Nghiên cứu xác định một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn pasteurella multocida trong bệnh tụ huyết trùng trâu bò tại hà giang cao bằng và lựa chọn vắc xin phòng bệnh

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - PHẠM THỊ PHƯƠNG LAN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN Pasteurella multocida TRONG BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI HÀ GIANG, CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Thái Nguyên, năm 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - PHẠM THỊ PHƯƠNG LAN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN Pasteurella multocida TRONG BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI HÀ GIANG, CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHÒNG BỆNH Ngành: Ký sinh trùng Vi sinh vật học thú y Mã số: 9.64.01.04 LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Xuân Bình TS Nguyễn Ngọc Nhiên Thái Nguyên, năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết luận án trung thực, không trùng lặp với kết công bố chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài hoàn thành luận án cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 10 năm 2017 Tác giả Phạm Thị Phương Lan ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nhận quan tâm giúp đỡ nhiều tổ chức, cá nhân, thầy, cơ, bạn đồng nghiệp gia đình Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo thầy, Đại học Thái Ngun, phịng Đào tạo, khoa Chăn nuôi Thú y, trường Đại học Nông Lâm trực tiếp giảng dạy suốt thời gian học tập Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán khoa Chăn nuôi Thú y, trường Đại học Nông Lâm; Bộ môn vi trùng - Viện Thú y; Bộ mơn vi trùng – Trung tâm chẩn đốn Thú y Trung ương nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình cán Chi cục Thú y tỉnh Cao Bằng Chi cục Thú y tỉnh Hà Giang tạo điều kiện, giúp đỡ q trình thí nghiệm thực luận văn Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Xn Bình trường Đại học Nơng Lâm TS Nguyễn Ngọc Nhiên Bộ môn Vi trùng – Viện Thú y trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ suốt q trình thực đề tài hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn chân thành tới thày cô giáo, anh, chị, em – Viện Thú y Quốc gia trực tiếp hướng dẫn tơi thực thí nghiệm, đóng góp ý kiến quý báu, kinh nghiệm nghiên cứu để tơi hồn thiện đề tài nghiên cứu Tơi ln biết ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, động viên, hỗ trợ suốt thời gian qua Tôi xin chân thành cảm ơn./ Thái Nguyên, tháng 10 năm 2017 Tác giả Phạm Thị Phương Lan iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT .vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vi khuẩn Pasteurella multocida 1.1.1 Phân loại vi khuẩn 1.1.3 Đặc tính sinh hóa 1.1.4 Các yếu tố gây bệnh vi khuẩn P multocida 1.2 Bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida gây 18 1.2.1 Đặc điểm bệnh tụ huyết trùng trâu, bò 18 1.2.2 Cơ chế sinh bệnh 18 1.2.3 Đặc điểm dịch tễ học 19 1.2.4 Triệu chứng lâm sàng bệnh tích bệnh tụ huyết trùng trâu, bò 23 1.2.5 Chẩn đoán bệnh 25 1.2.6 Phòng trị bệnh tụ huyết trùng 32 1.3 Vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng 35 1.3.1 Trên giới 35 1.3.2 Ở Việt Nam 38 1.4 Một số kết luận qua phân tích tổng quan 40 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 42 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 42 2.1.2 Nguyên vật liệu 42 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 44 2.2 Nội dung nghiên cứu 44 2.2.1 Nghiên cứu điều tra dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao 44 2.2.2 Nghiên cứu phân lập xác định đặc tính sinh vật, hóa học, yếu tố độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 45 iv 2.2.3 Xác định miễn dịch chủ động tự nhiên đánh giá hiệu lực vắc xin P52 dạng keo phèn nhũ dầu phòng bệnh tụ huyết trùng cho trâu, bò tỉnh Hà Giang, Cao Bằng 45 2.3 Phương pháp nghiên cứu 46 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò 46 2.3.2 Phương pháp lấy mẫu 49 2.3.3 Phương pháp phân lập vi khuẩn P multocida 49 2.3.4 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hóa học P multocida 51 2.3.5 Phương pháp xác định serotype vi khuẩn P multocida phân lập từ trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng kỹ thuật PCR 51 2.3.6 Phương pháp xác định LD50 vi khuẩn P multocida phân lập từ trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng Hà Giang Cao Bằng 52 2.3.7 Phương pháp xác định độc lực vi khuẩn P multocida phân lập từ trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng chuột nhắt trắng (Carter cs, 1995) [77] 53 2.3.8 Phương pháp xác định mức độ mẫn cảm với số kháng sinh chủng P multocida phân lập (Nguyễn Thanh Hà, 1991) [10] 53 2.3.9 Kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin 54 2.3.10 Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò trước tiêm vắc xin sau tiêm vắc xin phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp IHA (Indirect Haemaglunation Test) 55 2.3.11 Phương pháp xác định hiệu lực bảo hộ trâu, bò trước sau tiêm phòng vắc xin phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng (Bain cs, 1982) [61] 56 2.3.12 Phương pháp đánh giá tỷ lệ bảo hộ trung bình (Lê văn Tạo, Dương Long, 1996) [42] 58 2.3.13 Phương pháp xử lý số liệu 58 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 59 3.1 Nghiên cứu điều tra dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao từ năm 2011 - 2015 59 3.1.1 Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng tỉnh Hà Giang Cao Bằng 59 3.1.2 Tỷ lệ mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng xét riêng lồi trâu, bị tỉnh Hà Giang Cao Bằng 61 v 3.1.3 Tỷ lệ trâu, bò mắc tụ huyết trùng tử vong mùa vụ năm tỉnh Hà Giang Cao Bằng 63 3.1.4 Mức độ dịch hệ số năm dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng 66 3.1.5 Thời điểm phát dịch, mùa dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng 67 3.2 Nghiên cứu phân lập xác định đặc tính sinh vật, hóa học, yếu tố độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 70 3.2.1 Phân lập vi khuẩn P multocida từ dịch ngoáy mũi trâu, bò khoẻ tỉnh Hà Giang Cao Bằng 70 3.2.2 Phân lập vi khuẩn P multocida từ bệnh phẩm trâu, bò nghi mắc bệnh tụ huyết trùng Hà Giang Cao Bằng 72 3.2.3 Giám định số đặc tính sinh vật, hố học chủng vi khuẩn P mutocida phân lập 73 3.2.4 Xác định serotype chủng vi khuẩn P multocida phân lập phản ứng PCR 76 3.2.5 Xác định độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 78 3.2.6 Xác định LD50 vi khuẩn P multocida 83 3.2.7 Kiểm tra khả mẫn cảm chủng vi khuẩn P multocida phân lập với số loại kháng sinh hóa dược 85 3.3 Xác định miễn dịch chủ động tự nhiên đánh giá hiệu lực vắc xin P52 dạng keo phèn nhũ dầu phòng bệnh tụ huyết trùng cho trâu, bò tỉnh Hà Giang, Cao Bằng 88 3.3.1 Miễn dịch chủ động tự nhiên trâu, bò chưa tiêm phòng vắc xin vùng thường xuyên xảy dịch tụ huyết trùng địa phương 88 3.3.2 Kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng chủng P52 phương pháp ngưng kết hồng cầu gián tiếp 94 3.3.3 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò tiêm phòng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 108 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .124 TÀI LIỆU THAM KHẢO .127 vi DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT AGPT DNA BHI CFU CSY CBPT7 cs DNT ELISA FAO GMT HE HS HGXB5 HSND : Agar Gel Precipitin Test (Phản ứng kết tủa thạch) : Deoxyribonucleic acid : Brain Heart Infusion (Môi trường thạch BHI) : Colony forming units (Đơn vị khuẩn lạc) : Casein-sucrose-yeast (Môi trường thạch CSY) : Chủng P multocida phân lập Cao Bằng : Cộng : Dermonecrotic toxin (Độc tố gây hoại tử) : Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Phương pháp ELISA) : Food and Agriculture Organization (Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc) : Geometic Mean Titer (Hiệu giá trung bình) : Hemtoxylin Eosin (Phương pháp nhuộm HE) : Haemorrhagic septicaemia (Nhiễm trùng huyết, xuất huyết) : Chủng P multocida phân lập Hà Giang : Hệ số năm dịch : Hệ số tháng dịch : Indirect Haemaglunation Tets (Phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp) : Lethal Dose 50 – Liều gây chết 50% : Microscopic Agglutination Test (Xét nghiệm huyết học MAT) : National Committee for Clinical Laboratory Standards (Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Xét ngiệm) OMP : Outer membrane protein (Protenin màng ngoài) PCR : Polymerase Chain Reaction (Phản ứng nhân gen) PMPT : Passive Mouse Protection Test (Phương pháp bảo hộ thụ động chuột) P multocida : Pasteurella multocida REP-PCR : Repetitive extragenic palindrome (Nhân đoạn gen lặp lại kỹ thuật PCR) RR : Relative Risk (nguy tương đối RR) SDS : Sodium dodicyl sulphate TEM : Transport enrichment medium (Môi trường vận chuyển) TSI : Triple Sugar Iron (Môi trường đường) THT : Tụ huyết trùng HSTD IHA LD50 MAT NCCLS vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sự tương quan type Roberts Carter 14 Bảng 1.2 Hệ thống phân loại serotype P multocida 16 Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi dùng để xác định serotype B vi khuẩn P multocida 51 Bảng 2.2 Thành phần chất phản ứng PCR 52 Bảng 2.3 Đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn với số loại kháng sinh (NCCLS – 2014) [126] 54 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm xác định hiệu lực bảo hộ trâu, bò trước tiêm phòng vắc xin 57 Bảng 2.5 Bố trí thí nghiệm xác định hiệu lực bảo hộ trâu, bò sau tiêm phòng vắc xin 58 Bảng 3.1 Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng 59 Bảng 3.2 Tỷ lệ mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng xét riêng lồi trâu, bị 61 Bảng 3.3 Tỷ lệ trâu, bò mắc tụ huyết trùng tử vong mùa vụ 63 Bảng 3.4 Hệ số năm dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hà Giang Cao Bằng 66 Bảng 3.5 Hệ số tháng dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng 68 Bảng 3.6 Phân lập vi khuẩn P multocida từ dịch ngoáy mũi trâu, bò khỏe 70 Bảng 3.7 Phân lập vi khuẩn P multocida từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò nghi mắc bệnh tụ huyết trùng 72 Bảng 3.8 Giám định số đặc tính sinh vật, hố học chủng vi khuẩn P mutocida phân lập 74 Bảng 3.9 Kết thử phản ứng lên men đường chủng vi khuẩn P multocida phân lập 75 Bảng 3.10 Xác định serotype chủng vi khuẩn P multocida phân lập phản ứng PCR 77 Bảng 3.11 Xác định độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập 79 Bảng 3.12 Dung quang khuẩn lạc chủng vi khuẩn P multocida phân lập 81 Bảng 3.13 LD50 vi khuẩn P multocida 84 viii Bảng 3.14 Kiểm tra khả mẫn cảm với số loại kháng sinh 86 Bảng 3.15 Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng tụ huyết trùng huyết trâu, bò chưa tiêm phòng vắc xin 88 Bảng 3.16 Kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò chưa tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 90 Bảng 3.17 Điều tra tình hình tiêm phịng vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò Hà Giang Cao Bằng 92 Bảng 3.18 Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò thời điểm tháng sau tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng 95 Bảng 3.19 Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò thời điểm tháng sau tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng 99 Bảng 3.20 Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò thời điểm tháng sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng 101 Bảng 3.21 Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò loại vắc xin thời điểm 1, 3, tháng sau tiêm phòng 103 Bảng 3.22 Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu 106 Bảng 3.23 Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu thời điểm 12 tháng sau tiêm phòng 107 Bảng 3.24 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò sau tiêm tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 109 Bảng 3.25 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò sau tiêm tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 111 Bảng 3.26 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò sau tiêm tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 113 Bảng 3.27 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu trâu, bò sau tiêm 12 tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 115 Bảng 3.28 Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 trâu, bò sau tiêm thời điểm 1, tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 117 138 106 Kumar P., Singh V P., Agrawal R K., Singh S (2009), “Identification of Pasteurella multocida isolates of ruminant origin using polymerase chain reaction and their antibiogram study”, Trop Anim Health Prod, 41, pp 573 - 578 107 Lane E P., Kock N D., Hill F W G and Mohan K (1992), “An outbreak of haemorrhagic septicaemia (septicaemic pasteurellosis) in cattle in Zimbabwe”, Tropical Animal Health and Production, 24 (2), pp 97 - 102 108 Lax A J., Grigoriadis A E (2001), “Pasteurella multocida toxines: the mitogenic toxin that stimulates signalling cascades to regulate growth and differentiation”, International Journal of Medical Microbiolog, 291(4), pp 261 - 268 109 Lax A J., Thomas W (2002), “How bacteria could cause cancer: one step at a time”, Trends in Microbiology, 10 (6), pp 293 - 299 110 Little P.A., Lyon B.M (1943) “Demonstration of serological types within nonhaemolytic pasteurellae”, American Journal of Veterinary Research, 4, pp 110 - 112 111 Manasa Y S., Jasni A M., Moses O., Odugbo., Maryam M., Elmina A., Isa S (2013), “Isolation and in Vitro Antibiotic Susceptibility of Pasteurella multocida from Cattle Origin” International Research Journal of Microbiology (IRJM), 4(5) pp 131 - 134 112 Michael L P., Barbara J M., Vivek K (2002) “ Transcriptional response of Pasteurella multocida to nutrient limitation” Journal of bacteriology, 184(13), pp 3734 - 3739 113 Mitra J., Chaudhury M., Bhattacharya C (2013), “Outbreak of Hemorrhagic Septicemia in free range buffalo and cattle grazing at riverside grassland in Murshidabad district, West Bengal, India”, Exploratory Animal and Medical Research, 3(2), pp 179 - 182 114 Mohd Yasin I S., Mohd Yusoff S., Mohd Z S., Abd Wahid Mohd E (2011), “Efficacy of an inactivated recombinant vaccine encoding a fimbrial pro- tein of Pasteurella multocida B:2 against hemorrhagic septicemia in goats”, Trop Ani Health Production 43, pp 179 - 187 139 115 Mohammad T., Zhiqi L., Anna F., Roger P., John C (2002), “Protective Immunity Conferred by Attenuated aroA Derivatives of Pasteurella multocida B:2 Strains in a Mouse Model of Hemorrhagic Septicemia”, Infection and Immunity Division, Institute of Biomedical and Life Sciences, University of Glasgow, Glasgow, United Kingdom, 70(7), pp 3355 - 3362 116 Muhammad R H H., Masood J., Masood R S A., Arya R., Hamid J (2006), “Occurrence of Pasteurella multocia in the nasopharynx of healthy buffaloses and their immunity statutus”, Bull Vet Inst Pulawy, 50 (2), pp 435 - 438 117 Muhammad Imran, Muhammad Irshad, Muhammad Akbar Shahid, Muhammad Ashraf (2007), Studies on the Carrier Status of Pasteurella multocida in Healthy Cattle and Buffalo in District Faisalabad, International journal of Dairy Science, (40, pp 398 - 400 118 Muneer R., Akhtar S., Afzal M (1994), “Evaluation of three oil-adjuvant vaccines against Pasteurella multocida in Buffalo calves”, Revue scientifique et technique International Office of Epizootics, 13(3), pp 837 - 843 119 Myint A., Carter G R (1990), “Field use of a live haemorrhagic septicaemia vaccine” Veterinary Record, 126, pp 648 120 Naz S., Hanif A., Maqbool A., Ahmed S., Muhammand K (2012), “Isolation, Characterrization and monitoring of Antibiotic resistance in Pasteurella multocida Isolates from Buffalo (BUBALUS BUBALIS) Herds Around Lahore”, The Journal of Animal and Plant Sciences, 22(3), pp 242 - 245 121 Namioka M., Murata S (1961), “Serological studies on Pasteurella multocida I A simplified method for capsular typing of the organisms”, Cornell Veterinarian, 51, pp 498 - 507 122 Namioka S., Murata M (1964), “Serological studies on Pasteurella multocida, V: Some epizootiological findings resulting from '0' antigen analysis”, Cornell Veterinarian, 54, pp 520 - 534 123 Natalia L., Patten B., Syamsudin A (1993), Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vaccine using ELISA and PMPT In: B.E Patten, TL Spencer, R.B Johnson, D Hoffmann and L Lehane (eds), Pasteurellosis in Production Animals, An international workshop held at Bali, Indonesia, ACIAR Proceedings, 43, pp 219 - 223 140 124 Natalia L (1996), Abattoir survey for Pasteurella multocida B:2 in Indonesia sing conventional and PCR technology Paper presented at the International Workshop on Diagnosis and Control of Haemorrhagic Septicaemia, ACIAR, Indonesia, May 1996 125 Neramitmansook P (1993), Country Report - Thailand In: B.E Patten, TL Spencer, R.B Johnson, D Hoffmann and L Lehane (eds), Pasteurellosis in Production Animals, An international workshop held at Bali, Indonesia, ACIAR Proceedings, 43, pp 234 - 237 126 NCCLS (2014), Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; twenty-fourth informational supplement, M100 – S24 Vol 34 No.1 127 OIE (1996), Manual of standands for diagnostic tests and vaccines, Third Edition, Paris 128 OIE (2004), Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and bees), Fifth ed OIE 129 OIE, World Organisation for Animal Health (2012), posting date Man- ual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals http://www.oie int/international-standard-setting/terrestrial-manual/access-online 130 Okay S., Ozcengiz E., Ozcengiz G (2012), “Immune responses against chimeric DNA and protein vaccines composed of PlpEN-OmpH and PlpEC-OmpH from Pasteurella multocida A:3 in mice”, Acta Microbiol Immunol Hung, 59 (4), pp 485– 498 131 Orth H., Lang S., Taniguchi M., Aktories K (2005), “Pasteurella multocida toxininduced activation of RhoA is mediated via two families of G (alpha) protein, G (alpha)q and G (alpha) 12/13”, Journal of Biological Chemistry, 280 (44), pp 6701 - 6708 132 Pati U S., Srivastava S K., Roy S C., More T (1996), “Immunogenicity of outer membrane proteins of Pasteurella multocida in buffalo calves” Veterinary Microbiology, 52, pp 301 - 311 133 Peter E., Marth J., Carolyn J H (1996), “A minamal medium for growth of Pasteurella multocida “, FEMS microbiology letter, 140, pp 165 - 169 141 134 Price G H., Smith J E (1966), “Antigenic studies on Pasteurella multocida using immunodiffusion techniques I Identification and nomenclature of the soluble antigens of a bovine Haemorrhagic septicaemia strain”, Journal of comparative Pathology, 76, pp 303 - 314 135 Qureshi S., Saxena H M (2014), “Estimation of titers of antibody against Pasteurella multocida in cattle vaccinated with haemorrhagic septicemia alum precipitated vaccine”, Veterinary World, 7(4), pp 224 - 228 136 Rabia Durrani, Fawad Ali Khan, Qurban Ali (2013), “Isolation and Characterizationof Pasteurella multocida from Infected Animals”, Vestcan, 7(2), pp 46 – 57 137 Ramdani, Dawkins H J., Johnson R B., Spencer T L., Adler B (1990), “Pasteurella multocida infections in mice with refence to haemorrhagic septicaemia in cattle and buffalo”, Immunology and Cell Biology, 68(1), pp 57 - 61 138 Reed L J., Muench H (1938), “A simple method of estimating fifty percent endpoints”, The American Journal of Hygiene, 27, pp 493 – 497 139 Reddy G S., Anand Rao K., Srinivasan V A (1996), “Immunity conferred by oil-adjuvant haemorrhagic septicaemia vaccine”, Indian Journal of Animal Science, 66(7), pp 703 - 704 140 Rimier R B., Rhoades I R (1987), “Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida”, Journal of Clinical Microbiology, 25, pp 615 - 618 141 Rimler R B (1992), Pasteurella: "Laboratory techniques for serotyping and diagnosis of infection, Pasteurellosis in Production animal, International workshop", Sponsored by ACIAR Proceeding No 43, Indonesia, 10-13, August, pp: 1999 - 2002 142 Robers R S (1947), “An immunologycal study of Pasteurella septicaemia”, Journal of comparative pathology, 57, pp 79 143 Rosner H., Grimmecke H D., Knirel Y A., Shashkov A S (1992), “Hyaluronic acid and a (1-4)-beta-D-xylan, extracellular polysaccharides of Pasteu-rella multocida (Carter type A) strain 880”, Carbohydrate Research, 223, pp 329 - 333 142 144 Rubies X., Casal J., Pijoan C (2002), “Plasmid and restriction endonuclease patterns in Pasteurella multocida isolated from swine pyramid”, Veterinary Microbiology, 84 (1-2), pp 69 - 78 145 Ruffolo C G., Adler B (1996), “Cloning, sequencing, expression, and pro- tective capacity of the oma87 gene encoding the Pasteurella multocida 87-kilodalton outer membrane antigen” Infection and Immunity,6, pp 3161 -3167 146 Sarwar N., Muhammad K., Rabbani M., Rana M.Y., Sarwar M., Ali M.A., Nazir J., Kamran M (2015), “Factors affecting potency of hemorrhagic septicemia vaccines”, International Journal of Agricultural and Biological, 17 (2), pp 387 - 390 147 Saharee A A., Salim N (1991), The epidemiology of haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes in Malaysia, In FAO 1991, pp 109 - 112 148 Saharee A A., Salim N B., Rasedee A., Jainudeen M R (1993), Haemorrhagic septicaemia carriers among cattle and buffaloes in Malaysia In: B.E Patten, T.L Spencer, R.B Johnson, D Hoffmann and L Lehane (eds),Pasteurellosis in Production Animals, An international workshop held at Bali, Indonesia, 10-13 August 1992, ACIAR Proceedings, 43, pp 89 - 91 149 Seleim R S (1993), Adhesive Eigenschaften von P multocida, Ph.D Thesis Justus Liebig University, Giessen, Germany 150 Seleim R S (2005), Review: Major pathogenic components of Pasteurella multocida and Mannhemia (Pasterella) haemolytica isolated from animal origin, Bacteriology Department, Animal Health Research Institute, Nadi ElSeed St Dokki, 12311 Cairo, Egypt 151 Shah N H., Jacobs A A C., De Graaf F K (2001), “Safety and efficacy of and oil-adjuvant vaccine against haemorrhagic septicaemia in buffalo, calves: croos-protection between the serotype B;2,5 and E: 2,5” Veterinary Record, 149, pp 583 - 587 152 Shayegh J., Mikaili P., Sharaf J D., Rastgn A (2009), “Antimicrobal resistance evaluation of Iranian ovine and bovine Pasteurella multocida”, Journal of Animal and Veterinary Advances, (9), pp 1753 - 1756 143 153 Sheikh M A., Tasneem K., Zafar M S., Butt L A., Shakoori A R (1995), "Effect of storage on the prevalent alum-precipitated hemorrhagic septicaemia vaccine in Pakistan and preparation of a more efficient oil adjuvant vaccine using dense culture of Pasteurella multocida Roberts type on an improved culture medium", Zentralbl Vetertnarmed, 42(1), pp 28 - 34 154 Sheikh M A., Anzam M., Shakoori A R (1996), “Observations on haemorrhagic septicaemia in Pakistan livestock”, Journal of Veterinary Medicine Series B, 43, pp 293 - 304 155 Shivachandra S K (2006), “ Identification of avian strains of Pasteurella multocida in India by conventional and PCR assays”, Veterinary Journal, 172 (3), pp 561-565 156 Smith H (1990), “Pathogenicity and the microbe in vivo”, Journal of General Microbiology,136, pp 371 - 383 157 Sthitmatee N., Numee S., Kawamoto E., Sasaki H., Yamashita K., Taka- hashi N., Kataoka Y., Sawada T (2008), “Protection of chickens from fowl cholera by vaccination with recombinant adhesive protein of Pasteurella multocida” Vaccine, 26(19), pp 2398 – 2407 158 Tatum F M., Tabatabai L B., Briggs R E (2009), “Protection against fowl cholera conferred by vaccination with recombinant Pasteurella multocida filamentous hemagglutinin peptides”, Avian Diseases, 53(2), pp 169 - 174 159 To H., Someno S., Nagai S (2005), “Development of a genetically modified nontoxigenic Pasteurella multocida toxin as a candidate for use in vac- cines against progressive atrophic rhinitis in pigs” American Journal of Veterinary Research, 66 (1), pp 113 - 118 160 Townsend K M., Dawkins H J S., Papadimitriou J M (1997), “REP-PCR analysis of Pasteurella multocida isolates that cause haemorrhagic septicaemia”, Researchin Veterinary Science, 63, pp 151 - 155 161 Townsend K M., Frost A J., Lee C W., Papadimitriou J M., Dawkins H J S (1998), “Development of PCR assays for species and type specific identification of Pasteurella multocida”, Journal of Clinical Microbiology, 36, pp 1096 - 1100 144 162 Townsend K M., Boyce J D., Chung J Y., Frost A J., Adler B (2001), “Genetic organization of Pasteurella multocida cap loci and development of a multiplex capsular PCR typing system”, Journal of clinical Mycrobiology, 39, pp 924 - 929 163 Verma R., Jaiswal T N (1997), Protection, humoral and cell medicated immune responses in calves immunised with multiple emulsion haemorrhagic septicaemia vaccine, Vaccine, 15, pp 1254 - 1260 164 Verma R., Jaiswal T N (1998), Haemoharrgic septicaemia vaccines (Review), Vaccines, 16, pp 1184 - 1192 165 Warner S (1996), Development of a transport enrichment medium for improved isolation of Pasteurella multocida from field samples Paper presented at the International Workshop on Diagnosis and Control of Haemorrhagic septicaemia, AClAR, Indonesia, May 1996 166 Wassenaar T M., Silley P (2008), “Antimicrobial resistance in zoonotic bacteria: lessons learned from host-specific pathogens” Animal Health Research Reviews, (2), pp 177 - 186 167 Wijewardana T G., Horadagoda N U., Vipulasiri A A., Thalagoda S A (1993), Isolation and characterisation of Pasteurella multocida from tonsils of apparently healthy cattle, In: B.E Patten, TL Spencer, R.B Johnson, D.Hoffmann and L Lehane (eds), Pasteurellosis in Production Animals, An international workshop held at Bali, Indonesia, 10-13 August 1992 ACIAR Proceedings No 43, pp 209 - 214 168 Wilson M A., Rimier R B., Hoffman U (1992), “Comparison of DNA fingerprints d somatic serotypes of serogroup Band E Pasteurella multocida isolates”, Journal of Clinical Microbiology, 30, pp 1518 - 1524 169 Wilkie I W., Harper M., Boyce J D., Adler B (2012), Pasteurella multocida: Diseases and Pathogenesis, Current Topics in Microbiology and Immunology vol 361, pp - 22 170 Woods C R., Versalovic J., Koeuth T., Lupski J R (1993), “Whole-cell repetitive element sequence-based polymerase chain reaction allows rapid assessment of clonal relationships of bacterial isolates”, Journal of Clinical Microbiology, 31, pp 1927 -1931 145 171 Wu J R., Shien J H., Shieh H K., Chen C F., Chang P C (2007), “ Protective immunity conferred by recombinant Pasteurella multocida lipoprotein E (PlpE)”, Vaccine, 25 (21), pp 4140 - 4148 172 Yoshimura H., Ishimaru M., Endoh Y S., Kojima A (2008), “Antimicrobial Susceptibility of Pasteurella multocida Isolated From Cattle and Pigs”, Journal of Veterinary Medicine Series B, 48 (7), pp 555 – 560 III Từ Internet 173 Trung tâm Tư liệu Dịch vụ Thống kê Tổng Cục Thống kê (2015), Tình hình Kinh tế Xã hội năm 2015, https://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=621&ItemID=15507 146 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU Kết xử lý số liệu tỷ lệ mắc bệnh tụ huyết trùng trâu so với bò Two-Sample T-Test and CI: Trâu - HG, Bò - HG Two-sample T for Trâu - HG vs Bò - HG Trâu - H Bò - HG N 5 Mean 0.1640 0.0720 StDev 0.0699 0.0402 SE Mean 0.031 0.018 Difference = mu Trâu - HG - mu Bò - HG Estimate for difference: 0.0920 95% CI for difference: (0.0038, 0.1802) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 2.55 P-Value = 0.043 DF = P-Value = 0.000 DF = Two-Sample T-Test and CI: Trâu - CB, Bò - CB Two-sample T for Trâu - CB vs Bò - CB Trâu - C Bò - CB N 5 Mean 0.5140 0.2680 StDev 0.0546 0.0356 SE Mean 0.024 0.016 Difference = mu Trâu - CB - mu Bò - CB Estimate for difference: 0.2460 95% CI for difference: (0.1746, 0.3174) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = 8.44 Kết xử lý số liệu tỷ lệ mắc bệnh tụ huyết trùng trâu, bò theo mùa vụ Two-Sample T-Test and CI: Dông xuân - HG, Hè thu - HG Two-sample T for Dông Xuân - HG vs Hè Thu - HG Dông Xuâ Hè Thu - N 5 Mean 0.0400 0.0880 StDev 0.0212 0.0377 SE Mean 0.0095 0.017 Difference = mu Dông Xuân - HG - mu Hè Thu - HG Estimate for difference: -0.0480 95% CI for difference: (-0.0953, -0.0007) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -2.48 P-Value = 0.048 DF = Two-Sample T-Test and CI: Dông xuân - CB, Hè thu - CB Two-sample T for Dông Xuân - CB vs Hè Thu - CB Dông Xuâ Hè Thu - N 5 Mean 0.1440 0.2340 StDev 0.0270 0.0288 SE Mean 0.012 0.013 Difference = mu Dông Xuân - CB - mu Hè Thu - CB Estimate for difference: -0.0900 95% CI for difference: (-0.1318, -0.0482) T-Test of difference = (vs not =): T-Value = -5.10 P-Value = 0.001 DF = 147 PHỤ LỤC Bảng kết xác định nguy tương đối trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng tỉnh Hà Giang Cao Bằng Bảng 1: So sánh nguy mắc bệnh tụ huyết trùng trâu so với bị Lồi gia súc Trâu Bị Cộng Mắc bệnh (con) a 1.294 c 377 a+c 1.671 tỉnh Hà Giang Không mắc Cộng bệnh (con) b a+b 794.053 795.347 d c+d 514.540 514.917 b+d N= 1.308.593 1.310.264 χ2 RR 196,5 2,22 Bảng 2: So sánh nguy mắc bệnh tụ huyết trùng trâu so với bò tỉnh Cao Bằng Lồi gia súc Trâu Bị Cộng Mắc bệnh (con) a 2.587 c 1.645 a+c 4.232 Không mắc bệnh (con) b 500.516 d 614.716 b+d 1.115.232 Cộng χ2 RR a+b 503.103 c+d 616.361 N= 1.119.464 449,9 1,93 Bảng 3: So sánh nguy tương đối trâu, bò mắc bệnh THT tỉnh Hà Giang hai vụ Hè – Thu Đông - Xuân Mùa vụ Mắc bệnh (con) Đông - Xuân Hè - Thu Cộng Cộng a 522 c Không mắc bệnh (con) B 1.309.742 D a+b 1.310.264 c+d 1.149 1.309.115 1.310.264 a+c b+d N= 1.671 2.618.857 2.620.528 χ2 RR 235,4 2,20 148 Bảng 4: So sánh nguy tương đối trâu, bò mắc bệnh THT tỉnh Cao Bằng hai vụ Hè – Thu Đông - Xuân Mùa vụ Mắc bệnh Không (con) mắc bệnh Cộng χ2 RR 225,5 1,60 (con) Đông - Xuân Hè - Thu Cộng a B a+b 1.628 1.117.836 1.670.858 c D c+d 2.604 1.116.860 1.119.464 a+c b+d N= 4.232 2.234.696 2.238.928 149 MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỦA ĐỀ TÀI Ảnh 1, Trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng Hà Giang Cao Bằng Ảnh 3, Phổi tụ huyết, xuất huyết Ảnh 5, Gan sưng, xuất huyết 150 Ảnh 7, Tim xuất huyết Ảnh Lấy máu trâu Ảnh 11 Mẫu huyết trâu, bò Ảnh 10 Lấy mẫu dịch ngoáy mũi Ảnh 12 Ria cấy mẫu dịch ngoáy mũi 151 Ảnh 13 Khuẩn lạc P multocida Ảnh 14 Hình thái vi khuẩn P multocida Ảnh 15, 16 Thử phản ứng sinh hóa chủng P.multocida phân lập Ảnh 17, 18 Thử độc lực chuột 152 Ảnh 19 Dung quang khuẩn lạc chủng vi khuẩn P multocida phân lập Ảnh 20 Kết kháng sinh đồ ... tài: NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN Pasteurella multocida TRONG BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI HÀ GIANG, CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHÒNG BỆNH Ngành: Ký sinh trùng Vi. .. Hệ số năm dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hà Giang Cao Bằng 66 Bảng 3.5 Hệ số tháng dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng 68 Bảng 3.6 Phân lập vi khuẩn P multocida. .. thuốc vi khuẩn P multocida 18 1.2 Bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida gây 1.2.1 Đặc điểm bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Bệnh vi khuẩn P multocida gây thường thể chủ yếu nhiễm trùng huyết,