Nội dung bài viết trình bày mười lăm chủng thể hiện hoạt tính kháng khuẩn ở các mức độ khác nhau, các chủng còn lại không thể hiện khả năng kháng. Chủng có khả năng kháng khuẩn cao nhất là HĐM3.2, kháng 4/5 vi khuẩn chỉ thị đã sử dụng, gồm B. cerius, S. aureus, S. typhi và E. coli với kích thước vùng kháng đạt 9,5, 10,5, 16,5 và 14,5 mm. Chủng HĐM3.2 được xác định là chủng Streptomyces sp. dựa trên cây phát sinh loài đã xây dựng của trình tự gene 16S rRNA. Điều kiện nuôi cấy để chủng HĐM3.2 thể hiện hoạt tính kháng khuẩn cao nhất đã được khảo sát dựa trên phương pháp khuếch tán qua giếng thạch. Mời các bạn tham khảo!
TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP ISSN 2588-1256 Tập 5(1)-2021:2227-2236 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐỂ NÂNG CAO KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC CHỦNG Streptomyces sp Lê Thị Thu Hiền, Trần Thị Lệ Ngân, Trần Thị Kim Oanh, Trần Văn Trung, Nguyễn Thị Thúc, Nguyễn Thị Thủy Tiên* Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế *Tác giả liên hệ: nguyenthithuytien84@huaf.edu.vn Nhận bài: 21/08/2020 Hoàn thành phản biện: 23/09/2020 Chấp nhận bài: 03/10/2020 TÓM TẮT Streptomyces vi sinh vật có khả sinh tổng hợp chất kháng sinh Nghiên cứu nhằm sàng lọc chọn chủng có khả kháng khuẩn cao từ 59 chủng Streptomyces có nguồn gốc từ đất cung cấp dựa phương pháp cấy vạch vng góc vi khuẩn gây bệnh thị, bao gồm Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Mười lăm chủng thể hoạt tính kháng khuẩn mức độ khác nhau, chủng cịn lại khơng thể khả kháng Chủng có khả kháng khuẩn cao HĐM3.2, kháng 4/5 vi khuẩn thị sử dụng, gồm B cerius, S aureus, S typhi E coli với kích thước vùng kháng đạt 9,5, 10,5, 16,5 14,5 mm Chủng HĐM3.2 xác định chủng Streptomyces sp dựa phát sinh loài xây dựng trình tự gene 16S rRNA Điều kiện ni cấy để chủng HĐM3.2 thể hoạt tính kháng khuẩn cao khảo sát dựa phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Mơi trường International Streptomyces Project có pH 8, nhiệt độ nuôi cấy 28oC điều kiện thích hợp để chủng Streptomyces sp HĐM3.2 tạo vùng ức chế loại vi khuẩn B cereus, E coli, S typhi, S aureus cao Từ khóa: Điều kiện nuôi cấy, Kháng khuẩn, Streptomyces INVESTIGATION OF CULTURE CONDITIONS TO ENHANCE ANTIBACTERIAL ABILITY OF Streptomyces sp Le Thi Thu Hien, Tran Thi Le Ngan, Tran Thi Kim Oanh, Tran Van Trung, Nguyen Thi Thuc, Nguyen Thi Thuy Tien* University of Agriculture and Forestry, Hue University ABSTRACT Streptomyces is the microorganism that has capable of producing antibiotics The current study aimed to screen and to select a strain that had the highest antibacterial activity from 59 available soilderived Streptomyces strains based on the perpendicular culture method on indicator pathogenic bacteria, including Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Fourteen strains exhibited their antibacterial activity at various levels, the remaining did not have that activity The strain that had the highest antibacterial ability was HĐM3.2 against 4/5 indicator microorganisms, including B cerius, S aureus, S typhi and E coli with inhibitory areas were 9.5, 10.5, 16.5, and 14.5 mm respectively Strain HĐM3.2 was identified as strain Streptomyces sp based on a phylogenetic tree built on the 16S rRNA gene sequences Suitable conditions that made the strain HĐM3.2 showed the highest antibacterial activity were investigated based on agar well diffusion assay The medium of International Streptomyces Project with pH 8, the ambient temperature at 28oC were suitable conditions for Streptomyces sp HĐM3.2 produced the highest inhibitory areas against B cereus, E coli, S typhi, S aureus Keywords: Antibacterial, Culture conditions, Streptomyces http://tapchi.huaf.edu.vn 2227 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY MỞ ĐẦU Việc tìm loại kháng sinh có hiệu kháng lại vi sinh vật gây bệnh từ môi trường sống chưa khám phá khắp giới tiếp tục lĩnh vực nghiên cứu quan trọng Khoảng 17.000 loại kháng sinh từ nguồn vi sinh vật khác phân lập kết q trình sàng lọc rộng rãi, kháng sinh có nguồn gốc từ Streptomyces chiếm khoảng 70% Trong hai thập kỷ qua, có suy giảm việc phát hợp chất từ xạ khuẩn có nguồn gốc từ đất Do đó, việc khám phá hệ sinh thái để phân lập xạ khuẩn, tìm loại kháng sinh có hiệu cao khắc phục vấn đề kháng kháng sinh vấn đề có tính cấp thiết cao (Dezfully cs., 2015) Streptomyces chi thuộc họ Streptomycetaceae chi lớn ngành Actinobacteria Có 500 lồi Streptomyces mơ tả Giống hầu hết Actinobacteria khác, Streptomyces vi khuẩn Gram dương, có gen với tỉ lệ GC% cao Vi khuẩn tìm thấy chủ yếu đất thảm thực vật mục nát, vi sinh vật phân hủy quan trọng (Bùi Thị Hà, 2008) Đặc điểm quan trọng Streptomyces khả sản sinh hợp chất thứ cấp chất kháng nấm, kháng virus, chủ yếu kháng vi khuẩn dùng làm thuốc ức chế miễn dịch (Rudi cs., 2012) Streptomyces có tiềm lớn để sản xuất, ứng dụng dẫn xuất chúng nhiều lĩnh vực sản xuất chất kháng sinh dùng y học, nông nghiệp bảo quản thực phẩm Tuy nhiên, tùy theo đặc điểm địa lý, thời tiết mà đa dạng chủng Streptomyces nơi khác khơng giống Do đó, việc nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện ni cấy để chủng Streptomyces sinh tổng hợp 2228 ISSN 2588-1256 Vol 5(1)-2021: 2227-2236 chất kháng khuẩn cao điều cần thiết có tính khoa học cao Mục đích nghiên cứu nhằm đánh giá sàng lọc khả kháng khuẩn chủng Streptomyces phân lập từ đất số địa phương Thừa Thiên Huế Quảng Nam Từ đó, khảo sát mơi trường thích hợp để chủng chọn sinh thể khả kháng khuẩn cao NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 59 chủng Streptomyces cung cấp từ phịng thí nghiệm Vi sinh Khoa Cơ khí Công nghệ, trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế Các chủng phân lập từ mẫu đất có đặc điểm khác thuộc tỉnh Thừa Thiên Huế tỉnh Quảng Nam 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Sàng lọc sơ tuyển chọn chủng có khả kháng khuẩn cao Các chủng Streptomyces hoạt hóa sàng lọc sơ khả kháng khuẩn cách sử dụng kỹ thuật cấy vạch vuông góc Streptomyces cấy vệt tâm đĩa Petri (rộng khoảng 1,5 cm) có chứa mơi trường Mueller Hinton Media (MHA) Các đĩa ủ 28 - 30oC ngày Để xác định hoạt tính kháng khuẩn, vi khuẩn thị gồm vi khuẩn Gram âm Gram dương (Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella typhi, Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa), cung cấp Khoa Vi sinh, bệnh viện Trung ương Huế Các vi khuẩn thị cấy vạch vng góc với vạch khuẩn lạc Streptomyces phát triển đĩa, từ phía mép đĩa đến vạch xạ khuẩn Ủ đĩa 37oC, quan sát xác định khả kháng khuẩn chủng Streptomyces sau 24 Nguyễn Thị Thủy Tiên cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP dựa vùng ức chế tính từ khuẩn lạc xạ khuẩn đến vị trí vi sinh vật định phát triển Tuyển chọn chủng có khả kháng nhiều loại vi sinh vật gây bệnh với khả kháng cao để định danh khảo sát điều kiện ni cấy thích hợp nhằm nâng cao khả kháng khuẩn chúng (Dezfully cs., 2015) 2.2.2 Khuếch đại gen 16S rRNA kỹ thuật PCR khuẩn lạc Khuếch đại gen 16S rRNA chủng Streptomyces chọn phương pháp Polymerase Chain Reaction (PCR) khuẩn lạc Từ khuẩn lạc Streptomyces nuôi đĩa Petri, dùng đầu tip tiệt trùng lấy khuẩn lạc cho vào ống PCR 0,2 ml có chứa μl nước cất tiệt trùng Cặp mồi (primers) đặc hiệu cho Streptomyces StrepB/StrepF có trình tự mồi xuôi (forward primer) StrepB 5’ACAAGCCCTGGAAACGGGGT-3’ mồi ngược (reverse primer) StrepF 5’ACGTGTGCAGCCCAAGACA-3’ sử dụng để khuếch đại gen 16S rRNA chủng Streptomyces chọn (Rintala cs., 2001) Bổ sung thành phần phản ứng PCR bao gồm: μl đệm phusion, 0,4 μl dNTPs (deoxynucleoside triphosphates) (10 mM), μl mồi xuôi mồi ngược (10 pmol/μl), 0,6 μl DMSO (dimethyl sulfoxide) 0,2 μl phusion DNA polymerase vào ống PCR chuẩn bị trên, thêm nước cho đủ 20 μl Tất thành phần phản ứng cung cấp công ty Thermo Scientific Chương trình PCR thực sau: biến tính bước đầu 95oC 10 phút, 30 chu kỳ nhiệt độ biến tính 98oC 20 giây, gắn mồi 58oC 30 giây, kéo dài mồi 72oC phút bước kéo dài cuối 72oC 10 phút Sản phẩm PCR kiểm tra kích thước http://tapchi.huaf.edu.vn ISSN 2588-1256 Tập 5(1)-2021:2227-2236 phương pháp điện di gel agarose (1%) quan sát xuất DNA tạo thành đèn UV (Rintala cs., 2001) Sản phẩm phản ứng PCR tinh ExoSAP-IT gửi giải trình tự Cơng ty TNHH MTV Sinh Hóa Phù Sa, Cần Thơ 2.2.3 Xây dựng phát sinh loài định danh loài Kết giải trình tự chủng chọn so sánh với ngân hàng gene GenBank (hhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/) (Altschu cs., 1990) sở liệu gene EzTaxon (https://www.ezbiocloud.net) (Yoon cs., 2017) Dựa mức độ tương đồng chủng chọn với chủng có sẵn ngân hàng gene, xây dựng phát sinh loài để định danh chủng Cây phát sinh loài tạo dựa phần mềm MEGA (Molecular Evolutionary Genetics Analysis) (Kumar cs., 2000), sử dụng phương pháp neighbor-joining (Saitou Nei, 1987) với giá trị bootstrap 1,000 lần (Felsenstein, 1985), xóa khoảng cách cặp (pairwise gap deletion) (Nei Kumar, 2000) 2.2.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn chủng định danh Các yếu tố ảnh hưởng đến khả kháng khuẩn chủng chọn khảo sát thay đổi yếu tố, yếu tố lại cố định, bao gồm thành phần, nhiệt độ pH mơi trường ni cấy Theo đó, mơi trường nuôi cấy để khảo sát khả kháng khuẩn bao gồm: International Streptomyces Project (ISP) 2, Casein Starch (CS), ISP 3, Gause I Yeast Starch (YS), nhiệt độ khảo sát giữ mức 28oC, 35oC 40oC pH môi trường nuôi cấy điều chỉnh mức 4; 5; 6; 7; Sử dụng dịch sau nuôi cấy không chứa tế bào để đánh giá ảnh hưởng điều kiện đến khả kháng khuẩn Scoli S aureus với đường kính 11,0 mm 9,0 mm Cũng có chủng thể đặc tính kháng với - loại vi sinh vật thị NY.R5, HĐM03 HC1.1.1 Tuy nhiên, chúng có kích thước vùng kháng nhỏ so với HĐM3.2 Qua kết sàng lọc sơ này, thấy khả kháng vi sinh vật đa dạng loài xạ khuẩn Nguyễn Thị Thủy Tiên cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP ISSN 2588-1256 Tập 5(1)-2021:2227-2236 Bảng Kết đánh giá khả kháng khuẩn chủng Streptomyces VKKĐ VKKĐ Xạ khuẩn 5 NA.Đ2 - PĐ1.14 3,0 NA.Y4 - PĐ1.18 NA.R31 - PĐ1.19 8,0 NY.R2 - HT1.3 4,5 NY.R3 - HC1.1.1 8,5 10,5 10,0 12,0 NY.R4 - H.ĐM1.1 NY.R5 6,0 2,0 - 4,0 4,0 H.ĐM1.2 NY.Đ1 - HT.Đ3.2 NY.Đ3 11,0 - HT.Đ03 N2.L21 - H.NT6.4 N2.Đ7 - H.NT6.6 N2.R3 - H.NT2.1 N2.V2 - H.NT6.5 N4.V7 - H.ĐM01 N4.L2 - H.NT01 N4.L81 4,0 - H.NT1.6 6,5 9,0 12,0 N4.L1 - H.NT1.1 - 15,5 N4.L7 - H.N1.1.1 N4.Đ4 - H.N1.1.2 N4.R3.1 - H.N1.2 N4.R4.1 - H.N2.1.1 N4.R11 - H.N2.1.2 N2.L3 - H.C1.3.1 H.ĐM3.2 9,5 16,5 - 14,5 10,5 H.C2.1 H.ĐM03 2,5 3,5 - 5,5 3,5 H.C1.1.2 H.ĐM04 - H1.2 6,0 HT1.11 - H1.14 HT1.29 - 11,0 9,0 HT1.2 HT1.14 - HT1.25 6,5 10,5 PĐ3.9 - 11,0 Vi khuẩn thị: (1) B cerius; (2) S typhi; (3) P aeruginosa; (4) E coli; (5) S aureus; "- " khơng kháng; Đơn vị đo: mm Xạ khuẩn Hoạt tính kháng khuẩn chủng Streptomyces có nhờ vào hình thành chất kháng sinh ức chế phát triển vi khuẩn Quá trình sinh tổng hợp chất kháng khuẩn từ xạ khuẩn đặc biệt xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces mô tả gồm giai đoạn: Sinh trưởng (trophophase) - Khuẩn ty sơ cấp phát triển nhanh, Pha sinh tổng hợp (idiophase) - Sinh trưởng chậm xuất tự tan khuẩn ty sinh tổng hợp chất kháng sinh mạnh Streptomyces có khả kháng khuẩn trình sinh trưởng, chúng tạo hợp chất mà hợp chất có thành phần có khả tác động lên vách tế bào làm tổn thương màng http://tapchi.huaf.edu.vn nguyên sinh chất, kìm hãm tổng hợp protein, ức chế tổng hợp axit nucleic hay ức chế chuyển hóa axit folic (Trần Thị Thanh, 2011) Chủng H.ĐM3.2 có phổ hoạt động rộng, thể tính kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm tạo vùng kháng có kích thước lớn 59 chủng khảo sát Do đó, chủng H.ĐM3.2 chọn để định danh khảo sát ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp chất kháng sinh chủng vi khuẩn thị sử dụng tiếp để khảo sát điều kiện nuôi cấy nhằm nâng cao khả kháng khuẩn HĐM3.2 B cerius, S aureus, S typhi E coli 2231 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY 3.3 Kết xây dựng phát sinh loài định danh loài chủng HĐM3.2 Kết phân tích hình ảnh sản phẩm PCR chủng HĐM3.2 cho thấy kích thước phân tử gene 16S rRNA chủng khoảng 1000 bp (Hình 1) Hình Hình ảnh điện di sản phẩm PCR chủng HĐM3.2 Vol 5(1)-2021: 2227-2236 Sau giải trình tự, kích thước đoạn gene 1026 bp Từ đó, tạo phát sinh loài để đánh giá mối quan hệ chủng HĐM3.2 với chủng Streptomyces cơng bố ngân hàng gene (Hình 2) Hình Cây phát sinh lồi dựa trình tự gene 16S rRNA chủng HĐM3.2 chủng tham chiếu khác truy xuất từ sở liệu EzTaxon Giá trị bootstrap thể gốc nhánh Thanh tỷ lệ: 0.0010 thay cho vị trí nucleotide; Số cuối thể mức độ tương đồng chủng HĐM3.2 với chủng tham chiếu (%) Kết so sánh chủng HĐM3.2 với chủng Streptomyces khác cho thấy chủng có mức độ tương đồng 99,61% với ba chủng S enissocaesilis NRRLB-16365, S plicatus NBRC 13071 S rochei NRRLB2410, tương đồng 99,41% với chủng S vinaceusdrappus NRRL2363 Như vậy, kết luận chủng HĐM3.2 có tên lồi với lồi xác định tên tham chiếu, đặt tên cho chủng HĐM3.2 Streptomyces sp HĐM3.2 3.4 Kết khảo sát điều kiện nuôi cấy để nâng cao khả kháng khuẩn chủng Streptomyces sp HĐM3.2 3.4.1 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy Hoạt tính kháng khuẩn chủng HĐM3.2 sau nuôi cấy môi trường 2232 ISSN 2588-1256 lựa chọn thể Bảng Hình Số liệu phân tích cho thấy chủng HĐM3.2 có khả kháng tốt ni cấy mơi trường ISP 2, đường kính kháng khuẩn E coli, B cerius S aureus 8,200, 7,600 10,066 mm cho đường kính lớn với S typhi 10,766 mm Dịch thu chủng nuôi cấy mơi trường cịn lại, khơng tạo vòng kháng khuẩn vòng kháng khuẩn bé Trên mơi trường YS, dịch có khả kháng S aureus, với đường kính vịng kháng 0,416 mm Cịn mơi trường ISP 3, dịch ni cấy kháng B cerius S aureus với đường kính kháng khuẩn đạt 0,566 mm 0,050 mm Nguyễn Thị Thủy Tiên cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP ISSN 2588-1256 Tập 5(1)-2021:2227-2236 Bảng Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả kháng khuẩn chủng HĐM3.2 Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Môi trường nuôi cấy E coli B cereus S typhi S aureus Gause I 1,900b 1,966b 1,166a 3,766b c a a CS 3,483 0,000 0,000 3,283b d c b ISP 8,200 7,600 10,766 10,066c a a a YS 0,000 0,000 0,000 0,416a a ab a ISP 0,000 0,566 0,000 0,050a a, b, c, d : Các chữ khác cột thể sai khác có ý nghĩa (p < 0,050) Hình Ảnh hưởng mơi trường lên hoạt tính kháng khuẩn chủng HĐM3.2 Các đĩa có chứa loại vi khuẩn thị tính từ trái qua phải: E.coli; S typhi; B cereus; S aureus; Các giếng có chứa dịch môi trường nuôi cấy khảo sát: I Gause I; II Casein-Starch; III ISP-2; IV YS; V ISP-3; Vị trí mẫu nước đối chứng Kết hoàn toàn phù hợp với kết xác định hoạt tính kháng khuẩn chủng xạ khuẩn HLD3.16 Chủng cho hoạt tính kháng khuẩn tốt môi trường ISP (Nguyễn Văn Hiếu cs., 2012) Tuy nhiên, số nghiên cứu khác lại cho thấy khả kháng khuẩn Streptomyces tốt nhiều môi trường khác nhau, tùy thuộc vào chủng khảo sát Điển Bùi Thị Hà cs (2008) nghiên cứu trình lên men tổng hợp kháng sinh ba chủng xạ khuẩn DT7.1, HT28, K4 chè Thái Nguyên cho thấy khả sinh trưởng tốt môi trường A4H Theo nghiên cứu Phan Thị Hồng Thảo cs (2016) với xạ khuẩn HNR3X4 bưởi cho thấy chủng phát triển mạnh 37oC môi trường Gause I (Phan Thị Hồng Thảo, 2016) Còn theo Nguyễn Thị Vân (2014) nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng S toxytricini (VN08-A12) kháng bệnh bạc Xanthomonas oryzae gây lại cho khả kháng tốt môi trường SKS Chủng Streptomyces sp SCA thể hoạt tính kháng khuẩn cao mơi trường Modified Nutrient Glucose Agar (Saravana cs., 2014) http://tapchi.huaf.edu.vn Như vậy, tùy theo chủng xạ khuẩn khác nhau, lấy từ vùng có vị trí khí hậu khác nhau, môi trường nuôi cấy khác cho khả kháng khuẩn khác Chủng HĐM3.2 thể tính kháng khuẩn cao sinh trưởng môi trường ISP 2, đó, mơi trường chọn để khảo sát cho nghiên cứu 3.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ Nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến khả sản sinh hợp chất kháng khuẩn Streptomyces từ dịch nuôi cấy Ở nhiệt độ khác nhau, Streptomyces sp HĐM3.2 cho đường kính vòng kháng khuẩn khác loại vi sinh vật thị, chúng thể qua Bảng Hình Kết từ Bảng cho thấy khả sinh chất kháng khuẩn chủng HĐM3.2 cao nuôi khoảng 28-35oC Cả loại vi sinh vật thị bị ức chế nhiều 28oC, B cereus có đường kính vịng kháng lớn 12,466 mm Tuy nhiên, số liệu cho thấy 35oC chủng cho đường kính vịng kháng tương đương với đường kính kháng khuẩn khảo sát 28oC mặt ý nghĩa thống kê Còn E coli 2233 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY 28oC, đường kính vịng kháng 13,733 mm Tại 40oC, đường kính vịng kháng nhỏ S typhi 1,966 mm ISSN 2588-1256 Vol 5(1)-2021: 2227-2236 cho thấy chủng HĐM3.2 thể hoạt tính kháng nhiệt độ Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ môi trường nuôi cấy đến khả kháng khuẩn Streptomyces sp HĐM3.2 Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Nhiệt độ E coli B cereus S typhi S aureus 28oC 13,733a 12,400a 12,466a 13,233a o b a a 35 C 7,833 11,633 10,766 9,716b o c b b 40 C 0,000 0,000 1,966 0,936c a, b, c: Các chữ khác cột thể sai khác có ý nghĩa (p < 0,050) Hình Ảnh hưởng nhiệt độ mơi trường lên hoạt tính kháng khuẩn chủng HĐM3.2 Các đĩa có chứa loại vi khuẩn thị tính từ trái qua phải: E.coli; S typhi; B cereus; S aureus; Vị trí mẫu nước đối chứng Chủng Streptomyces sp HĐM3.2 sinh trưởng tốt 28 - 35oC, thuộc nhóm ưa ấm Kết cho thấy chủng HĐM3.2 có đặc điểm sinh trưởng giống chủng ACTK2, chủng tổng hợp chất kháng khuẩn tốt 28oC (Defully cs., 2015) Còn theo nghiên cứu Phan Thị Hồng Thảo cs (2016) xạ khuẩn HNR3X4 bưởi, chủng sản sinh hoạt tính kháng khuẩn tốt 37oC môi trường Gause I Phạm Thu Trang cs (2014) công bố xạ khuẩn VD111 sinh trưởng tốt môi trường AH4 37oC pH từ - Đa số loài xạ khuẩn chi Streptomyces phát triển tốt nhiệt độ 28 - 30oC (Nguyễn Lân Dũng cs., 2010) Nhiệt độ ảnh hưởng tới tốc độ sinh trưởng, kiểu sinh sản, hình thái, trình trao đổi chất nhu cầu dinh dưỡng xạ khuẩn Ở nhiệt độ thấp xạ khuẩn không sinh trưởng được, nhiệt độ cao xạ khuẩn bị biến tính protein, ARN bị chết Chủng Streptomyces sp HĐM3.2 thể khả kháng cao 28oC, đó, nhiệt độ dùng để khảo sát ảnh hưởng pH môi 2234 trường nuôi cấy đến khả kháng vi khuẩn thị 3.4.3 Ảnh hưởng pH Kết nghiên cứu Bảng cho thấy pH ảnh hưởng lớn đến hoạt tính kháng khuẩn chủng HĐM3.2 Chủng sản sinh hoạt chất kháng khuẩn tốt môi trường ISP pH vi sinh vật thị S typhi pH với S aureus Đường kính vịng kháng khuẩn giá trị pH (4, 5, 6, 7, 9) có sai khác mặt ý nghĩa thống kê, hoạt độ chúng khơng có khác pH 7, và pH (p