Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học dịch chiết n hexane lá đu đủ đực (carica papaya l ) thu hái tại quảng nam đà nẵng

Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hoá học và hoạt tính sinh học dịch chiết nhexane lá Đu đủ đực (Carica papaya L.), góp phần cung cấp các thông tin có ý nghĩa khoa học về thành phần hóa học của chúng, nâng cao giá trị sử dụng của loài thực vật này trong thực tiễn.

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA  TRẦN THỊ ĐỨC Ý NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC DỊCH CHIẾT N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) THU HÁI TẠI QUẢNG NAM – ĐÀ NẴNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Đà Nẵng, tháng 04 năm 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA  NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC DỊCH CHIẾT N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L.) THU HÁI TẠI QUẢNG NAM – ĐÀ NẴNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực : Trần Thị Đức Ý Lớp : 14CHD Giảng viên hướng dẫn : GS.TS Đào Hùng Cƣờng Đà Nẵng, tháng 04 năm 2018 LỜI CẢM ƠN Để có đƣợc kiến thức kinh nghiệm nhƣ ngày hôm nay, em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo môn khoa Hóa học trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng hết lòng dạy dỗ, truyền đạt kinh nghiệm quý báu trang bị cho em kiến thức vững Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy giáo GS.TS Đào Hùng Cƣờng cô giáo ThS Đỗ Thị Thúy Vân, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, góp ý, sửa chữa báo cáo tạo điều kiện cho em hồn thành đề tài khóa luận Tiếp đến, em xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo phòng thí nghiệm hƣớng dẫn, tạo điều kiện tốt để em có hội vận dụng kiến thức vào thực tiễn, thành thạo số thao tác thí nghiệm Những kết đạt đƣợc đề tài khóa luận hành trang vững chắc, tảng giúp em tự tin vào công việc sau Cuối cùng, cho phép em đƣợc cảm ơn thầy cô hội đồng giành thời gian quý báu để nhận xét, đánh giá tham gia chấm khóa luận Đà Nẵng, ngày 23 tháng 04 năm 2018 Sinh viên Trần Thị Đức Ý MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 1.Tính cấp thiết đề tài 2.Mục tiêu nghiên cứu .2 3.Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 4.Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 Phƣơng pháp nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm 5.Bố cục khóa luận tốt nghiệp CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 1.1 Giới thiệu Đu đủ .4 1.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ nƣớc 1.3 Nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ ngồi nƣớc 1.4 Những nghiên cứu hoạt tính sinh học Đu đủ 1.5 Các phƣơng pháp nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào 15 1.5.1 Phƣơng pháp MTT 15 1.5.2 Phƣơng pháp SRB 15 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu .17 2.1.1 Nguyên liệu .17 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu .17 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Xác định số tiêu hóa lý .18 2.2.2 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình chiết hợp chất hóa học Đu đủ đực 19 2.2.2.1 Phƣơng pháp chiết mẫu thực vật 19 2.2.2.2 Phƣơng pháp định danh thành phần hóa học hợp chất 20 2.2.3 Định tính số hợp chất Đu đủ đực 20 2.2.3.1 Alkaloid 20 2.2.3.2 Flavonoid 21 2.2.3.3 Coumarin .22 2.2.3.4 Saponin 22 2.2.3.5 Đƣờng khử 23 2.2.3.6 Polyphenol 23 2.2.3.7 Steroid 24 2.2.3.8 Axit hữu 24 2.2.3.9 Chất béo .24 2.2.3.10 Carotene .25 2.2.3.11 Polysaccarid .25 2.2.3.12 Iridoid 26 2.2.4 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 2.2.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết n-hexane 27 2.2.5.1 Quy trình chiết xuất dịch chiết Đu đủ đực để nghiên cứu tác dụng ức chế tế bào ung thƣ 27 2.2.5.2 Các dòng tế bào 28 2.2.5.3 Phƣơng pháp 28 2.2.5.4 Thử độc tế bào 28 2.2.6 Định danh thành phần hóa học dịch chiết n-hexane .29 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Kết xác định số đại lƣợng vật lý 30 3.1.1 Độ ẩm 30 3.1.2 Hàm lƣợng tro 30 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại 31 3.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến q trình chiết hợp chất hóa học Đu đủ đực dung môi n-hexane .31 3.2.1 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết ngâm dầm 31 3.2.1.1 Kết khảo sát thời gian chiết ngâm dầm dung môi n-hexane 32 3.2.1.2 Kết khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng (R/L) chiết dung môi n-hexane .33 3.2.2 Kết khảo sát thời gian chiết soxhlet dung môi n-hexane 36 3.2.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết siêu âm .36 3.2.3.1 Kết khảo sát thời gian chiết siêu âm dung môi n-hexane 36 3.3 Kết định tính lớp chất Đu đủ đực 38 3.4 Kết điều chế cao chiết 40 3.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết n-hexane từ Đu đủ đực 40 3.6 Kết khảo sát thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ đực phƣơng pháp GC-MS 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 Kết luận 45 Kiến nghị .46 TÀI LIỆU TH M KHẢO 47 Tiếng Việt 47 Tiếng Anh 48 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BuOH: Butanol CHCl3: Chloroform EtOAc: Ethyl acetate MeOH: Methanol GC-MS: Gas chromatography-Mass spectrometry SRB: Sulforhodamine B DMSO: Dimethyl sunfoxide DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng bảng 1.1 1.2 1.3 Thành phần hóa học Đu đủ Tác dụng chất chiết từ Đu đủ lên dòng tế bào ung thƣ khác điều kiện in vitro Hoạt tính chống ung thƣ phenolic, flavonoid alkaloid Đu đủ Trang 11 13 3.1 Kết khảo sát độ ẩm Đu đủ đực 30 3.2 Kết khảo sát hàm lƣợng tro Đu đủ đực 30 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 Kết khảo sát hàm lƣợng số kim loại Đu đủ đực Kết khảo sát thời gian chiết ngâm dầm dung môi n-hexane Kết khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng chiết ngâm dầm dung môi n-hexane Kết khảo sát thời gian chiết soxhlet dung môi nhexane Kết khảo sát thời gian siêu âm tối ƣu dung môi nhexane Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm dung mơi nhexane Định tính lớp chất Đu đủ đực 31 32 33 35 36 37 39 3.10 Khối lƣợng cao chiết phân đoạn 40 3.11 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết n-hexane 41 3.12 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ đực 42 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh Đu đủ 1.2 Công thức cấu tạo hợp chất Đu đủ 2.1 Lá Đu đủ đực bột Đu đủ đực 17 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 26 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian chiết ngâm dầm Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo tỉ lệ Rắn/Lỏng chiết ngâm dầm Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian chiết soxhlet Mối quan hệ khối lƣợng cao n-hexane theo thời gian chiết siêu âm Mối quan hệ khối lƣợng cao chiết n-hexane theo nhiệt độ chiết siêu âm Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực 32 34 35 36 38 41 3.2.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phƣơng pháp chiết siêu âm 3.2.3.1 Kết khảo sát thời gian chiết siêu âm dung môi n-hexane Sử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm với lƣợng bột Đu đủ đực khoảng 10g, 200mL dung môi n-hexane 500C Tiến hành chiết mẫu với thời gian khác nhau, lần lƣợt 30, 60, 90, 120 150 phút Thu dịch chiết, cô đuổi dung môi đến khối lƣợng không đổi cân % Khối lƣợng cao chiết : Trong đó: mcao: khối lƣợng cao chiết (g) mđầu: khối lƣợng bột Đu đủ đực (g) Kết khảo sát thời gian chiết dung mơi n-hexane đƣợc trình bày bảng 3.7, hình 3.4 Bảng 3.7 Kết khảo sát thời gian siêu âm tối ƣu dung môi n-hexane Tỷ lệ R/L Nhiệt độ Thời gian mđầu mcao (g/mL) (0C) (phút) (g) (g) 1/20 30 30 10,001 1,011 10,11 1/20 30 60 10,003 1,129 11,29 1/20 30 90 10,002 1,187 11,87 1/20 30 120 10,004 1,234 12,34 1/20 30 150 10,002 1,239 12,39 STT % mcao (%) Hình 3.4 Mối quan hệ khối lượng cao n-hexane theo thời gian chiết siêu âm 36 Qua kết bảng 3.7 hình 3.4 ta thấy, thời gian siêu âm tăng khối lƣợng cao thu đƣợc nhiều Tuy nhiên từ 120 đến 150 phút, khối lƣợng cao lại tăng không đáng kể Nguyên nhân tăng thời gian siêu âm, cấu tử có bột Đu đủ hòa tan dung mơi nhiều Thời gian tăng hàm lƣợng cấu tử có cao chiết tăng dẫn đến khối lƣợng cao chiết tăng lên Đến l c đó, cấu tử h a tan gần hết dung mơi khối lƣợng cao chiết tăng chậm có xu hƣớng khơng đổi Nhƣ thời gian siêu âm tối ƣu dung môi n-hexane 120 phút 3.2.3.2 Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm dung môi n-hexane Sử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm với lƣợng bột Đu đủ đực khoảng 10g, 200mL dung môi n-hexane 90 phút Tiến hành chiết mẫu với nhiệt độ khác nhau, lần lƣợt 30, 40, 50, 60 700C Thu dịch chiết, cô đuổi dung môi đến khối lƣợng không đổi cân % Khối lƣợng cao chiết : Trong đó: mcao: khối lƣợng cao chiết (g) mđầu: khối lƣợng bột Đu đủ đực (g) Kết khảo sát nhiệt độ chiết dung môi n-hexane đƣợc trình bày bảng 3.8 hình 3.5 Bảng 3.8 Kết khảo sát nhiệt độ chiết siêu âm môi n-hexane Tỷ lệ R/L Thời gian Nhiệt độ mđầu mcao % mcao (g/mL) (phút) (0C) (g) (g) (%) 1/20 90 30 10,001 1,185 11,85 1/20 90 40 10,003 1,267 12,67 1/20 90 50 10,002 1,348 13,48 1/20 90 60 10,004 1,382 13,82 1/20 90 70 10,002 1,394 13,94 STT 37 Hình 3.5 Mối quan hệ khối lượng cao chiết n-hexane theo nhiệt độ chiết siêu âm Qua kết bảng 3.8 hình 3.5 ta thấy, nhiệt độ siêu âm tăng khối lƣợng cao thu đƣợc nhiều Tuy nhiên từ 600C đến 700C, khối lƣợng cao lại tăng không đáng kể Nguyên nhân tăng nhiệt độ siêu âm, cấu tử có bột Đu đủ hòa tan dung mơi nhiều Nhiệt độ tăng hàm lƣợng cấu tử có cao chiết tăng dẫn đến khối lƣợng cao chiết tăng lên Đến l c đó, cấu tử h a tan gần hết dung mơi khối lƣợng cao chiết tăng chậm có xu hƣớng khơng đổi Nhƣ nhiệt độ siêu âm tối ƣu dung môi n-hexane 600C Kết luận: Qua trình nghiên cứu chiết tách thành phần hóa học Đu đủ đực thu hái Quảng Nam – Đà Nẵng dung môi n-hexane, cho thấy rằng: hai phương pháp chiết cổ điển phương pháp chiết soxhlet phương pháp ngâm dầm cho hàm lượng cao chiết thấp phương pháp chiết siêu âm đại, thời gian chiết dài nhiều Vì thời gian chiết ngắn lại thu lượng cao nhiều nên lựa chọn phương pháp siêu âm để chiết tách thành phần hóa học Đu đủ đực 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC Kết định tính lớp chất Đu đủ đực phản ứng hóa học đƣợc trình bày bảng 3.9 38 Bảng 3.9 Định tính lớp chất Đu đủ đực STT Nhóm hợp chất Thuốc thử phản ứng Kết Kết luận sơ Phản ứng với thuốc thử Ankaloid Flavonoid Coumarin Saponin Đƣờng khử Polyphenol Mayer ++ Wagner + NaOH 10%: - H2SO4 đậm đặc - FeCl3 5% + Phản ứng mở đóng v ng lacton Hiện tƣợng tạo bọt Thuốc thử Fehling A thuốc thử Fehling B Steroid Có +++ Có - Khơng + Gelatin 1% + Dung dịch chì acetat 10% ++ ứng Libermann- Khơng ++ Dung dịch FeCl3 5% Phản Có Có + Burchard Có Phản ứng Salkowski + + Có +++ Có Axit hữu Phản ứng với Na2CO3 tinh thể Chất béo Để lại vết mờ tờ giấy lọc 10 Carotene Phản ứng với H2SO4 + Có 11 Polysaccarid Thuốc thử Lugol - Không 12 Iridoid Thuốc thử Trim-Hill - Không Ghi chú:(+++): Phản ứng rõ (++): Phản ứng rõ (+): Có phản ứng 39 (-): Khơng có phản ứng Nhận xét: Sau tiến hành định tính nhóm hợp chất tự nhiên Đu đủ đực có lớp chất: alkaloid, coumarin, saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo, carotene 3.4 KẾT QUẢ ĐIỀU CHẾ CAO CHIẾT Kết khối lƣợng cao chiết phân đoạn n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol dịch nƣớc thu đƣợc từ cao chiết tổng methanol đƣợc trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10 Khối ƣợng cao chiết phân đoạn Cao methanol n-hexane chloroform ethyl acetate n-butanol nƣớc Khối 1500 555,12 221,54 18,31 321,31 176,50 lƣợng (g) (g) (g) (g) (g) (g) Nhận xét: Lƣợng cao thu đƣợc phân đoạn so với lƣợng cao tổng 86% Đảm bảo trình thu nhận cao 3.5 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA DỊCH CHIẾT N-HEXANE TỪ LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC Cao chiết n-hexane đem thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thƣ: - Phổi (A549) - Gan (Hep3B) - Vú (MCF-7) Kết hoạt tính độc tế bào cao chiết đƣợc trình bày bảng 3.11 Ký hiệu: M/H: phân đoạn cao chiết n-hexane từ cao tổng methanol Camptothecin: đƣợc sử dụng làm chất chuẩn 40 Bảng 3.11 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết n-hexane TB sống sót (%) Mẫu Nồng độ (µg/mL) A549 % TB sống Control Hep3B Sai số % TB sống Sai số MCF-7 % TB Sai sống số 100.00 1.29 100.00 2.64 100.00 1.93 30 62.47 2.69 59.94 2.27 65.01 1.21 100 57.93 2.36 49.72 2.06 56.29 2.29 Camptothecin 0.1 55.66 2.49 54.27 2.01 56.25 1.97 * 10 35.74 0.77 22.64 0.67 44.84 0.22 M/H Nhận xét: Dựa vào bảng 3.11, phân đoạn n-hexane thể hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thƣ phổi ( 549), ung thƣ gan (Hep 3B), ung thƣ vú (MCF-7) Trong phân đoạn ức chế tế bào ung thƣ gan tốt hai nồng độ nghiên cứu 30μg/mL 100μg/mL: phần trăm d ng tế bào Hep3B sống sót lần lƣợt 59,94% ± 2,27% 49,72% ± 2,06%; phần trăm dòng tế bào A549 sống sót lần lƣợt 62,47% ± 2,69% 57,93% ± 2,36; phần trăm dòng tế bào MCF-7 sống sót lần lƣợt 65,01% ± 1,21% 56,29% ± 2,29% 3.6 KẾT QUẢ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT N-HEXANE LÁ ĐU ĐỦ ĐỰC BẰNG PHƢƠNG PHÁP GC-MS Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực đƣợc trình bày hình 3.6 Hình 3.6 Sắc k đồ GC-MS dịch chiết n-hexane Đu đủ đực 41 Kết định danh thành phần hóa học có dịch chiết n-hexane Đu đủ đực đƣợc trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Đu đủ đực Peak TR Area Name Structure % 2,24 0,91 1,3,5-Triazine-2,4HN dianime,6-chloro-Nethyl ; N C5H8ClN5 3,75 0,24 Cl N N NH Cis-9-Octadecenoic O acid, (2-phenyl-1,3- O O O dioxolan-4-yl) methyl ester; C28H44O4 4,68 11,59 Trans-2-pentadecylO 5-hexadecyloxy-1,3dioxane; C35H70O3 O O 5,00 0,12 O I-Gala-I-ido-octose; HO OH C8H16O8 OH HO HO OH OH 5,96 13,75 3-(4'- O methoxyphenyl)-1N acetyl-2phenylindolizine; C23H19O2N O 42 6,34 29,37 2-Undecenal; O C11H20O 8,12 21,06 5,9-Undecadien-2- O one,6,10-dimethyl; C13H22O 9,60 7,24 Dodecanoic O acid, O O O 2,3bis(acetyloxy)propyl O ester; C19H34O6 9,77 6,14 Methyl O 14-(2O octylcyclopropyl)tet radecanoate; O C26H50O2 10 20,03 6,13 9-Octadecenoic acid HO O (Z); C18H34O2 11 38,73 0,13 Methyl 2,5- octadecadlynoate; O C19H30O2 12 41,75 3,32 O Cholest-5-en-3ol (3á)-,9octadecenoate; O O C45H78O2 Nhận xét : Từ bảng 3.12 cho thấy, kết phân tích sắc kí đồ GC-MS so sánh với thƣ viện chuẩn có 12/12 cấu tử đƣợc định danh Các cấu tử đƣợc định danh với hàm lƣợng lớn bao gồm: 2-Undecenal (29,37%); 5,9-Undecadien-2- 43 one,6,10-dimethyl (21,06%); 3-(4'-methoxyphenyl)-1-acetyl-2-phenylindolizine (13,75%); Trans-2-pentadecyl-5-hexadecyloxy-1,3-dioxane (11,59%) Trong có 2-Undecenal 9-Octadecenoic acid (Z) có hoạt tính sinh học 2-Undecenal thành phần tinh dầu rau má (Coriandrum sativum) ức chế phát triển chất promigigotes Leishmani donovani nuôi cấy với IC50 2,81±0,12 μg/mL đƣợc phân lập từ tinh dầu C.sativum, chất ức chế hiệu nuôi cấy in vitro L Donovani promastigotes – nguồn tiềm loại thuốc chống lại bệnh leishmaniasis – loại bệnh truyền nhiễm mãn tính [36] 9-Octadecenoic acid (Z) hay gọi Oleic acid chất chống oxy hóa tốt cho thể ngƣời Gi p ngăn chặn cholesterol xấu máu, làm tăng cholesterol tốt để phòng chống bệnh tim mạch, xơ vữa động mạch Có khả trì ổn định lƣợng lipid cho bà bầu Hỗ trợ tăng trƣởng phát triển trí não bé có sữa mẹ Gi p thể nhuận tràng có tác dụng loại bỏ chất thải Gi p thể dễ hấp thụ Omega-3 vitamin Ngăn ngừa ung thƣ v , ung thƣ miệng ung thƣ thận Kích thích ruột non sản xuất hợp chất Oleoiletanolamid, giảm cảm giác thèm ăn cản trở việc hấp thụ nhanh Tăng cƣờng chức tái tạo máu Chống tác hại tia xạ [11] 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trong trình triển khai nghiên cứu, đề tài đạt đƣợc kết nhƣ sau: - Đã xác định thơng số hóa lý ngun liệu: độ ẩm nguyên liệu bột khô 10,272%; hàm lƣợng tro trung bình 6,718%; hàm lƣợng kim loại nằm giới hạn cho phép theo Quyết định số 46/2007/QĐ-BYT ngày 19/12/2007 “quy định giới hạn tối đa nhiễm sinh học hóa học thực phẩm” - Đã định tính đƣợc lớp chất có Đu đủ đực: alkaloid, coumarin, saponin, polyphenol, steroid, acid hữu cơ, chất béo, carotene - Đã chiết tách đƣợc cấu tử có Đu đủ đực dung môi n-hexane với phƣơng pháp chiết khác xác định đƣợc điều kiện chiết tối ƣu phƣơng pháp: Phƣơng pháp chiết ngâm dầm: thời gian ngày với tỉ lệ R/L = 10g nguyên liệu/200mL dung môi thu đƣợc 0,701g cao; tỉ lệ R/L = 1/25 thu đƣợc 0,735g cao Phƣơng pháp chiết soxhlet: thời gian với tỉ lệ R/L = 10g nguyên liệu/200mL dung môi thu đƣợc 0,756g cao Phƣơng pháp chiết siêu âm: thời gian 120 phút thu đƣợc 1,234g cao; nhiệt độ 600C thu đƣợc 1,382g cao với tỉ lệ R/L = 10g ngun liệu/200mL dung mơi Trong phƣơng pháp chiết siêu âm thu đƣợc hàm lƣợng cao nhiều thời gian ngắn - Đã thu đƣợc cao chiết phân đoạn: n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol - Đã thử hoạt tính độc tế bào phân đoạn n-hexane tế bào ung thƣ: phần trăm d ng tế bào Hep3B sống sót lần lƣợt 59,94% ± 2,27% 49,72% ± 2,06%; A549 lần lƣợt 62,47% ± 2,69% 57,93% ± 2,36; MCF-7 lần lƣợt 45 65,01% ± 1,21% 56,29% ± 2,29% nồng độ thử nghiệm 30μg/mL 100μg/mL - Bằng phƣơng pháp GC-MS định danh đƣợc 12 cấu tử dịch chiết n-hexane từ Đu đủ đực Trong đó, 2-Undecenal 9-Octadecenoic acid (Z) có hoạt tính sinh học Kiến nghị - Phân lập xác định cấu trúc chất phân lập đƣợc từ phân đoạn dịch chiết n-hexane Đu đủ đực - Thăm d hoạt tính sinh học chất phân lập đƣợc - Tiếp tục thử hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết chloroform, ethyl acetate, n-butanol để lựa chọn phân đoạn có hoạt tính sinh học cao phân lập tiếp 46 TÀI LIỆU THAM HẢO Tiếng Việt 1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [2] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [3] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012), “Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ đu đủ (Carica papaya L.)”, Tạp chí hóa học, Tập 50 (4A), tr 166-169 [4] Hồ Thị Hà (2014), Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ đu đủ (Carica papaya Linn), Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội [5] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [6] Phạm Kim Mãn cộng (2001), “Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung thƣ”, Tạp chí dược liệu, (2+3), tr 58-62 [7] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007), “Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, 23, tr 130-134 [8] Đỗ Thị Thảo (2006), Nghiên cứu xác định khả phòng chống ung thư chất hóa học số thuốc Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học [9] Trần Thế Tục, Đoàn Thế Lƣ (2004), Cây đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb Lao động Xã hội, Hà Nội [10] Nguyễn Tƣờng Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khơi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983), “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ”, Tạp chí dược học, số [11].https://123doc.org//document/3424838-chat-beo-khong-no-va-vai-tro-trongdinh-duong.htm, tr.9, mục 2.1.4 “Vai trò dinh dưỡng acid oleic“ [12] https://thucvatduocvn.blogspot.com/2016/02/bao-quan-duoc-lieu.html?m=1 47 [13] file:///C:/Users/PC/Downloads/QD+46+BYT.pdf, phần ”Giới hạn tối đa kim loại thực phẩm” chè sản phẩm chè, tr.51-55 Tiếng Anh [14] Okunola A., Alabi, Muyideen T Haruna, Chinedu P Anokwuru, Tomisin Jegede, Harrison Abia, Victor U Okegbe and Babatunde E Esan (2012), “Comparative studies on antimicrobial properties of extracts of fresh and dried leaves of Carica papaya (L) on clinical bacterial and fungal isolates, Pelagia Research Library”, Advances in Applied Science Research, 3(5), pp 3107-3114 [15] Adlin Afzan, Noor Rain Abdullah, Siti Zaleha Halim, Badrul Amini Rashid (2012), “Repeated dose 28 days oral toxicity study of Carica papaya L leaf extract in Sprague dawley rats”, Molecules 2012, 17, pp 4326-4342 [16] Adeolu Alex, Adedapo and Vivian Eguonor, Orherhe (2013), “ ntinociceptive and anti-inflammatory studies of the aqueous leaf extract of Carica papaya in laboratory animals” Asian J.EXP.BIOL.SCI, Vol 4(1), pp 89-96 [17] Moses Alo, Ukpai Agwu Eze, Chukwudi nyim (2012), “Invitro antimicrobial activities of extracts of magnifera indica, carica papaya and psidium guajava leaves on salmonella typhi isolates”, World J Public Health Sciences, 1(1):1 [18] ntonella Canini, Daniela lesiani, Giuseppe D’ rcangelo, Pietro Tagliatesta (2007), “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from Carica papaya L leaf”, Journal of food composition and analysis, Vol 20, pp 584-590 [19] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against scaris suum in naturally infected pigs”, J Helminthol Dec, 68(4):343-6 [20] Ayoola G.A., Coker H.A.B., Adesegun S.A., Adepoju-Bello A.A., Obaweya K., Ezennia E.C., tangbayila T.O (2008), “Phytochemical screening and antioxidant activities of some selected medicinal plants used for malaria therapy in southwestern Nigeria”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 7(3), pp 1019-1024 48 [21] Srikanth G.S., Manohar Babu S., Kavitha CH.N., Bhanoji Rao M.E., Vijaykumar N., Pradeep CH (2010), “Studies on in - vitro antioxidant activities of Carica papaya aqueous leaf extract”, Research journal of pharmaceutical, Biological and Chemical sciences, Vol 1, pp 59-65 [22] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008), “Review on nutritional, medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)”, Natural product radiance, Vol 7(4), pp 364-373 [23] K Kayalvizhi, Dr L Cathrine K Sahira Banu (2015), “Phytochemical and antibacterial studies on the leaf extracts of female Carica papaya.linn”, International Journal of PharmTech Research, Vol 8(7), pp 166-170 [24] Noriko Otsuki, Nam H Dang, Emi Kumagai, Akira Kondo, Satoshi Iwata, Chikao Morimoto (2010), “ queous extract of Carica papaya leaves exhibits anti tumor activity and immunomodulatory effects”, Journal of Ethnopharmacology, 127, pp 760 - 767 [25] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine on Candida albicans growth” Mycoses, 39, pp 103-110 [26] John R., Van (1998), “Mechanism of ction of Non Stervidal nti inflammatory Drug”, The American Jour of Med March 30, Vol 104 (3A), pp 2s3s [27] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah bdullah Sani (2002), “ ntiproliferative ctivity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”, Journal of Medical Sciences, Vol 2, Issue 2, pp 55-58 [28] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002), “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, Vol 60, pp 873-882 49 [29] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011), “ ntibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya L.”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 5(20), pp 51675171 [30] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965), “Carpaine and pseudocarpaine”, Tetrahedron letters, No 24, pp 1907-1916 [31] Chung-Shih Tang (1979), “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II”, Phytochemistry, Vol 18, pp 651-652 [32] Ashok Kumar U., Manjunath C., Thaminzhmani T., Ravi Kiran Y., Brahmaiah Y (2012), “ review on immunomodulatory activity plants”, Indian Journal of Novel Drug delivery, 4(2), pp 93-103 [33] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and yodele O, Soladoye (2008), “ nti-inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”, Inflammopharmacology, 16, pp 168-173 [34] Abrham W.B., (1978), Techniques of Animal and Clinical toxicology, Med Pub, Chicago [35] Rumiyati, Sismindari dan riyani (2006), “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl-2 in breast cancer cells line”, Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170-176 [36] http://www.thegoodscentscompany.com/data/rw1036141.html, Articles: “Pharmacological activities of cilantro’s aliphatic aldehydes against Leishmania donovani” 50 ... bệnh ung thƣ Chính l tr n, l a ch n đề tài: Nghi n cứu chiết tách, xác định thành ph n hóa học hoạt tính sinh học dịch chiết n- hexane Đu đủ đực (Carica papaya L. ) thu hái Quảng Nam - Đà N ng”... tiêu nghi n cứu Nghi n cứu chiết tách, xác định thành ph n hố học hoạt tính sinh học dịch chiết n- hexane Đu đủ đực (Carica papaya L. ), góp ph n cung cấp thơng tin có ý nghĩa khoa học thành ph n hóa. ..ĐẠI HỌC ĐÀ N NG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA  NGHI N CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PH N HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC DỊCH CHIẾT N- HEXANE L ĐU ĐỦ ĐỰC (CARICA PAPAYA L. ) THU HÁI TẠI QUẢNG