Bài viết tiến hành đánh giá khả năng phát triển hình thức nuôi trồng nấm Linh chi thân thiện với tự nhiên, mang lại lợi ích thiết thực cho người dân. Sự thành công của hình thức nuôi cấy này có thể là gợi ý về những mô hình sinh thái lớn hơn trong tương lai.
No.16_June 2020|Số 16 – Tháng năm 2020| p.86-90 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC TÂN TRÀO ISSN: 2354 - 1431 http://tckh.daihoctantrao.edu.vn/ PHÂN LẬP VÀ NUÔI TRỒNG GIỐNG NẤM LINH CHI THU NHẬN TẠI XÃ TÂN TRÀO, HUYỆN SƠN DƯƠNG, TỈNH TUYÊN QUANG Vi Đại Lâm a , Lưu Hồng Sơn 1, Vũ Khánh Linh , Tạ Thị Lượng 1, Huỳnh Thị Thiệp 1, Nguyễn Thị Tình 1, Ngơ Xn Bình1,2 Trường Đại học Nơng Lâm Thái Nguyên Bộ Khoa học Công nghệ a Email: vidailam@tuaf.edu.vn Thông tin viết Ngày nhận bài:19/5/2020 Ngày duyệt đăng:10/6/2020 Từ khóa: Thử nghiệm; Ganoderma lucidum; phân lập; giống cấp 2; điều kiện tự nhiên Tóm tắt Nấm Linh chi loại nấm dược liệu có nhiều lợi ích cho sức khỏe, trồng phổ biến nhiều nơi Trong nghiên cứu này, nấm Linh chi thu nhận xã Tân Trào, huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang Giống nấm phân lập phương pháp nuôi cấy mô tăm nhằm cải thiện tốc độ lan phủ chất Các bịch nấm nuôi trồng tán tự nhiên Kết cho thấy giống nấm phân lập nuôi cấy thành công với thời gian lan phủ chất khoảng 14 ngày Thể nấm điều kiện bán tự nhiên có kích thước lớn hình thái đặc trưng nấm Linh chi Quy trình ni trồng áp dụng dễ dàng hộ gia đình phục vụ cho nhu cầu định người dân Mở đầu Nấm Linh chi (tên khoa học Ganoderma nói chung tỉnh miền núi phía bắc có mơi trường lucidum) loại nấm dược liệu có tác dụng nâng cao hệ tự nhiên thuận lợi cho việc nuôi trồng nấm Linh chi miễn dịch thể, có tác dụng tích cực tới hệ thần kinh, hệ tim mạch, hệ hơ hấp, hệ tiêu hóa, q trình điều trị Tuyên Quang, Thái Nguyên nói riêng Xuất phát từ ung thư kéo dài tuổi thọ [1,4,6] Những mẫu nấm Linh chi thu nhận từ môi trường hoang dại săn huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang thu nhận, lùng có giá thành cao hẳn so với nấm nuôi trồng nhân tạo lán trại Nhiều ý kiến cho triển hình thức ni trồng nấm Linh chi thân thiện với điều kiện khơng có chăm sóc người, nấm cần thích nghi với điều kiện tự nhiên bên ngồi phải phát huy khả cạnh tranh sinh tồn với vi sinh vật khác hệ sinh thái Sợi nấm cần phát triển mạnh, khả sinh bào tử tốt cân đối hợp chất tế bào, bao gồm hợp chất có ý nghĩa dược học [3, 5, 9] Trên giới, nấm Linh chi nuôi trồng bán tự nhiên khối gỗ, vùi lớp đất che phủ bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng khu nhà lưới Những mơ hình cịn gặp Việt Nam thực tế trên, mẫu nấm địa bàn xã Tân Trào, phân lập nuôi trồng nhằm đánh giá khả phát tự nhiên, mang lại lợi ích thiết thực cho người dân Sự thành cơng hình thức ni cấy gợi ý mơ hình sinh thái lớn tương lai Nội dung Thu mẫu Từ mẫu nấm Linh chi người dân thu nhận tự nhiên, lựa chọn thể lớn, chưa bị héo, nứt nẻ để thuận lợi cho trình phân lập mảnh mô lõi Mẫu vận chuyển phịng thí nghiệm, bảo quản điều kiện 5°C Q trình phân lập tiến hành mẫu nấm cịn tươi, mẫu nấm bảo quản V.D.Lam et al/ No.16_June 2020|p.86-90 lạnh khoảng tuần phân lập thường có rủi ro mốc hỏng cao.[2] Phân lập giống nấm Giống nấm Linh chi phân lập theo phương pháp nuôi cấy mô thể [7,10] Thể nấm xé đôi theo chiều dọc, sử dụng dao vô trùng cắt lấy mảnh mơ lõi có kích thước khoảng 0.5-1cm Mảnh mô nấm chuyển vào chai/túi tăm vô trùng, thấm ướt dung dịch PDA (Potato Dextrose Agar) có thành phần gồm 200 g/l khoai tây, glucose 20 g/l, peptone g/l Các mảnh mô nuôi bóng tối nhiệt độ phịng khoảng 20-300C, kiểm tra sau 2-3 ngày cấy mẫu Sản xuất giống nấm cấp Thóc ngun liệu để sản xuất giống nấm cấp Sau rửa nhiều lần nước sạch, thóc ngâm nước 12 giờ, luộc sơi tách vỏ, vớt thóc để khơ khoảng 15 phút, bổ sung 3% bột nhẹ, trộn Cho hỗn hợp thóc bột nhẹ vào túi bóng, khử trùng 121°C thời gian 180 phút, để nguội 24 Cấy que tăm chứa giống cấp theo tỉ lệ tăm bơng/túi thóc 5:1 Ni cấy điều kiện nhiệt độ phịng, ánh sáng Để thử nghiệm phương pháp làm giống mới, kế thừa ý tưởng sản xuất giống nấm thân mềm, tre có kích thước tương đương chiều dài bịch nấm quấn đầu Ngâm tre dung dịch PDA khoảng phút, để nước Cho tre vào túi bóng, khử trùng 121°C thời gian 180 phút Các túi tre để nguội 24 giờ, cấy giống mọc tăm theo tỉ lệ tăm : túi giống, ni cấy điều kiện thường, ánh sáng Sản xuất thể Nguyên liệu sản xuất nghiên cứu thân gỗ keo, loại gỗ dồi tỉnh miền núi Việt Nam Các đoạn gỗ keo đường kính khoảng 10 cm trở lên cắt thành đoạn ngắn khoảng 20-30 cm, ngâm nước 12h (không bổ sung thành phần khác), để nước đóng vào túi bóng Khử trùng theo phương pháp Tyndall 100°C thời gian 60 phút, để nguội Sau 48 tiến hành khử trùng lặp lại lần thứ hai 100°C thời gian 60 phút Cấy giống cấp với số lượng xấp xỉ thìa giống/1 bịch nấm Ni cấy nhiệt độ phịng, khơng có ánh sáng Khi sợi nấm lan phủ kín chất, loại bỏ túi bóng, vùi bịch nấm vào khay đất ẩm, có lỗ nước Phần đầu khối gỗ keo để hở lên mặt đất Nuôi cấy bóng cây, tưới nước đẫm khơng để bề mặt đất bị khô [8,7] Kết nghiên cứu Phân lập giống nấm Giống nấm Linh chi cấp phân lập phương pháp nuôi cấy mô thể mơi trường PDA túi tăm bơng Hình Giống nấm tăm bơng Hình cho thấy q trình ni cho kết tốt sau 9-10 ngày ni cấy Từ mảnh mô sợi nấm lan rộng bao phủ bề mặt tăm bơng Sợi nấm có màu trắng đồng nhất, không xuất khuẩn lạc vi khuẩn hay loại bào tử xanh, đen, vàng nấm mốc thường gặp Khi sợi nấm từ mảnh mơ thể bao phủ tồn bề mặt khối tăm bông, giống sử dụng để cấy truyền sản xuất giống nấm cấp Sản xuất giống nấm cấp Sợi nấm phát triển túi thóc cấy giống cấp tăm bơng có thời gian lan phủ kín túi chất (khối lượng 300g) khoảng 15 ngày Kết túi thóc cho kết tốt, sợi nấm mọc trắng, có mùi thơm nhẹ Khơng quan sát thấy túi thóc bị nhiễm mốc hay côn trùng gây hại Trong phương pháp sản xuất giống nấm truyền thống, mảnh mô phân lập môi trường PDA chứa agar, sản xuất giống cấp thường cần 20-30 ngày tính từ thời điểm cấy lên túi thóc [3] Với phương pháp thay tăm bông, thời gian rút ngắn hình dạng tăm bơng cho phép cấy giống nấm theo chiều dọc túi thóc, nhờ sợi nấm phát triển đồng loạt vị trí đáy túi miệng túi Kế thừa ý tưởng sản xuất giống nấm gỗ mềm, tre với hai đầu ngâm môi trường dinh dưỡng thử nghiệm V.D.Lam, et al/ No.16_June 2020|p.86-90 Hình 2: Thử nghiệm giống nấm cấp Các thử nghiệm gỗ keo cho kết tích cực, sợi nấm mọc dày, đồng theo chiều dọc bịch nấm (Hình 2) Các khối bơng hai đầu thấm đẫm dung dịch PDA có vai trị nơi dự trữ, cung cấp chất dinh dưỡng cho sợi nấm, thời gian mọc kín chất từ 15-20 ngày Mặt khác, trình chuẩn bị nguyên liệu theo phương pháp dễ dàng, nguồn nguyên liệu dễ tìm, chi phí thấp Đây gợi ý cho trình sản xuất giống nấm ăn dược liệu tương lai Sản xuất thể Ươm sợi Hình 3A: Bịch nấm Linh chi sau ngày ni cấy Để sản xuất thể quả, đoạn gỗ keo ngâm nước, khử trùng theo phương pháp Tyndall cấy giống cấp Q trình ni cấy sợi nấm cho kết tốt Sau khoảng ngày, quan sát thấy sợi nấm mọc từ hạt giống (Hình 3A) Các sợi nấm mọc đồng cho thấy giống cấp có chất lượng đáng tin cậy Để thử nghiệm, giống nấm tăm cấy trực tiếp vào bịch nấm, nhiên tốc độ sợi nấm lan phủ chất chậm, không thích hợp để làm giống nấm phục vụ sản xuất Sau 15-20 ngày, sợi nấm lan phủ kín bịch nấm Tiến hành loại bỏ túi bóng chuyển vào khay đất ẩm (Hình 3B) Hình 3B: Khay nấm Linh chi bóng Hình 3C: Thể nấm Linh Hình 3D: Thể nấm Linh chi sau 16 tuần ni chi sau tuần ni cấy cấy Hình 3: Mơ hình ni trồng nấm Linh chi bóng V.D.Lam, et al/ No.16_June 2020|p.86-90 Hình thành thể Tiếng Việt Trong điều kiện ni cấy tán ngồi trời, thể nấm Linh chi hình thành sau 1-2 tuần ni cấy (Hình Lê Văn Cơ, Nguyễn Thị Xuân San, Nguyễn Thị Thanh, Ngũ Trường Nhân, Khảo sát khả bắt gốc tự 3C) Sau khoảng 30 ngày, thể xịe rộng, có dạng hình DPPH, ABTS cao chiết từ số loài nấm linh chi thận đặc trưng nấm Linh chi Màu sắc thể màu đỏ đen (Amauroderma) thu hái tỉnh đắk lắk, Tạp chí Y tía, bề mặt có lớp phấn trắng mỏng Một khay nấm dược Cần Thơ, 2018, 16, 229-240 cho 3-4 lần thu hái thể (Hình 3D) So với việc nuôi trồng nấm Linh chi lán trại, Lê Xuân Thám., Nguyễn Lê Quốc Hùng., Đặng Ngọc q trình chăm sóc khay nấm khơng yêu cầu tưới hàng Quang., Bùi Thị Lương., 2009 Phân tích lồi nấm Linh ngày, lớp đất che phủ có vai trò giữ ẩm thời gian dài Chi Đen phát vườn quốc gia Cát Tiên, cho bịch nấm Đồng thời sợi nấm tiếp xúc với Đồng Nai-Lâm Đồng, Tạp chí Sinh học., 31(4), 55-64 nguồn khoáng chất tự nhiên đất Lớp đất che phủ Nguyễn Lân Dũng, Công nghệ nuôi trồng nấm không yêu cầu khử trùng hay bổ sung yếu tố hóa học (tập 2), NXB Nơng nghiệp, Hà Nội, 2003 Trong đất có chứa hệ vi sinh vật tự nhiên, Nguyễn Thị Thu Hương., Trương Thị Mỹ Chi., nhiều lồi xạ khuẩn cho có vai trị hỗ trợ 2010 Nghiên cứu tác dụng chống oxi hóa in vitro in trình phân giải cellulose, giúp nấm phát triển mạnh vivo số loài nấm linh chi (ganoderma lucidum) nấm vân chi (trametes versicolor), Tạp chí y học Trong nghiên cứu này, bịch nấm khử trùng Thành phố Hồ Chí Minh., 2(14), 1859-1779 phương pháp Tyndall đơn giản 100 C, dễ dàng áp dụng hộ gia đình Các bịch nấm có Tiếng Anh thể chuyển vào dụng cụ đơn giản nuôi khu Ahmet Unlu, Erdinc Nayir, Onder Kirca, Mustafa rừng trồng có độ ẩm cao, cách xa mặt đất, tránh côn Ozdogan, “Ganoderma Lucidum (Reishi Mushroom) trùng gây hại để tạo quần thể nấm Linh chi bán tự and cancer”, Journal of B.U.ON.: official journal of the nhiên, vừa có giá trị kinh tế, vừa có giá trị sinh thái, Balkan Union of Oncology, vol 21, no.4, pp 792-798, cảnh quan kết hợp với mơ hình tham quan, 2016 du lịch trải nghiệm D.N Quang., T.T Nga.,L.X Tham., 2011 Chemical Kết luận Composition of Vietnamese Black Quá trình phân lập nuôi trồng mẫu nấm Linh chi thu Lingzhi Amauroderma subresinosum Murr, Res J nhận Xã Tân Trào, Sơn Dương, Tuyên Quang thu Phytochemistry, 5, 216-221 kết sau: (1) Đã phân lập nuôi trồng Hyun Hur, "Cultural Characteristics and Logthành công mẫu nấm Linh chi thu nhận từ xã Tân Trào, Mediated Cultivation of the Medicinal Mushroom, huyện Sơn Dương, tỉnh Tuyên Quang phương pháp Phellinus linteus", Mycobiology, vol 36, no.2, pp 81nuôi cấy mô thể nấm (2) Giống nấm phân lập 87, 2008 phát triển tốt tăm chứa môi trường PDA (3) ISE Ueitele, P Chimwamurombe, NP KadhilaGiống nấm cấp sản xuất chất thóc với thời Muandingi, “Optimization of indigenous Ganoderma gian lan phủ sợi nấm khoảng tuần (4) Giống nấm lucidum productivity under cultivation in Namibia”, Int cấp thử nghiệm thành cơng tre có bổ Sci Technol J Namibia, vol 3, no.1, pp: 35-41, 2014 sung dung dịch PDA (5) Thể nấm khay nuôi Jue Wang, Bin Cao, Haiping Zhao, Juan Feng, trồng phát triển tốt điều kiện nuôi cấy trời, “Emerging Roles of Ganoderma Lucidum in Antidưới tán tự nhiên (6) Mơ hình ni trồng có tiềm Aging”, Aging Dis, vol.8, no.6, pp 691-707, 2017 giá trị dược liệu giá trị kinh tế, du lịch Subarna Roy, Miskat Ara Akhter Jahan, Kamal Kanta Das , Saurab Kishore Munshi, Rashed Noor, “Artificial Phương pháp ni cấy nghiên cứu Cultivation of Ganoderma lucidum (Reishi Medicinal áp dụng cho sở sản xuất quy mô nhỏ Các Mushroom) Using Different Sawdusts as Substrates”, thể tách chiết đánh giá hoạt chất dược American Journal of BioScience, vol 3, no.5, pp.178liệu nghiên cứu tương lai 182, 2015 TÀI LIỆU THAM KHẢO Isolation and cultivation reishi mushroom collecting in Tan Trao commune, Son Duong district, Tuyen Quang province Vi Dai Lam, Luu Hong Son, Vu Khanh Linh, Ta Thi Luong, Huynh Thi Thiep, Nguyen Thi Tinh, Ngo Xuan Binh Article info Recieved: 19/5/2020 Accepted: 10/6/2020 Keywords: Experiment, Ganoderma lucidum, isolation, spawn, natural condition Abstract Linh Chi mushroom is a medical mushroom with many benefits for health, which has been cultivated in many areas in Vietnam In this study, Linh Chi mushrooms are collected from Tan Trao commune, Son Duong district, Tuyen Quang province That mushroom is isolated by tissue cultivation on cotton swabs which contain PDA medium to improve expanding speed on substrate Linh Chi mushroom bags are cultivated in outdoor condition, under natural tree shadow The result showed that mushroom has been isolated and cultivated successfully with the expanding time about 14 days The size and shape of fruiting bodies in semi-natural condition are quite large and characterize Linh Chi mushroom The farming process can be easily applied at households to meet certain needs of the people ... Tân Trào, Sơn Dương, Tuyên Quang thu Phytochemistry, 5, 216-221 kết sau: (1) Đã phân lập nuôi trồng Hyun Hur, "Cultural Characteristics and Logthành công mẫu nấm Linh chi thu nhận từ xã Tân Trào,. .. 2020|p.86-90 lạnh khoảng tuần phân lập thường có rủi ro mốc hỏng cao.[2] Phân lập giống nấm Giống nấm Linh chi phân lập theo phương pháp nuôi cấy mô thể [7,10] Thể nấm xé đôi theo chi? ??u dọc, sử dụng dao... cứu Phân lập giống nấm Giống nấm Linh chi cấp phân lập phương pháp nuôi cấy mô thể môi trường PDA túi tăm bơng Hình Giống nấm tăm bơng Hình cho thấy q trình ni cho kết tốt sau 9-10 ngày nuôi