Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học cây chó đẻ răng cưa thân xanh (phylanthus amarus schum et thonn ) ở bình triều thăng bình quảng nam

i   ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI VƯƠNG THỊ PHƯƠNG HẠNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH (PHYLANTHUS AMARUS SCHUM ET THONN.) Ở BÌNH TRIỀU - THĂNG BÌNH - QUẢNG NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Đà Nẵng - 2014 ii   ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH (PHYLANTHUS AMARUS SCHUM ET THONN.) Ở BÌNH TRIỀU - THĂNG BÌNH - QUẢNG NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực : Vương Thị Phương Hạnh Lớp : 10 CHD Giáo viên hướng dẫn : Th.S Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng - 2014 iii   iv   ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP   Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA ….# "…   ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐  NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Vương Thị Phương Hạnh Lớp : 10CHD Tên đề tài: “Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học Chó đẻ cưa thân xanh (Phyllanthus amarus Schum et Thonn.) Bình Triều, Thăng Bình, Quảng Nam” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị • Ngun liệu: tồn (trừ rễ) Chó đẻ cưa thân xanh • Hóa chất: ethanol 96°, chloroform, đietylete, KOH, HCl, H2SO4, tinh thể KI, nước cất, CuSO4, FeCl3, vanilin, gelatin, acid acetic, nước cất • Dụng cụ thiết bị: - Cốc thủy tinh 100 ml, 250 ml, 500 ml, 1000 ml - Bình tam giác 250 ml, 500 ml, ống đong 10 ml, 50 ml, 100 ml - Bộ chiết soxhlet, phễu lọc, bếp điện, bếp cách thủy, tủ sấy, cân phân tích - Đũa thủy tinh, nhiệt kế, pipet thẳng, pipet bầu, ống nghiệm - Bản mỏng Silica gel GF254, đầu phun thuốc thử, ống mao quản, máy sấy - Máy đo GC - MS Nội dung nghiên cứu • Điều tra sơ bộ, thu gom xử lí ngun liệu • Dùng phương pháp chiết soxhlet để chiết tách chất • Xác định số số hóa lý nguyên liệu: độ ẩm, hàm lượng tro • Khảo sát thời gian chiết tối ưu với dung mơi ethanol 96° • Định tính số nhóm hợp chất có nguyên liệu phản ứng định tính hóa học phương pháp sắc ký lớp mỏng • Định danh thành phần hóa học dịch chiết nguyên liệu với ethanol 96° v   Giáo viên hướng dẫn: Th.S Đỗ Thị Thúy Vân Ngày giao đề tài: 01/10/2013 Ngày hoàn thành: 10/05/2014 Chủ nhiệm Khoa Giáo viên hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) PGS.TS Lê Tự Hải Th.S Đỗ Thị Thúy Vân Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày … tháng 05 năm 2014 Kết điểm đánh giá: Ngày… tháng 05 năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) \ vi   LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn giáo Th.S Đỗ Thị Thúy Vân tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo giảng dạy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa, trường đại học Sư phạm; anh chị cán Trung tâm Kỹ thuật tiêu chuẩn đo lường chất lượng II, thành phố Đà Nẵng nhóm bạn sinh viên lớp 10 CHD - khoa Hóa, trường đại học Sư phạm Đà Nẵng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đề tài Bước đầu làm quen với nghiên cứu khoa học nên khóa luận em khơng tránh khỏi thiếu sót, mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung quý thầy cô giáo để đề tài em hoàn thiện thân em thu nhận nhiều kiến thức kinh nghiệm nhằm phục vụ cho công việc tương lai Cuối cùng, em xin kính chúc q thầy giáo sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn Đà Nẵng, ngày 22 tháng 05 năm 2014 Sinh viên Vương Thị Phương Hạnh vii   MỤC LỤC Nhiệm vụ khóa luận tốt nghiệp i Lời cảm ơn iii Danh mục bảng vii Danh mục hình vẽ, sơ đồ viii Danh mục chữ viết tắt ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Tên gọi 1.1.3 Đặc điểm thực vật 1.1.4 Phân bố sinh thái 1.1.5 Kỹ thuật trồng chăm sóc Chó đẻ cưa thân xanh 1.1.6 Bộ phận dùng, cách thu hái Chó đẻ cưa thân xanh 1.1.7 Thành phần hóa học Chó đẻ cưa thân xanh 1.1.8 Công dụng Chó đẻ cưa thân xanh 1.1.9 Tác dụng dược lý Chó đẻ cưa thân xanh 11 1.1.10 Phân biệt lồi Chó đẻ 12 1.2 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH 14 1.2.1 Một số thuốc thơng dụng chữa bệnh từ Chó đẻ cưa thân xanh 14 1.2.2 Một số sản phẩm thuốc làm từ Chó đẻ cưa thân xanh để điều trị bệnh gan 16 1.3 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT SHOXLET 17 1.3.1 Nguyên tắc 17 1.3.2 Ưu nhược điểm phương pháp chiết shoxlet 18 1.4 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỚP MỎNG 19 1.4.1 Định nghĩa 19 viii   1.4.2 Cơ chế 19 1.4.3 Hệ số di chuyển 19 1.4.4 Cách tiến hành 20 1.5 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ GHÉP NỐI KHỐI PHỔ (GC - MS) 22 1.5.1 Định nghĩa 22 1.5.2 Cơng dụng máy Sắc ký khí ghép nối khối phổ 22 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  . 24  2.1 NGUYÊN LIỆU 24 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Phương pháp thu gom xử lý mẫu 24 2.2.2 Các phương pháp xác định tiêu hóa lý 24 2.2.3 Định tính nhóm hợp chất có Chó đẻ cưa thân xanh 25 2.2.3.1 Định tính phản ứng hóa học 25 2.2.3.2 Định tính Sắc ký lớp mỏng 27 2.2.3.2.1 Nhóm Ankaloid 27 2.2.3.2.2 Nhóm Lignan 28 2.2.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết Chó đẻ cưa thân xanh với dung mơi ethanol 96° 28 2.2.4.1 Khảo sát chọn thời gian tối ưu 28 2.2.4.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết ethanol 96° 28 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29  3.1 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 29 3.2 XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU 29 3.2 Thu hái nguyên liệu 29 3.2 Xử lý nguyên liệu 30 3.3 XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ TIÊU HÓA LÝ CỦA NGUYÊN LIỆU 30 3.3.1 Xác định độ ẩm 30 3.3.2 Xác định hàm lượng tro 31 ix   3.4 ĐỊNH TÍNH CÁC NHĨM HỢP CHẤT CHÍNH CĨ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH 31 3.4.1 Định tính phản ứng hóa học 31 3.4.2 Định tính phương pháp Sắc ký lớp mỏng 32 3.4.2.1 Nhóm Ankaloid 32 3.4.2.2 Nhóm lignan 33 3.5 CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DỊCH CHIẾT CHĨ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH VỚI DUNG MƠI ETHANOL 96° 34 3.5.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu với dung môi ethanol 96° 34 3.5.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết ethanol 96 ° Chó đẻ cưa thân xanh 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39  TÀI LIỆU THAM KHẢO 40   x   DANH MỤC CÁC BẢNG Số Tên Bảng 1.1 Phân biệt Chó đẻ cưa thân xanh Chó đẻ thân đỏ Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Kết xác định độ ẩm mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh Kết xác định hàm lượng tro mẫu Chó đẻ cưa thân xanh Kết định tính số nhóm hợp chất có dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh Sự phụ thuộc giá trị d (g/ml) vào thời gian chiết với dung mơi ethanol 96° Thành phần hóa học dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° Trang 13, 14 30 31 32 35 36, 36 28   Dung dịch đối chiếu: Lấy g bột Chó đẻ cưa thân xanh (mẫu chuẩn), tiến hành chiết tương tự với dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm lên mỏng khoảng 20 µl dung dịch thử Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng, phun thuốc thử Dragendorff (TT) Sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết giá trị Rf màu sắc sắc ký đồ dung dịch đối chiếu 2.2.3.2.2 Nhóm Lignan [18], [19] Bản mỏng Silica gel GF254 Dung môi khai triển: n-hexan : aceton : ethyl acetat (74 : 12 : 8) Dung dịch thử: Cân khoảng 10 g bột dược liệu, chiết soxhlet nhiệt độ phòng (25 ± °C) với 100 ml methanol 10 giờ, lọc lặp lại trình tương tự (2 x 100 ml) với methanol Gộp dịch chiết cồn lại cô đến cắn Hòa tan cắn thu 1ml methanol dùng làm dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm lên mỏng khoảng 20 µl dung dịch thử Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng, phun thuốc thử vanilin 1% hỗn hợp acid sunfuric đậm đặc : ethanol (5 : 95) Sấy mỏng 110 °C 25 phút màu 2.2.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° [15] 2.2.4.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu Cân khoảng 10 g bột nguyên liệu, gói vào giấy lọc, tiến hành chiết soxhlet 80 o C 150ml dung môi ethanol 96° với thời gian chiết (M1), (M- 2), (M3), (M4) 10 (M5) Dịch chiết thu được, tiến hành quay đuổi dung mơi đến cịn lại khoảng 30 ml dịch chiết, đong lấy thể tích (V) sau đem cân khối lượng (m) Lập tỉ số d = m/V (g/ml) dịch chiết So sánh tỉ số d có kết 2.2.4.2 Xác định thành phần hóa học có dịch chiết ethanol 96° Tiến hành chiết soxhlet bột nguyên liệu với dung môi ethanol 96° thời gian tối ưu xác định Dịch chiết thu được, đem cô quay đuổi dung môi, để nguội lọc lần đến khơng cịn thấy cặn cho mẫu vào ống lấy mẫu gửi đo GC - MS phịng phân tích số 02 Ngơ Quyền, thành phố Đà Nẵng 29   CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU: SƠ ĐỒ 3.1: SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU Mẫu Chó đẻ cưa thân xanh Thu xử lý nguyên liệu Định tính Bột Chó đẻ nhóm hợp chất cưa thân xanh Xác định độ ẩm, hàm lượng tro Chiết Soxhlet Khảo sát thời gian với ethanol 96° chiết tối ưu Dịch chiết ethanol 96° Nghiên cứu, xác định thành phần hợp chất (Đo GC - MS) 3.2 XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU 3.2.1 Thu hái nguyên liệu Cây Chó đẻ cưa thân xanh thu hái Bình Triều, Thăng Bình, Quảng Nam 30   3.2.2 Xử lý nguyên liệu Cây Chó đẻ cưa thân xanh sử dụng toàn phần mặt đất, bao gồm thân, lá, hóa Mẫu nguyên liệu xử lý loại bỏ tạp chất cắt bỏ, rửa sạch, cắt khúc dài khoảng cm sau sấy khô tủ sấy nhiệt độ khoảng 60 °C (Hình 3.1) Ngun liệu sau sấy khơ nghiền máy xay thành bột mịn, bảo quản dụng cụ thích hợp dùng làm mẫu nghiên cứu (Hình 3.1) Hình 3.1: Nguyên liệu sau phơi khơ bột Chó đẻ cưa thân xanh 3.3 XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ TIÊU HÓA LÝ CỦA NGUYÊN LIỆU 3.3.1 Xác định độ ẩm Kết xác định độ ẩm mẫu nghiên cứu thể bảng 3.1 Bảng 3.1: Kết xác định độ ẩm mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh STT mo(g) m1(g) m2(g) ω (%) 19,0265 20,0318 19,9860 4,56 20,8595 21,8605 21,8143 4,62 19,0060 20.0096 19,9621 4.73 Độ ẩm trung bình Trong đó: mo (g) khối lượng cốc cân m1 (g) khối lượng mẫu ban đầu m2 (g) khối lượng cốc mẫu sau sấy ω (%) độ ẩm mẫu 4,63 31   Nhận xét: Từ kết Bảng 3.1 cho thấy độ ẩm trung bình nguyên liệu Chó Đẻ cưa thân xanh khơ, sau sấy 105°C 4.63% Với độ ẩm thấp, nguyên liệu lâu bị hư hỏng, giữ chất lượng trình làm thử nghiệm Đạt tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV quy định không 12% 3.3.2 Xác định hàm lượng tro Kết xác định hàm lượng tro trung bình mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2: Kết xác định hàm lượng tro mẫu Chó đẻ cưa thân xanh STT mo(g) m1(g) m2(g) M(%) 31,784 3,537 31,987 5,73 39,672 3,489 39,893 6,33 32,653 3,742 32,851 5,29 Hàm lượng tro trung bình Trong đó: 5,78 mo(g) khối lượng cốc sứ m1(g) khối lượng mẫu ban đầu m2(g) khối lượng cốc sứ mẫu sau nung M(%) hàm lượng tro mẫu Nhận xét: Vậy hàm lượng tro trung bình mẫu nghiên cứu 5,78% Kết hàm lượng tro đạt tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV qui định không 20% 3.4 ĐỊNH TÍNH CÁC NHĨM HỢP CHẤT CHÍNH CĨ TRONG CÂY CHĨ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH [9], [18], [19] 3.4.1 Định tính phản ứng hóa học Kết định tính nhóm hợp chất có mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh trình bày bảng 3.3 32   Bảng 3.3: Kết định tính số nhóm hợp chất có dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh STT Nhóm chất Đường khử Ankaloid Thuốc thử Hiện tượng đặc hiệu Kết Felinh A, B Kết tủa đỏ gạch ++ Mayer Kết tủa màu vàng + Dragendoff Kết tủa màu vàng da cam ++ Bouchardar Kết tủa màu đỏ nâu ++ Flavonoid Zn/ HCl Màu đỏ nâu ++ Poliphenol FeCl3 Xanh thẫm ++ Coumarin KOH Lớp phát quang màu vàng xanh ++ Tanin Gelatin Dung dịch vẩn đục + Ghi chú: (+): phản ứng dương tính (++): phản ứng dương tính rõ Nhận xét: Từ bảng kết định tính số nhóm hợp chất dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh, chúng tơi nhận thấy mẫu nghiên cứu có chứa hợp chất thuộc nhóm chất sau: đường khử, ankaloid, flavonoid, tanin, poliphenol, coumarin 3.4.2 Định tính phương pháp Sắc ký lớp mỏng [9], [18], [19] 3.4.2.1 Nhóm Ankaloid [9] Qua trình chiết ta thu kết cảm quan cắn dung dịch thử dung dịch chuẩn thể qua hình 3.2 3.3 Hình 3.2: Cắn chloroform dung Hình 3.3: Cắn chloroform dung dịch thử Chó đẻ cưa thân xanh dịch chuẩn Chó đẻ cưa thân xanh 33   Sau trình triển khai sắc ký lớp mỏng ta thu kết cảm quan sắc ký đồ dung dịch chuẩn dung dịch thử mẫu nguyên cứu Chó đẻ cưa thân xanh thể hình 3.4 Hình 3.4: Sắc ký đồ định tính nhóm Ankaloid dung dịch chuẩn dung dịch thử mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh Nhận xét: Sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch chuẩn mẫu nghiên cứu thu gồm vết có giá trị Rf màu sắc Giá trị Rf vết là: 0,48; 0,58; 0,64; 0,82; 0,92 (hình 3.4) Các vết tách tương đối cách xa khơng có tượng trùng vết, hàm lượng chất chiết thấp nên vết khơng rõ Đặc biệt sắc ký đồ có vết có hình dạng gần giống “vết cua” đặc trưng cho Chó đẻ cưa thân xanh [9] 3.4.2.2 Nhóm Lignan [18], [19] Qua trình chiết ta thu kết cảm quan cắn dung dung dịch thử dung dịch chuẩn thể qua hình 3.5 Hình 3.5: Cắn methanol dung dịch thử Chó đẻ cưa thân xanh 34   Sau trình triển khai sắc ký lớp mỏng ta thu kêt cảm quan sắc ký đồ dung dịch thử mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh thể hình 3.6 Hình 3.6: Sắc ký đồ định tính nhóm lignan dung dịch thử Chó đẻ cưa thân xanh Nhận xét: Sắc ký dung dịch thử thu gồm có vết có giá trị Rf sau: 0,08; 0,24; 0,29; 0,40; 0,48; 0,54; 0,65; 0,89 (hình 3.6) Các vết tách tương đối cách xa khơng có tượng trùng vết Đặc biệt sắc ký đồ có hai vết có giá trị Rf 0,24 0,29 phyllanthin hypophyllanthin thuộc nhóm hợp chất lignan có Chó đẻ cưa thân xanh [18], [19] Tuy nhiên hàm lượng hai chất tương đối nên vết mờ so với vết khác sắc ký đồ *Nhận xét chung: Qua định tính phương pháp sắc ký lớp mỏng mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh, chúng tơi nhận thấy mẫu nghiên cứu có hợp chất thuộc nhóm ankaloid có hợp chất thuộc nhóm lignan 3.5 CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DỊCH CHIẾT CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH VỚI DUNG MÔI ETHANOL 96° 3.5.1 Khảo sát chọn thời gian chiết tối ưu với dung môi ethanol 96° Kết cảm quan lượng sản phẩm tạo thành theo thời gian chiết giờ, giờ, giờ, giờ, 10 thể hình 3.7 35   Hình 3.7: Dịch chiết ethanol 96° thời gian khác Kết khảo sát thời gian chiết tối ưu thể bảng 3.4 Bảng 3.4: Sự phụ thuộc giá trị d (g/ml) vào thời gian chiết với dung môi ethanol 96° STT Thời gian (giờ) V(ml) mcốc(g) mcốc+dịch(g) mdịch(g) d(g/ml) M1 30 62.257 85.861 23.604 0.7868 M2 30 49.586 73.503 23.917 0.7972 M3 30 54.803 78,995 24.192 0.8064 M4 30 48,419 73.183 24.764 0.8255 M5 10 30 47.056 71.859 24,803 0,8268 88 Hình 3.8: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc giá trị d vào thời gian chiết dung môi ethanol 96° Nhận xét: Từ đồ thị Hình 3.8 cho thấy giá trị d tăng dần chiết khoảng thời gian từ - 10 giờ, chứng tỏ lượng chất chiết tăng theo thời gian Tuy nhiên, giá trị d tăng rõ rệt ứng với thời gian mẫu M4 Từ h trở đi, giá trị d có tăng khơng đáng kể Do đó, chúng tơi chọn thời gian chiết tối ưu tương ứng với mẫu M4 36   3.5.2 Xác định thành phần có dịch chiết ethanol 96° Chó đẻ cưa thân xanh phương pháp GC - MS Kết đo GC - MS thu sau: Hình 3.9: Sắc kí đồ GC - MS dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° Từ kết thu sắc kí đồ GC - MS, so sánh kiện phổ cấu tử với phổ chuẩn cơng bố có thư viện NIST, ta thu kết định danh thành phần hóa học dịch chiết Chó đẻ cưa thân xanh với ethanol 96° GC - MS, thể bảng 3.5 Bảng 3.5: Thành phần hóa học dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° S Thời Khối T gian lượng T lưu phân tử 5,688 134,13 Tên Tỉ lệ Cấu trúc – Coumaranone (%) 0,6 O O O 6,620 8,868 126,11 180,00 1,2,3-Benzenetriol 4-((1E)-3-Hydroxy-1propenyl)-2- H H O O 0,81 H O H C O H H O 0,57 37   methoxyphenol O 10,329 256,42 n-Hexadecanoic acid 11,948 296,53 Phytol 2,70 OH HO 0,31 9,12,15O 12,339 278,429 Octadecatrienoic acid, 3,35 OH (Z,Z,Z)- HO 29,482 352,297 Daphnoretin O O O O O 1,07 (3H)-Furanone, 3,4HO 31,219 354,00 bis (1,3-benzodioxol - O O O O O 5- ylmethyl) dihydro-, 1,48 (3R-trans)Ethanone, 34,339 278,00 2- (1H- N imidazo [4,5-b] pyridin -2-yl) -1- NH N 31,986 364,69 11 34,189 400,68 19,59 N (4- morpholyl)10 O S O 1-Hexacosene 1,65 5- Cholestene-3-ol, 24- 0,36 methylHO 12 34,722 278,52 1,19 – Eicosadiene 0,58 13 36,180 308,58 1- Docosene 3,75 14 34,908 412,69 Stigmasterol 0,96 HO OH 15 39,786 456,00 0,28 Ursolic acid O OH 38   Nhận xét: Kết thu bảng 3.5 cho thấy thành phần hóa học dịch chiết mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° hỗn hợp gồm nhiều chất Trong chủ yếu acid hữu cơ, anken mạch thẳng dài 2026C, ngồi có dẫn xuất phenol, ete vòng Cụ thể định danh câu tử tiêu biểu sau: 2-Coumaranone (0,6%); 1,2,3-Benzenetriol (0,81%); 4-((1E)-3-Hydroxy-1propenyl)-2-methoxyphenol (0,57%); n-Hexadecanoic acid (2,70%); Phytol (0,31%); 9,12,15-Octadecatrienoic acid,(Z,Z,Z)- ( 3,35%); Daphnoretin (1,07%); (3H)Furanone, 3,4-bis (1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)dihydro-,(3R-trans)- (1,48%); 1Hexacosene (1,65%); 5-Cholestene-3-ol,24-methyl (0,36%); 1,19-Eicosadiene (0,58%); Stigmasterol (0,96%); 1-Docosene (3,75%); Ursolic acid (0,28%) Đáng ý số thành phần định danh có hợp chất có hoạt tính sinh học cao như: n-Hexadecanoic acid chiếm 2,7%; Ursolic acid chiếm 0,28%; Daphnoretin chiếm 1,07%; Stigmasterol 0,96%; Phytol chiếm 0,31% Trong đó: • n-Hexadecanoic acid axit béo omega - 7, theo nghiên cứu có tác dụng làm giảm lượng cholesterol máu • Ursolic acid có hoạt tính kháng khuẩn, chống viêm, chống oxi hóa, ngăn ngừa khối u • Daphnoretin thử nghiệm có hoạt tính kháng virut chống khối u mạnh • Stigmasterol có hoạt tính chống ơxi hóa, phịng chống ung thư định ung thư tuyến tiền liệt, ung thư vú • Phytol tiền tố vitamin K1 vitamin E - hai số vitamin quan trọng thể người 39   KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua nghiên cứu thực nghiệm, thu số kết sau: Xác định số số hóa lý mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh: - Độ ẩm trung bình: 4,63% - Hàm lượng tro: 5,78% Đã định tính xác định mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh số hợp chất thuộc nhóm chất sau: flavonoid, poliphenol, tanin, đường khử, ankaloid, coumarin có hợp chất thuộc nhóm lignan Khảo sát thời gian chiết tối ưu hợp chất mẫu nghiên cứu Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi ethanol 96° phương pháp chiết soxhlet: thời gian chiết tối ưu với dung môi ethanol 96° là Bằng phương pháp GC - MS định danh thành phần hóa học số hợp chất dịch chiết ethanol 96° mẫu nguyên cứu Chó đẻ cưa thân xanh như: 2-Coumaranone (0,6%); 1,2,3-Benzenetriol (0,81%); 4-((1E)-3-Hydroxy-1propenyl)-2-methoxyphenol (0,57%); n-Hexadecanoic acid (2,70%); Phytol (0,31%); 9,12,15-Octadecatrienoic acid,(Z,Z,Z)- ( 3,35%); Daphnoretin (1,07%); (3H)Furanone, 3,4-bis (1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)dihydro-,(3R-trans)- (1,48%); 1Hexacosene (1,65%); 5-Cholestene-3-ol,24-methyl (0,36%); 1,19-Eicosadiene (0,58%); Stigmasterol (0,96%); 1-Docosene (3,75%); Ursolic acid (0,28%) Trong đó, cấu tử n-Hexadecanoic acid, Ursolic acid, Stigmasterol, Daphnoretin, Phytol có hoạt tính sinh học mạnh, sử dụng nhiều dược phẩm KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu để tách cấu tử có hoạt tính sinh học cao Chó đẻ cưa thân xanh để tìm hiểu hoạt tính sinh học nghiên cứu phản ứng chuyển hóa chúng Tiếp tục nghiên cứu chiết tách định danh hợp chất hóa học dịch chiết Chó đẻ cưa thân xanh với dung môi khác Nghiên cứu phân lập hoạt chất có hoạt tính sinh học Chó đẻ cưa thân xanh Mở rộng phạm vi nghiên cứu thành phần hóa học Chó đẻ cưa thân xanh địa bàn khác 40   TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, năm 2010 [2] Dược Điển Việt Nam IV , NXB Hà Nội, năm 1999 [3] Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học Hà Nội, năm 2003 [4] Phan Văn Kiệm, Trần Huy Thái, Nguyễn Quang Hùng, Nguyễn Tiến Đạt, Nguyễn Hoài Nam, Nguyễn Quang Hưng, Ninh Khắc Bản Nghiên cứu thành phần hóa học chó đẻ thân xanh (phylanthus amarus), Tạp chí Khoa học Công nghệ, số 3, trang 101-105, năm 2009 [5] DS Lê Thị Kim Phụng, cỏ bảo vệ gan, Đại học Y dược Tp Hồ Chí Minh [6] Ngơ Đức Trọng, Nghiên cứu hóa học nhận dạng số nhóm chất có Chó đẻ cưa (Phyllanthus urinaria L, Euphorbiace) Luận văn Thạc sĩ Đại học Sư phạm Thái Nguyên, năm 2009 [7] Bùi Xuân Vững, Phân tích cơng cụ hóa học Đại học Sư phạm Đà Nẵng, năm 2010 [8] Vũ Văn Vụ, Trương Nữ Thanh Tâm, Lê Xuân Thám, Nguyễn Thị Hoà, Nguyễn Thị Nụ, Nghiên cứu nhân giống in vitro thành phần khoáng Hạ Diệp Châu Phyllathus amarus phân tích kích hoạt Neutron kết hợp, Tạp chí Dược học, số 6, năm 1999 [9] http://luanvan.net.vn/luan-van/de-tai-xay-dung-tieu-chuan-cho-duoc-lieu-cho-derang-cua-21100/ [10] http://en.wikipedia.org/wiki/Phyllanthus_amarus [11] Chuyên trang nông nghiệp Sở khoa học công nghệ Hải Dương Kỹ thuật trồng Diệp hạ châu (Chó đẻ), năm 2012 [12] http://thaoduocminhtam.com/cay-thuoc-vi-thuoc/diep-ha-chau-dang-phyllanthusamarus-schum-et-thonn.html [13] http://thuocdieutri.vn/diep-ha-chau-va-tac-dung-cua-diep-ha-chau-dang/ 41   [14] http://www.doko.vn/luan-van/nghien-cuu-anh-huong-cua-mat-do-va-thoi-vu-densinh-truong-phat-trien-nang-suat-va-ham-luong-hoat-chat-phyllanthin-cua-hai-loai-di326544 [15] Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học Khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng, Đà Nẵng, năm 2010 Tiếng Anh [16] Fernand, Initial characterization of crude extracts from phyllanthus amarus schum and Thonn and Quassia Amara L using normal phase thin layer chromatography Master of science Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College, năm 2003 [17] Krithikaa et al., Isolation, characterization and antioxidative effect of phyllanthin against CCl4-induced toxicity in HepG2 cell line, Chemico-Biological Interactions, 181: 351-358, năm 2009 [18] Preeti Sagar NAYAK*, Anubha UPADHYAY, Sunil Kumar DWIVEDI & Sathrupa RAO, Quantitative determination of phyllanthin in Phyllanthus amarus by High-performance thin layer chromatography, India, năm 2010 [19] Arvind K Tripathi, Ram K Vemra, Anil K Gupta, Madan M Gupta* and Suman P S Khanuja, Quantitative Determination of Phyllanthin and Hypophyllanthin in Phyllanthus, Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants, P.O CIMAP, India, năm 2006 [20] Vishwavidyalaya, Phyllanthus amarus: Etnomedicinal uses, phytochemistry and pharmacology: A review, Journal of Ethnopharmacology, 138, 286-313, năm 2011 42   PHỤ LỤC ... tách, xác định thành phần hóa học Chó đẻ cưa thân xanh (Phyllanthus amarus Schum et Thonn. ) Bình Triều - Thăng Bình - Quảng Nam? ?? Với đề tài chúng tơi muốn nghiên cứu tìm hiểu thành phần hóa học. .. ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HƠI Tên đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA THÂN XANH (PHYLANTHUS AMARUS SCHUM ET THONN. ) Ở BÌNH TRIỀU... tách, xác định thành phần hóa học Chó đẻ cưa thân xanh (Phyllanthus amarus Schum et Thonn. ) Bình Triều, Thăng Bình, Quảng Nam? ?? Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị • Ngun liệu: tồn (trừ r? ?) Chó đẻ cưa thân