Nghiên cứu xác định một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn p multocida trong bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tại hà giang, cao bằng và lựa chọn vắc xin phòng bệnh (tt)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - PHẠM THỊ PHƯƠNG LAN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ YẾU TỐ GÂY BỆNH CỦA VI KHUẨN Pasteurella multocida TRONG BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI HÀ GIANG, CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHỊNG BỆNH” TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Thái Nguyên, năm 2017 Luận án hoàn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Xuân Bình TS Nguyễn Ngọc Nhiên Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường Họp tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia - Trung tâm học liệu Đại học Thái Nguyên - Thư viện Trường Đại học Nông Lâm - ĐH Thái Ngun DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Phạm Thị Phương Lan, Đặng Xuân Bình (2013), “Một số đặc tính sinh học vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò phân lập Hà Giang Cao Bằng”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Thái Nguyên, 112 (12/2), tr 163 - 167 Phạm Thị Phương Lan, Đặng Xuân Bình (2014), “Một số đặc đặc điểm dịch tễ nhân tố ảnh hưởng đến bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang ”, Tạp chí Khoa học Công nghệ Đại học Thái Nguyên , 119 (5), tr 73 – 78 Phạm Thị Phương Lan, Đặng Xuân Bình (2014), “Diễn biến bệnh tụ huyết trùng trâu, bò theo mùa ảnh hưởng yếu tố khí hậu đến tỷ lệ mắc bệnh tỉnh Cao Bằng”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú , 21 (7), tr 28 - 33 MỞ ĐẦU Ở Việt Nam ngành chăn ni trâu, bò ln giữ vai trò quan trọng sản xuất nông nghiệp Theo thông báo Cục thống kê (2015) [173] tính tới thời điểm 01/10/2015, đàn trâu nước có 2,5 triệu con, tăng 0,1% so với thời điểm năm trước; đàn bò có 5,4 triệu con, tăng 2,5%, riêng đàn bò sữa đạt 275,3 nghìn con, tăng 21% Song song với phát triển ngành chăn ni trâu, bò cơng tác phòng chống dịch bệnh đặc biệt coi trọng, trước tiên phải nói đến bệnh tụ huyết trùng Báo cáo Hội nghị phòng chống dịch bệnh gia súc, gia cầm, thủy sản năm 2014 [1] năm 2015 [2] Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn cho biết, năm 2014 có 26 tỉnh thành có bệnh tụ huyết trùng với 7.682 trâu, bò mắc bệnh, năm 2015 có 26 tỉnh thành báo cáo có bệnh với 7.278 trâu, bò mắc Chính bệnh xác định đối tượng nghiên cứu ngành Thú y năm qua năm Một số tỉnh miền núi phía Bắc, có Hà Giang, Cao Bằng, có diện tích tự nhiên rộng chủ yếu rừng núi, điều kiện thuận lợi để phát triển chăn nuôi gia súc, đặc biệt chăn ni trâu, bò Hiện nay, tổng đàn trâu, bò tỉnh Hà Giang 265.000 tỉnh Cao Bằng 228.000 Nhưng có đặc thù riêng địa lý, kinh tế xã hội tập quán chăn nuôi, việc áp dụng kỹ thuật phòng chống dịch bệnh chăn ni hạn chế, nhân tố tạo nên tồn phát sinh nhiều ổ dịch tụ huyết trùng, gây thiệt hại chăn nuôi Theo báo cáo tổng kết công tác thú y hàng năm địa phương kết nghiên cứu Đặng Xuân Bình cs (2010) [3]; năm 2008 tỉnh Hà Giang có 276 trâu, 157 bò chết bệnh tụ huyết trùng, tỉnh Cao Bằng năm 2008 có 455 trâu, bò chết năm 2009 có gần 400 trâu bò chết bệnh tụ huyết trùng Để khống chế bệnh, có số loại vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò quan nghiên cứu, sản xuất, sử dụng để tiêm phòng cho đàn gia súc, bệnh liên tục xảy nhiều địa phương Việc tiếp tục phân lập xác định vi khuẩn Pasteurella để làm rõ đặc điểm dịch tễ bệnh, tìm quy luật lưu hành, tính gây bệnh vi khuẩn để sản xuất ứng dụng vắc xin phù hợp vùng, hạn chế tiến tới tốn bệnh cần thiết Vì việc lựa chọn vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò phù hợp cho địa phương có ý nghĩa định đến hiệu cơng tác kiểm sốt, khống chế bệnh Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn sản xuất, tiến hành đề tài “Nghiên cứu xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hà Giang, Cao Bằng lựa chọn vắc xin phòng bệnh” * Mục tiêu đề tài - Nghiên cứu dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng tình trạng mang trùng vi khuẩn Pasteurella multocida trâu, bò hai tỉnh Hà Giang Cao Bằng - Giám định đặc tính sinh vật, hóa học yếu tố độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng cho trâu, bò thực địa - Đánh giá khả đáp ứng miễn dịch, hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng sử dụng cho trâu, bò Hà Giang, Cao Bằng đề xuất giải pháp, lựa chọn vắc xin phòng bệnh hiệu * Ý nghĩa khoa học đề tài - Bổ sung tư liệu khoa học đặc điểm dịch tễ, serotype kháng nguyên, yếu tố độc lực, lưu hành vi khuẩn P multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò hai tỉnh Hà Giang, Cao Bằng - Bổ sung tư liệu khoa học hiệu lực bảo hộ vắc xin thử thách với chủng vi khuẩn P multocida cường độc phân lập được; làm tiền đề cho việc lựa chọn vắc xin thương mại phù hợp, tuyển chọn chủng vi khuẩn P multocida thích hợp, ổn định kháng nguyên cho việc phát triển vắc xin nội địa để phòng bệnh tụ huyết trùng tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam * Ý nghĩa thực tiễn đề tài - Việc đánh giá tình trạng mang khuẩn P multocida trâu, bò khỏe sở cho việc điều chỉnh chiến lược phòng bệnh tụ huyết trùng hai tỉnh Hà Giang, Cao Bằng - Kết nghiên cứu đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng thực địa sở thực tiễn để nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu thay đổi công nghệ chế tạo vắc xin theo hướng tăng cường an toàn, đồng thời kéo dài thời gian bảo hộ, hạn chế tỷ lệ mắc bệnh, góp phần nâng cao hiệu kinh tế chăn ni trâu, bò - Kết đề xuất lựa chọn vắc xin phòng bệnh thích hợp địa phương giúp cho quan thú y người chăn ni Hà Giang, Cao Bằng nói riêng tỉnh miền núi phía Bắc nói chung rà soát, điều chỉnh kế hoạch sử dụng vắc xin thích hợp, đạt tỷ lệ miễn dịch bảo hộ cao trâu, bò sau tiêm phòng * Những đóng góp đề tài - Việc sử dụng chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu bò mắc bệnh để xác định độ dài đáp ứng miễn dịch hiệu lực vắc xin phòng bệnh cho thấy tương đồng chủng vi khuẩn sản xuất vắc xin thương mại với chủng vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng thực địa Đây đóng góp có ý nghĩa khoa học thực tiễn việc lựa chọn vắc xin đồng tính kháng nguyên với chủng vi khuẩn lưu hành địa phương để tiêm phòng cho trâu, bò - Sử dụng chủng vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu bò phân lập để đánh giá hiệu lực vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng sản xuất nước sở cho nghiên cứu việc chọn giống chuẩn đáp ứng yêu cầu sản xuất vắc xin phòng bệnh phù hợp tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam * Bố cục luận án Luận án gồm 126 trang (không kể phần tài liệu tham khảo), mở đầu trang, tổng quan tài liệu 39 trang, nguyên vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 17 trang, kết ngiên cứu thảo luận 65 trang, kết luận đề nghị trang Luận văn có 30 bảng thể kết nghiên cứu, 14 hình ảnh, 173 tài liệu tham khảo Trong có 55 tài liệu tiếng việt 118 tài liệu tiếng anh Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chương NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, nguyên liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng - Vi khuẩn P multocida phân lập từ dịch ngốy mũi trâu bò khỏe phân lập từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Đáp ứng miễn dịch trâu, bò ni Hà Giang, Cao Bằng sau tiêm vắc tụ huyết trùng xin nhũ dầu, keo phèn chủng P52 2.1.2 Nguyên vật liệu - Mẫu bệnh phẩm: dịch ngoáy mũi lấy từ trâu, bò khỏe, bệnh phẩm gan, lách, phổi, tủy xương lấy từ trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng + Mẫu huyết trâu, bò trước sau tiêm phòng vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu keo phèn chủng P52 tháng, tháng, tháng, tháng, 12 tháng - Động vật thí nghiệm: chuột nhắt trắng (dòng Swiss, Viện Thú y cung cấp) khỏe, có khối lượng từ 18-22 gam/con +Trâu, bò khỏe chưa tiêm vắc xin phòng bệnh - Các loại hóa chất, mơi trường sử dụng theo quy trình nghiên cứu Bộ môn vi trùng Viện Thú y Trung tâm chẩn đoán Thý y Trung Ương - Chủng vi khuẩn: Vi khuẩn P mutocida chủng HGXB5 CBPT7 phân lập vi khuẩn P mutocida chủng P52 chuẩn Viện Thú y Quốc gia cung cấp - Vắc xin sử dụng thí nghiệm: vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu keo phèn chủng P52 Công ty thuốc Thú y TW NAVETCO - Dụng cụ, máy móc thí nghiệm: dụng cụ thí nghiệm thơng dụng, buồng cấy vô trùng, nồi hấp, máy ly tâm, máy dùng cho phản ứng PCR có Bộ mơn Vi trùng - Viện Thú y Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu + Một số địa phương địa bàn tỉnh Hà Giang Cao Bằng + Bộ môn Vi trùng -Viện Thú y Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung Ương - Thời gian nghiên cứu: Từ năm 2011 đến năm 2015 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu điều tra dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao - Xác định tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng - Xác định tỷ lệ mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng xét riêng lồi trâu, bò - Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng mùa vụ khác - Nghiên cứu mức độ dịch hệ số năm dịch - Nghiên cứu thời điểm phát dịch, mùa dịch 2.2.2 Nghiên cứu phân lập xác định đặc tính sinh vật, hóa học, yếu tố độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập - Phân lập vi khuẩn P multocida từ mẫu dịch ngốy mũi trâu, bò khỏe mẫu bệnh phẩm lấy từ trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Xác định số đặc tính sinh vật hóa học chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ dịch ngoáy mũi mẫu bệnh phẩm trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Xác định serotype chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Xác định độc lực chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Xác định khả mẫn cảm với số kháng sinh chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ mẫu bệnh phẩm trâu, bò chết nghi mắc bệnh tụ huyết trùng 2.2.3 Xác định miễn dịch chủ động tự nhiên đánh giá hiệu lực vắc xin P52 dạng keo phèn nhũ dầu phòng bệnh tụ huyết trùng cho trâu, bò tỉnh Hà Giang, Cao Bằng 2.2.3.1 Miễn dịch chủ động tự nhiên trâu, bò chưa tiêm phòng vắc xin vùng dịch tụ huyết trùng địa phương - Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng tụ huyết trùng huyết trâu, bò chưa tiêm phòng vùng dịch tụ huyết trùng địa phương - Kiểm tra khả miễn dịch trâu, bò chưa tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 2.2.3.2 Kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng chủng P52 - Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò thời điểm tháng, tháng, tháng, tháng, 12 tháng sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu keo phèn chủng P52 2.2.3.3 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò tiêm phòng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Sử dụng phương pháp nghiên cứu dịch tễ Nguyễn Như Thanh (2011) 2.3.2 Phương pháp lấy mẫu - Mẫu dịch ngoáy mũi mẫu bệnh phẩm: bảo quản điều kiện nhiệt độ oC nhanh chóng đưa phòng thí nghiệm Bộ mơn vi trùng - Viện Thú y Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương để phân lập vi khuẩn - Lấy máu trâu, bò: máu lấy vô trùng từ tĩnh mạch cổ trâu, bò, chắt lấy huyết Ghi ký hiệu mẫu, ngày lấy mẫu đưa phòng thí nghiệm (mẫu cho vào phích lạnh vận chuyển) Các mẫu huyết bảo quản điều kiện -20 oC thực thí nghiệm xác định hiệu giá kháng thể 2.3.3 Các phương pháp nghiên cứu phòng thí nghiệm - Phân lập, xác định đặc tính sinh vật, hóa học theo phương pháp thường quy Bộ môn Vi trùng -Viện Thú y Trung tâm chẩn đoán Thú y Trung ương - Phương pháp xác định hình thái khuẩn lạc theo tiêu chuẩn Hedleston cs (1966) - Phản ứng PCR, xác định serotype giáp mô vi khuẩn P multocida (Townsend cs, 2001) - Cơng thức tính LD50 theo Reed L J., Muench H (1938) - Phương pháp xác định độc lực vi khuẩn P multocida (Carter et al,1995) - Phương pháp xác định mức độ mẫn cảm với số kháng sinh chủng P multocida phân lập (Nguyễn Thanh Hà, 1991) - Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò trước tiêm vắc xin sau tiêm vắc xin phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp IHA (Indirect Haemaglunation Tets) - Phương pháp xác định hiệu lực bảo hộ trâu, bò trước sau tiêm phòng vắc xin phản ứng bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng (Bain cs, 1982) 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu thu từ kết nghiên cứu xử lý theo phương pháp toán học thông dụng thống kê sinh vật học (Nguyễn Văn Thiện, 2008) Ứng dụng phần mềm thống kê Excell, Minitab 14 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu điều tra dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao từ năm 2011 - 2015 3.1.1 Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng tỉnh Hà Giang Cao Bằng Số liệu bảng 3.1 thu thập nêu mục 2.3.1 cho thấy: từ năm 2011 – 2015, bệnh tụ huyết trùng xảy địa bàn tỉnh Hà Giang Cao Bằng phổ biến mối đe dọa cho ngành chăn ni tỉnh Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng tỉnh Hà Giang 0,13%, tỷ lệ tử vong 36,56% Tỉnh Cao Bằng tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tương ứng 0,38% 32,63% Kết cho thấy, tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng tỉnh Hà Giang Cao Bằng có khác nhau, lý giải yếu tố vùng địa lý, tập quán chăn nuôi vùng miền, đặc biệt tỷ lệ tiêm phòng khác Bảng 3.1: Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng Thời gian (năm) Tổng đàn trâu, bò (con) 2011 2012 2013 2014 2015 Tổng hợp 259.271 262.474 264.427 258.990 265.102 1.310.264 2011 2012 2013 2014 2015 Tổng hợp 224.725 221.903 216.927 227.681 228.228 1.119.464 Số mắc Tỷ lệ bệnh (%) (con) Hà Giang 565 0,22 327 0,12 352 0,13 195 0,08 232 0,09 1.671 0,13 Cao Bằng 919 0,41 952 0,43 772 0,36 747 0,33 842 0,37 4.232 0,38 Số chết/số ốm (con) Tỷ lệ tử vong (%) 194 123 133 71 90 611 34,34 37,61 37,78 36,41 38,79 36,56 203 315 455 209 199 1.381 22,09 33,09 58,94 27,98 23,63 32,63 3.1.2 Tỷ lệ mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng xét riêng lồi trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng Bảng 3.2: Tỷ lệ mắc bệnh tử vong tụ huyết trùng xét riêng lồi trâu, bò Trâu Năm Tổng số Số trâu mắc điều tra bệnh (con) (con) 2011 2012 2013 2014 2015 TH 156.311 158.717 158.336 158.889 163.094 795.347 2011 2012 2013 2014 2015 TH 102.110 100.801 97.416 101.360 101.416 503.103 Bò Tỷ lệ Tổng số Số tử bò mắc vong điều tra bệnh (%) (con) (con) Hà Giang 433 0,28 149 34,41 102.960 132 256 0,16 97 37,89 103.757 71 253 0,16 100 39,53 106.091 99 161 0,10 56 34,78 100.101 34 191 0,12 73 38,22 102.008 41 1.294 0,16 475 36,71 514.917 377 P=0,043 Cao Bằng 587 0,57 152 25,89 122.615 332 563 0.56 205 36,41 121.102 389 503 0,52 326 64,81 119.511 269 446 0.44 131 29,37 126.321 301 488 0,.48 143 29,30 126.812 354 2.58 0,51 957 36,99 616.361 1.645 P= 0,000 Tỷ lệ (%) chết/ ốm (con) Tỷ lệ (%) chết / ốm (con) Tỷ lệ tử vong (%) 0,13 0,07 0,09 0,03 0,04 0,07 45 26 33 15 17 136 34,09 36,62 33,33 44,12 41,46 36,07 0,27 0,32 0,23 0,24 0,28 51 110 129 78 56 15,36 28,28 47,96 25,91 15,82 0,27 424 25,78 P: độ tin cậy tỷ lệ mắc trâu, bò Từ số liệu bảng 3.2 cho thấy: Tại Hà Giang: kết điều tra tỷ lệ mắc bệnh tử vong lồi trâu, bò qua năm thấy, có 1.294 trâu mắc bệnh tổng đàn 795.347 con, chiếm tỷ lệ 0,16%, có 36,71% trâu chết Đối với bò tỷ lệ mắc bệnh thấp (0,07%) tỷ lệ tử vong 36,07% Tại Cao Bằng: kết điều tra cho thấy có 0,51% trâu mắc bệnh, tỷ lệ tử vong 36,99% Đối với bò tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong tương ứng 0,27% 25,78% So sánh tỷ lệ mắc bệnh trâu bò tỉnh thấy rằng, trâu có tỷ lệ mắc bệnh cao so với bò, với độ tin cậy (P < 0,05) 3.1.3 Tỷ lệ trâu, bò mắc tụ huyết trùng tử vong mùa vụ năm tỉnh Hà Giang Cao Bằng Bảng 3.3: Tỷ lệ trâu, bò mắc tụ huyết trùng tử vong mùa vụ Số trâu, bò mắc bệnh (con) Số trâu, bò chết (con) Đông - Xuân Hè - Thu Đông - Xuân Hè - Thu Năm Tổng số Số Số Tỷ lệ Tỷ lệ Theo trâu bò mắc mắc Số tử Số tử Dõi (con) bệnh Tỷ lệ bệnh Tỷ lệ chết vong chết vong (con) (%) (con) (%) (con) (%) (con) (%) Hà Giang 2011 259.271 180 0,07 385 0,15 68 37,78 126 32,73 2012 262.474 93 0,04 234 0,09 39 41,94 84 35,90 2013 264.427 132 0,05 220 0,08 38 28,79 95 43,18 37,5 2014 258.990 62 0,02 133 0,05 21 33,87 50 2015 265.102 55 0,02 177 0,07 18 32,73 72 40,68 Tổng hợp 1.310.264 522 0,04 1.149 0,09 184 35,25 427 37,16 P=0,048 Cao Bằng 2011 224.725 317 0,14 602 0,27 65 20,50 138 22,92 2012 221.903 428 0,19 524 0,24 122 28,50 193 36,83 2013 216.927 266 0,12 506 0,23 143 53,76 312 61,66 2014 227.681 316 0,14 431 0,19 87 27,53 122 28,31 2015 228.228 301 0,13 541 0,24 73 24,5 126 23,29 Tổng hợp 1.119.464 1.628 0,15 2.604 0,23 490 30,10 891 34,22 P=0,001 P: độ tin cậy tỷ lệ mắc vụ Hè - Thu so với vụ Đông - Xuân Kết tổng hợp bảng 3.3 cho thấy: Tại Hà Giang: kết điều tra qua năm thấy, vụ Đơng – Xn có 522 trâu, bò mắc bệnh, chiếm tỷ lệ 0,04%, trâu, bò chết 184 con, tỷ lệ tử 13 kháng nguyên chủng HGXB5 - mẫu huyết trâu, bò Cao Bằng có kháng thể dương tính với kháng nguyên chủng CBPT7 Bảng 3.16: Kết kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò chưa tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng Địa phương Mẫu kháng huyết QBH1 QBH2 QBH7 QBH13 Hà QBH15 Giang QBH18 BH2 BH10 BH11 BH15 Đối chứng âm HAH2 HAH8 Cao HAH9 Bằng HAH12 NKH1 NKH10 Đối chứng âm Chủng thử thách cường độc HGXB5 CBPT7 Liều gây nhiễm 10LD50 10LD50 Mức hiệu giá kháng thể 1/2 1/4 1/8 1/2 1/2 1/32 1/2 1/32 1/2 1/4 1/4 1/4 1/2 1/4 1/16 1/2 Kết bảo hộ chuột Số chuột Số thử thách chuột Tỷ lệ cường sống (%) độc (con) (con) 0 0 0 0 0 25 0 50 0 0 0 4 4 4 0 0 0 0 0 25 0 Kết tổng hợp bảng 3.16 cho thấy: số 16 mẫu huyết trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng có kháng thể dương tính, có mẫu bảo hộ 25 – 50% số chuột nhắt trắng sau thử thách cường độc Trong đó, mẫu huyết trâu, bò Hà Giang có mẫu bảo hộ 25% chuột, mẫu bảo hộ 50% chuột thí nghiệm Các mẫu huyết trâu, bò Cao Bằng có mẫu bảo hộ 25% chuột Theo tiêu chuẩn FAO mẫu huyết bảo hộ 50% động vật thí nghiệm trở lên đạt hiệu lực bảo hộ (dẫn theo Lê Văn Tạo, Dương Thế Long, 1996) [43] Đối chiếu với tiêu chuẩn FAO có 1/46 (2,17%) mẫu huyết trâu, bò chưa tiêm phòng vắc xin Hà Giang có kháng thể đủ để bảo hộ trâu, bò bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida gây 3.3.1.3 Tình hình tiêm phòng vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng 14 Đã phối hợp với quan thú y địa phương Hà Giang Cao Bằng đánh giá tình hình cơng tác tiêm phòng vắc xin tụ huyết trùng cho trâu, bò năm liên tục 2013, 2014 2015 So sánh tỷ lệ tiêm phòng vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn cho trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng thấy, trâu, bò tiêm phòng vắc xin nhũ dầu đạt tỷ lệ cao Cụ thể: Năm 2013 tỷ lệ tiêm phòng vắc xin nhũ dầu cho trâu, bò Hà Giang đạt 90,86%, Cao Bằng đạt 88,95%, tỷ lệ tiêm phòng vắc xin keo phèn cho trâu, bò đạt tỷ lệ 76,70% Hà Giang 65,52% Cao Bằng Nguyên nhân vắc xin keo phèn tiêm lần/năm, việc tổ chức tiêm phòng gặp nhiều khó khăn, nhận thức người dân cơng tác phòng chống dịch hạn chế, số lượt trâu, bò tiêm đủ mũi khơng đạt, nên tỷ lệ tiêm phòng thấp Qua cho thấy, vắc xin nhũ dầu có lợi việc giảm số lần tiêm phòng năm giúp nâng tỷ lệ tiêm phòng đạt cao so với vắc xin tụ huyết trùng keo phèn, hiệu phòng bệnh đạt cao Xuất phát từ thực tế trên, khuyến cáo sở sản xuất vắc xin nhũ dầu cần tiếp tục nghiên cứu, đổi công nghệ để hạn chế tỷ lệ trâu, bò bị phản ứng; địa phương, đặc điểm chăn ni trâu bò khơng tập trung, chủ yếu vùng sâu, vùng xa lại khó khăn, để kết tiêm phòng đạt tỷ lệ cao, quan thú y Hà Giang Cao Bằng cần tuyên truyền người dân nên tiếp tục sử dụng vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 tiêm phòng cho trâu, bò Còn dùng vắc xin keo phèn phải tiêm đủ mũi/năm đạt tỷ lệ bảo hộ cao 3.3.2 Kiểm tra đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng chủng P52 phương pháp ngưng kết hồng cầu gián tiếp Trước tiêm phòng vắc xin, tiến hành kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng Chọn ngẫu nhiên 16 trâu, bò Hà Giang 16 trâu, bò Cao Bằng khơng có kháng thể kháng P multocida để tiêm vắc xin trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu chủng P52 trâu, bò tiêm vắc xin keo phèn chủng P52 Thí nghiệm bố trí sau: * Tỉnh Cao Bằng: Lô 1: tiêm vắc xin nhũ dầu chủng P52 ký hiệu từ đến Lô 2: tiêm vắc xin keo phèn chủng P52 ký hiệu đến 16 * Tỉnh Hà Giang: Lô 1: tiêm vắc xin nhũ dầu chủng P52 ký hiệu 17 đến 24 Lô 2: tiêm vắc xin keo phèn chủng P52 ký hiệu 25 đến 32 Sau tiêm vắc xin, tiến hành lấy máu vào thời điểm tháng; tháng; tháng, tháng, 12 tháng, chắt huyết pha thành tỷ lệ 1/2; 1/4; 1/8; 1/16; 1/64; 1/128 để kiểm tra hiệu giá kháng thể phản ứng ngưng kết với kháng nguyên chủng P multocida (CBPT7) phân lập Cao Bằng, (HGXB5) phân lập Hà Giang * Kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò thời điểm 1, 3, tháng sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu, keo phèn chủng P52 15 Tổng hợp kết thu đáp ứng miễn dịch trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 sau 1, 3, tháng trình bày bảng 3.18; 3.19; 3.20 cho thấy : Chỉ số miễn dịch trâu, bò đạt mức cao sau tháng tiêm vắc xin, sau giảm dần vào tháng thứ tháng thứ sau tiêm Kết thể rõ hình 3.12 3.13 Hình 3.12: Chỉ số miễn dịch trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 sau 1, 3, tháng tỉnh Cao Bằng Hình 3.13: Chỉ số miễn dịch trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 sau 1, 3, tháng tỉnh Hà Giang So sánh kết hiệu giá kháng thể, số miễn dịch hai loại vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu keo phèn chủng P52 thử nghiệm trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng, thấy rằng: Vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu vắc xin tụ huyết trùng keo phèn kích thích sinh miễn dịch tốt cho trâu, bò hai tỉnh Tuy nhiên, vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu cho đáp ứng miễn dịch cao * Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể loại vắc xin thời điểm 1, 3, tháng sau tiêm phòng Bảng 3.21: Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể loại vắc xin thời điểm 1, 3, tháng sau tiêm phòng Loại vắc xin Nhũ dầu Số mẫu huyết khảo sát Hiệu giá kháng thể (+) 16 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 16 16 16 16 16 16 Tính chung (%) Keo phèn 16 1/2 1/4 1/8 Đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắc xin tháng tháng tháng (%) (+) (%) (+) 100 100 100 100 100 100 50,00 92,85 16 100 16 100 16 100 16 16 16 16 16 100 100 100 100 100 56,25 79,46 16 100 16 100 16 100 16 16 16 14 11 (%) 100 100 100 87,50 68,75 18,75 67,86 16 100 16 100 12 75,00 16 1/16 1/32 1/64 1/128 Tính chung (%) 16 16 16 100 100 100 31,25 90,18 16 16 100 100 31,25 75,89 0 43,75 18,75 0 48,21 Kết tổng hợp bảng 3.21 cho thấy: - Sau tháng tiêm vắc xin tụ huyết trùng cho trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng, thấy hiệu giá kháng thể cao, từ 1/2 đến 1/128 Với vắc xin nhũ dầu 50% số mẫu đạt mức hiệu giá kháng thể 1/128, vắc xin keo phèn số mẫu có hiệu giá kháng thể mức thấp (31,25%) 100% mẫu ngưng kết hiệu giá kháng thể 1/2 đến 1/64 Tính chung tỷ lệ mẫu có kháng thể bình qn mức hiệu giá khác vắc xin nhũ dầu 92,85% vắc xin keo phèn 90,18% - Sau tiêm tháng, khơng mẫu huyết đạt hiệu giá 1/128 Số mẫu có hiệu giá kháng thể 1/64 giảm, với vắc xin keo phèn (31,25%), với vắc xin nhũ dầu (56,25%) Mức hiệu giá kháng thể 1/2 đến 1/32 đạt 100% loại vắc xin Tính chung tỷ lệ mẫu có kháng thể bình quân mức hiệu giá khác vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn giảm so với tháng sau tiêm phòng: Vắc xin nhũ dầu 79,46% vắc xin keo phèn 75,89% - Sau tháng, 68,75% số mẫu huyết trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu đạt hiệu giá 1/32 Trong hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin keo phèn giảm xuống rõ rệt, đa số hiệu giá 1/2 đến 1/8, hiệu giá 1/32 18,75% số mẫu, khơng có mẫu huyết đạt hiệu giá 1/64 Tính chung tỷ lệ mẫu có kháng thể bình qn mức hiệu giá khác vắc xin nhũ dầu sau tháng 67,86%, vắc xin keo phèn 48,21% * Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò sau tiêm vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu thời điểm tháng 12 tháng Đối với vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu, theo khuyến cáo nhà sản xuất thời gian bảo hộ sau tiêm phòng vắc xin 12 tháng Sau có kết kiểm tra hiệu giá kháng thể sau tháng tiêm vắc xin, tiếp tục lấy mẫu để kiểm tra hiệu giá kháng thể 16 trâu, bò thí nghiệm tiêm vắc xin nhũ dầu vào thời điểm tháng 12 tháng Kết thu trình bày bảng 3.22 Kết tổng hợp bảng 3.22 cho thấy: Tại thời điểm tháng sau tiêm, vắc xin cho đáp ứng miễn dịch có khả bảo hộ cho trâu, bò thực địa, giảm so với kết khảo sát thời điểm tháng Mức hiệu giá kháng thể 1/32 có 8/16 (50%) mẫu, thời điểm tháng (68,75%) Thời điểm 12 tháng sau tiêm vắc xin khơng mẫu huyết có hiệu giá kháng thể 1/32 * Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu thời điểm 12 tháng sau tiêm phòng 17 - Thời điểm sau tiêm vắc xin nhũ dầu tháng, hiệu giá kháng thể giảm rõ rệt so với sau tiêm tháng Chỉ 50% số mẫu huyết đạt hiệu giá 1/32, hiệu giá kháng thể 1/16 có 68,75% mẫu huyết ngưng kết Hiệu giá kháng thể bình qn mức hiệu giá khác 59,82% - Thời điểm 12 tháng sau tiêm, đa số mẫu huyết hiệu giá 1/2 đến 1/8, 18,75% số mẫu có hiệu giá 1/16 Khơng mẫu huyết có hiệu giá 1/32 Hiệu giá kháng thể bình quân mức hiệu giá khác 44,64% Như vậy, thời điểm 12 tháng sau tiêm vắc xin khơng mẫu huyết có hiệu giá kháng thể đủ để bảo hộ cho trâu, bò thực địa Bảng 3.23: Tổng hợp kết kiểm tra hiệu giá kháng thể vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu thời điểm 12 tháng sau tiêm phòng Loại vắc xin Nhũ dầu Số mẫu huyết khảo sát Hiệu giá kháng thể 16 Tính chung (%) 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 Đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắc xin tháng 12 tháng (+) (%) (+) (%) 16 16 16 11 0 100 100 100 68,75 50,00 0 16 16 15 0 100 100 93,75 18,75 0 59,82 44,64 3.3.3 Kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò tiêm phòng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng Tiến hành kiểm tra hiệu lực vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng Trên sở so sánh lựa chọn loại vắc xin có khả bảo hộ cao Tiến hành chọn mẫu huyết trâu, bò thí nghiệm tỉnh Hà Giang, Cao Bằng, đại diện cho loại vắc xin kiểm tra hiệu lực 1, 3, tháng sau tiêm Riêng với vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu thí nghiệm tiếp tục khảo sát thời điểm tháng 12 tháng sau tiêm Mẫu huyết chọn mẫu có hiệu giá kháng thể số miễn dịch mức cao nhất, trung bình thấp nhất, cụ thể là: Tỉnh Cao Bằng: Mẫu huyết tiêm vắc xin nhũ dầu là: 2; 3; Mẫu huyết tiêm vắc xin keo phèn là: 10; 13; 16 Tỉnh Hà Giang: Mẫu huyết tiêm vắc xin nhũ dầu là: 20; 21; 24 Mẫu huyết tiêm vắc xin keo phèn là: 25; 27; 31 Mỗi mẫu huyết thử thách cường độc chủng P52, HGXB5, CBPT7 (mỗi chủng thử thách chuột) với liều 10LD 50, chuột đối chứng không tiêm huyết 18 Kết kiểm tra hiệu lực vắc xin thời điểm 1, 3, 6, 12 tháng sau tiêm trình bày bảng 3.24; 3.25; 3.26; 3.27 *Hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu keo phèn trâu, bò sau tiêm 1, 3, tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng Kết tổng hợp bảng 3.24; 3.25; 3.26 cho thấy: sau tháng tiêm phòng, vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu cho khả bảo hộ cao so với vắc xin tụ huyết trùng keo phèn tiêm cho trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Kết tương ứng với kết kiểm tra hiệu giá kháng thể bảng 18, 3.19, 3.20, 3.21 Từ kết trên, đưa khuyến cáo nên dùng vắc xin nhũ dầu chủng P52 để tiêm phòng cho trâu, bò tỉnh Hà Giang, Cao Bằng So sánh tỷ lệ chuột bảo hộ sau thử thách cường độc chủng sản xuất vắc xin P52 hay chủng phân lập địa phương khơng có sai khác khả bảo hộ (P>0,05) * Hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu trâu, bò sau tiêm 12 tháng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng Kết tổng hợp bảng 3.27 cho thấy: thời điểm tháng 4/6 mẫu huyết trâu, bò bảo hộ, đến thời điểm 12 tháng sau tiêm phòng, mẫu huyết khơng hiệu lực bảo hộ chuột nhắt trắng Từ kết tỷ lệ bảo hộ chuột bảng 3.24; 3.25; 3.26; 3.27, tiến hành tổng hợp để xác định khả bảo hộ vắc xin nhũ dầu keo phèn trâu, bò tỉnh nghiên cứu Đánh giá tỷ lệ bảo hộ trung bình (X) mẫu huyết đánh giá bảo hộ chuột, mẫu huyết đánh giá theo tháng nghiên cứu theo loại vắc xin Phương pháp trình bày mục 2.3.12 * Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 Đã tiến hành tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu trâu, bò sau tiêm thời điểm 1, 3, 6, 12 tháng Kết thu trình bày bảng 3.28 bảng 3.29 Kết tổng hợp bảng 3.28 cho thấy: - Tại thời điểm tháng sau tiêm vắc xin tỷ lệ bảo hộ trung bình chuột thí nghiệm sau tiêm huyết trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu tỉnh Hà Giang Cao Bằng đạt mức bảo hộ cao Trong đó: Nhóm chuột thử thách cường độc chủng P52, tỷ lệ bảo hộ cao (91,67%), tiếp đến nhóm thử thách chủng phân lập Cao Bằng (CBPT7) Hà Giang (HGXB5) 87,50% - Tại thời điểm tháng sau tiêm vắc xin, tỷ lệ bảo hộ chuột thí nghiệm đạt mức cao sau thử thách chủng cường độc Nhóm chuột thử thách chủng P52, tỷ lệ bảo hộ (83,33%), tiếp đến nhóm thử thách chủng phân lập Cao Bằng (CBPT7) Hà Giang (HGXB5) 79,16% 19 - Tại thời điểm tháng sau tiêm, nhóm chuột thử thách chủng P52, tỷ lệ bảo hộ trì mức (62,50%), tiếp đến nhóm chuột thử thách chủng phân lập Cao Bằng (CBPT7), tỷ lệ bảo hộ 58,33%, nhóm chuột thử thách chủng phân lập Hà Giang (HGXB5), tỷ lệ bảo hộ 54,17% 20 Bảng 3.28: Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 trâu, bò sau tiêm thời điểm 1, tháng Tỷ lệ Chủng vi khuẩn thử thách cường độc % Chủng sản xuất vắc xin Chủng phân lập Hà Giang Chủng phân lập Cao Bằng chuột (P52) (HGXB5) (CBPT7) T1 T3 T6 T1 T3 T6 T1 T3 T6 nhó m Số Số Số Số Số Số Số Số Số mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % bảo u u u u u u u u u hộ 100 66,6 50,0 0 50,0 33,3 0 66,6 33,3 0 0 75 25,0 25,0 50,0 37,5 37,5 25,0 12,5 37,5 50,0 0 0 0 0 50 0 8,33 8,33 0 8,33 25,0 8,33 8,33 8,33 25 0 0 4,17 0 0 4,17 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Cộng 6 6 6 6 X 91,6 83,3 62,5 87,5 79,1 54,1 87,5 79,1 58,3 0 Đ/c 0/6 0/6 0/6 06 0/6 0/6 0/6 0/6 0/6 âm Ghi chú: %: Tỷ lệ chuột bảo hộ T1: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng T3: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng 21 T6: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng 22 Bảng 3.29: Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 trâu, bò sau tiêm thời điểm 12 tháng Tỷ lệ Chủng vi khuẩn thử thách cường độc % Chủng sản xuất Chủng phân lập Chủng phân lập chuột vắc xin Hà Giang Cao Bằng (P52) (HGXB5) (CBPT7) nhóm T9 T12 T9 T12 T9 T12 Số % Số % Số % Số % Số % Số % bảo mẫu mẫu mẫu mẫu mẫu hộ mẫu 100 0 0 0 0 0 0 75 37,50 0 25,00 0 37,50 0 50 8,33 0 16,67 0 8,33 0 25 8,33 16,67 8,33 16,67 4,17 20,83 0 0 1 Cộng 6 6 6 X 54,16 16,67 50,00 16,67 50,00 20,83 Đ/c 0/6 0/6 0/6 0/6 0/6 0/6 âm Ghi chú: %: Tỷ lệ chuột bảo hộ T9: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng T12: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng 12 tháng - Tại thời điểm tháng sau tiêm vắc xin: khả bảo hộ chuột thí nghiệm mẫu huyết trâu, bò giảm nhiều sau thử thách cường độc, nhóm chuột thử thách chủng P52 có 54,16% số chuột bảo hộ, nhóm lại bảo hộ 50% - Tại thời điểm 12 tháng sau tiêm vắc xin: tỷ lệ bảo hộ trung bình mẫu huyết chuột thí nghiệm nhóm giảm thấp Dao động từ 20,83% (nhóm chuột thử thách cường độc chủng CBPT7), xuống 16,67% nhóm chuột lại Từ kết cho thấy, thời điểm 12 tháng sau tiêm vắc xin nhũ dầu, trâu, bò khơng khả bảo hộ bệnh tụ huyết trùng tỉnh nghiên cứu - Chuột đối chứng không tiêm huyết thanh, 100% bị chết thử thách cường độc Như vậy, vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu kích thích đáp ứng miễn dịch tốt cho trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng, sau tháng tiêm vắc xin, tỷ lệ bảo hộ trung bình trâu, bò đạt 50% Điều chứng tỏ sau tháng trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu bảo hộ vi khuẩn P mutocida cường độc công * Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng keo phèn chủng P52 23 Bảng 3.30: Tổng hợp kết kiểm tra hiệu lực vắc xin tụ huyết trùng keo phèn chủng P52 trâu, bò sau tiêm thời điểm 1, tháng Tỷ lệ Chủng vi khuẩn thử thách cường độc % Chủng sản xuất vắc xin Chủng phân lập Hà Giang Chủng phân lập Cao Bằng chuột (P52) (HGXB5) (CBPT7) T1 T3 T6 T1 T3 T6 T1 T3 T6 nhó m Số Số Số Số Số Số Số Số Số % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫ % mẫu bảo u u u u u u u u hộ 100 83,3 33,3 0 50,0 16,6 0 50,0 16,6 0 3 7 75 0 25,0 25,0 37,5 37,5 25,0 25,0 50,0 12,2 0 0 0 50 8,33 16,6 8,33 0 16,6 8,33 8,33 8,33 16,6 7 25 0 0 12,5 0 0 8,33 0 0 8,33 0 0 0 0 0 0 0 0 Cộng 6 6 6 6 X 91,6 75,0 45,8 87,5 70,8 41,6 83,3 75,0 37,2 6 24 Đ/c 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 âm Ghi chú: %: Tỷ lệ chuột bảo hộ T1: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng T3: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng T6: Thời điểm lấy huyết sau tiêm phòng tháng 0/4 0/4 0/4 0/4 22 Kết tổng hợp bảng 3.30 cho thấy: - Các mẫu huyết trâu, bò lấy thời điểm tháng sau tiêm vắc xin keo phèn, có khả bảo hộ cao chuột thí nghiệm sau thử thách cường độc Cụ thể: Nhóm chuột thử thách chủng P52 bảo hộ cao (91,66%) Tiếp đến nhóm thử thách chủng HGXB5 (87,50%), sau nhóm thử thách chủng CBPT7 (83,33%) - Tại thời điểm sau tháng tiêm vắc xin, nhóm chuột thử thách chủng P52 nhóm chuột thử thách chủng CBPT7 đạt tỷ lệ bảo hộ (75%), nhóm chuột lại (HGXB5) bảo hộ 70,84% - Tại thời điểm tháng sau tiêm, tỷ lệ bảo hộ trung bình trâu, bò tiêm vắc xin giảm rõ rệt Nhóm chuột thử thách chủng P52, tỷ lệ bảo hộ đạt mức (45,83%), nhóm chuột thử thách chủng phân lập Cao Bằng (CBPT7), tỷ lệ bảo hộ 41,66%, nhóm chuột thử thách chủng phân lập Hà Giang (HGXB5), tỷ lệ bảo hộ 37,25% Theo tiêu chuẩn FAO, sau tháng tiêm phòng, vắc xin keo phèn chủng P52 hết hiệu lực bảo hộ cho trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng Kết phù hợp với kết kiểm tra hiệu giá kháng thể bảng 3.21, sau tháng tiêm vắc xin keo phèn hiệu giá kháng thể bình quân đạt 48,21% - Chuột đối chứng không tiêm huyết thanh, mẫu bảo hộ cơng cường độc chủng P.multocida dùng thí nghiệm Như vậy, qua kết kiểm tra khả tạo miễn dịch phòng vệ trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu keo phèn chủng P52, chúng tơi có nhận xét: Tại Hà Giang Cao Bằng vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 cho khả bảo hộ trâu, bò cao so với vắc xin keo phèn chủng P52 Tỷ lệ trâu, bò bảo hộ sau tiêm vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 thể rõ hình 3.14 Hình 3.14: Tỷ lệ trâu, bò bảo hộ sau tiêm vắc xin nhũ dầu vắc xin keo phèn chủng P52 Trên hình 3.14 cho thấy, thời điểm tháng sau tiêm vắc xin tỷ lệ bảo hộ trâu, bò tiêm vắc xin nhũ dầu keo phèn chủng P52 tương đương nhau, với vắc xin nhũ dầu 91,67% vắc xin keo phèn 91,66% Kết cho thấy, trâu, bò ni tỉnh Hà Giang Cao Bằng có đáp ứng miễn dịch tốt với loại vắc xin thời điểm tháng sau tiêm Sau tháng tiêm phòng, tỷ lệ trâu, bò bảo hộ tiêm vắc xin keo phèn giảm 8,33% so với 23 tỷ lệ trâu, bò bảo hộ tiêm vắc xin nhũ dầu thời điểm Tuy nhiên tỷ lệ bảo hộ trì mức cao 75% Ở thời điểm tháng sau tiêm, tỷ lệ trâu, bò bảo hộ tiêm vắc xin nhũ dầu đạt mức cao (62,50%), tỷ lệ trâu, bò bảo hộ tiêm vắc xin keo giảm đạt 45,83% (dưới mức bảo hộ 50% so với tiêu chuẩn bảo hộ vắc xin ) Trên sở kết nghiên cứu đạt được, đưa nhận xét sau: - Bằng phương pháp bảo hộ thụ động chuột nhắt trắng, so sánh khả tạo miễn dịch phòng vệ loại vắc xin nhũ dầu keo phèn chủng P52 dùng tiêm phòng hàng năm cho trâu, bò Hà Giang, Cao Bằng - Cả loại vắc xin dùng có khả tạo miễn dịch tốt cho trâu, bò Tuy nhiên, vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu cho đáp ứng miễn dịch bền vững - Căn vào ngưỡng bảo hộ tiêm vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò phải đạt hiệu lực bảo hộ 50% động vật thí nghiệm trở lên, vắc xin tụ huyết trùng keo phèn chủng P52 sau tiêm tháng khơng hiệu lực bảo hộ trâu, bò Trong đó, vắc xin tụ huyết trùng nhũ dầu chủng P52 thời điểm sau tiêm phòng tháng tỷ lệ bảo hộ đạt 50% Điều cho phép kết luận để đạt hiệu cao cơng tác phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Hà Giang Cao Bằng, nên sử dụng vắc xin nhũ dầu chủng P52 để tiêm phòng cho trâu, bò tỉnh - Sử dụng chủng phân lập địa phương để đánh giá khả bảo hộ vắc xin cho trâu, bò thực địa, bước đầu đánh giá vắc xin chế tạo từ chủng P52 có số liệu ban đầu khả bảo hộ vắc xin chủng phân lập địa phương, khơng có sai khác so với chủng sản xuất vắc xin Đây số liệu để đánh giá cho thí nghiệm khả báo hộ loại vắc xin chế tạo từ chủng IR, PP, làm sở khoa học cho việc lựa chọn vắc xin phù hợp vùng - Trong tình hình với địa điểm chăn ni tập trung tiêm phòng vắc xin keo phèn năm hai lần hợp lý, tránh rủi ro phản ứng sau tiêm Còn vùng sâu, vùng xa việc tiêm phòng đạt hiệu cao khó, quan thú y địa phương tỉnh nghiên cứu cần cân nhắc tiêm phòng vắc xin nhũ dầu để đảm bảo tỷ lệ miễn dịch tồn đàn ln bảo hộ mức cao, giúp cho cơng tác kiểm sốt khống chế dịch tụ huyết trùng vùng chăn nuôi tập trung vùng chăn nuôi không tập trung KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh tử vong tương ứng là: 0,13% 6,56% tỉnh Hà Giang; 0,38% 32,63% tỉnh Cao Bằng - Trâu loài mẫn cảm với bệnh tụ huyết trùng bò (P