Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học trong dịch chiết thân cây chùm ngây

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HĨA HỌC TRẦN CƠNG TÙNG NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG DỊCH CHIẾT THÂN CÂY CHÙM NGÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Đà Nẵng, 04/2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG DỊCH CHIẾT THÂN CÂY CHÙM NGÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Sinh viên thực : TRẦN CÔNG TÙNG Lớp : 15CHDE Giảng viên hƣớng dẫn : ThS TRẦN THỊ DIỆU MY Đà Nẵng, 04/2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Trần Công Tùng Lớp : 15CHDE Tên đề tài: “ Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học hoạt tính sinh học dịch chiết thân chùm ngây” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị: - Nguyên liệu: Bột thân chùm ngây - Dụng cụ: Máy cô quay chân không, lị nung, cân phân tích, bình hút ẩm, cốc thủy tinh, bình tam giác, bình định mức, giấy lọc, phễu chiết,… - Một số hóa chất khác đƣợc sử dụng nhƣ n-hexan, CH2Cl2, EtOAc, nƣớc cất - Thiết bị: Các thiết bị xác định cấu trúc hóa học chất: Phổ khối GC-MS Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Khoa Sinh – Môi trƣờng trƣờng Đại học Sƣ phạm- Đại học Đà Nẵng Nội dung nghiên cứu: - Xác định số tiêu hóa lý: Độ ẩm, hàm lƣợng tro, hàm lƣợng kim loại nặng - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình chiết: Thời gian tỉ lệ Rắn/Lỏng tối ƣu - Điều chế cao tổng chiết lần lƣợt qua dung mơi, từ thu đƣợc cao ứng với phân đoạn - Xác định thành phần hóa học dịch chiết cao cuối etanol - Thử hoạt tính sinh học: Chống oxy hóa, kháng khuẩn gây độc tế bào ung thƣ gan Hep3B Giáo viên hƣớng dẫn : ThS.Trần Thị Diệu My Ngày giao đề tài : 01/09/2018 Ngày hoàn thành : 20/04/2019 Chủ nhiệm khoa Giảng viên hƣớng dẫn (Ký ghi rõ họ, tên) (Ký ghi rõ họ, tên) PGS.TS Lê Tự Hải ThS Trần Thị Diệu My Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày 27 tháng năm 2019 Kết điểm đánh giá: Đà Nẵng, ngày 27 tháng năm 2019 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ, tên) LỜI CẢM ƠN Sau nghiên cứu học tập trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng, nổ lực thân giúp đỡ, động viên, khích lệ thầy cơ, bạn bè ngƣời thân, em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc chân thành đến giảng viên – cô Trần Thị Diệu My tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài khóa luận đƣợc hồn thành nhƣ báo cáo tiến độ chƣơng trình đào tạo Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo cán phịng thí nghiệm Khoa Hóa học – Trƣờng Đại học Sƣ phạm Đà Nẵng Nhà trƣờng hỗ trợ kiến thức, sở vật chất, trang thiết bị kỹ thuật, dụng cụ thí nghiệm giúp em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn gia đình ngƣời thân, bạn bè động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình học tập hồn thành khóa luận Do điều kiện chủ quan khách quan, chắn không tránh khỏi thiếu sót, nên em mong nhận đƣợc lời góp ý chân tình, thiết thực từ q thầy bạn bè để khóa luận đạt đến hoàn thiện chỉnh chu Trân trọng cảm ơn! Đà Nẵng, ngày 20 tháng năm 2019 Sinh viên thực Trần Công Tùng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .8 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU .9 MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU ĐỐI TƢỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 4.1 Phƣơng pháp nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm BỐ CỤC CỦA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP .3 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY CHÙM NGÂY .4 1.1.1 Phân loại khoa học phân bố 1.1.2 Đặc điểm thực vật .4 1.1.3 Trồng trọt 1.1.4 Công dụng 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHÙM NGÂY TRONG NƢỚC 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CÂY CHÙM NGÂY NƢỚC NGỒI .7 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 NGUYÊN LIỆU, HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU .11 2.1.1 Nguyên liệu .11 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu .11 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.2.1 Xác định số tiêu hóa lý .12 2.2.2 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến q trình chiết hợp chất hóa học mẫu bột thân Chùm ngây 14 2.2.3 Khảo sát hàm lƣợng protein 15 2.2.4 Sơ đồ điều chế cao chiết 16 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 23 3.1.1 Độ ẩm 23 3.1.2 Hàm lƣợng tro 23 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại nặng 24 3.1.4 Hàm lƣợng protein 25 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH CHIẾT HỢP CHẤT HÓA HỌC CÓ TRONG MẪU BỘT THÂN CÂY CHÙM NGÂY TRONG DUNG MÔI ETHANOL .26 3.2.1 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết ngâm dầm 26 3.3 KẾT QUẢ ĐIỀU CHẾ CAO CHIẾT 30 3.4 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC DỊCH CHIẾT TRONG PHÂN ĐOẠN N-HEXAN VÀ ETHANOL (CAO CUỐI) TỪ MẪU BỘT THÂN CÂY CHÙM NGÂY 31 3.4.1 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định .31 3.4.2 Kết hoạt tính chống oxy hóa quét gốc tự DPPH 32 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT CUỐI CÙNG MẪU BỘT THÂN CÂY CHÙM NGÂY BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐO PHỔ GC – MS 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 KẾT LUẬN 39 KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT EtOH : Ethanol CH2Cl2 : Diclomethane DDPH : 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl EtOAc : Ethylacetate AAS : Atomic Absorption Spectrophotometric GC-MS : Gas chromatography – Mass spectrometry DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng bảng 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 Kết khảo sát độ ẩm mẫu bột thân Chùm ngây Kết khảo sát hàm lƣợng tro mẫu bột thân Chùm ngây Kết khảo sát hàm lƣợng số kim loại nặng mẫu bột thân Chùm ngây Kết khảo sát thời gian chiết ngâm dầm dung môi ethanol Kết khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng chiết ngâm dầm dung môi ethanol Khối lƣợng cao chiết phân đoạn Trang 23 24 25 27 29 30 Nồng độ ức chế tồi thiểu MIC kháng vi sinh vật kiểm định 4.1 mẫu thử nghiệm 31 4.2 Kết hoạt tính chống oxy hóa DPPH cao n-hexan 32 4.3 Kết hoạt tính chống oxy hóa DPPH cao ethanol 32 4.4 5.1 Kết sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào Hep3B mẫu cao ethanol Thành phần hóa học dịch chiết cao cuối ethanol từ mẫu bột thân Chùm ngây 33 35 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh Chùm ngây 1.2 Công thức cấu tạo hợp chất thân Chùm ngây 2.1 Thân bột thân Chùm ngây 11 2.2 Khảo sát trình ngâm dầm dung môi ethanol 14 2.3 Sơ đồ điều chế chiết tách cao chiết 16 2.4 Quá trình chiết phân đoạn qua dung môi 18 2.5 2.6 3.1 3.2 4.1 Các cao chiết từ dung môi n-hexan, diclomethane, ethyl acetate, ethanol nƣớc Mẫu cao chiết n-hexan Mối quan hệ khối lƣợng cao chiết ethanol theo thời gian chiết ngâm dầm Mối quan hệ khối lƣợng cao chiết ethanol theo tỉ lệ Rắn/Lỏng Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết ethanol thân Chùm ngây 18 18 27 29 34 TIẾNG ANH [9] Chuang P; Lee C; Chou J; Murugan M; Shieh B; Chen H, “Anti-fungal activity of crude extracts and essential oil of Moringa oleifera Lam,” Bioresource Technology, pp 232–236, 2007 [10] Guevara A; Vargas C; Sakurai H, “An antitumor promoter from Moringa oleifera Lam.,” Mutation Reseaech - Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, pp 181–188, 1999 [11] Jaiswal D; Kumar Rai P; Kumar A; Mehta S; Watal G, “Effect of Moringa oleifera Lam leaves aqueous extract therapy on hyperglycemic rats,” J Ethnopharmacol., pp 392–396, 2009 [12] Ghasi S; Nwobodo E; Ofili J, “Hypocholesterolemic effects of crude extract of leaf of Moringa oleifera Lam in high-fat diet fed wistar rats,” J Ethnopharmacol., pp 21–25, 2000 [13] Nepolean P; Anitha J; Renitta R, “Isolation, analysis and identification of phytochemicals of antimicrobial activity of Moringa oleifera Lam.,” Current Biotica, pp 33–39, 2009 [14] Rajanandh M; Kavitha J, “Quantitative estimation of β-Sitosterol, total phenolic and flavonoid compounds in the leaves of Moringa oleifera,” Int J PharmTech Research, 2010 [15] Chumark P; Khunawat P; Sanvarinda Y; Phornchirasilp S; Morales N; Phivthong-ngam L; Ratanachamnong; P Srisawat S; Pongrapeeporn K, “The in vitro and ex vivo antioxidant properties, hypolipidaemic and antiatherosclerotic activities of water extract of Moringa oleifera Lam leaves,” J Ethnopharmacol., 2008 [16] Vongsak B; Sithisam P; Gritsanapan W,“Simultaneous HPLC quantitative analysis of active compounds in leaves of moringa oleifera lam,” J Chromatographic Science, 2014 [17] Pal S; Mukherjee P; Saha K; Pal M; Saha B,“Antimicrobial action of the leaf extract of moringa oleifera lam,” Ancient science of life, 1995 [18] Moyo,“Antimicrobial activities of Moringa oleifara lam leaf extracts,” African Journal of Biotechnology, 2012 [19] Rodríguez-Pérez C; Quirantes-Piné R; Femández-Gutiérrez A; SeguraCarretero A,“Optimization of extraction method to obtain a phenolic compounds-rich extract from Moringa oleifera Lam leaves,” Industrial Crops and Products, 2015 ... HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC TRONG DỊCH CHIẾT THÂN CÂY CHÙM NGÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HĨA HỌC... KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Trần Công Tùng Lớp : 15CHDE Tên đề tài: “ Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học hoạt tính sinh học dịch chiết thân chùm ngây? ??... tính sinh học dịch chiết thân Chùm ngây? ?? MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU - Khảo sát, tìm hiểu điều kiện thích hợp chiết tách hợp chất thân Chùm ngây - Định danh, xác định thành phần hóa học dịch chiết từ