Khảo sát khả năng nhân giống cây hoa salem (limonium siniatium l mill) bằng phương pháp nuôi cấy in virto

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN THỊ HUYỀN TRANG KHẢO SÁT KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY HOA SALEM (LIMONIUM SINUATUM L MILL) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2011 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày tháng năm Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA………… ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGUYỄN THỊ HUYỀN TRANG MSHV: 09310588 Ngày, tháng, năm sinh: 17/01/1986 Nơi sinh: Đắklắk Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số : 60 42 80 I TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát khả nhân chồi hoa salem (Limonium sinuatum L Mill) phương pháp nuôi cấy in vitro II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Xác định thành phần mơi trường ni cấy thích hợp cho mục đích nhân giống hoa salem nuôi cấy in vitro - Khảo sát ảnh hưởng yếu tố hữu mơi trường ni cấy chất điều hịa sinh trưởng thực vật chất bổ sung khác đến nhân chồi tạo rễ salem III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 03/2010 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 07/2011 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : TS LÊ THỊ THỦY TIÊN Tp HCM, ngày tháng năm 20 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA….……… (Họ tên chữ ký) i ‱ LỜI CẢM ƠN Em thấy thật may mắn học tập trường Bách khoa, sống mái nhà chung Công nghệ Sinh học suốt gần năm qua Có ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô, cán môn Công nghệ Sinh học dạy bảo, uốn nắn tạo điều kiện thuận lợi cho em trình học tập làm luận văn Lời cảm ơn sâu sắc em xin gửi đến cô Lê Thị Thủy Tiên, người trực tiếp hướng dẫn em thực đề tài Em biết ơn khơng hướng dẫn em cách tận tình, truyền đạt cho em kinh nghiệm quý báu mà lúc em khó khăn ln bên cạnh động viên, chia sẻ, tiếp thêm động lực để em cố gắng nhiều trình làm luận văn Cơ người cho em thêm tình u ngành nghề mà em lựa chọn Xin cảm ơn bố mẹ, anh chị em gia đình ln dõi theo đường đi, ủng hộ, động viên tạo điều kiện thuận lời để học tập tốt Cảm ơn bạn học viên cao học phịng thí nghiệm mơn Cơng nghệ Sinh học, đặc biệt thành viên phịng 102B2 ln sát cánh tơi, chia sẻ với tơi khó khăn suốt thời gian qua HVTH Nguyễn Thị Huyền Trang ‱ ii ‱ TÓM TẮT Chồi từ salem tuần tuổi môi trường MS nguyên liệu thích hợp để tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật chất hữu bổ sung lên tạo chồi Mặc dù BA loại cytokinin thích hợp cho tạo chồi nhiều loại thực vật, hay TDZ sử dụng rộng rãi nuôi cấy mô hoạt tính cao hẳn auxin cytokinin thơng thường, thí nghiệm này, kinetin lại tỏ có hiệu tốt Sau tuần ni cấy môi trường bổ sung kinetin nồng độ mg/l, từ chồi ban đầu thu 5.6 chồi khỏe mạnh Sự kết hợp kinetin mg/l với loại auxin khác (bao gồm IBA, NAA 2,4-D) không làm tăng hiệu tạo chồi so với kinetin riêng lẻ chồi hình thành có kích thước lớn, thích hợp cho giai đoạn kích thích rễ Adenine, GA3 nước dừa bổ sung vào môi trường nuôi cấy với kinetin mg/l để kích thích tạo chồi Kết khảo sát cho thấy kết hợp kinetin mg/l với GA3 (10 mg/l) adenine (10 mg/l) có hiệu tạo chồi cao với số lượng chồi trung bình mẫu cấy 7.8 9.73 sau tuần nuôi cấy IBA, NAA, IAA 2,4-D nồng độ khác sử dụng phối hợp khơng phối hợp với than hoạt tính (1 g/l) để kích thích rễ chồi IBA nồng độ 1,5 mg/l có hiệu cao mục đích kích thích tạo rễ từ chồi salem in vitro Số lượng rễ hình thành 21.67 sau tuần ni cấy Việc trì chồi mơi trường có kinetin nồng độ cao thời gian dài ức chế tác động kích thích tạo rễ auxin Than hoạt tính khơng có hiệu giai đoạn tạo rễ ‱ iii ‱ MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC ẢNH vii DANH MỤC HÌNH x CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược chi Limonium 2.2 Giới thiệu salem (Limonium sinuatum L Mill) 2.3 Sơ lược phương pháp nhân giống vơ tính thực vật in vitro 2.3.1 Mục đích nhân giống in vitro 2.3.2 Các giai đoạn trình vi nhân giống 2.3.3 Các phương pháp vi nhân giống 2.4 Tình hình nghiên cứu nhân giống thuộc chi Limonium 15 2.4.1 Các nghiên cứu nước 15 2.4.2 Các nghiên cứu nước 28 CHƯƠNG VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 29 3.1 Sơ đồ nghiên cứu chung 30 3.2 Vật liệu nghiên cứu 31 3.3 Môi trường điều kiện nuôi cấy 31 ‱ iv ‱ 3.4 Phương pháp 32 3.4.1 Khử trùng mẫu cấy hạt giống salem 32 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến tạo chồi salem 33 3.4.3 Khảo sát khả tạo rễ chồi điều kiện in vitro 34 3.4.4 Phân tích xử lý số liệu: 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 36 4.1 Sự tạo in vitro 37 4.2 Nhân giống chồi sẵn có 37 4.3 Ảnh hưởng auxin cytokinin lên tạo chồi mẫu cấy chồi in vitro 38 4.3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA 38 4.3.2 Ảnh hưởng kinetin 39 4.4 Ảnh hưởng cytokinin lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi 40 4.4.1 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA 40 4.4.2 Ảnh hưởng kinetin 41 4.5 Khảo sát độ tuổi sinh lý mẫu cấy thích hợp cho tạo chồi 43 4.6 Ảnh hưởng cytokinin lên tạo chồi chồi tuần tuổi 46 4.6.1 Ảnh hưởng BA lên tạo chồi 46 4.6.2 Ảnh hưởng kinetin lên tạo chồi 47 4.6.3 Ảnh hưởng TDZ lên tạo chồi 48 4.7 Ảnh hưởng kết hợp kinetin với auxin lên tạo chồi chồi tuần tuổi 51 4.7.1 Ảnh hưởng kết hợp kinetin với IBA lên tạo chồi 52 4.7.2 Ảnh hưởng kết hợp kinetin với 2,4 – D lên tạo chồi 53 4.7.3 Ảnh hưởng kết hợp kinetin với NAA lên tạo chồi 54 ‱ v ‱ 4.8 Ảnh hưởng GA3 đến tạo chồi chồi tuần tuổi 56 4.9 Ảnh hưởng adenine đến tạo chồi chồi tuần tuổi 58 4.10 Ảnh hưởng nước dừa đến tạo chồi chồi tuần tuổi 59 4.11 Khảo sát khả tạo rễ chồi điều kiện in vitro 62 4.11.1 Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ chồi 62 4.11.2 Ảnh hưởng 2,4 – D đến tạo rễ chồi 64 4.11.3 Ảnh hưởng NAA đến tạo rễ chồi 65 4.11.4 Ảnh hưởng IAA đến tạo rễ chồi 66 4.11.5 Ảnh hưởng than hoạt tính đến tạo rễ chồi 66 CHƯƠNG 5.KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 68 5.1 Kết luận 69 5.2 Kiến nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 PHỤ LỤC 77 ‱ vi ‱ DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D : acid (2,4-dichlorophenxy) acetic 2iP : 6-(,-dimethylallylamino)purine A/C : tỉ lệ auxin/cytokinin BA : benzyladenine GA3 : acid gibberellic IAA : 3-indol-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : môi trường Murashige Skoog (1962) NAA : 1-naphthylacetic acid TDZ : 1-phenyl-3-(1,2,3 thiadiazol-5-yl) ‱ vii ‱ DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tác động auxin lên tạo mô sẹo từ mẫu cấy môi trường MS 1/2 chứa sucrose 2% gellan gum 0.25% 18 Bảng 2.2 Tác động cytokinin lên tạo chồi từ tế bào nuôi cấy môi trường MS 1/2 chứa sucrose 2% gellan gum 0.25% 19 Bảng 2.3 Tác động loại thành phần cytokinin lên tạo chồi từ tế bào nuôi cấy môi trường MS 1/2 chứa sucrose 2% gellan gum 0.5% 20 Bảng 2.4 Tác động loại thành phần chất tạo gel lên tạo chồi từ tế bào nuôi cấy môi trường MS 1/2 chứa sucrose 2% zeatin 1.0 mg/l 20 Bảng 2.5 Phát vi khuẩn ký sinh mô salem 24 Bảng 2.6 Mức độ nhiễm khuẩn ký sinh mô tỉ lệ tái sinh mẫu cấy cuống hoa salem PP 25 Bảng 2.7 Hiệu loại trừ khuẩn ký sinh mơ mơi trường C1 có bổ sung 250 mg/l Augmentin 26 Bảng 2.8 Hiệu qua loại trừ khuẩn ký sinh mô giống DP từ trang trại môi trường C1 có bổ sung kháng sinh 26 Bảng 4.1 Ảnh hưởng kết hợp NAA 0,2 mg/l với BA nồng độ thay đổi lên tạo chồi mẫu cấy chồi in vitro 38 Bảng 4.2 Ảnh hưởng kinetin tạo chồi chồi salem in vitro 39 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ kinetin đến tạo chồi chồi từ tuần tuổi 41 Bảng 4.4 Ảnh hưởng độ tuổi mẫu cấy đến hiệu nhân chồi 43 Bảng 4.5 Ảnh hưởng BA đến tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi 46 Bảng 4.6 Ảnh hưởng kinetin đến tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần ‱ 78 ‱ Bảng 4.1 Ảnh hưởng kết hợp NAA 0.2 mg/l với BA nồng độ thay đổi lên tạo chồi mẫu cấy chồi in vitro Tuần nuôi cấy (tuần) tuần tuần tuần BA NAA (mg/l) (mg/l) 0.2 0.5 0.2 0.5 0.2 0.5 0.2 0.2 0.2 Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát trên15 mẫu cấy) (chồi) 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Mẫu tạo chồi 0 3 1 3 1 Tỉ lệ tạo Σ Số lượng chồi (%) chồi chồi/mẫu 0.00 20.00 6.67 0.00 0.00 6.67 0.00 20.00 20.00 6.67 0.00 6.67 0.00 20.00 20.00 6.67 0.00 6.67 15 18 16 15 15 16 15 19 18 16 15 16 15 19 18 16 15 16 1.00 1.20 1.07 1.00 1.00 1.07 1.00 1.27 1.20 1.07 1.00 1.07 1.00 1.27 1.20 1.07 1.00 1.07 Độ lệch chuẩn 0.00 0.41 0.26 0.00 0.00 0.26 0.00 0.59 0.41 0.26 0.00 0.26 0.00 0.59 0.41 0.26 0.00 0.26 ‱ 79 ‱ Bảng 4.2 Ảnh hưởng kinetin tạo chồi chồi salem in vitro Tuần nuôi cấy (tuần) Kinetin (mg/l) tuần tuần tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) 1 1 1 1 1 1 1 Mẫu tạo chồi Tỉ lệ tạo Số lượng chồi Σ chồi chồi/mẫu (%) 0.00 15 1.00 Độ lệch chuẩn 0.00 0.2 1 1 1 1 1 1 13.33 18 1.20 0.56 0.5 4 1 1 1 2 1 1 40.00 53.33 33 25 2.20 1.67 1.74 0.72 1 2 1 2 1 1 40.00 23 1.53 0.83 2 3 2 15 100.00 45 3.00 1.25 1 1 1 1 1 1 1 0.00 15 1.00 0.00 0.2 1 1 1 1 33.33 30 2.00 1.60 0.5 4 5 2 1 60.00 42 2.80 1.86 3 4 13 86.67 45 3.00 1.25 1 60.00 48 3.20 2.21 4 3 15 100.00 65 4.33 1.59 0.2 4 1 2 1 1 1 1 10 0.00 66.67 15 40 1.00 2.67 0.00 1.63 0.5 6 5 1 60.00 51 3.40 2.32 4 5 15 100.00 65 4.33 1.40 6 7 7 5 4 15 15 100.00 100.00 72 85 4.80 5.67 2.43 1.23 ‱ 80 ‱ Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ kinetin đến tạo chồi chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi Kinetin cấy (mg/l) (tuần) 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) 1 1 1 1 4 1 1 6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Mẫu tạo chồi 1 1 1 1 1 1 1 0 10 10 0 12 15 0 15 15 Tỉ lệ tạo chồi (%) 0.00 0.00 0.00 13.33 66.67 66.67 0.00 0.00 0.00 13.33 80.00 100.00 0.00 0.00 6.67 20.00 100.00 100.00 Số lượng Σ chồi chồi/mẫu 15 15 15 17 26 35 15 15 15 18 47 55 15 15 16 23 73 80 1.00 1.00 1.00 1.13 1.73 2.33 1.00 1.00 1.00 1.20 3.13 3.67 1.00 1.00 1.07 1.53 4.87 5.33 Độ lệch chuẩn 0.00 0.00 0.00 0.35 0.59 1.18 0.00 0.00 0.00 0.56 1.46 1.29 0.00 0.00 0.26 1.19 1.77 1.29 ‱ 81 ‱ Bảng 4.4 Ảnh hưởng độ tuổi mẫu cấy đến hiệu nhân chồi Tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu nuôi Số tuần (khảo sát 15 mẫu cấy) cấy tuổi (chồi) (tuần) tuần 2 1 1 1 1 1 1 tuổi tuần 3 3 3 1 tuần tuổi tuần tuổi tuần tuần tuổi tuần tuổi tuần tuổi tuần tuần tuổi tuần tuổi tuần tuổi Số lượng Độ lệch chồi/ chuẩn Mẫu Mẫu tạo chồi Tỉ lệ tạo chồi (%) Σ chồi 13.33 17 1.13 0.35 12 80.00 40 2.67 1.05 1 1 1 1 1 1 1 6.67 16 1.07 0.26 3 1 1 10 66.67 38 2.53 1.46 6 3 4 14 93.33 63 4.20 1.57 1 1 1 1 1 1 13.33 20 1.33 1.05 11 8 1 12 80.00 79 5.27 2.99 6 7 5 6 15 100.00 88 5.87 1.60 5 1 1 1 1 40.00 32 2.13 1.60 ‱ 82 ‱ Bảng 4.5 Ảnh hưởng BA đến tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi cấy (tuần) tuần tuần tuần 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 0.1 0.2 0.4 0.6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 Tỉ lệ tạo chồi (%) 0.00 0.00 0.00 6.67 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 6.67 6.67 0.00 0.00 6.67 0.00 6.67 0.8 1 1 1 1 1 1 1 6.67 16 1.07 0.26 1 1 1 1 1 1 1 1 6.67 16 1.07 0.26 Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) BA (mg/l) Mẫu tạo chồi Σ chồi Số lượng chồi/mẫu Độ lệch chuẩn 15 15 15 16 15 15 15 15 15 16 16 15 15 16 15 16 1.00 1.00 1.00 1.07 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.07 1.07 1.00 1.00 1.07 1.00 1.07 0.00 0.00 0.00 0.26 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.26 0.26 0.00 0.00 0.26 0.00 0.26 ‱ 83 ‱ Bảng 4.6 Ảnh hưởng kinetin đến tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần Kinetin nuôi cấy (mg/l) (tuần) 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 0.2 0.5 tuần 1.0 2.0 4.0 Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu Mẫu Tỉ lệ tạo (khảo sát 15 mẫu cấy) tạo chồi (%) (chồi) chồi 1 1 1 1 1 1 1 0.00 1 1 1 1 1 1 1 0.00 1 4 1 1 46.67 1 1 53.33 2 2 2 12 80.00 1 1 1 1 33.33 1 1 1 1 1 1 1 0.00 1 1 1 1 1 1 1 0.00 6 10 66.67 4 6 3 1 11 73.33 4 3 5 13 86.67 4 14 93.33 1 1 1 1 1 1 1 0.00 1 1 1 1 1 13.33 3 14 93.33 14 93.33 4 3 5 13 86.67 4 14 93.33 Σ chồi 15 15 32 32 34 31 15 15 45 46 56 54 15 17 59 72 56 54 Số lượng Độ lệch chồi/mẫu chuẩn 1.00 1.00 2.13 2.13 2.27 2.07 1.00 1.00 3.00 3.07 3.73 3.60 1.00 1.13 3.93 4.80 3.73 3.60 0.00 0.00 1.46 1.36 1.10 1.87 0.00 0.00 1.81 1.71 1.71 1.99 0.00 0.35 2.05 2.18 1.71 1.99 ‱ 84 ‱ Bảng 4.7 Ảnh hưởng phối hợp IBA kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần IBA nuôi cấy (mg/l) (tuần) tuần tuần tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) Mẫu Tỉ lệ tạo Σ Số lượng tạo chồi chồi (%) chồi chồi/mẫu Độ lệch chuẩn 0.05 4 3 1 1 10 66.67 40 2.67 1.68 0.1 2 3 2 1 2 10 66.67 29 1.93 0.88 0.2 1 2 1 60.00 33 2.20 1.32 0.05 6 3 15 100.00 61 4.07 1.58 0.1 4 3 3 1 5 13 86.67 50 3.33 1.29 0.2 3 13 86.67 56 3.73 2.28 0.05 8 3 15 100.00 79 5.27 1.87 0.1 5 7 15 100.00 76 5.07 1.75 0.2 10 4 4 14 93.33 74 4.93 2.43 ‱ 85 ‱ Bảng 4.8 Ảnh hưởng phối hợp 2,4-D kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi cấy (tuần) tuần tuần tuần Độ lệch chuẩn 2.4-D (mg/l) Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) Mẫu tạo chồi 0.05 3 1 1 1 53.33 27 1.80 0.86 0.1 3 1 1 1 1 40.00 23 1.53 0.74 0.2 1 1 1 2 1 33.33 22 1.47 0.83 0.05 6 1 2 4 12 80.00 52 3.47 1.81 0.1 1 3 11 73.33 42 2.80 1.61 0.2 1 5 3 12 80.00 42 2.80 1.57 0.05 4 6 14 93.33 78 5.20 2.27 0.1 5 8 13 86.67 70 4.67 2.41 0.2 2 6 13 86.67 68 4.53 2.47 Tỉ lệ tạo Σ Số lượng chồi (%) chồi chồi/mẫu ‱ 86 ‱ Bảng 4.9 Ảnh hưởng phối hợp NAA kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần NAA nuôi cấy (mg/l) (tuần) tuần tuần tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (chồi) Mẫu tạo chồi 0.05 2 2 1 1 46.67 25 1.67 0.90 0.1 1 2 3 2 53.33 28 1.87 0.99 0.2 3 1 3 1 60.00 33 2.20 1.15 0.05 5 3 13 86.67 58 3.87 1.77 0.1 3 6 3 14 93.33 51 3.40 1.59 0.2 3 4 6 12 80.00 51 3.40 1.68 0.05 5 3 13 86.67 63 4.20 2.04 0.1 3 7 15 100.00 71 4.73 2.12 0.2 5 6 2 15 100.00 67 4.47 1.73 (khảo sát 15 mẫu cấy) Tỉ lệ tạo Σ Số lượng Độ lệch chồi (%) chồi chồi/mẫu chuẩn ‱ 87 ‱ Bảng 4.10 Ảnh hưởng phối hợp GA3 kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi cấy (tuần) tuần tuần tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) GA3 (mg/l) Mẫu tạo chồi Tỉ lệ tạo Σ Số lượng chồi (%) chồi chồi/mẫu Độ lệch chuẩn 1 1 1 1 1 26.67 21 1.40 0.83 1 1 1 1 33.33 23 1.53 0.92 2 1 1 1 53.33 26 1.73 0.88 10 2 1 1 1 40.00 24 1.60 0.91 2 6 3 15 100.00 62 4.13 1.73 7 5 15 100.00 59 3.93 2.12 7 4 5 14 93.33 60 4.00 1.85 10 3 10 4 4 15 100.00 71 4.73 1.83 3 5 8 5 10 15 100.00 88 5.87 2.20 8 5 8 6 15 100.00 94 6.27 1.39 13 12 5 13 15 100.00 98 6.53 3.48 10 14 7 12 9 15 100.00 117 7.80 2.51 ‱ 88 ‱ Bảng 4.11 Ảnh hưởng phối hợp adenine kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi Adenine cấy (mg/l) (tuần) tuần tuần tuần Độ Mẫu Tỉ lệ Σ Số lượng lệch tạo tạo chồi chồi chồi/mẫu chuẩn chồi (%) Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) 1 1 1 1 1 20.00 24 1.60 1.45 10 3 3 1 2 10 66.67 33 2.20 1.01 15 1 2 1 1 46.67 29 1.93 1.44 20 1 2 1 1 1 1 5 33.33 24 1.60 1.12 5 5 7 3 15 100.00 74 4.93 1.87 10 6 3 15 100.00 78 5.20 1.93 15 3 6 10 15 100.00 70 4.67 2.41 20 3 3 15 100.00 53 3.53 1.36 5 20 11 14 15 100.00 116 7.73 4.37 10 20 9 18 10 8 11 15 100.00 146 9.73 4.03 15 17 10 5 11 16 15 100.00 114 7.60 4.17 20 4 6 15 100.00 83 5.53 1.46 6 ‱ 89 ‱ Bảng 4.12 Ảnh hưởng phối hợp nước dừa kinetin mg/l lên tạo chồi mẫu cấy chồi từ tuần tuổi Tuần nuôi cấy (tuần) tuần tuần tuần Số lượng chồi hình thành từ mẫu cấy ban đầu (khảo sát 15 mẫu cấy) (chồi) Nước dừa (ml) Mẫu Tỉ lệ tạo Σ Số lượng Độ lệch tạo chồi (%) chồi chồi/mẫu chuẩn chồi 50 1 1 2 2 2 60.00 25 1.67 0.62 100 1 1 1 1 33.33 24 1.60 0.99 150 1 1 1 1 1 20.00 18 1.20 0.41 200 1 1 1 1 1 1 1 6.67 16 1.07 0.26 50 3 3 3 3 2 14 93.33 41 2.73 0.80 100 2 1 2 12 80.00 42 2.80 1.70 150 1 1 2 2 10 66.67 31 2.07 1.03 200 1 1 2 1 33.33 23 1.53 1.06 50 2 6 4 4 3 15 100.00 58 3.87 1.25 100 2 4 2 13 86.67 48 3.20 1.90 150 2 3 3 4 12 80.00 41 2.73 1.33 200 1 1 60.00 34 2.27 1.53 ‱ 90 ‱ Bảng 4.13 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến tạo rễ chồi sau tuần nuôi cấy IBA (mg/l) Số mẫu khảo sát 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1.0 1.5 15 15 15 15 15 15 15 Số rễ tạo thành mẫu cấy (rễ) 11 22 5 10 14 26 12 13 17 12 - - … … … … … … … Mẫu tạo rễ 4 2 4 Tỉ lệ tạo rễ (%) 26.67 26.67 13.33 13.33 26.67 26.67 20.00 Số lượng rễ/mẫu tạo rễ 4.75 5.75 7.50 8.50 10.25 11.75 21.67 Chiều dài rễ TB Chiều dài rễ (cm) 4.40 9.70 9.10 8.70 7.80 7.40 6.10 4.6 8.6 6.9 6.6 6.7 6.5 3.5 7.5 7.6 6.2 7.1 5.2 - - … … … … … … … 4.88 8.35 8.00 7.65 6.43 6.88 5.93 Bảng 4.14 Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến tạo rễ mẫu cấy sau tuần nuôi cấy 2,4-D (mg/l) Số mẫu khảo sát 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1.0 1.5 15 15 15 15 15 15 15 Số rễ tạo thành mẫu cấy (rễ) - - - - - - - 10 - - - - - - - - … … … … … … … Mẫu Tỉ lệ tạo tạo rễ rễ (%) 0 33.33 40.00 0.00 20.00 0.00 0.00 0.00 Số lượng rễ/mẫu tạo rễ 6.60 3.33 - Chiều dài rễ TB Chiều dài rễ (cm) 1.7 2.7 0.5 2.5 1.5 2.4 1.2 - - … … … … … … … 1.78 1.53 - ‱ 91 ‱ Bảng 4.15 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến tạo rễ mẫu cấy sau tuần nuôi cấy NAA (mg/l) Số mẫu khảo sát 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1.0 1.5 15 15 15 15 15 15 15 Số rễ tạo thành mẫu cấy (rễ) - - - - … … … … … … … Mẫu tạo rễ 0 0 Tỉ lệ tạo rễ (%) 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 20.00 0.00 Số lượng rễ/mẫu tạo rễ 3.67 - Chiều dài rễ TB Chiều dài rễ (cm) 2.1 - - 1.4 - - … … … … … … … 1.83 - ‱ 92 ‱ PHẦN LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Nguyễn Thị Huyền Trang Ngày, tháng, năm sinh:17/01/1986 Nơi sinh: Tp Buôn Ma Thuột – Tỉnh ĐắkLắk Địa liên lạc: 03 Giải Phóng – Phường Tân Thành – Tp Bn Ma Thuột – Tỉnh ĐắkLắk Q TRÌNH ĐÀO TẠO  Từ 09/2004 đến 04/2009 : Sinh viên Bộ môn Công nghệ Sinh học – trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh  Từ 09/2009 đến nay: Học viên cao học khóa 2009 ngành Cơng nghệ Sinh học Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh QUÁ TRÌNH CƠNG TÁC  Từ 04/2009 đến 08/2009: Thư ký văn phịng cơng ty Cổ phần Liên kết Trực tuyến Tiêu Điểm – 57 Lê Thị Hồng Gấm – Phường Nguyễn Thái Bình – Quận – Tp Hồ Chí Minh ‱ ... 15-20 l? ??i trồng, kể đến L sinuatum, L bouduelli, L dregeanum, L sinense, L latifolium , L psylliostrachum, L bellidifolium, L gmelinni, L perezi, L dumosum L altaica (Sato, 1989) [17]  ? ?L.  emarginatum ... 17/01/1986 Nơi sinh: Đắklắk Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số : 60 42 80 I TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát khả nhân chồi hoa salem (Limonium sinuatum L Mill) phương pháp nuôi cấy in vitro II NHIỆM VỤ... TÀI LIỆU 2.1 Sơ l? ?ợc chi Limonium 2.2 Giới thiệu salem (Limonium sinuatum L Mill) 2.3 Sơ l? ?ợc phương pháp nhân giống vơ tính thực vật in vitro 2.3.1 Mục đích nhân giống