Luận văn tốt nghiệp khảo sát khả năng tinh sạch sơ bộ pectin methylesterase từ aspergillus niger bằng phương pháp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG NGUYỄN NGỌC HUỲNH TRÂN MSSV: 2060376 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TINH SẠCH SƠ BỘ PECTIN METHYLESTERASE TỪ ASPERGILLUS NIGER BẰNG PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã ngành: 08 Người hướng dẫn Ths TRẦN THANH TRÚC NĂM 2010 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan toàn nội dung số liệu trình bày luận văn cơng trình nghiên cứu theo hướng dẫn giáo viên Người viết Nguyễn Ngọc Huỳnh Trân Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang i Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CẢM TẠ Luận văn tốt nghiệp điều kiện tiên giúp sinh viên tốt nghiệp trường Trong khoảng thời gian này, sinh viên cần nỗ lực hết mình, vận dụng kiến thức học để hồn thành tốt đề tài giao hội cho sinh viên rèn luyện kỹ cần thiết chuẩn bị cho công việc tương lai Trong thời gian thực luận văn, có lẽ sinh viên gặp khơng khó khăn bước đầu không tránh khỏi Đến ngày hôm tơi hồn thành đạt kết mong muốn, nhờ giúp đỡ thầy cơ, bạn bè gia đình Trước hết, xin gửi đến ba mẹ người thân gia đình lịng biết ơn chân thành sâu sắc Cảm ơn ba mẹ sinh nuôi dạy nên người ngày hôm Em xin chân thành cảm ơn cô Trần Thanh Trúc, người giáo viên hướng dẫn tận tình dẫn, động viên tạo điều kiện giúp em hồn thành tốt luận văn Bên cạnh đó, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn Văn Mười giúp đỡ em nhiều trình thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Bộ môn Công Nghệ Thực Phẩm truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện sở vật chất giúp chúng em hồn thành q trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lớp Công Nghệ Thực Phẩm khóa 32 tơi chia sẻ, trao đổi kiến thức thời gian thực luận văn tốt nghiệp cảm ơn bạn quan tâm giúp đỡ, động viên suốt năm tháng học tập, hoạt động mái trường Đại học Cần Thơ Cuối cùng, xin kính chúc q thầy bạn nhiều sức khỏe, gặt hái nhiều thành công nghiệp sống Chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 20 tháng năm 2010 Sinh viên Nguyễn Ngọc Huỳnh Trân Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang ii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Đề tài tiến hành xác định phương pháp kết tủa protein phù hợp cho trình tinh sơ enzyme pectin methylesterase từ Aspergillus niger Ba loại hóa chất sử dụng acetone, ethanol muối ammonium sulfate (NH4)2SO4 Trong trường hợp sử dụng dung môi hữu cơ, tỉ lệ enzyme dung mơi (ethanol, acetone) tối ưu cho q trình tinh khảo sát Quá trình kết tủa phân đoạn enzyme dung dịch muối (NH4)2SO4 40C tiến hành mức độ bão hòa khác – 15% (F0-15), 15 – 25% (F15-25), 25 – 35% (F25-35), 35 – 45% (F35-45), 45 – 55% (F45-55), 55 – 65% (F55-65), 65 – 75% (F65-75), 75 - 85% (F75-85) Hiệu tinh đánh giá dựa hoạt tính riêng PME (U/mg protein) thu sau trình tinh hiệu suất thu hồi enzyme Đồng thời, trước tiến hành thí nghiệm kết tủa PME ba loại hóa chất, thí nghiệm xác định điều kiện bảo quản enzyme PME thô tiến hành khảo sát nhiệt độ lạnh (4°C) lạnh đông (-18°C) Kết khảo sát cho thấy, bảo quản enzyme PME thô tốt điều kiện nhiệt độ lạnh đông Đồng thời, ba phương pháp kết tủa enzyme, phương pháp tủa phân đoạn muối (NH4)2SO4 bão hịa tỏ khơng hiệu việc tinh PME từ Aspergillus niger, thể hiệu suất thu hồi thấp (1,15%) hoạt tính thu đạt giá trị 4,85U/mg protein PME bị phá hủy điều kiện kết tủa với dung môi actetone tỉ lệ enzyme : dung môi lớn 1:2 Hoạt tính riêng hiệu suất thu hồi enzyme PME đạt giá trị cao tinh ethanol với tỉ lệ enzyme : dung môi 1:3 Hoạt tính PME tương ứng 9,92U/mg protein hiệu suất thu hồi tương ứng đạt 26,79% Từ khóa: pectin methylesterase, hoạt tính, acetone, ethanol, (NH4)2SO4 Ngành Cơng nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang iii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM TẠ ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH HÌNH .vi DANH SÁCH BẢNG .vii CHƯƠNG TỔNG QUAN .1 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG 2.1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Hệ enzyme pectinase 2.1.1 Giới thiệu chung 2.1.2 Polygalacturonase (PG) .3 2.1.3 Lyase 2.1.4 Pectin methyl- acetyl-esterases 2.2 Pectin methylesterase 2.2.1 Giới thiệu chung 2.2.2 Đặc điểm PME 2.2.3 Kiểu phản ứng 2.3 Nguồn gốc thu nhận PME 2.3.1 PME từ thực vật 2.3.2 PME từ vi sinh vật .7 2.4 Cơ sở việc thu nhận PME từ Aspergillus niger 2.5 Một số ứng dụng PME 10 2.5.1 Làm nước .10 2.5.2 Trích ly dịch 10 2.5.3 Cải thiện cấu trúc .11 2.6 Tinh sơ PME từ Aspergillus niger phương pháp kết tủa 13 2.6.1 Thu nhận enzyme thô .13 2.6.2 Một số phương pháp kết tủa enzyme .13 2.7 Các nghiên cứu ngồi nước có liên quan 17 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang iv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 CHƯƠNG 3.1 Trường Đại học Cần Thơ PHƯƠNG TIỆN – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 Phương tiện nghiên cứu 20 3.1.1 Thời gian, địa điểm nghiên cứu .20 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị .20 3.1.3 Hóa chất 20 3.1.4 Đối tượng nghiên cứu 21 3.2 Phương pháp nghiên cứu 21 3.2.1 Phương pháp chuẩn bị mẫu 21 3.2.2 Phương pháp phân tích đo đạc kết .21 3.2.3 Phương pháp thu thập xử lý kết 21 3.2.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN 27 4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo quản đến độ ổn định enzyme PME thô .27 4.2 Hiệu trình tinh ammonium sulfate đến tính chất PME .29 4.3 Hiệu trình tinh dung mơi hữu đến tính chất PME 30 4.4 So sánh hiệu tinh enzyme PME thô theo ba phương pháp kết tủa protein khác 32 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 KẾT LUẬN 34 5.2 ĐỀ NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC : CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH viii PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ THỐNG KÊ xii Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang v Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Phản ứng thủy phân liên kết methyl ester pectin với xúc tác PME Hình 2: Nấm mốc Aspergillus niger Hình 3: Tác dụng PME trình làm nước 10 Hình 4: Pectate calcium 12 Hình 5: Thẩm tích để loại muối (NH4)2SO4 kết tủa protein 15 Hình 6: Sơ đồ thí nghiệm kết tủa enzyme PME phân đoạn (NH4)2SO4 bão hịa 24 Hình 7: Đồ thị biểu diễn kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ bảo quản lạnh đơng đến hoạt tính enzyme PME thơ .28 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang vi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Đặc tính sinh hóa số PME tinh khiết từ thực vật Bảng 2: Hiệu xử lý nước táo nước vải chế phẩm enzyme pectinase 11 Bảng 3: Phương pháp phân tích đo đạc tiêu 22 Bảng 4: Sự thay đổi hoạt tính enzyme PME thô theo thời gian bảo quản 27 Bảng 5: Hiệu tinh sơ PME kết tủa phân đoạn dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa 29 Bảng 6: Đánh giá hiệu tinh enzyme PME dung môi hữu 31 Bảng 7: Kết so sánh phương pháp kết tủa khác 32 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang vii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 CHƯƠNG 1.1 Trường Đại học Cần Thơ TỔNG QUAN Tính cấp thiết đề tài Cùng với phát triển mạnh mẽ công nghệ sinh học vài thập kỷ trở lại đây, chế phẩm enzyme sản xuất ngày nhiều sử dụng hầu hết lĩnh vực kinh tế Trong lĩnh vực chế biến thực phẩm, điều khiển hoạt động PME đóng vai trò quan trọng, cụ thể sản xuất nước citrus đục (Nath and Ranganna, 1977), giúp tăng độ nhớt sản xuất nước puree cà (Nath et al., 1983), góp phần cải thiện cấu trúc độ cứng trình chế biến số loại rau (Pilnik and Voragen, 1991; Stanley et al., 1995) Hoạt động enzyme PME thực phẩm thúc đẩy cách kích hoạt nội enzyme hay bổ sung thêm chế phẩm enzyme (Duvetter, 2007; Tran et al., 2008) Tuy nhiên, số loại rau PME nội bào thấp đồng thời việc kích hoạt PME phương pháp xử lý nhiệt làm ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm, việc nghiên cứu bổ sung chế phẩm enzyme PME biện pháp khả thi Hiện vi sinh vật nguồn cung cấp enzyme chủ yếu ưu điểm tốc độ sinh sản nhanh, nguồn vật liệu rẻ tiền, dễ thu hồi, lúc thu nhiều loại enzyme Nguồn nấm mốc vi khuẩn sản xuất enzyme PME đa dạng, nhiên việc ly trích enzyme PME từ Aspergillus niger ưu tiên chọn lựa (Schmitz, WO 03/000876) Aspergillus niger sử dụng phổ biến công nghiệp thực phẩm nhiều thập kỷ qua khơng có tác động xấu đến sức khỏe người (Dijck et al., 2003) Việc ly trích ứng dụng PME vào trình chế biến thực phẩm phát triển rộng rãi nhiều quốc gia (Saurel, 2004; Suutarinenn and Autio, 2004) Riêng Việt Nam phải nhập chế phẩm PME thương mại từ nước với giá cao Do đó, việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm PME nước ta cần thiết, cần quan tâm Hầu hết enzyme pectinase thương mại sử dụng trình chế biến hỗn hợp pectin methylesterase, pectin- rhamnogalacturonan acetylesterase, polygalacturonase, rhamnogalacturonan hydrolase, pectate-, pectinvà rhamnogalacturonan lyase (Benen et al., 1999) Mặt khác, PME enzyme khởi đầu cho trình thủy phân pectin, tạo điều kiện cho enzyme lại hệ enzyme pectinase hoạt động Điều gây khó khăn cho việc ứng dụng PME độc lập vào loại sản phẩm cụ thể nhằm mang lại hiệu mong muốn Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Chính thế, việc tiến hành nghiên cứu tinh nhằm thu PME tinh khiết, hoạt tính cao cần thực sau thu dịch enzyme thơ Bước cho q trình tinh nhằm thu enzyme nhất, việc nghiên cứu kết tủa enzyme nhằm loại bỏ protein tạp q trình khơng phần quan trọng, cần tiến hành 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định hiệu tinh sơ phần enzyme pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11) từ A.niger phương pháp kết tủa protein khác Đồng thời, khảo sát thời gian bảo quản enzyme pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11) từ A.niger điều kiện nhiệt độ lạnh lạnh đông Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Xác định protein theo phương pháp Bradford Nguyên tắc Hàm lượng protein xác định với thuốc thử Coomassie Brillant Blue (CBB) G 250 theo Bradford (1976) CBB G 250 kết hợp với protein điều kiện acid tạo nên phức màu tím hấp thu ánh sáng bước sóng 595 nm Độ hấp thu tỉ lệ thuận với hàm lượng protein dung dịch Cách tiến hành - Chuẩn bị dung dịch Bradford: hòa tan 100 mg CBB G 250 50 mL ethanol 95%, thêm 100 mL acid phosphoric 85% khuấy đều, thêm nước cất đến lít Sau lọc giấy lọc Whatman No1 trữ chai tối nhiệt độ phòng - Thiết lập đường chuẩn protein, Bovin serum Albumin (BSA) với nồng độ tăng dần từ - 300mg/mL Dựa vào đường chuẩn suy nồng độ protein mẫu - Ghi cách chuẩn bị mẫu đo đạc: 150 µL protein + mL dung dịch thuốc thử Bradford, để yên 10 phút Đo độ hấp thu ánh sáng bước sóng 595 nm Cách pha dung dịch đệm citrate-phosphate (pH 2,2 - 8,0) pH Na2HPO4 0,2M (mL) Acid citric 0,1M (mL) 2,2 0,4 19,6 2,4 1,24 18,76 2,6 2,18 17,82 2,8 3,17 16,83 3,0 4,11 15,89 3,2 4,94 15,06 3,4 5,7 14,3 3,6 6,44 13,56 3,8 7,1 12,9 4,0 7,71 12,29 4,2 8,28 11,72 4,4 8,82 11,18 4,6 9,35 10,65 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang ix Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ pH Na2HPO4 0,2M (mL) Acid citric 0,1M (mL) 4,8 9,86 10,14 5,0 10,3 9,7 5,2 10,72 9,28 5,4 11,15 8,85 5,6 11,6 8,4 5,8 12,09 7,91 6,0 12,63 7,37 6,2 13,22 6,78 6,4 13,85 6,15 6,6 14,55 5,45 6,8 15,45 4,55 7,0 16,47 3,53 7,2 17,39 2,61 7,4 18,17 1,83 7,6 18,73 1,27 7,8 19,15 0,85 8,0 19,45 0,55 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang x Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Bảng tra nồng độ muối (NH4)2SO4 bão hịa (Nguồn: Scopes, 1994) Ngành Cơng nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ THỐNG KÊ BQ lạnh Analysis Summary Dependent variable: A Factor: Thoi gian Number of observations: 10 Number of levels: ANOVA Table for A by Thoi gian Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3,74719 ,936798 321,10 , Within groups ,0145872 ,00291744 Total (Corr.) 3,76178 Multiple Range Tests for A by Thoi gian -Method: 95,0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups -4 ,0 X ,155103 X 2 ,289916 X 1,0 X 1,62987 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - *-,62987 ,138846 - *,710084 ,138846 - *,844897 ,138846 - *1,0 ,138846 - *1,33995 ,138846 - *1,47477 ,138846 - *1,62987 ,138846 - ,134813 ,138846 - *,289916 ,138846 - *,155103 ,138846 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Bảo quản lạnh đông Analysis Summary Dependent variable: PME Factor: Thoi gian_ngay Number of observations: 14 Number of levels: ANOVA Table for PME by Thoi gian_ngay Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 6,6856 1,11427 16,40 , Within groups ,475486 ,0679266 Total (Corr.) 7,16109 13 Multiple Range Tests for PME by Thoi gian_ngay -Method: 95,0 percent LSD Thoi gian_ngay Count Mean Homogeneous Groups -0 1,0 X 13 1,31169 X 1,33785 X 1,5776 X 2,22206 X 2,52597 XX 3,03285 X -Contrast Difference +/- Limits -0 - -,5776 ,616287 - -,337853 ,616287 - *-2,03285 ,616287 - *-1,22206 ,616287 - *-1,52597 ,616287 - 13 -,311688 ,616287 - ,239747 ,616287 - *-1,45525 ,616287 - *-,644464 ,616287 - *-,948374 ,616287 - 13 ,265912 ,616287 - *-1,695 ,616287 - *-,88421 ,616287 - *-1,18812 ,616287 - 13 ,026165 ,616287 - *,810786 ,616287 - ,506875 ,616287 - 13 *1,72116 ,616287 - -,30391 ,616287 - 13 *,910375 ,616287 - 13 *1,21429 ,616287 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xiii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Tinh (NH4)2SO4 * Hoạt tính riêng S ANOVA Table for Hoat tinh rieng S by Sat conc of NH4 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 5,13501 1,027 15,81 , 21 Within groups ,389751 ,0649585 Total (Corr.) 5,52476 11 Multiple Range Tests for Hoat tinh rieng S by Sat conc of NH4 -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -Crude 2,89205 X 65% 3,11362 XX 85% 3,16001 XX 75% 3,2345 XX 45% 3,712 X 55% 4,84827 X -Contrast Difference +/- Limits -45% - 55% *-1,13627 ,623645 45% - 65% ,598385 ,623645 45% - 75% ,477505 ,623645 45% - 85% ,551996 ,623645 45% - Crude *,819952 ,623645 55% - 65% *1,73466 ,623645 55% - 75% *1,61378 ,623645 55% - 85% *1,68827 ,623645 55% - Crude *1,95622 ,623645 65% - 75% -,12088 ,623645 65% - 85% -,0463896 ,623645 65% - Crude ,221567 ,623645 75% - 85% ,0744904 ,623645 75% - Crude ,342447 ,623645 85% - Crude ,267956 ,623645 -* denotes a statistically significant difference * Hiệu suất thu hồi H ANOVA Table for Hieu suat H by Sat conc of NH4 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 16436,6 3287,33 533654,70 , Within groups ,0369602 ,00616003 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xiv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Total (Corr.) 16436,7 11 Multiple Range Tests for Hieu suat H by Sat conc of NH4 -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -85% ,208333 X 65% ,585938 X 75% ,703125 XX 45% ,833333 X 55% 1,14583 X Crude 100,0 X -Contrast Difference +/- Limits -45% - 55% *-,3125 ,192048 45% - 65% *,247396 ,192048 45% - 75% ,130208 ,192048 45% - 85% *,625 ,192048 45% - Crude *-99,1667 ,192048 55% - 65% *,559896 ,192048 55% - 75% *,442708 ,192048 55% - 85% *,9375 ,192048 55% - Crude *-98,8542 ,192048 65% - 75% -,117188 ,192048 65% - 85% *,377604 ,192048 65% - Crude *-99,4141 ,192048 75% - 85% *,494792 ,192048 75% - Crude *-99,2969 ,192048 85% - Crude *-99,7917 ,192048 -* denotes a statistically significant difference + Độ tinh P ANOVA Table for Do tinh sach P by Sat conc of NH4 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups ,619179 ,123836 13,66 , 31 Within groups ,0543983 ,00906639 Total (Corr.) ,673577 11 Multiple Range Tests for Do tinh sach P by Sat conc of NH4 -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -Crude 1,0 X 65% 1,07575 XX 85% 1,09218 XX 75% 1,11896 XX Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ 45% 1,28335 X 55% 1,67897 X -Contrast Difference +/- Limits -45% - 55% *-,395618 ,23299 45% - 65% ,207602 ,23299 45% - 75% ,164393 ,23299 45% - 85% ,191177 ,23299 45% - Crude *,283354 ,23299 55% - 65% *,60322 ,23299 55% - 75% *,560011 ,23299 55% - 85% *,586795 ,23299 55% - Crude *,678972 ,23299 65% - 75% -,043209 ,23299 65% - 85% -,0164253 ,23299 65% - Crude ,0757522 ,23299 75% - 85% ,0267836 ,23299 75% - Crude ,118961 ,23299 85% - Crude ,0921775 ,23299 -* denotes a statistically significant difference Tinh acetone + Hoạt tính riêng S ANOVA Table for Hoat tinh rieng S by Acetone Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 63,2496 15,8124 353,07 , Within groups ,223928 ,0447855 Total (Corr.) 63,4735 Multiple Range Tests for Hoat tinh rieng S by Acetone -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -A4 ,129109 X A3 ,691988 X Crude 2,89205 X A2 3,20249 X A1 7,25904 X -Contrast Difference +/- Limits -A1 - A2 *4,05655 ,544003 A1 - A3 *6,56705 ,544003 A1 - A4 *7,12993 ,544003 A1 - Crude *4,36699 ,544003 A2 - A3 *2,5105 ,544003 A2 - A4 *3,07338 ,544003 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xvi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ A2 - Crude ,310436 ,544003 A3 - A4 *,562879 ,544003 A3 - Crude *-2,20006 ,544003 A4 - Crude *-2,76294 ,544003 -* denotes a statistically significant difference + Hiệu suất thu hồi H ANOVA Table for Hieu suat H by Acetone Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 15402,4 3850,61 67206,20 , Within groups ,286477 ,0572954 Total (Corr.) 15402,7 Multiple Range Tests for Hieu suat H by Acetone -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -A4 ,279018 X A3 ,669643 X A2 1,83333 X A1 5,12955 X Crude 100,0 X -Contrast Difference +/- Limits -A1 - A2 *3,29622 ,615308 A1 - A3 *4,45991 ,615308 A1 - A4 *4,85053 ,615308 A1 - Crude *-94,8704 ,615308 A2 - A3 *1,16369 ,615308 A2 - A4 *1,55432 ,615308 A2 - Crude *-98,1667 ,615308 A3 - A4 ,390625 ,615308 A3 - Crude *-99,3304 ,615308 A4 - Crude *-99,721 ,615308 -* denotes a statistically significant difference Độ tinh P ANOVA Table for Do tinh sach P by Acetone Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7,56215 1,89054 360,85 , Within groups ,0261958 ,00523917 Total (Corr.) 7,58835 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xvii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Do tinh sach P by Acetone -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -A4 ,0446429 X A3 ,239272 X Crude 1,0 X A2 1,10734 X A1 2,51 X -Contrast Difference +/- Limits -A1 - A2 *1,40266 ,186065 A1 - A3 *2,27072 ,186065 A1 - A4 *2,46535 ,186065 A1 - Crude *1,51 ,186065 A2 - A3 *,868069 ,186065 A2 - A4 *1,0627 ,186065 A2 - Crude ,107341 ,186065 A3 - A4 *,19463 ,186065 A3 - Crude *-,760728 ,186065 A4 - Crude *-,955357 ,186065 -* denotes a statistically significant difference Tinh Ethanol + Hoạt tính riêng S ANOVA Table for Hoat tinh rieng S by Ethanol Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 117,551 16,7931 150,21 , Within groups ,894354 ,111794 Total (Corr.) 118,446 15 Multiple Range Tests for Hoat tinh rieng S by Ethanol -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -E7 1,63643 X E6 1,69309 X Crude 2,89205 X E5 3,06269 X E4 3,9841 X E1 5,88216 X E2 7,0386 X E3 9,9246 X -Contrast Difference +/- Limits Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xviii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ -Crude - E1 *-2,9901 ,771029 Crude - E2 *-4,14654 ,771029 Crude - E3 *-7,03255 ,771029 Crude - E4 *-1,09204 ,771029 Crude - E5 -,17064 ,771029 Crude - E6 *1,19896 ,771029 Crude - E7 *1,25562 ,771029 E1 - E2 *-1,15644 ,771029 E1 - E3 *-4,04244 ,771029 E1 - E4 *1,89806 ,771029 E1 - E5 *2,81946 ,771029 E1 - E6 *4,18906 ,771029 E1 - E7 *4,24572 ,771029 E2 - E3 *-2,886 ,771029 E2 - E4 *3,0545 ,771029 E2 - E5 *3,9759 ,771029 E2 - E6 *5,3455 ,771029 E2 - E7 *5,40216 ,771029 E3 - E4 *5,9405 ,771029 E3 - E5 *6,86191 ,771029 E3 - E6 *8,23151 ,771029 E3 - E7 *8,28817 ,771029 E4 - E5 *,921403 ,771029 E4 - E6 *2,291 ,771029 E4 - E7 *2,34766 ,771029 E5 - E6 *1,3696 ,771029 E5 - E7 *1,42626 ,771029 E6 - E7 ,05666 ,771029 -* denotes a statistically significant difference + Hiệu suất thu hồi H ANOVA Table for Hieu suat H by Ethanol Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14087,6 2012,51 196,38 , Within groups 81,9853 10,2482 Total (Corr.) 14169,5 15 Multiple Range Tests for Hieu suat H by Ethanol -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -E6 2,60417 X E7 3,52328 X E1 8,03571 X E2 15,7967 X E5 16,25 X E4 22,5 XX E3 26,7857 X Crude 100,0 X Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xix Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ -Contrast Difference +/- Limits -Crude - E1 *91,9643 7,38217 Crude - E2 *84,2033 7,38217 Crude - E3 *73,2143 7,38217 Crude - E4 *77,5 7,38217 Crude - E5 *83,75 7,38217 Crude - E6 *97,3958 7,38217 Crude - E7 *96,4767 7,38217 E1 - E2 *-7,76099 7,38217 E1 - E3 *-18,75 7,38217 E1 - E4 *-14,4643 7,38217 E1 - E5 *-8,21429 7,38217 E1 - E6 5,43155 7,38217 E1 - E7 4,51243 7,38217 E2 - E3 *-10,989 7,38217 E2 - E4 -6,7033 7,38217 E2 - E5 -,453297 7,38217 E2 - E6 *13,1925 7,38217 E2 - E7 *12,2734 7,38217 E3 - E4 4,28571 7,38217 E3 - E5 *10,5357 7,38217 E3 - E6 *24,1815 7,38217 E3 - E7 *23,2624 7,38217 E4 - E5 6,25 7,38217 E4 - E6 *19,8958 7,38217 E4 - E7 *18,9767 7,38217 E5 - E6 *13,6458 7,38217 E5 - E7 *12,7267 7,38217 E6 - E7 -,919118 7,38217 -* denotes a statistically significant difference + Độ tinh P ANOVA Table for Do tinh sach P by Ethanol Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14,0545 2,00779 151,03 , Within groups ,106352 ,013294 Total (Corr.) 14,1609 15 Multiple Range Tests for Do tinh sach P by Ethanol -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -E7 ,565838 X E6 ,58543 X Crude 1,0 X E5 1,059 X E4 1,3776 X E1 2,0339 X Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xx Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ E2 2,43377 X E3 3,43168 X -Contrast Difference +/- Limits -Crude - E1 *-1,0339 ,265882 Crude - E2 *-1,43377 ,265882 Crude - E3 *-2,43168 ,265882 Crude - E4 *-,377601 ,265882 Crude - E5 -,059003 ,265882 Crude - E6 *,41457 ,265882 Crude - E7 *,434162 ,265882 E1 - E2 *-,399869 ,265882 E1 - E3 *-1,39778 ,265882 E1 - E4 *,656302 ,265882 E1 - E5 *,974901 ,265882 E1 - E6 *1,44847 ,265882 E1 - E7 *1,46807 ,265882 E2 - E3 *-,997908 ,265882 E2 - E4 *1,05617 ,265882 E2 - E5 *1,37477 ,265882 E2 - E6 *1,84834 ,265882 E2 - E7 *1,86793 ,265882 E3 - E4 *2,05408 ,265882 E3 - E5 *2,37268 ,265882 E3 - E6 *2,84625 ,265882 E3 - E7 *2,86584 ,265882 E4 - E5 *,318598 ,265882 E4 - E6 *,792172 ,265882 E4 - E7 *,811763 ,265882 E5 - E6 *,473573 ,265882 E5 - E7 *,493165 ,265882 E6 - E7 ,0195916 ,265882 -* denotes a statistically significant difference So sánh nghiệm thức tinh tối ưu ANOVA Table for Hoat tinh rieng S by PP tinh sach Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 55,5201 18,5067 176,37 , Within groups ,419731 ,104933 Total (Corr.) 55,9398 Multiple Range Tests for Hoat tinh rieng S by PP tinh sach -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -Crude 2,89205 X (NH4)2SO4 55% 4,84827 X A1 7,25904 X Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ E3 9,9246 X -Contrast Difference +/- Limits -(NH4)2SO4 55% - A1 *-2,41077 ,899386 (NH4)2SO4 55% - Crude *1,95622 ,899386 (NH4)2SO4 55% - E3 *-5,07633 ,899386 A1 - Crude *4,36699 ,899386 A1 - E3 *-2,66556 ,899386 Crude - E3 *-7,03255 ,899386 -* denotes a statistically significant difference ANOVA Table for Hieu suat H by PP tinh sach Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 12637,6 4212,52 657,30 , Within groups 25,6355 6,40888 Total (Corr.) 12663,2 Multiple Range Tests for Hieu suat H by PP tinh sach -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -(NH4)2SO4 55% 1,14583 X A1 5,12955 X E3 26,7857 X Crude 100,0 X -Contrast Difference +/- Limits -(NH4)2SO4 55% - A1 -3,98372 7,0288 (NH4)2SO4 55% - Crude *-98,8542 7,0288 (NH4)2SO4 55% - E3 *-25,6399 7,0288 A1 - Crude *-94,8704 7,0288 A1 - E3 *-21,6562 7,0288 Crude - E3 *73,2143 7,0288 -* denotes a statistically significant difference ANOVA Table for Do tinh sach P by PP tinh sach Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 6,63313 2,21104 135,71 , Within groups ,0651681 ,016292 Total (Corr.) 6,69829 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Multiple Range Tests for Do tinh sach P by PP tinh sach -Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups -Crude 1,0 X (NH4)2SO4 55% 1,67897 X A1 2,51 X E3 3,43168 X -Contrast Difference +/- Limits -(NH4)2SO4 55% - A1 *-,831025 ,354387 (NH4)2SO4 55% - Crude *,678972 ,354387 (NH4)2SO4 55% - E3 *-1,75271 ,354387 A1 - Crude *1,51 ,354387 A1 - E3 *-,921683 ,354387 Crude - E3 *-2,43168 ,354387 -* denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxiii ... enzyme pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11) từ A .niger phương pháp kết tủa protein khác Đồng thời, khảo sát thời gian bảo quản enzyme pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11) từ A .niger điều... loại hóa chất khảo sát biểu thị khác biệt có ý nghĩa với độ tin cậy 95% Dựa vào kết khảo sát, phương pháp kết tủa acetone tỏ không hiệu ethanol trường hợp tinh PME từ Aspergillus niger Ở tỷ lệ... thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang i Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CẢM TẠ Luận văn tốt nghiệp điều kiện tiên giúp sinh viên tốt nghiệp trường Trong khoảng