Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học của vỏ thân cây chùm ruột tam kỳ, tỉnh quảng nam trong một số dịch chiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ NHƢ THẢO NGHI N CỨU CHI T T CH VÀ X C ĐỊNH THÀNH PHẦN H CH HỌC CỦ VỎ TH N C Y RU T T TRONG TỈNH QUẢNG N T SỐ DỊCH CHI T LUẬN VĂN THẠC SĨ HO HỌC Đà Nẵng – Năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ NHƢ THẢO NGHI N CỨU CHI T T CH VÀ X C ĐỊNH THÀNH PHẦN H CH HỌC CỦ VỎ TH N C Y RU T T TRONG TỈNH QUẢNG N T SỐ DỊCH CHI T Chuyên ngành: Hóa hữu ã số: 60 44 27 LUẬN VĂN THẠC SĨ HO HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS TRẦN Đà Nẵng – Năm 2014 ẠNH LỤC LỜI C ĐO N Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn VÕ THỊ NHƢ THẢO ỤC LỤC Ở ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Đối tƣợng mục đích nghiên cứu 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.2 Mục đích nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục luận văn CHƢƠNG 1: TỔNG QU N 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ CÂY CHÙM RUỘT 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Điều kiện sinh trƣởng, phát triển 1.1.4 Thân chùm ruột 1.1.5 Lá chùm ruột 11 1.1.6 Quả chùm ruột 12 1.1.7 Rễ chùm ruột 17 1.1.8 Hoa hạt chùm ruột 18 1.2 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ CHÙM RUỘT 19 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PH P NGHI N CỨU 21 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 21 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Phƣơng pháp xác định thơng số hóa lý 22 2.2.2 Phƣơng pháp chiết mẫu thực vật 23 2.2.3 Phƣơng pháp định danh thành phần hóa học dịch chiết 28 2.2.4 Phƣơng pháp thử hoạt tính kháng khuẩn 29 2.3 CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 30 2.3.1 Sơ đồ thực nghiệm 30 2.3.2 Xác định thơng số hóa lí ngun liệu 30 2.3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tách chất 32 2.3.4 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết từ bột vỏ thân chùm ruột 33 CHƢƠNG 3: T QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH CÁC THƠNG SỐ HĨA LÝ 36 3.1.1 Xử lý nguyên liệu 36 3.1.2 Độ ẩm 36 3.1.3 Hàm lƣợng tro 37 3.1.4 Hàm lƣợng kim loại 38 3.2 KẾT QUẢ CHIẾT BẰNG PHƢƠNG PHÁP NGẤM KIỆT 39 3.2.1 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến hàm lƣợng cao chiết 39 3.2.2 Kết định danh thành phần hóa học 44 3.3 KẾT QUẢ CHIẾT SOXHLET PHÂN ĐOẠN 68 3.3.1 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung mơi nhexane 70 3.3.2 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung môi chloroform 74 3.3.3 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung môi ethyl acetate 77 3.3.4 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung môi methanol 79 3.4 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC 84 T LUẬN VÀ D NH I N NGHỊ 87 ỤC TÀI LIỆU TH HẢO 89 QUY T ĐỊNH GI O ĐỀ TÀI LUẬN VĂN (Bản sao) PHỤ LỤC D NH Số hiệu Tên bảng bảng 3.1 3.2 ỤC C C BẢNG Kết xác định độ ẩm bột vỏ thân chùm ruột Kết xác định hàm lƣợng tro bột vỏ thân chùm ruột Trang 37 37 3.3 Hàm lƣợng kim loại vỏ thân chùm ruột 39 3.4 Ảnh hƣởng thời gian đến hàm lƣợng cao chiết 40 3.5 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng cao chiết 41 3.6 Ảnh hƣởng tỷ lệ rắn-lỏng đến hàm lƣợng cao chiết 43 3.7 Kết chiết lỏng-lỏng 45 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung mơi n-hexane Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung mơi chloroform Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung môi ethyl acetate Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng cắn chlorof Bảng tổng kết thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng Phần trăm khối lƣợng cao chiết dung mơi Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung mơi n-hexane Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung môi chloroform 51 54 57 61 65 69 70 74 3.16 3.17 3.18 3.19 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet dung môi ethyl acetate Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet methanol Bảng tổng kết thành phần hóa học dịch chiết soxhlet Kết thử hoạt tính kháng khuẩn 77 80 82 85 DANH Số hiệu ỤC C C HÌNH Tên hình hình Trang 1.1 Thân chùm ruột 1.2 Cấu trúc tanin 1.3 Cấu trúc hóa học vài saponine 10 1.4 Lá chùm ruột 11 1.5 Quả chùm ruột 12 1.6 Cấu tạo hóa học số chất có chùm ruột 14 1.7 Hoa chùm ruột 19 2.1 Cây chùm ruột Tam Kỳ-Quảng Nam 21 2.2 Chiết máy soxhlet 25 2.3 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng 28 2.4 Sơ đồ thực nghiệm 35 3.1 Thân (a), vỏ (b), bột (c) chùm ruột 36 3.2 Mẫu tro hóa bột vỏ thân chùm ruột 38 3.3 Ảnh hƣởng thời gian đến hàm lƣợng cao chiết 40 3.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hàm lƣợng cao chiết 42 3.5 Ảnh hƣởng tỷ lệ rắn-lỏng đến hàm lƣợng cao chiết 43 Dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi: n-hexane, 3.6 chloroform, ethyl acetace, cắn chloroform-methanol, cắn ethyl acetate-methanol, pha nƣớc (theo thứ tự từ trái sang 45 phải) 3.7 3.8 Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi nhexane Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi 46 46 3.9 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 3.21 3.22 Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi ethyl acetate Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với cắn chloroformmethanol Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với cắn ethyl acetatemethanol Phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với pha nƣớc Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi n-hexane Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi chloroform Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết lỏng-lỏng với dung môi ethyl acetate Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết lỏng-lỏng với cắn chloroform- methanol Dịch chiết soxhlet bột vỏ thân chùm ruột dung môi: n-hexane, chloroform, ethyl acetate methanol Phổ UV/VIS dịch chiết soxhlet với dung môi n-hexane Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết soxhlet với dung môi nhexane từ vỏ thân chùm ruột Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết soxhlet với dung môi chloroform từ vỏ thân chùm ruột Phổ UV/VIS dịch chiết soxhlet với dung môi chloroform Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết soxhlet với dung môi ethyl acetate từ vỏ thân chùm ruột 47 47 48 48 50 56 60 64 68 71 72 75 76 78 3.23 3.24 3.25 Phổ UV/VIS dịch chiết soxhlet với dung môi ethyl acetate Phổ UV/VIS dịch chiết soxhlet với dung môi methanol Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết soxhlet với dung môi methanol từ vỏ thân chùm ruột 79 80 81 80 Hình 3.24 Phổ UV/VIS dịch chiết soxhlet với dung môi methanol Bảng 3.17 Thành phần hóa học dịch chiết soxhlet methanol STT Thời Diện tích gian peak lƣu (%) Tên gọi DL-proline, 5-oxo, 5.423 10.48 methyl ester (C6H9NO3) 39.729 5.85 γ-sitosterol ( C29H50O) 2(1H)naphthalenone, 3,5,6,7,8,8a-hexahydro3 40.216 5.61 4,8a-dimethyl-6-(1methylethenyl) (C15H22O) Công thức 81 Hình 3.25 Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết soxhlet với dung môi methanol từ vỏ thân chùm ruột 82  Nhận xét: Từ sắc ký đồ GCMS hình 3.25 bảng 3.17 ta thấy: dịch chiết soxhlet dung mơi methanol có tất 26 cấu tử, có cấu tử đƣợc định danh chiếm 21.94% 23 cấu tử chƣa đƣợc định danh chiếm 78.06% Các cấu tử định danh bao gồm ancaloid, sterol Cụ thể: DLproline, 5-oxo, methyl ester (10.48%) có hàm lƣợng cao γ-sitosterol (5.85%) có hoạt tính sinh học: giảm mỡ máu, điều hịa chuyển hóa cholesterol máu Từ phổ UV/VIS hình 3.24 ta thấy phổ gần giống với phổ UV/VIS dịch chiết lỏng-lỏng với dung mơi methanol hình 3.10, vùng có bƣớc sóng khoảng 200-300nm xuất nhiều peak chứng tỏ chất có vỏ thân chùm ruột có chứa nhóm chức: ester (-COOR) (205nm), cacbonyl (C=O) (270-295nm) [32] Tổng kết thành phần hóa học dịch chiết soxhlet Bảng 3.18 Bảng tổng kết thành phần hóa học dịch chiết soxhlet Diện tích peak (%) STT Tên gọi nhexane Chloroform ethyl acetate cắn chloroform methanol β-eudesmol 0.54 _ _ _ Hexadecane 1.64 1.85 _ _ Nonadecane 2.07 _ _ _ 83 β-sitosterol 2.36 _ _ _ 7.58 4.43 _ 5.61 2(1H)naphthalen one, 3,5,6,7,8,8a5 hexahydro-4,8adimethyl-6-(1methyletheny) Ethyl citrate _ 1.02 _ _ Heptadecane _ 3.08 _ _ Eicosane _ _ 3.28 _ Tetracosane _ _ 3.55 _ 10 Octacosane _ _ 3.23 _ _ _ _ 10.48 _ _ _ 5.85 11 12 DL-proline, 5oxo, methyl ester γ-sitosterol  Nhận xét: Kết định danh GC-MS dịch chiết soxhlet cho thấy: tổng cấu tử định danh đƣợc có 12 cấu tử; đó, dịch chiết n-hexane đƣợc cấu tử, dịch chiết chloroform đƣợc cấu tử, dịch chiết ethyl acetate đƣợc cấu tử, dịch chiết cắn chloroform-methanol đƣợc cấu tử Phần trăm diện tích peak cấu tử đƣợc định danh dịch chiết methanol lớn (10.48%), dịch chiết n-hexane (6.04%), dịch chiết chloroform (4.43%) dịch chiết ethyl acetate nhỏ (3.55%) Điều chứng tỏ methanol có khả hịa tan tốt chiết đƣợc cấu tử có hàm lƣợng lớn cịn ethyl acetate hịa tan kém, chiết đƣợc hàm lƣợng nhỏ cấu tử có vỏ thân chùm ruột 84 Trong cấu tử định danh có chứa số chất có ứng dụng y học nhƣ: β-sitosterol đƣợc sử dụng việc sản xuất nƣớc hoa nhƣ ethyl citrate Vì cần nghiên cứu phƣơng pháp tách cấu tử có tính chất q y học, thực phẩm… nhằm đáp ứng nhu cầu sống  Nhận xét chung: Tổng cấu tử dịch chiết soxhlet định danh đƣợc có 13 cấu tử, dịch chiết lỏng-lỏng định danh đƣợc đến 23 cấu tử Qua đó, ta thấy chiết lỏng-lỏng chiết đƣợc gần gấp hai lần so với chiết soxhlet điều giải thích chiết lỏng-lỏng q trình lắc s làm tăng diện tích tiếp xúc bề m t chất rắn dung môi dễ thẩm thấu việc chiết s hiệu Ngoài ra, ta nhận thấy kết chiết soxhlet tốt dung môi methanol ứng với phần trăm cao chiết 14.66% kết chiết chƣng ninh khảo sát điều kiện tốt tiến hành làm điều kiện tốt ta đƣợc phần trăm cao chiết 15.687%, điều chứng tỏ sử dụng dung mơi chiết methanol việc chiết chƣng ninh s cho phần trăm cao chiết cao thời gian chiết s nhanh việc chiết thiết bị soxhlet 3.4 T QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC Các dịch chiết lỏng-lỏng bột vỏ thân chùm ruột đƣợc thử hoạt tính kháng khuẩn Viện Y Tế công cộng, 159 Hƣng Phú Phƣờng Quận Tp Hồ Chí Minh Kết thử hoạt tính kháng khuẩn đƣợc trình bày bảng 3.19 Mẫu 1: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi n-hexane Mẫu 2: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi ethyl acetate Mẫu 3: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi chloroform Mẫu 4: dịch chiết lỏng-lỏng cắn chloroform dung môi methanol 85 Bảng 3.19 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (mm) dịch chiết nguyên chất Vi sinh vật ẫu ẫu ẫu ẫu S aureus 0 0 Bacillus subtilis 10 0 Bacillus cereus 0 0 P aeruginosa 0 0 Escherichia coli 0 0 Shigella spp 0 0 Klebsiella 15 0 Proteus 0 0 Salmonella spp 0 0 Candida albicans 0 0  Nhận xét: Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn bột vỏ chùm ruột dịch chiết nguyên chất mẫu có tác dụng chủng vi khuẩn Bacillus subtilis Klebsiella Khi dịch chiết đƣợc pha loãng đến 10, 100, 1000, 10000, 100000 lần khơng có tác dụng kháng khuẩn Mẫu 1, mẫu 3, mẫu dịch chiết nguyên chất hay pha lỗng khơng có tác dụng kháng khuẩn Vậy ta thử hoạt tính kháng khuẩn ethyl acetate dung mơi phân cực trung bình có khả kháng khuẩn so với dung môi khác Vi khuẩn chủng Bacillus subtilis chất chiết xuất từ vi sinh vật đƣợc cục quản lý thực phẩm dƣợc phẩm Hoa Kỳ (FDA), quan an toàn thực phẩm châu Âu (EFSA) đánh giá an toàn sử dụng bổ sung vào thực 86 phẩm mang lại lợi ích kinh tế cao Bacillus subtilis có khả sản sinh nhiều enzyme, nhƣng quan trọng amylase protease, loại enzyme thuộc hệ thống men tiêu hóa Nó thƣờng tồn sản phẩm trạng thái bào tử, nhờ uống vào dày s không bị acide nhƣ men tiêu hóa dịch vị phá hủy Ở ruột, bào tử nẩy mầm phát triển thành thể hoạt động giúp cân hệ vi sinh có ích đƣờng ruột, cải thiện hệ thống tiêu hóa, sau sử dụng kháng sinh kéo dài [20] Klebsiella giống trực khuẩn không di động, gram âm Đây mầm bệnh thƣờng trực với ngƣời, chủng Klebsiella gây nhiều chứng bệnh đ c biệt viêm phổi, nhiễm trùng đƣờng tiểu, nhiễm trùng huyết, viêm cột sống dính khớp viêm mơ mềm [25] 87 T LUẬN VÀ * I N NGHỊ ết luận Sau thực đề tài “Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học vỏ thân chùm ruột Tam ỳ tỉnh Quảng Nam số dịch chiết” đạt đƣợc số kết nhƣ sau: Bằng phƣơng pháp sấy khô, phƣơng pháp tro hóa mẫu phƣơng pháp hấp thụ nguyên tử AAS xác định đƣợc độ ẩm, hàm lƣợng tro hàm lƣợng kim loại vỏ thân chùm ruột Tam kỳ-Quảng Nam cho thấy: - Độ ẩm trung bình ngun liệu bột khơ 8.87% - Hàm lƣợng tro trung bình 5.00% - Hàm lƣợng kim loại As 0.000327mg/l, Pb 0.11477mg/l, Cu 0.276063mg/l Đã xác định đƣợc điều kiện chiết chƣng ninh: - Thời gian chiết tốt 6h - Nhiệt độ chiết tốt 500C - Tỷ lệ rắn lỏng tốt 1:8 Dùng phƣơng pháp chƣng ninh với methanol, sau phân đoạn chiết lỏng-lỏng lần lƣợt với n-hexane, chloroform, ethyl acetate, cắn chloroform-methanol xác định đƣợc:  Dịch chiết n-hexane: có 15 cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: acide h u cơ, ester, vitamine, sterol  Dịch chiết chloroform: có cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: sterol, acide h u ester acide béo  Dịch chiết ethyl acetate: có 14 cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: acide h u cơ, ester acide béo, sterol, sesquiterpen  Dịch chiết cắn chloroform-methanol: có 14 cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: ancaloid, ester h u cơ, acide h u cơ, vitamine, sterol 88 Chiết soxhlet phƣơng pháp phân đoạn lần lƣợt với dung môi n-hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol xác định đƣợc:  Dịch chiết n-hexane: có cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: hydrocacbon mạch dài 15C÷20C, sterol, sesquiterpen  Dịch chiết chloroform: có cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: hydrocacbon mạch dài, ester acide béo  Dịch chiết ethyl acetate: có cấu tử đƣợc định danh Thành phần hóa học dịch chiết nh ng hydrocacbon mạch dài  Dung mơi methanol: có cấu tử đƣợc định danh, bao gồm: ancaloid, sterol Thử hoạt tính sinh học Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn bột vỏ chùm ruột dịch chiết nguyên chất mẫu có tác dụng chủng vi khuẩn Bacillus subtilis Klebsiella * iến nghị Trong trình nghiên cứu, tơi có kiến nghị sau: - Vỏ thân chùm ruột có chứa số chất có ứng dụng y học nhƣ: stigmasterol, β-sitosterol, vitamine E… Vì vậy, cần nghiên cứu phƣơng pháp tách cấu tử có tính chất q y học thực phẩm nhằm đáp ứng nhu cầu sống, góp phần làm tăng giá trị sử dụng nhƣ ch a bệnh thân chùm ruột thuốc dân gian - Khảo sát thêm hoạt tính kháng khuẩn chủng khác 89 D NH ỤC TÀI LIỆU TH HẢO Tiếng Việt [1] Bộ Y tế (1998), Quyết định số 867/1998/QĐ-BYT việc ban hành Danh mục Tiêu chuẩn vệ sinh lương thực, thực phẩm, Hà Nội [2] Võ Văn Chi, Phƣơng Đức Tiến (1978), Phân loại thực vật-thực vật bậc cao, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp [3] Trịnh Đình Chính, Nguyễn Thị Bích Tuyết (2013), Giáo trình hợp chất tự nhiên, Bộ giáo dục đào tạo trung tâm đào tạo từ xa [4] Lê Văn Đăng (2005), Chuyên đề số hợp chất thiên nhiên, Nhà xuất Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh [5] Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học [6] Nguyễn Kim Phi Phụng (2006), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh [7] Hồng Thị San (1986), Phân loại thực vật, tập 1, Nhà xuất Giáo dục [8] Bùi Xn V ng (2013), Giáo trình phân tích công cụ, Đại học Đà Nẵng Tiếng anh [9] Calixto JB, Santos AR, Cechinel Filho V, Yunes RA (1998), Protective effect of Lygodium flexuosum (L.) A review of the plants of the genus Phyllanthus: their chemistry, pharmacology, and therapeutic potential[J] Med Res Rev, 18(4), pp 225-258 [10] Council of Scientific and Industrial Research (1998), The wealth of India: a dictionary of Indian raw materials and industrial products[M] New Delhi: Publications and Information Directorate, Council of Scientific and Industrial Research 90 [11] Jamshidzadeh A, Fereidooni F, Salehi Z, Niknahad H (2005), Hepatoprotective activity of Gundelia tourenfortii[J] J Ethnopharmacol, 101(1-3), pp 233-237 [12] Janick, Jules; Robert E Paull (2008), The Encyclopedia of Fruit & Nuts CABI, pp 373 [13] Leeya, Yuttapong; Mulvany, Michael J, Queiroz, Emerson F, Marston, Andrew, Hostettmann, Kurt, Jansakul, Chaweewan (2010), "Hypotensive activity of an n-butanol extract and their purified compounds from leaves of Phyllanthus acidus (L.) Skeels in rats", European Journal of Pharmacology 649 (1–3): 301–13 [14] Morton J (1987), Otaheite Gooseberry, In: Fruits of warm climates, Julia F, Morton, Miami, FL, pp 217–219 [15] National Geographic (2008), Edible: an Illustrated Guide to the World's Food Plants National Geographic Books, pp 110 [16] Sousa, M.; Ousingsawat, J, Seitz R, Puntheeranurak S, Regalado A, Schmidt A, Grego T, Jansakul C et al (2006), "An Extract from the Medicinal Plant Phyllanthus acidus and Its Isolated Compounds Induce Airway Chloride Secretion: A Potential Treatment for Cystic Fibrosis" Molecular Pharmacology 71 (1): 366–76 [17] Thyagarajan S, Jayaram S (1992), Natural history of Phyllanthus amarus in the treatment of hepatitis B[J] Indian J Med Microbiol, 10(2), pp 64-80 Trang web [18] http://duocthaothucdung.blogspot.com/2014/05/chum-ruot-otaheitegooseberry.html (04/10/2014) [19] http://www.hoahocngaynay.com/vi/hoa-hoc-va-doi-song/hoa-thucpham/239-vitamin-c.html (14/10/2014) 91 [20] http://menvisinh.org/content/bacillus-subtilis (31/10/2014) [21] http://en.wikipedia.org/wiki/Phyllanthus_acidus (27/11/2014) [22] http://en.wikipedia.org/wiki/Stigmasterol (18/10/2014) [23] http://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Phytol (20/10/2014) [24] http://vi.wikipedia.org/wiki/Axit_gallic (9/11/2014) [25] http://vi.wikipedia.org/wiki/Klebsiella (31/10/2014) [26] https://sites.google.com/site/raurungvietnam/rau-than-go-lon/cay-chumruot (4/10/2014) [27] http://voer.edu.vn/m/phan-tich-as-bang-phuong-phap-aas/37087360 (28/09/2014) [28] http://www.benhvienlongxuyen.com/nuke/modules.php?name= News&op= viewst&sid=4932 (20/10/2014) [29] http://www.kilobooks.com/archive/index.php/t-103150.html [30] http://www.webmd.com/vitamins-supplements/ingredientmono-939-betasitosterol.aspx?activeingredientid=939&activeingredientname=betasitosterol (17/10/2014) [31] http://123doc.vn/document/1214910-luan-van-tot-nghiep-nghien-cuuche-bien-nuoc-giai-khat-len-men-tu-trai-chumruot.htm?page=6(04/10/2014) [32] http://www.slideshare.net/nhattamnhattam/ph-uv-vis (28/10/2014) PHỤ LỤC T QUẢ HẢO S T HOẠT TÍNH H NG HUẨN Mẫu 1: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi n-hexane Vi sinh vật S aureus Bacillus subtilis Bacillus cereus P aeruginosa Escherichia coli Shigella spp Klebsiella Proteus Salmonella spp Candida albicans C0 0 0 0 0 0 Đƣờng kính vòng kháng khuẩn (mm) C1 C2 C3 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 0 0 0 0 0 Mẫu 2: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi ethyl acetate Vi sinh vật S aureus Bacillus subtilis Bacillus cereus P aeruginosa Escherichia coli Shigella spp Klebsiella Proteus Salmonella spp Candida albicans C0 10 0 0 15 0 Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (mm) C1 C2 C3 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 0 0 0 0 0 Mẫu 3: dịch chiết lỏng-lỏng dung môi chloroform Vi sinh vật S aureus Bacillus subtilis Bacillus cereus P aeruginosa Escherichia coli Shigella spp Klebsiella Proteus Salmonella spp Candida albicans C0 0 0 0 0 0 Đƣờng kính vịng kháng khuẩn (mm) C1 C2 C3 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 0 0 0 0 0 Mẫu 4: dịch chiết lỏng-lỏng cắn chloroform dung môi methanol Vi sinh vật S aureus Bacillus subtilis Bacillus cereus P aeruginosa Escherichia coli Shigella spp Klebsiella Proteus Salmonella spp Candida albicans C0 0 0 0 0 0 Đƣờng kính vòng kháng khuẩn (mm) C1 C2 C3 C4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C5 0 0 0 0 0 ... chiết tách thích hợp chất từ vỏ thân chùm ruột Tam Kỳ, T nh Quảng Nam - Xác định thành phần hóa học số dịch chiết từ vỏ thân chùm ruột - Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết từ vỏ thân chùm. .. phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung mơi n-hexane Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung mơi chloroform Thành phần hóa học dịch chiết lỏng-lỏng dung môi ethyl acetate Thành phần hóa học dịch. .. 10 1.4 Lá chùm ruột 11 1.5 Quả chùm ruột 12 1.6 Cấu tạo hóa học số chất có chùm ruột 14 1.7 Hoa chùm ruột 19 2.1 Cây chùm ruột Tam Kỳ -Quảng Nam 21 2.2 Chiết máy soxhlet 25 2.3 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng