Luận văn tốt nghiệp một số yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính pectin methylesterase từ aspergillus niger

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG VƯƠNG TỐ TRINH MSSV 2060378 MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HOẠT TÍNH PECTIN METHYLESTERASE TỪ ASPERGILLUS NIGER LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã ngành: 08 Người hướng dẫn Ths TRẦN THANH TRÚC NĂM 2010 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn nội dung số liệu trình bày luận văn cơng trình nghiên cứu tơi theo hướng dẫn giáo viên Người viết Vương Tố Trinh Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang i Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CẢM TẠ Luận văn tốt nghiệp kết sau ba tháng nghiên cứu phịng thí nghiệm mơn Cơng nghệ thực phẩm, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ đúc kết tất kiến thức học suốt năm qua Tuy nhiên, để hoàn thành tốt luận văn khơng có nỗ lực thân mà cịn có giúp đỡ nhiều thầy cô, người thân bạn bè Con xin gửi đến ba mẹ người thân yêu lịng biết ơn sâu sắc tất ba mẹ dành cho Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Văn Mười Trần Thanh Trúc tận tình hướng dẫn, động viên tạo điều kiện để hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô trường Đại học Cần Thơ đặc biệt quý thầy cô môn Công nghệ thực phẩm tận tình truyền đạt kiến thức rèn luyện kỹ cho suốt năm qua Xin chân thành cảm ơn tất bạn lớp Cơng nghệ thực phẩm khóa 32 khóa 34 liên thông thời gian qua quan tâm giúp đỡ, động viên, cổ vũ để tơi hồn thành khóa học hồn thành luận văn Cuối xin gởi đến q Thầy Cơ tất bạn lời chúc sức khỏe thành công sống Chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 20 tháng năm 2010 Sinh viên Vương Tố Trinh Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang ii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ TĨM TẮT Đề tài: “Một số yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính pectinmethylesterase từ Aspergillus niger”, thực nhằm khảo sát ảnh hưởng điều kiện môi trường đến hoạt tính PME từ nấm mốc Aspergillus niger Các yếu tố mơi trường có ảnh hưởng đến hoạt tính PME nồng độ chất, nhiệt độ tối thích, độ bền nhiệt, pH môi trường, nồng độ NaCl CaCl2 khảo sát Kết nghiên cứu cho thấy, số Michealis – Menten (Km) PME 1,092 g/L PME từ Aspergillus niger thể hoạt tính cao 400C, pH mơi trường 5,0 với có mặt NaCl hay CaCl2 làm chất hoạt hóa Phương trình động học bậc 1: ln(A/A0) = - 0,0082 t (với t: thời gian gia nhiệt, phút) ứng dụng để tốc độ vơ hoạt enzyme PME nhiệt độ 600C Từ khóa: PME, NaCl, CaCl2, số Michealis – Menten, phương trình động học bậc Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang iii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM TẠ ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH BẢNG viii CHƯƠNG TỔNG QUAN .1 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 2.1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU NẤM MỐC ASPERGILLUS 2.1.1 Giới thiệu chung nấm mốc Aspergillus .2 2.1.2 Aspergillus niger 2.2 PECTIN METHYLESTERASE 2.2.1 Pectin methylesterase hệ enzyme pectinase 2.2.2 Cấu trúc PME 2.2.3 Đặc tính sinh lý, sinh hóa 2.2.4 Kiểu phản ứng 2.2.5 Nguồn tổng hợp PME 2.2.6 Một số yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính xúc tác enzyme PME 2.3 ĐỘNG HỌC ENZYME 11 2.3.1 Khái niệm enzyme cấu tạo hóa học 11 2.3.2 Giới thiệu phản ứng enzyme .11 2.3.3 Động học phản ứng enzyme 11 2.3.4 Động học vô hoạt enzyme 13 2.4 MỘT SỐ ỨNG DỤNG CỦA PME TRONG CHẾ BIẾN THỰC PHẨM .14 2.4.1 Trích ly dịch 15 2.4.2 Làm nước .15 2.4.3 Cải thiện cấu trúc .16 2.4.4 Một số ứng dụng khác .16 2.5 CÁC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN 16 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang iv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 CHƯƠNG 3.1 Trường Đại học Cần Thơ PHƯƠNG TIỆN – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 18 3.1.1 Địa điểm, thời gian thí nghiệm 18 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 18 3.1.3 Dụng cụ, thiết bị .18 3.1.4 Hóa chất 18 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.2.1 Phương pháp chuẩn bị mẫu 19 3.2.2 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 19 3.3 PHƯƠNG PHÁP BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM .19 3.3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nồng độ chất pectin đến hoạt tính enzyme PME từ A.niger 19 3.3.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu biến đổi hoạt tính PME nấm mốc Aspergillus niger theo nhiệt độ .20 3.3.3 Thí nghiệm 3: Động học vơ hoạt enzyme PME từ A.niger 22 3.3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng pH mơi trường đến hoạt tính PME nấm mốc Aspergillus niger 23 3.3.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu thay đổi hoạt tính enzyme PME theo nồng độ NaCl .25 3.3.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu biến đổi hoạt tính PME nấm mốc A.niger theo nồng độ CaCl2 26 CHƯƠNG 4.1 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CƠ CHẤT (PECTIN) ĐẾN HOẠT TÍNH ENZYME PME TỪ ASPERGILLUS NIGER 28 4.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN HOẠT TÍNH ENZYME PME 29 4.3 XÁC ĐỊNH SỰ ỔN ĐỊNH NHIỆT CỦA ENZYME PME TỪ ASPERGILLUS NIGER 30 4.4 ẢNH HƯỞNG CỦA pH ĐẾN SỰ ỔN ĐỊNH HOẠT TÍNH CỦA ENZYME PME TỪ ASPERGILLUS NIGER 33 4.5 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ NaCl VÀ CaCl2 ĐẾN HOẠT TÍNH ENZYME PME TỪ ASPERGILLUS NIGER .34 CHƯƠNG KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 37 5.1 KẾT LUẬN 37 5.2 ĐỀ NGHỊ 37 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang v Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC 1: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH xi PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ THỐNG KÊ xiv Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang vi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Aspergillus niger Hình 2: Sự thủy phân liên kết methyl ester pectin với xúc tác PME Hình : Cấu trúc PME từ carrot Hình 4: Cấu trúc bậc II PME từ E chrysanthemi (A), cà chua (B), carrot (C) Hình 5: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 20 Hình 6: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 21 Hình 7: Sơ đồ thí nghiệm 23 Hình 8: Sơ đồ thí nghiệm 24 Hình 9: Sơ đồ thí nghiệm 26 Hình 10: Ảnh hưởng nồng độ pectin đến hoạt tính enzyme PME từ Aspergillus niger 29 Hình 11: Phương trình động học vô hoạt enzyme PME từ Aspergillus niger pH 4,5, nhiệt độ 60ºC 32 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang vii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Thông số động học Km số enzyme 13 Bảng : Hiệu xử lý nước táo nước vải chế phẩm enzyme pectinase 15 Bảng 3: Ảnh hưởng nồng độ pectin (g/L) đến hoạt tính PME từ A.niger (U/mL) 28 Bảng 4: Sự thay đổi hoạt tính PME ảnh hưởng nhiệt độ 30 Bảng 5: Kết đánh giá ổn định nhiệt enzyme PME từ Aspergillus niger 31 Bảng 6: Ảnh hưởng pH đến ổn định hoạt tính enzyme PME từ A.niger .33 Bảng 7: Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến hoạt tính enzyme PME từ A.niger 34 Bảng 8: Ảnh hưởng nồng độ CaCl2 đến hoạt tính enzyme PME từ A.niger .35 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang viii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 CHƯƠNG Trường Đại học Cần Thơ TỔNG QUAN 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với tiến khoa học kỹ thuật, công nghệ sinh học ngày phát triển mạnh mẽ Với thành tựu lĩnh vực khoa học ứng dụng, nghiên cứu, phát minh công nghệ sinh học ngày khẳng định vai trị khoa học Cơng nghệ enzyme lĩnh vực không phần quan trọng công nghệ sinh học Ngày nay, enzyme ngày ứng dụng rộng rãi nhiều ngành cơng nghiệp nói chung cơng nghiệp thực phẩm nói riêng Các chế phẩm enzyme phổ biến amylase, protease, catalase, cellulase, lipase, glucoseoxydase… Trong đó, pectin methylesterase enzyme quan trọng sử dụng phổ biến công nghệ thực phẩm Pectin methylesterase sản xuất từ thực vật vi sinh vật, Aspergillus nguồn chủ yếu (Polizeli et al., 1991) Việc trích ly enzyme pectin methylesterase (PME) từ Aspergillus niger (A.niger) ưu tiên chọn lựa nhiều sản phẩm từ A.niger Viện nghiên cứu thực phẩm thuốc Mỹ (FDA) chứng nhận sản phẩm an tồn (GRAS) chúng có khả phát triển sinh enzyme nhanh chất rẻ tiền PME tìm thấy nhiều thực vật, vi sinh vật Tùy thuộc vào nguồn gốc PME, thông số tối ưu cho hoạt động enzyme (pH, nhiệt độ tối thích, chất hoạt hóa PME ) thay đổi, đặc biệt khác phương thức hoạt động PME Do đó, để ứng dụng enzyme PME từ A.niger cách hiệu nhất, chất điều kiện hoạt động tối thích enzyme cần phải hiểu rõ Vì vậy, việc nghiên cứu để tìm hiểu yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính A.niger PME cần thiết 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ, độ bền nhiệt, pH, nồng độ NaCl, nồng độ CaCl2 đến hoạt tính enzyme PME từ A.niger Ngành Công nghệ thực phẩm Trang Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Drauz, K and Waldmann, H (2000) Enzyme catalysis in organic synthesis Inc., Germany Pp: 23-35 Duvetter T., (2007) Understanding the role of fungal pectin methylesterase in fruit texture engineering, Docteraasproefschrift Nr 729 aan de Faculteit Bio-ingenieurswetenschappen van de KU Leuven Hlmann, F (1995) Purification and Characterization of an Extracellular Pectate Lyase from an Amycolata sp Applied and environmental microbiology, 3580–3585 Jenkins J., Mayans, O., Smith, D., Worboys, K and Pickersgill, R W (2001) Three-dimensional structure of Erwinia chrysanthemi pectin methylesterase reveals a novel esterase active site Journal of Molecular Biology, 305, 951-960 Johansson K., El-Ahmad, M., Friemann, R., Jörnvall, H., Markovic, O and Eklund, H (2002) Crystal structure of plant pectin methylesterase Febs Letters, 514, 243-249 Kashyap, D R., Vohra, P K., Chopra, S and Tewari, R (2001) Applications of pectinases in the commercial sector: a review Bioresource Technology, 77, 215- 227 Leiting, V A and Wicker, L (1997) Inorganic cations and polyamines moderate pectinesterase activity Journal of Food Science, 62, 253-275 Lin, T.P., Liu, C.C., Chen, S.W., Wan, W.Y (1989) Purification and characterization of pectinmethylesterases from ficus awkuotsang Markino akenes Plant Physiol, 91, 14451453 Ludikhuyze, L., A Van Loey, Indrawati, C Smout & M Hendrickx,(2001) Effects of combined pressure and temperature on enzymes related to quality of fruits and vegetables: From kinetic information to process engineering aspects CRC Critical Reviews in Food Science & Nutrition, 43, 527–586 Ly Nguyen B., (2004), The combined pressure temperature stability of plant pectin methylesterase and their inhabitor, Docteraasproefschrift Nr 630 aan de Faculteit Bio÷ingenieurswetenschappen van de KU Leuven Maldonado, M.C., Strasser de Saad, A.M., Callieri, D (1994) Purification and characterization of Pectinesterase Produced by a Strain of Aspergillus niger Current Microbiology, 28, 193-196 Markovic, O and Janecek, S (2004) Pectin methylesterases: sequence-structural features and phylogenetic relationships Carbohydrate Research, 339, 2281- 2295 Mathewson, P.R (1988) Enzymes Inc., United State of American Pp: 20-35 Ngành Công nghệ thực phẩm Trang 39 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Moustacas, A.M and Natri, J (1991) Pectinmethylestarases metal-ions and plant cell-eall extension÷the role of metal-ions in plant cell÷wall extension Biochemistry Journal, 279, 351354 Nari, J., Noat, G and Ricard, J (1991) Pectin methylesterase, metal ions and plant cell-wall extension Hydrolysis of pectin by plant cell-wall pectin methylesterase Biochemical Journal, 279, 343-350 Nikolic ´, M.V., Mojovicb, L (2007) Hydrolysis of apple pectin by the coordinated activity of pectic enzymes Food Chemistry, 101, 1–9 Ortega N., S de Diego, M Perez-Mateos and M D Busto (2004) Kinetic properties and thermal behaviour of polygalacturonase used in fruit juice clarification Journal of Food Chemistry, 88(2): 209 – 217 Pitt, J.I and Hocking, A.D (1997) Fungi and Food Spoilage Journal of Food Science, 44, 210-241 Raper, K.B and Femmell, D.I (1965) The genus Aspergillus Chemistry and Biochemistry, 23, 686705 Rexova-Benkova, L and Markovic, O., 1976 Pectin enzymes Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, 33: 323-385 Sajjaanantakul Pitifer, 1991) Unal, M.U and Bellur, E (2009) Extraction and characterisation of pectin methylesterase from black carrot (Daucus carota L.) Food Chemistry, 116, 836–840 Verlent, I., Van Loey, A., Smout, C., Duvetter, T and Hendrickx, M (2004a) Purified tomato polygalacturonase activity during thermal and high pressure treatment Biotechnology and Bioengineering, 86, 63-71 Trang Web http://www.giaoducsuckhoe.net Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang x Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC 1: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Phương pháp trích ly PME Để trích ly enzyme huyền phù sau lên men, bổ sung dung dịch đệm citrate/phosphate (pH 4,5) với tỉ lệ 20 mL cho trung bình g bình Tiến hành khuấy gián đoạn huyền phù khoảng (10 phút khuấy lần) Sau lọc hỗn hợp giấy lọc, dịch trích sau lọc xem chiết xuất enzyme Phương pháp xác định hoạt tính PME (theo Crelier et al., 1995; trích dẫn Duvetter, 2007) Nguyên tắc Phương pháp dựa sở thủy phân dung dịch pectin enzyme PME Hoạt tính PME xác định cách đo lường lượng acid galacturonic giải phóng đơn vị thời gian nhiệt độ pH không đổi Hóa chất - Dung dịch pectin 3,5g/L (Pectin táo DE 75%, Sigma) dung dịch NaCl 0,12M Cân khối lượng pectin NaCl cần thiết Trộn NaCl pectin (để tránh pectin vón cục), rắc từ từ hỗn hợp vào cốc nước cất đun nóng sẵn đồng thời khuấy máy khuấy từ Để yên nhiệt độ phòng để pectin trương nở hịa tan, sau để khoảng 12 nhiệt độ ÷ 60C Sau dung dịch làm nóng đến 200C chuyển vào bình định mức có dung tích thích hợp định mức tới vạch ngấn nước cất, lắc lọc qua hai lớp vải có bơng Bảo quản dung dịch nhận tủ lạnh thời gian ngày - Dung dịch NaOH 0,01N Tiến hành Chuẩn bị cốc thủy tinh nhỏ Lấy 30mL dung dịch pectin pha sẵn cho vào cốc, điều chỉnh pH dung dịch pectin đến 4,5 dung dịch NaOH 0,01N Sau bổ sung 250µL dung dịch enzyme vào cốc, cốc cịn lại bổ sung 250µL dung dịch enzyme bị vô hoạt (1000C, 30 phút) làm mẫu đối chứng Trong suốt trình enzyme thủy phân pectin, pH dung dịch đuợc giữ không đổi (pH 4,5 nhiệt độ 30±10C) cách bổ sung NaOH 0,01N Kết Hoạt tính PME số mili đương lượng este thủy phân phút 1g enzyme Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Cách pha dung dịch đệm citrate-phosphate (pH 2,2 ÷ 8,0) pH Na2HPO4 0,2M (mL) Acid citric 0,1M (mL) 2,2 0,4 19,6 2,4 1,24 18,76 2,6 2,18 17,82 2,8 3,17 16,83 3,0 4,11 15,89 3,2 4,94 15,06 3,4 5,7 14,3 3,6 6,44 13,56 3,8 7,1 12,9 4,0 7,71 12,29 4,2 8,28 11,72 4,4 8,82 11,18 4,6 9,35 10,65 pH Na2HPO4 0,2M (mL) Acid citric 0,1M (mL) 4,8 9,86 10,14 5,0 10,3 9,7 5,2 10,72 9,28 5,4 11,15 8,85 5,6 11,6 8,4 5,8 12,09 7,91 6,0 12,63 7,37 6,2 13,22 6,78 6,4 13,85 6,15 6,6 14,55 5,45 6,8 15,45 4,55 7,0 16,47 3,53 7,2 17,39 2,61 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ 7,4 18,17 1,83 7,6 18,73 1,27 7,8 19,15 0,85 8,0 19,45 0,55 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xiii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ THỐNG KÊ Kết thống kê thí nghiệm ANOVA Table for Hoat Tinh PME by ND pectin Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3668,7 407,633 48,0 20 2,4 Within groups 169,85 , Total (Corr.) 3716,7 29 Multiple Range Tests for Hoat Tinh PME by ND pectin Method: 95,0 percent LSD ND pectin Count Mean Homogeneous Groups ,0 X ,25 5,0 ,5 13,0 19,0 23,0 3,5 26,0 29,0 X 31,0 XX 10 32,0 X 33,0 X X X X X X Contrast Difference +/- Limits - ,25 *-5,0 2,63856 - ,5 *-13,0 2,63856 - *-19,0 2,63856 - *-23,0 2,63856 - 3,5 *-26,0 2,63856 - *-29,0 2,63856 - *-31,0 2,63856 - *-33,0 2,63856 - 10 *-32,0 2,63856 ,25 - ,5 *-8,0 2,63856 ,25 - *-14,0 2,63856 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xiv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ ,25 - *-18,0 2,63856 ,25 - 3,5 *-21,0 2,63856 ,25 - *-24,0 2,63856 ,25 - *-26,0 2,63856 ,25 - *-28,0 2,63856 ,25 - 10 *-27,0 2,63856 ,5 - *-6,0 2,63856 ,5 - *-10,0 2,63856 ,5 - 3,5 *-13,0 2,63856 ,5 - *-16,0 2,63856 ,5 - *-18,0 2,63856 ,5 - *-20,0 2,63856 ,5 - 10 *-19,0 2,63856 - *-4,0 2,63856 - 3,5 *-7,0 2,63856 - *-10,0 2,63856 - *-12,0 2,63856 - *-14,0 2,63856 - 10 *-13,0 2,63856 - 3,5 *-3,0 2,63856 - *-6,0 2,63856 - *-8,0 2,63856 - *-10,0 2,63856 - 10 *-9,0 2,63856 3,5 - *-3,0 2,63856 3,5 - *-5,0 2,63856 3,5 - *-7,0 2,63856 3,5 - 10 *-6,0 2,63856 - -2,0 2,63856 - *-4,0 2,63856 - 10 *-3,0 2,63856 - -2,0 2,63856 - 10 -1,0 2,63856 - 10 1,0 2,63856 * denotes a statistically significant difference Kết thống kê thí nghiệm 2: Sự thay đổi hoạt tính PME nhiệt độ xử lý khác ANOVA Table for Muc thay doi hoat tinh by Nhiet Analysis of Variance - Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xv Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Source Sum of Squares Trường Đại học Cần Thơ Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 183804,0 30634,0 47764,7 28 1705,88 17,96 , Total (Corr.) 231569,0 34 Multiple Range Tests for Muc thay doi hoat tinh by Nhiet Method: 95,0 percent LSD Nhiet Count Mean Homogeneous Groups 60 48,6837 X 30 100,0 XX 55 118,48 35 164,342 XX 50 183,223 X 45 216,418 X 40 283,726 XX X Contrast Difference +/- Limits 30 - 35 *-64,3418 53,5084 30 - 40 *-183,726 53,5084 30 - 45 *-116,418 53,5084 30 - 50 *-83,2227 53,5084 30 - 55 -18,48 53,5084 30 - 60 51,3163 53,5084 35 - 40 *-119,384 53,5084 35 - 45 -52,0763 53,5084 35 - 50 -18,8809 53,5084 35 - 55 45,8618 53,5084 35 - 60 *115,658 53,5084 40 - 45 *67,308 53,5084 40 - 50 *100,503 53,5084 40 - 55 *165,246 53,5084 40 - 60 *235,042 53,5084 45 - 50 33,1954 53,5084 45 - 55 *97,9381 53,5084 45 - 60 *167,734 53,5084 50 - 55 *64,7427 53,5084 50 - 60 *134,539 53,5084 55 - 60 *69,7964 53,5084 * denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xvi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ Ảnh hưởng thời gian gia nhiệt đến thay đổi hoạt tính PME (Tính ổn định nhiệt PME) 3.1 Phân tích ANOVA ANOVA Table for Muc thay doi hoat tinh by Thoi gian XL nhiet Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 1,93295 14 ,138068 ,0244918 15 ,00163279 84,56 , Total (Corr.) 1,95744 29 Multiple Range Tests for Muc thay doi hoat tinh by Thoi gian XL nhiet Method: 95,0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups 80 ,225971 X 70 ,250316 X 60 ,276738 XX 55 ,358289 XX 50 ,381016 X 45 ,433155 XX 40 ,517433 XX 35 ,579572 X 30 ,591123 X 25 ,596123 X 20 ,723262 15 ,83631 X 10 ,884492 X ,993182 X 1,0 X X Contrast Difference +/- Limits - ,006818 ,0861273 - 10 *,115508 ,0861273 - 15 *,16369 ,0861273 - 20 *,276738 ,0861273 - 25 *,403877 ,0861273 - 30 *,408877 ,0861273 - 35 *,420428 ,0861273 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xvii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ - 40 *,482567 ,0861273 - 45 *,566845 ,0861273 - 50 *,618984 ,0861273 - 55 *,641711 ,0861273 - 60 *,723262 ,0861273 - 70 *,749684 ,0861273 - 80 *,774029 ,0861273 - 10 *,10869 ,0861273 - 15 *,156872 ,0861273 - 20 *,26992 ,0861273 - 25 *,397059 ,0861273 - 30 *,402059 ,0861273 - 35 *,41361 ,0861273 - 40 *,475749 ,0861273 - 45 *,560027 ,0861273 - 50 *,612166 ,0861273 - 55 *,634893 ,0861273 - 60 *,716444 ,0861273 - 70 *,742866 ,0861273 - 80 *,767211 ,0861273 10 - 15 ,0481818 ,0861273 10 - 20 *,16123 ,0861273 10 - 25 *,288369 ,0861273 10 - 30 *,293369 ,0861273 10 - 35 *,30492 ,0861273 10 - 40 *,367059 ,0861273 10 - 45 *,451337 ,0861273 10 - 50 *,503476 ,0861273 10 - 55 *,526203 ,0861273 10 - 60 *,607754 ,0861273 10 - 70 *,634176 ,0861273 10 - 80 *,65852 ,0861273 15 - 20 *,113048 ,0861273 15 - 25 *,240187 ,0861273 15 - 30 *,245187 ,0861273 15 - 35 *,256738 ,0861273 15 - 40 *,318877 ,0861273 15 - 45 *,403155 ,0861273 15 - 50 *,455294 ,0861273 15 - 55 *,478021 ,0861273 15 - 60 *,559572 ,0861273 15 - 70 *,585995 ,0861273 15 - 80 *,610339 ,0861273 20 - 25 *,127139 ,0861273 20 - 30 *,132139 ,0861273 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xviii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ 20 - 35 *,14369 ,0861273 20 - 40 *,205829 ,0861273 20 - 45 *,290107 ,0861273 20 - 50 *,342246 ,0861273 20 - 55 *,364973 ,0861273 20 - 60 *,446524 ,0861273 20 - 70 *,472947 ,0861273 20 - 80 *,497291 ,0861273 25 - 30 ,005 ,0861273 25 - 35 ,0165508 ,0861273 25 - 40 ,0786898 ,0861273 25 - 45 *,162968 ,0861273 25 - 50 *,215107 ,0861273 25 - 55 *,237834 ,0861273 25 - 60 *,319385 ,0861273 25 - 70 *,345807 ,0861273 25 - 80 *,370151 ,0861273 30 - 35 ,0115508 ,0861273 30 - 40 ,0736898 ,0861273 30 - 45 *,157968 ,0861273 30 - 50 *,210107 ,0861273 30 - 55 *,232834 ,0861273 30 - 60 *,314385 ,0861273 30 - 70 *,340807 ,0861273 30 - 80 *,365151 ,0861273 35 - 40 ,062139 ,0861273 35 - 45 *,146417 ,0861273 35 - 50 *,198556 ,0861273 35 - 55 *,221283 ,0861273 35 - 60 *,302834 ,0861273 35 - 70 *,329257 ,0861273 35 - 80 *,353601 ,0861273 40 - 45 ,0842781 ,0861273 40 - 50 *,136417 ,0861273 40 - 55 *,159144 ,0861273 40 - 60 *,240695 ,0861273 40 - 70 *,267118 ,0861273 40 - 80 *,291462 ,0861273 45 - 50 ,052139 ,0861273 ,0748663 ,0861273 45 - 55 45 - 60 *,156417 ,0861273 45 - 70 *,18284 ,0861273 45 - 80 *,207184 ,0861273 50 - 55 50 - 60 ,0227273 *,104278 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD ,0861273 ,0861273 Trang xix Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ 50 - 70 *,130701 ,0861273 50 - 80 *,155045 ,0861273 55 - 60 ,0815508 ,0861273 55 - 70 *,107973 ,0861273 55 - 80 *,132317 ,0861273 60 - 70 ,0264225 ,0861273 60 - 80 ,0507665 ,0861273 70 - 80 ,024344 ,0861273 * denotes a statistically significant difference Ảnh hưởng pH đến hoạt tính PME (U/mL) ANOVA Table for Hoat tinh PME by pH Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 5163,34 737,62 Within groups 284,607 16 17,7879 41,47 , Total (Corr.) 5447,95 23 Multiple Range Tests for Hoat tinh PME by pH Method: 95,0 percent LSD pH Count Mean Homogeneous Groups -2,5 ,0 X 3 ,0 X 3,5 4,26667 XX 7,46667 XX 9,96667 XX X 4,5 14,7667 5,5 30,4 44,1 X X Contrast Difference +/- Limits 2,5 - ,0 7,30019 2,5 - 3,5 -4,26667 7,30019 2,5 - *-9,96667 7,30019 2,5 - 4,5 *-14,7667 7,30019 Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xx Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ 2,5 - *-44,1 7,30019 2,5 - 5,5 *-30,4 7,30019 2,5 - *-7,46667 7,30019 - 3,5 -4,26667 7,30019 - *-9,96667 7,30019 - 4,5 *-14,7667 7,30019 - *-44,1 7,30019 - 5,5 *-30,4 7,30019 - *-7,46667 7,30019 3,5 - -5,7 7,30019 3,5 - 4,5 *-10,5 7,30019 3,5 - *-39,8333 7,30019 3,5 - 5,5 *-26,1333 7,30019 3,5 - -3,2 7,30019 - 4,5 -4,8 7,30019 - *-34,1333 7,30019 - 5,5 *-20,4333 7,30019 - 2,5 7,30019 4,5 - *-29,3333 7,30019 4,5 - 5,5 *-15,6333 7,30019 4,5 - 7,3 7,30019 - 5,5 *13,7 7,30019 - *36,6333 7,30019 5,5 - *22,9333 7,30019 * denotes a statistically significant difference Hoạt tính xúc tác NaCl đến PME ANOVA Table for A by NaCl Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 9,16667 1,83333 1,0175 12 ,169583 10,81 , 58 Total (Corr.) 10,1842 17 Multiple Range Tests for A by NaCl Method: 95,0 percent LSD NaCl Count Mean Homogeneous Groups 1,0 X Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxi Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ ,2 2,5 X ,05 3,0 XX ,1 3,25 XX ,12 3,375 XX ,15 3,625 X Contrast Difference +/- Limits - ,05 *-2,0 1,00765 - ,1 *-2,375 1,00765 - ,12 *-2,25 1,00765 - ,15 *-2,625 1,00765 - ,2 *-1,5 1,00765 ,05 - ,1 -,375 1,00765 ,05 - ,12 -,25 1,00765 ,05 - ,15 -,625 1,00765 ,05 - ,2 ,5 1,00765 ,1 - ,12 ,125 1,00765 ,1 - ,15 -,25 1,00765 ,1 - ,2 ,875 1,00765 ,12 - ,15 -,375 1,00765 ,12 - ,2 ,75 1,00765 ,15 - ,2 *1,125 1,00765 * denotes a statistically significant difference Hoạt tính xúc tác CaCl2 đến PME ANOVA Table for A_Ao by CaCl2 Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 5,83333 1,16667 Within groups 1,16667 12 ,0972222 12,00 , Total (Corr.) 7,0 17 Multiple Range Tests for A_Ao by CaCl2 Method: 95,0 percent LSD CaCl2 Count Mean Homogeneous Groups 1,0 X Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ ,015 2,0 X ,0075 2,33333 XX ,005 2,33333 XX ,0125 2,66667 X ,01 2,66667 X Contrast Difference +/- Limits - ,005 -,0075 *-1,33333 *-1,33333 ,5547 ,5547 - ,01 *-1,66667 ,5547 - ,0125 *-1,66667 ,5547 - ,015 *-1,0 ,5547 ,005 - ,0075 ,005 -,01 ,0 -,333333 ,5547 ,5547 ,005 - ,0125 -,333333 ,5547 ,005 - ,015 ,333333 ,5547 ,0075 - ,01 -,333333 ,5547 ,0075 - ,0125 -,333333 ,5547 ,0075 - ,015 ,333333 ,5547 ,01 - ,0125 ,0 ,5547 ,01 - ,015 *,666667 ,5547 ,0125 - ,015 *,666667 ,5547 * denotes a statistically significant difference Ngành Công nghệ thực phẩm – Khoa Nông nghiệp SHUD Trang xxiii ... Khoa Nông nghiệp SHUD Trang ii Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Đề tài: ? ?Một số yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính pectinmethylesterase từ Aspergillus niger? ??,... enzyme PME từ Aspergillus niger 31 Bảng 6: Ảnh hưởng pH đến ổn định hoạt tính enzyme PME từ A .niger .33 Bảng 7: Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến hoạt tính enzyme PME từ A .niger 34 Bảng 8: Ảnh hưởng. .. 36 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 32 2010 CHƯƠNG Trường Đại học Cần Thơ KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính PME từ nấm mốc Aspergillus niger chứng minh ảnh