân lập tuyển chọn chủng có khả phân giải tinh bột nƣớc thải làng nghề sản xuất miến dong, thu đƣợc kết nhƣ sau: - Các mẫu nƣớc thu thập đƣợc từ làng nghề So có hàm lƣợng chất hữu nƣớc lớn, vƣợt quy chuẩn cho phép nhiều lần - Phân lập khiết đƣợc chủng nấm mốc F1, F2, F3, F4, F5, F6 đƣợc mơ tả hình thái nhƣ - Tuyển chọn đƣợc hai chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột chủng F5 F6 - Kết định danh chủng nấm mốc F5 thuộc loài Penicillium citrinum, chủng nấm mốc F6 thuộc loài Aspergillus oryzae 4.2 Tồn - Thời gian thực đề tài tƣơng đối ngắn nên thí nghiệm thử hoạt tính sinh hóa chủng nghiên cứu chƣa đƣợc thực - Đồng thời thí nghiệm ứng dụng chủng nấm mốc nghiên cứu chƣa đƣợc áp dụng thực địa để xác định khả xử lí nƣớc thải chủng nấm mốc chọn đƣợc 4.3 Kiến nghị - Kiến nghị trang thiết bị phục vụ cho nghiên cứu: trang thiết bị thiếu thốn, cũ chƣa đƣợc nâng cấp - Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện nhằm góp phần nâng cao khả áp dụng đề tài - Khảo sát ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy nhƣ nhiệt độ, pH, thời gian nuôi cấy, tốc độ nuôi lắc đến khả sinh enzyme chủng nấm mốc 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: [1] Bùi Tuấn Anh ( 2016), Đánh giá trạng nƣớc thải làng nghề sản xuất miến dong làng So xã Tân Hòa, huyện Quốc Oai, TP.Hà Nội [2] Nguyễn Ngọc Ánh ( 2016), Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi sinh vật bổ sung vào q trình tạo bùn hạt hiếu khí để xử lí nƣớc thải chế biến tinh bột, ĐH Khoa học tự nhiên [3] Bộ Tài nguyên Môi trƣờng (2009), Báo cáo trạng môi trƣờng quốc gia 2008: Môi trƣờng làng nghề ô nhiễm nghiêm trọng, Hà Nội [4] Cổng thông tin điện tử UBND huyện Quốc Oai, TP Hà Nội, năm 2018 [5] Nguyễn Hữu Hiệp Nguyễn Thị Hải Lý (2012), Phân lập dịng vi khuẩn có khả phân hủy tinh bột từ nƣớc thải làng nghề sản xuất bột gạo thị xã Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp, ĐH Cần Thơ [6] Nguyễn Thị Ngọc Huế ( 2015) , Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật canh tác dong riềng đỏ Thái Nguyên, ĐH Nông lâm Thái Nguyên [7] Phạm Ngọc Lan Huỳnh Ngọc Thành (2012), Nghiên cứu nấm mốc có khả phân giải tinh bột phân lập từ ao nuôi tôm Đầm Sam- Chuồn, Thừa Thiên Huế [8] Nguyễn Đức Lƣợng (2003), Công nghệ xử lý nƣớc thải, NXB Đại học quốc gia, TP.HCM [9] Nguyễn Đức Lƣợng, Công nghệ vi sinh tập 2- VSV học công nghiệp, NXB Đại học quốc gia, TP.HCM [10] TCVN 6663-1:2011 [11] TCVN 6168:2002 [12] Nguyễn Tiến Thắng (2008), Giáo trình công nghệ enzyme [13] Bùi Thị Vân ( 2014), Đánh giá số đặc điểm nông sinh học giống dong riềng triển vọng Thanh Trì – Hà Nội, ĐH Sƣ phạm Hà Nội [14] Đặng Nhƣ Xuyến (1998), Sử dụng số biện pháp sinh học để làm môi trƣờng đất nƣớc, Báo cáo khoa học đề tài cấp bộ, tr 23 – 42 37 Các trang web: [15] http://thuvienluanvan.info/luan-van/de-tai-nghien-cuu-xu-ly-nuoc-thai-cualang-nghe-san-xuat-mien-dong-cu-da-thanh-oai-ha-noi-bang-phuong-phap-locsinh-hoc-19592/ [16] http://doc.edu.vn/tai-lieu/luan-van-nghien-cuu-tuyen-chon-mot-so-chungvi-sinh-vat-co-kha-nang-phan-huy-tinh-bot-va-ung-dung-trong-xu-ly-nuoc-thai52360/ [17] www.starch.dk/isi/starch/strch.htm [18] https://vi.scribd.com/doc/209519021/Moi-tr%C6%B0%E1%BB%9Dngnuoi-c%E1%BA%A5y-n%E1%BA%A5m-m%E1%BB%91c 38 PHỤ LỤC 39 Phụ lục 1: Các vị trí lấy mẫu nƣớc thải khu vực nghiên cứu Hình 1: Vị trí lấy mẫu nƣớc Máng Bảy (MN2) mẫu nƣớc sơng Hình 2: Vị trí lấy Tiêu (MN3) Hình 3: Vị trí lấy mẫu nƣớc nhà ơng Cấn Văn Tồn (MN1) 40 Phụ lục 2: Hình ảnh chủng nấm mốc phân lập đƣợc từ mẫu nƣớc làng nghề So 41 ... phân lập nấm mốc phân giải tinh bột từ mẫu nƣớc thải Để phân lập đƣợc chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột từ mẫu nƣớc thải làng nghề So, đề tài tiến hành nuôi cấy chủng từ nƣớc thải môi trƣờng... - Phân lập chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột từ nƣớc thải khu vực nghiên cứu - Tuyển chọn chủng nấm mốc có khả phân giải tinh bột cao từ nƣớc thải khu vực nghiên cứu - Định danh chủng nấm. .. tạo nguồn hữu có ích khác Trên sở đó, tơi thực đề tài có tên: ? ?Phân lập chủ có khả ă phâ ốc iải tinh bột cao từ ước thải miến dong làng nghề So, xã Cộng Hòa, huyện Quốc Oai, Hà Nội. ” CHƢƠNG I