Bài viết Ảnh hưởng của điều kiện chiết đến hàm lượng Polyphenol và khả năng chống oxy hóa của dịch chiết lá bầu đất (gynura procumbens (lour) merr.) trồng tại Khánh Hòa trình bày lá bầu đất Gynura procumbens (Lour.) Merr. là cây dược liệu được sử dụng phổ biến ở các nước Đông Nam Á trong việc điều trị các bệnh viêm nhiễm, mỡ máu, cao huyết áp và tiểu đường,... Mời các bạn cùng tham khảo.
Vietnam J Agri Sci 2016, Vol 14, No 8: 1248-1260 Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam 2016, tập 14, số 8: 1248-1260 www.vnua.edu.vn ẢNH HƯỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN CHIẾT ĐẾN HÀM LƯỢNG POLYPHENOL VÀ KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA CỦA DỊCH CHIẾT LÁ BẦU ĐẤT (Gynura procumbens (Lour) Merr.) TRỒNG TẠI KHÁNH HÒA Phạm Thị Kim Quyên1, Nguyễn Văn Minh2, Nguyễn Thế Hân2* Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III Khoa Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Nha Trang Email*: hannt@ntu.edu.vn Ngày gửi bài: 18.03.2016 Ngày chấp nhận: 15.07.2016 TÓM TẮT Lá bầu đất Gynura procumbens (Lour.) Merr dược liệu sử dụng phổ biến nước Đông Nam Á việc điều trị bệnh viêm nhiễm, mỡ máu, cao huyết áp tiểu đường Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng điều kiện chiết bao gồm: dung môi chiết, nồng độ dung môi chiết, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi, thời gian chiết, nhiệt độ chiết phương pháp chiết (ngâm tĩnh có hỗ trợ sóng siêu âm), đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa bầu đất Gynura procumbens (Lour) Merr.) Phương pháp Folin - Ciocalteu’s sử dụng để xác định hàm lượng polyphenol tổng số khả bắt gốc tự DPPH (2,2’ - diphenyl - picrylhydrazyl) tổng lực khử sử dụng để đánh giá khả chống oxy hóa Điều kiện chiết thích hợp xác định sau: dung môi chiết 50% methanol, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 1/50, nhiệt độ chiết 60C, thời gian chiết 30 phút sử dụng phương pháp chiết có hỗ trợ sóng siêu âm Dịch chiết thu điều kiện thích hợp có hàm lượng polyphenol tổng số, khả bắt gốc tự DPPH (EC50) tổng lực khử (EC50) 48,49 mg GAE/g dịch chiết khô, 0,13 0,06 mg/ml Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết từ bầu đất có tiềm sử dụng làm chất chống oxy hóa tự nhiên Từ khóa: Lá bầu đất Gynura procumbens, polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa, điều kiện chiết Effect of Extraction Conditions on Polyphenol Content and Antioxidant Activity of the Extract from Gynura Procumbens (Lour) Merr Leaves ABSTRACT Gynura procumbens (Lour.) Merr is a well - known traditional herb in South East Asia and it is widely used to treat inflammation, high cholesterol level, high blood pressure and diabetes In the present study, the effects of various extraction conditions were investigated: solvent, solvent concentration, material to solvent ratio, extraction temperature, extraction time and extraction techniques (maceration and ultrasonic - assisted) on total phenolic content (TPC) and antioxidant activity of the extract from leaves of Gynura procumbens (Lour) Merr cultivated in Khánh Hoa province Folin - Ciocalteu’s method was used for the determination of TPC, while the antioxidant activity was determined by 2,2’ - diphenyl - - picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity and reducing power assays The best extraction conditions were as follows: 50% aqueous methanol as the extraction solvent,1: 50 material to solvent ratio, the extraction temperature at 60C and the extraction time of 30 min, using ultrasonic - assisted extraction The total phenolic content, DPPH radical scavenging activity (EC 50) and reducing power (EC50) under suitable condition, were 48.49 mg GAE/g dry extract, 0.13 and 0.06 mg/ml, respectively The present study suggested that the Gynura procumbens extract could be a promising source of natural antioxidants Keywords: Gynura procumbens leaves, polyphenol, antioxidant activity, extraction conditions 1248 Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn Văn Minh, Nguyễn Thế Hân ĐẶT VẤN ĐỀ Oxidative stress cân việc sản xuất gốc tự (free radicals) hoạt động chất chống oxy hóa (antioxidants) thể sinh vật Sự cân oxy hóa nguyên nhân nhiều loại bệnh tật nguy hiểm ung thư (Nidhin et al., 2015), suy giảm trí nhớ, xơ vữa động mạch (Pohanka, 2013), suy tim, nhồi máu tim (Singh et al., 1995), viêm loét dày, thấp khớp thối hóa khớp (Sara et al., 2015) Để giảm nguy mắc bệnh cân oxy hóa gây ra, chất chống oxy hóa sử dụng phổ biến ngành công nghiệp dược phẩm Chất chống oxy hóa sử dụng thường có nguồn từ tổng hợp nguyên liệu tự nhiên Tuy nhiên, người tiêu dùng có xu hướng lo ngại chất chống oxy hóa có nguồn gốc từ tổng hợp butylated hydroxytoluene (BHT) butylated hydroxyanisole (BHA) chất chứng minh gây số tác dụng không mong muốn suy giảm đông máu, viêm phổi (Kahl and Kappus, 1993) Do đó, năm gần đây, nhà nghiên cứu nhà sản xuất thực phẩm, dược phẩm quan tâm nhiều đến hợp chất chống oxy hóa có nguồn gốc từ tự nhiên Polyphenols hợp chất chuyển hóa thứ cấp thực vật Nhóm hợp chất ngày nhận nhiều quan tâm hoạt tính sinh học quan trọng chúng khả chống oxy hóa, kháng khuẩn, kháng viêm ức chế phát triển tế bào ung thư (Kuriyama et al., 2006) Những nghiên cứu dịch tễ học chế độ ăn giàu polyphenol có khả ngăn ngừa nhiều loại bệnh cho người (Kuriyama et al., 2006) Các hợp chất polyphenol nghiên cứu thu nhận từ nhiều nguồn nguyên liệu tự nhiên khác Cây bầu đất Gynura Procumbens (Lour) Merr phân bố rộng rãi nước Đông Nam Á Ở Việt Nam, bầu đất trồng nhiều tỉnh ven biển miền Trung sử dụng để giải độc, nhiệt, tiêu viêm, lợi tiểu chống lão hóa (Nguyễn Thị Ngọc Huệ, 2012) Một số nghiên cứu gần cho thấy dịch chiết từ bầu đất có khả ngăn ngừa điều trị bệnh gan, thận, đường ruột, tim mạch viêm loét (Iskander et al., 2002); giảm hàm lượng cholesterol triglyceride máu (Young and Woodside, 2001) đường huyết (Hassan et al., 2010) Polyphenol nhóm hợp chất chứng minh có tác dụng sinh học kể có bầu đất Đã có số cơng trình nghiên cứu tách chiết hợp chất polyphenol từ bầu đất trồng số nước Đông Nam Á Indonesia (Sadikun et al., 1996) Malaysia (Rosidah et al., 2008; Atiqah et al., 2014) Điều kiện thổ nhưỡng khí hậu chứng minh có ảnh hưởng lớn đến chất có hoạt tính sinh học thực vật (Rebogile et al., 2014) Do vậy, giả thuyết đặt bầu đất trồng Việt Nam có tính chất khác so với đối tượng loại trồng nước khác Do đó, mục tiêu nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết từ bầu đất trồng Khánh Hòa, Việt Nam VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Lá bầu đất Lá bầu đất sử dụng nghiên cứu thu hái vườn trồng người dân thành phố Nha Trang, tỉnh Khánh Hòa vào tháng 01 năm 2015 Lá bầu được sấy khô nhiệt độ 45ºC thời gian Nguyên liệu khô nghiền nhỏ sàng qua lưới sàng có đường kính 0,1 mm Bột bầu đất khơ bao gói chân khơng bao bì PA bảo quản nhiệt độ 40C tiến hành thí nghiệm 2.2 Hóa chất thuốc thử 2,2’ - diphenyl - – picrylhydrazyl (DPPH), acid gallic, thuốc thử Folin - Ciocalteu, Potassium ferricyanide (K3Fe[CN]6), Aluminium chloride (AlCl3), acid tricloric (TCA), Sodium carbonate (Na2CO3) mua từ công ty Sigma Aldrich (Hoa Kỳ); Ethanol methanol mua từ công ty Merck (Đức) 1249 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa 2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiết Phương pháp nghiên cứu đơn yếu tố sử dụng Thí nghiệm sau kế thừa kết nghiên cứu thí nghiệm trước Để nghiên cứu ảnh hưởng loại dung môi chiết, sử dụng loại dung môi khác bao gồm: nước, methanol 100% ethanol 100% Các thông số khác thời gian chiết, nhiệt độ chiết tỷ lệ nguyên liệu/dung môi chiết giữ cố định với giá trị tương ứng là: 30 phút, 60ºC 1/50 g/ml Loại dung mơi chiết thích hợp chọn dựa vào hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa Ảnh hưởng nồng độ dung mơi chiết đến hàm lượng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa bầu đất nghiên cứu mốc 0%, 25%, 50%, 75% 100% Các thông số khác giữ cố định bao gồm: dung mơi chiết thích hợp lựa chọn từ thí nghiệm trước, nhiệt độ chiết 60ºC, thời gian chiết 30 phút, tỷ lệ nguyên liệu/dung mơi 1/50 (g/ml) Nồng độ dung mơi chiết thích hợp lựa chọn dựa vào hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi chiết nghiên cứu mức 1/10, 1/20, 1/30, 1/40, 1/50 1/60 (g/ml) Các thông số giữ cố định bao gồm: loại nồng độ dung mơi chiết thích hợp lựa chọn từ thí nghiệm trước, nhiệt độ chiết 60ºC, thời gian chiết 30 phút Tỷ lệ nguyên liệu/dung môi chiết thích hợp lựa chọn dựa vào hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đếm hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết bầu đất thực 30, 45, 60, 75 90ºC Các thông số giữ cố định bao gồm: loại dung môi, nồng độ dung môi chiết tỷ lệ ngun liệu/dung mơi thích hợp chọn từ thí nghiệm trước, thời gian chiết 30 phút Nhiệt độ chiết thích hợp chọn dựa vào hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa Ảnh hưởng thời gian chiết đếm hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết bầu đất nghiên cứu mức 10, 20, 30, 40, 50 60 phút Các thông 1250 số giữ cố định bao gồm: loại dung môi, nồng độ dung môi chiết, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi nhiệt độ chiết thích hợp lựa chọn từ thí nghiệm trước Thời gian chiết thích hợp chọn dựa vào hàm lượng polyphenol tổng số hoạt tính chống oxy hóa Để đánh giá ảnh hưởng sóng siêu âm đến hiệu chiết hợp chất polyphenol hoạt tính chống oxy hóa bầu đất, nguyên liệu chiết điều kiện thích hợp (loại dung môi chiết, nồng độ dung môi chiết, tỷ lệ nguyên liêu/dung môi chiết, nhiệt độ chiết, thời gian chiết) lựa chọn từ thí nghiệm trên, điều kiện có hỗ trợ sóng siêu âm khơng có hỗ trợ sóng siêu âm Điều kiện chiết có hỗ trợ sóng siêu âm sau: mẫu chiết bể siêu âm Bể siêu âm S15 - S900H (Elma Co., Đức) tần số sóng siêu âm 37 Hz Đối với tất trình chiết trên, g nguyên liệu khô sử dụng cho lần chiết Quá trình chiết tĩnh thực bể ổn nhiệt Dịch lọc thu sau trình lọc hút chân không, cô đặc thiết bị cô quay chân không R210 (Buchi, Thụy Sĩ) nhiệt độ 45ºC áp suất chân không 123 mBar Cô đặc đến thể tích dịch chiết cịn lại khoảng 10 ml Dịch chiết cô đặc sử dụng để đánh giá hàm lượng polyphenol tổng, khả chống oxy hóa độ ẩm Số liệu hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa tính dựa hàm lượng chất khô dịch chiết 2.4 Phương pháp phân tích 2.4.1 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số Hàm lượng polyphenol tổng số xác định theo phương pháp Singleton et al (1999) Lấy xác 0,1 ml dịch chiết bỏ vào 0,9 ml nước cất Sau cho thêm ml thuốc thử Folin - Ciocalteu 10% 2,5 dung dịch ml Na2CO3 7,5% Hỗn hợp lắc máy Vortex thời gian 30 giây trước giữ điều kiện tối nhiệt độ phòng thời gian 30 phút Sau hỗn hợp đo bước sóng 760 nm máy quang phổ kế Carry 50 (Spectrophotometry, Varian, Australia) Acid Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn Văn Minh, Nguyễn Thế Hân gallic dùng để xây dựng đường chuẩn kết biểu diễn miligam acid gallic tương đương (mg GAE)/g dịch chiết khơ trung bình phân tích ANOVA theo phép thử Ducan Giá trị P < 0,05 khác có ý nghĩa thống kê 2.4.2 Xác định tổng lực khử KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Năng lực khử xác định theo phương pháp Oyaizu (1986) với vài hiệu chỉnh nhỏ Lấy ml dịch chiết trộn với đệm phosphate pH = 6,6 để đạt thể tích cuối 1,5 ml trước thêm 0,5 ml dung dịch K3(Fe[CN]6) 1% Hỗn hợp ủ 50ºC 20 phút, sau thêm 0,5 ml dung dịch TCA (Tricloric acid) 10% ml nước cất, cuối cho thêm 0,4 ml dung dịch AlCl3 0,1% Độ hấp thu quang học xác định bước sóng 700 nm Độ hấp thu quang học cao lực khử mạnh Kết báo cáo giá trị EC50 nồng độ dịch chiết cho độ hấp thụ quang 0,5 3.1 Ảnh hưởng loại dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất 2.5 Xử lý số liệu Dung môi yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu chiết hợp chất có hoạt tính sinh học từ nguồn ngun liệu tự nhiên Trong nghiên cứu tại, loại dung mơi chiết có độ phân cực khác bao gồm methanol, ethanol nước sử dụng Hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết bầu đất (27,15 mg GAE/g dịch chiết) đạt cao (P < 0,05) chiết dung môi methanol; ethanol nước (Hình 1A) Hiệu suất chiết phụ thuộc vào độ phân cực dung môi chất chất cần thu nhận nguyên liệu Polyphenol có nhiều nhóm chất, nhóm có độ phân cực khác (Peschel et al., 2006) Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Atiqah et al (2014) nguyên liệu bầu đất trồng Malaysia Theo đó, hàm lượng polyphenol dịch chiết methanol cao dịch chiết nước thấp Bushra et al (2009) nghiên cứu ảnh hưởng dung môi chiết (ethanol 100%, methanol 100%, ethanol 80% methanol 80%) đến hàm lượng polyphenol tổng số số loài thảo dược trồng Pakistan cho thấy methanol cho hiệu chiết polyphenol cao dung môi chiết khác nguyên liệu Moringa oleifera, Eugenia jambolana, Acacia nilotica, Azadirachta indica, Terminalia arjuna Ficus religiosa Methanol chứng minh dung mơi chiết thích hợp để thu nhận polyphenol từ nhiều nguồn nguyên liệu thực vật khác (Nurhanan and Wan Rosli, 2012) Số liệu biểu diễn giá trị trung bình độ lệch chuẩn (mean SD) Phần mềm Microsoft Excel 2007 SPSS 16.0 sử dụng để tính tốn số liệu vẽ đồ thị Giá trị Ảnh hưởng loại dung mơi chiết đến khả chống oxy hóa từ dịch chiết bầu đất có xu hướng tương tự hàm lượng polyphenol tổng số Đối với lực khử, dịch 2.4.3 Xác định khả bắt gốc tự DPPH Khả khử gốc tự DPPH dịch chiết xác định theo phương pháp Fu and Shieh (2002) với vài hiệu chỉnh nhỏ Dịch chiết chuẩn bị nồng độ khác trộn với nước cất để đạt thể tích tổng cộng ml Sau thêm ml dung dịch DPPH 0,1 mM (pha ethanol 99,5%), lắc để yên bóng tối 30 phút Độ hấp thu quang học đo bước sóng 517 nm Khả khử gốc tự DPPH xác định theo cơng thức sau: DPPH (%) = 100 × (ACT - ASP)/ACT Trong đó: ACT: Độ hấp thu quang học mẫu trắng không chứa dịch chiết; ASP: Độ hấp thu quang học mẫu có chứa dịch chiết Kết báo cáo giá trị EC50 nồng độ dịch chiết cho khả khử gốc tự DPPH 50% 1251 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa (A) (B) ,300 Tổng lực khử Fe (EC50, mg/ml) Hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g dịch chiết) 40 a 30 ab b 20 10 a ,200 b c ,100 Nước Ethanol Methanol Metanol Khả bắt gốc tự DPPH (EC50, mg/ml) Nước Ethanol Methanol (C) 000 c 000 b a 000 000 000 Nước Ethanol Methanol Metanol Hình Ảnh hưởng dung mơi chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Các chữ khác cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) chiết thu sử dụng methanol, ethanol nước có giá trị EC50 0,21; 0,17; 0,15 mg/ml có khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) (Hình 1-B) Khả khử gốc tự DPPH dịch chiết methanol cao số dung môi sử dụng nghiên cứu (P < 0,05) Giá trị EC50 dịch chiết bầu đất ba loại dung môi chiết methanol, ethanol nước 0,09; 0,11; 0,16 mg/ml (Hình 1C) Nhiều nghiên cứu chứng minh khả hòa tan polyphenol dung môi chiết phụ thuộc vào độ phân cực dung mơi, methanol ethanol dung mơi thích hợp nhất, sử dụng rộng trãi để chiết tách polyphenol từ thực vật (Tabart et al., 1252 2007; Wang et al., 2008) Dựa vào kết này, dung môi methanol lựa chọn để tiến hành nghiên cứu 3.2 Ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất Ảnh hưởng nồng độ methanol nước (0 - 100%) đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa nghiên cứu Kết cho thấy tăng nồng độ methanol từ lên 50% hàm lượng polyphenol tổng số tăng từ 18,9 đến 31,61 mg GAE/g dịch chiết Tuy nhiên, tiếp tục tăng nồng độ methanol từ 50 đến 100% hàm lượng giảm xuống (P < 0,05) (Hình 2-A) Như vậy, hỗn Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn n Văn Minh, Nguyễn Nguy Thế Hân hợp methanol nước (50%) cho hiệu chiết cao so với dung môi đơn lẻ Tuy nhiên, nồng độ thích hợp khác lồi thực vật (Chew et al.,, 2011) Ví dụ, nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ methanol đến hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết Limnophila aromatica, Do et al (2014) báo cáo 75% nồng độ cho hiệu chiết hợp chất polyphenol cao (35,7 mg GAE/g) Khi sử dụng nước dung môi chiết, lượng lớn protein, polysaccaride chất vơ khác trích khỏi ngun liệu làm cản trở q trình hịa tan hợp chất polyphenol (Koffi et al., 2000; Boeing et al., al 2014) Tổng lực khử khả bắt gốc tự DPPH có xu hướng ng tương tự Ở nồng độ methanol 50%, tổng lực khử khả bắt gốc tự DPPH cao Dựa kết thu được, methanol 50% sử dụng để thực nghiên cứu 000 (C) Khả bắt gốc tự DPPH (EC50, mg/ml) a 000 b 000 d cd c 000 000 25 50 75 100 Nồng độ dung môi chiết (%) Hình Ảnh hưởng nồng độ dung mơi chiết đến hàm lượng polyphe polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Các chữ khác cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) 1253 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hịa 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ ngun liệu/dung mơi chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất 40 (A) a b 30 00 ab Tổng lực khử Fe (EC50, mg/ml) Hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g dịch chiết) Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi (NL/DM) từ 1/10 đến 1/60 đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất mơ tả hình Khi tỉ lệ giảm từ 1/10 xuống 1/50 (g/ml) hàm lượng polyphenol chiết tăng lên đáng kể từ 9,37 lên 36,82 mg GAE/g dịch chiết Trong đó, tỷ lệ NL/DM 1/50 (g/ml) cho hàm lượng polyphenol cao Tuy nhiên, tiếp tục giảm tỉ lệ xuống 1/50 1/60, hàm lượng polyphenol giảm không đáng kể (P > 0,05) Tổng lực khử khả bắt gốc tự DPPH có xu hướng tương tự Ở tỉ lệ 1/50 (g/ml), tổng lực khử khả bắt gốc tự DPPH cao Điều lý giải tăng tỉ lệ NL/DM dẫn đến chênh lệch gradient nồng độ chất cần chiết nguyên liệu với môi trường chiết nên hiệu chiết giảm (Gertenbach, 2001) Ở tỷ lệ dung môi methanol với nước theo tỉ lệ khác ta tạo hệ dung mơi có khả hịa tan polyphenol mức độ khác Để chọn tỉ lệ NL/DM thích hợp cần phải tính đến hiệu chung q trình có liên quan đến chi phí lượng, thiết bị, chi phí dung mơi, xử lý loại bỏ bã chiết vấn đề môi trường Vì vậy, tùy vào mục đích cụ thể lượng dịch chiết cần thu mà chọn tỉ lệ NL/DM chiết thích hợp Với kết nghiên cứu tại, tỉ lệ NL/DM chiết 1/50 (g/ml) lựa chọn để thực nghiên cứu c d 20 e 10 (B) a b 00 c cd d d 1/40 1/50 1/60 00 00 1/10 1/10 1/20 1/30 1/40 1/50 1/60 1/20 1/30 Tỷ lệ nguyên liệu/dung môi (g/ml) Tỷ lệ nguyên liệu/dung môi (g/ml) Khả bắt gốc tự DPPH (EC50, mg/ml) (C) 00 00 a b c d 00 de e 1/50 1/60 00 1/10 1/20 1/30 1/40 Tỷ lệ nguyên liệu/dung môi (g/ml) Hình Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Các chữ khác cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) 1254 Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn Văn Minh, Nguyễn Thế Hân 3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất Nhiệt độ thơng số quan trọng ảnh hưởng đến q trình trích ly hợp chất polyphenol từ nguyên liệu thực vật Trong nghiên cứu này, ảnh hưởng nhiệt độ chiết (30, 45, 60, 75 90ºC) đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa nghiên cứu (Hình 4) Kết nghiên cứu cho thấy hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết bầu đất tăng lên theo chiều tăng nhiệt độ khoảng từ 30 lên 60ºC (P < 0,05); hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết nhiệt độ 30, 45 60ºC 21,31; 25,74 31,89 mg GAE/g dịch chiết Tuy nhiên, tăng nhiệt độ từ 60 đến 90ºC hàm lượng hợp chất polyphenol dịch chiết có xu hướng giảm Điều giải thích sau: nhiệt độ chiết tăng, làm tăng khả hòa tan khuếch tán hợp chất polyphenol; làm giảm độ nhớt dung môi; tăng trình chuyển chất thấm ướt nguyên liệu chiết, qua làm tăng hiệu chiết hợp chất polyphenol (AlFarsi and Lee, 2008; Wang et al., 2008) 00 a 30 ab c (B) (A) b d 20 10 Tổng lực khử Fe (EC50, mg/ml) Hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/ g dịch chiết) 40 a 00 b d cd c 00 00 30 45 60 75 Nhiệt độ chiết (ºC) 30 90 45 75 90 Nhiệt độ chiết (oC) 00 Khả bắt gốc tự DPPH (EC50, mg/ml) 60 (C) a b 00 cd c 45 60 75 Nhiệt độ chiết (ºC) 90 d 00 30 Hình Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Các chữ khác cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) 1255 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa Trong nghiên cứu này, hiệu chiết tăng lên theo chiều tăng nhiệt độ khoảng 30 đến 60ºC có xu hướng giảm xuống tiếp tục tăng nhiệt độ chiết Kết nhiệt độ cao phá hủy số nhóm chất chống oxy hóa khơng bền với nhiệt độ (Liyana and Shahidi, 2005) Khi tăng nhiệt độ chiết, hợp chất polyphenol nguyên liệu bị phân hủy phản ứng thủy phân, oxy hóa nội polymer hóa (Simon et al., 1990) Đối với khả chống oxy hóa, nhiệt độ chiết ảnh hưởng rõ rệt đến tổng lực khử sắt khả bắt gốc tự DPPH dịch chiết từ bầu đất Về tổng lực khử, ăng nhiệt độ chiết từ 30 lên 60ºC giá trị EC50 dịch chiết bầu đất giảm từ 0,20 đến 0,15 mg/ml Tuy nhiên, tiếp tục tăng nhiệt độ chiết từ 75 đến 90ºC tổng lực khử dịch chiết có xu hướng giảm; giá trị EC50 dịch chiết tăng từ 0,16 lên 0,18 mg/ml Khả bắt gốc tự DPPH có xu hướng tương tự Ở 60ºC có khả bắt gốc tự DPPH cao Dựa kết thu được, 60ºC sử dụng để thực nghiên cứu 3.5 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất mơ tả Hình Khi tăng thời gian chiết từ 10 đến 40 phút hàm lượng tăng nhanh từ 17,16 đến 34,80 mg GAE/g dịch chiết 40 phút thời gian chiết thu hàm lượng cao Tuy nhiên, tiếp tục tăng thời gian chiết lên 50 60 phút hàm lượng polyphenol tổng số tăng nhẹ khác có ý nghĩa mặt thống kê (P 0,05) (Hình 5-A) Điều giải thích định luật thứ hai Fick khuếch tán, thời gian chiết tăng hàm lượng chất nguyên liệu khuếch tán từ tế bào nhiều (Cracolice and Peters, 2009) Tuy nhiên, hiệu chiết chất có hoạt tính sinh học không tăng sau khoảng thời gian định Khoảng thời gian 1256 phụ thuộc vào điều kiện chiết khác dung môi, nhiệt độ chiết, tỷ lệ DM/NL chất nguyên liệu hợp chất cần tách chiết (Silva et al., 2007), kéo dài thời gian chiết hợp chất polyphenol bên nguyên liệu gần đạt trạng thái cân nên dịch chiết thu có hàm lượng polyphenol tổng số tăng chậm dần sau Ngoài ra, hợp chất bị oxy hóa yếu tố bất lợi từ môi trường chiết (nhiệt độ, ánh sáng, oxy) (Naczk and Shahidi, 2004) Ảnh hưởng thời gian chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất thể hình 3-C Kết cho thấy thời gian chiết ảnh hưởng rõ rệt đến tổng lực khử sắt khả bắt gốc tự DPPH Về tổng lực khử, tăng thời gian chiết từ 10 đến 40 phút, lực khử dịch chiết bầu đất tăng dần nên giá trị EC50 dịch chiết có xu hướng giảm dần Cụ thể giá trị EC50 dịch chiết sử dụng thời gian chiết 10, 20, 30 40 phút 0,22; 0,19; 0,15 0,13 mg/ml Tuy nhiên, tiếp tục tăng thời gian chiết từ 40 đến 60 phút tổng lực khử dịch chiết có xu hướng giảm dần nên giá trị EC50 dịch chiết sử dụng thời gian chiết từ 50 đến 60 phút tăng từ 0,16 lên 0,18 mg/ml Đối với lực khử, giá trị EC50 dịch chiết bầu đất dải thời gian chiết 10, 20, 30, 40 phút là: 0,22; 0,19; 0,15; 0,13 mg/ml (P < 0,05) Từ kết phân tích cho thấy thời gian thích hợp cho trình chiết bầu đất 40 phút 3.6 Ảnh hưởng sóng siêu âm đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất Chiết có hỗ trợ sóng siêu âm chứng minh nâng cao hiệu thu nhận chất dinh dưỡng chất có hoạt tính sinh học từ nguồn ngun liệu tự nhiên Trong nghiên cứu ảnh hưởng sóng siêu âm đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất đánh giá (Hình 6) Kết cho thấy so với phương pháp chiết tĩnh, sóng siêu âm nâng Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn n Văn Minh, Nguyễn Nguy Thế Hân b ab 00 a 20 (B) a c 30 Tổng lực khử Fe (EC50, mg/ml) Hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g dịch chiết) 40 d e 10 b 00 c e de d 00 00 10 20 30 40 50 Thời gian chiết (phút) 60 10 20 30 40 50 Thời gian chiết (phút) 60 Khả bắt gốc tự DPPH (EC50, mg/ml) 000 (C) a b 000 c cd cd d 20 30 40 50 Thời gian chiết (phút) 60 000 10 Hình Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Các chữ khác au cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) cao hiệu thu nhận hàm lượng hợp chất polyphenol khả chống oxy hóa từ bầu đất Hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết sử dụng sóng siêu âm 48,49 mg GAE/g dịch chiết, giá trị cao đáng kể (P < 0,05) so với mẫu ĐC chiết điều kiện tĩnh (33,65 mg GAE/g dịch chiết) (Hình 6-A) A) Xu hướng ảnh hưởng sóng siêu âm đến khả chống oxy hóa dịch chiết tương tự hàm lượng hợp chất polyphenol (Hình 6-B-C) Đối với tổng lực khử, giá trị EC50 dịch chiết bầu đất sử dụng sóng siêu âm chiết tĩnh 0,129 0,144 mg/ml khả bắt gốc tự DPPH 0,06; 0,08 mg/ml Sự tăng hiệu chiết hợp chất polyphenol phenol giải thích sau: với chế tác động đa chiều, sóng siêu âm tạo hiệu ứng vật lý học, thay đổi cấu trúc, trạng thái nguyên liệu tăng cường tiếp xúc nguyên liệu dung môi chiết làm tăng khuếch tán hợp chất c polyphenol vào dung môi (Cárcel et al., al 2012; Gogate and Kabadi, 2009) Hiệu suất chiết tăng sóng siêu âm làm tăng mức độ khuấy trộn làm “lỏng” cấu trúc nguyên liệu dẫn đến tốc độ khuếch tán hợp chất từ nguyên liệu đặc biệt polyphenol môi trường tăng (Fazlena et al., 2013; Jian et al.,, 2008) Như vậy, việc sử dụng 1257 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến n hàm lư lượng polyphenol khả chống oxy hóa a dịch d chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồ ồng Khánh Hịa Khả bắt gơc tự DPPH (EC50, mg/ml) 00 (C) 00 * 00 Siêu âm Đối chứng Hình Ảnh hưởng sóng siêu âm đến hàm lượng polyphenol tổng số (A), tổng lực khử (B) khả khử gốc tự DPPH (C) dịch chiết bầu đất Ghi chú: Dấu * cột khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) sóng siêu âm để hỗ trợ trình chiết giúp nâng cao hiệu thu nhận dịch hợp chất polyphenol dịch chiết có khả chống oxy hóa từ bầu đất trợ sóng siêu âm Kết nghiên cứu cho thấy bầu đất nguồn nguyên liệu tiềm để chiết xuất chất chống oxy hóa tự nhiên Đây báo cáo hoạt tính chống oxy hóa bầu đất trồng Việt Nam KẾT LUẬN Nghiên cứu ã xác định điều kiện chiết thích hợp để thu dịch chiết có hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa từ bầu đất: sử dụng dung môi methanol 50%, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi chiết 1/50 (g/ml), nhiệt độ chiết 60ºC, C, thời gian chiết 30 phút có hỗ 1258 TÀI LIỆU U THAM KHẢO KH Alfarsi, M A., Lee, C.Y (2008) Optimization of phenolics and dietary fibre extraction from date seeds Food Chemistry, 108: 977 - 985 Atiqah, A., Halimhimi, Z.M., Amirin, S., Sabariah, I (2014) Antioxydant properties of Gynura Phạm Thị Kim Quyên, Nguyễn Văn Minh, Nguyễn Thế Hân Procumbens extracts and their inhibitory effects on two major human recombinant cytochorome P450S using a high through put luminescence assay Asian J Pharm Clin Res., 7(5): 36 - 41 Boeing, J.S., Barizão, É.O., Costa e Silva, B., Montanher, P.F., Almeida, J., Visentainer, J.V (2014) Evaluation of solvent effect on the extraction of phenolic compounds and antioxidant capacities from the berries: application of principal component analysis Chemistry Central Journal, 8: 48 - 57 Bushra, S., Farooq, A., Muhammad, A (2009) Effect of extraction solvent/Technique on the antioxidant activity of selected medicinal plant extracts Molecule, 14: 2167 - 2180 Cárcel, J A., García - Pérez, J V., Benedito, J., Mulet, A (2012) Food process innovation through new technologies: Use of ultrasound Journal of Food Engineering, 110: 200 - 207 Chew, K.K., Ng, S.Y., Thoo, Y.Y., Khoo, M Z., Wan, Aida, W.M., and Ho, C.W (2011) Effect of ethanol concentration, extraction time and extractiontemperature on the recovery of phenolic compounds and antioxidant capacity of Centella asiatica extracts International Food Research Journal, 18: 571 - 578, 1427 - 1435 Cracolice, M., Peters, E (2009) Basics of introductory chemistry: anactive learning approach, CA: Brooks/Cole Fazlena, H., Norsuraya, S., Nadiah, S.N (2013) Ultrasonic assisted enzymatic reaction: An overview on ultrasonic mechanism and stability activity of the enzyme Business Engineering and Industrial Applications Colloquium (BEIAC), 2013 IEEE, pp 85 - 90 Fu, H.Y., Shieh, D.E (2002) Antioxydant and free radical scavenging activities of edible mushrooms Journal of Food Lipid, 9: 35 - 46 Gertenbach, D (2001) Solid - liquid extraction technologies formanufacturing nutraceuticals In: Mazza G, Maguer ML Shi J (Eds.) Functional foods: biochemical and processing aspects Boca Raton: CRC Press, pp 331 - 66 Gogate, P.R and Kabadi, A.M (2009) A review of applications of cavitation in biochemical engineering/biotechnology Biochemical Engineering Journal, 44(1): 60 - 72 Hassan, Z., Mun, F.Y., Mariam A., Ahmad P.M.Y (2010) Antidiabetic properties and mechanism of action of Gynura procumbens water extract in streptozotocin - induce diabetic rats Molecules, 15: 9008 - 9023 Iskander, M.N., Song, Y., Coupar, I.M., Jiratchariyakul, W (2002) Antiinflammatory screening of the medicinal plant Gynura procumbens Plant Foods for Human Nutrition, 57: 233 - 244 Jian, S., Wenyi, T., and Wuyong, C (2008) Ultrasound accelerated enzymatic hydrolysis of solid leather waste Journal of Cleaner Production, 16(5): 591 - 597 Kahl, R., Kappus, H (1993) Toxicology of the synthetic antioxidants BHA and BHT in comparison with the natural antioxidant vitamin E European Food Research and Technology, 196 (4): 329 - 338 Koffi, E., Sea, T., Đoehe, Y., Soro, S (2010) Effect of solvent type on extraction of polyphenols from twenty three Ivorian plants Journal of Animal and Plant Sciences, 5(3): 550 - 558 Kuriyama, S., Shinazu, T., Ohmori, K., Kikuchi, N (2006) Green tea consumption and mortality due to cardiovascular disease, cancer, and all causes in Japan: the Ohsaki study JAMA, 296(10): 1255 1265 Liyana,P.C M., Shahidi, F (2005) Optimization of extraction of phenolic compounds from wheat using response surface methodology Food Chemistry, 93: 47 - 56 Naczk, M., Shaidi, F (2004) Exxtraction and analysis of phenolics in food, 1054(1 - 2): 95 - 111 Nguyễn Thị Ngọc Huệ (2012) Cây bầu đất Tài nguyên thực vật di truyền Việt Nam Nidhin, J., Yanli, Z.J., Andras, P., Stephen, V.F., (2015) Oxidative stress and ADHD A Meta analysis Journal of Attention Disorders, 19(11): 915 - 924 Nurhanan, A.R., Wan Rosli, W.I (2012) Evaluation of polyphenol content and antioxidant activities of some selected organic and aqueous extracts of cornsilk (Zea Mays Hairs) Journal of Medical and Bioengineering, 1: 48 - 51 Oyaizu, M (1986) Antioxydantative activity of browing products of glucosamine fractionated by organic solvent and thin - layer chroma - tography Nippon Shokukhin Kogyo Gakkaishi, 3(5): 771 775 Peschel, W., Sanchez, F., Plescher, A., Gartzia, I., Jimenez, D., Lamuela - Raventos, R., Buxaderas, S (2006) An industrial approach in the search of natural antioxydants from vegetable and fruit wastes Food Chem., 97: 137 - 150 Pohanka, M (2013) Alzheimer´s disease and oxidative stress: a review Current Medicinal Chemistry, 21(3): 356 - 364 Rebogile, R.M., Olaniyi, A.Fawole., Marietjie, A.S., Umezuruike, L.O (2014) Preharvest and postharvest factors influencing bioactive compounds in pomegranate (Punica granatum L.) A review Scientia Horticulturae, 178: 144 - 123 1259 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa Rosidah, Yam M.F., Sadikun, A., Asmawi, M.Z (2008) Antioxydant po - tential of Gynura procumbens Pharmaceutical Biology, 46: 616 - 625 Sadikun, A., Idus, A., Ismail, N (1996) Sterol and sterol glycosides from the leaves of Gynura procumbens Nat Prod Sci., pp 19 - 23 Sara, J.F., Manuel, G., Francisco, D.A., Lucia, P.C., Miriam, G., Christoph, U.C (2015) Oxidative stress and antioxidant parameters in patients with major depressive disorder compared to healthy controls before and after antidepressant treament: results from a meta - analysis J Clin Psychiatry, 76 (22): 1658 - 1667 Silva, E.M., Souza, J.N.S., Rogez, H., Rees, J.F and Larondelle, Y (2007) Antioxidant activities and polyphenolic contents of fifteen selected plant species from the Amazonian region Food Chemistry, 101: 1012 - 1018 Simon, B.F., Ilzarbe, J.P., Hernandez, C., Cordoves, G., Estrella (1990) HPLC study of the efficiency of extraction of phenolic compounds Revised manuscript, pp 35 - 37 1260 Singh, N., Dhalla, A.K., Seneviratne, C., Singal, P.K (1995) Oxidative stress and heart failure Molecular and Cellular Biochemistry, 147(1): 77 81 Singleton, V.L., Orthofer, R., Lamuela - Raventos, R.M (1999) Analysis of total phenol andother oxydation substrates and antioxydants by means of Folin - Ciocalteu reagent Method Enzymol, 299: 152 - 78 Tabart, J., Kevers, C., Sipel, A., Pincemail, J., Defraigne, J.O., Dommes, J (2007) Optimisation of extraction of phenolics and antioxydants from black currant leaves and buds and of stability during storage Food chemistry, 105: 1268 - 1275 Wang, J., Sun, B.G., Cao, Y., Tian, Y., Li, X.H (2008) Optimization of ultrasound - assisted extraction of phenolic compound from wheat bran Food chemistry, 106: 804 - 810 Young, I.S., Woodside, J.V (2001) Antioxydants in health and disease Journal of Clinical Pathology, 54: 176 - 186 ... (Đức) 1249 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa 2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiết Phương... 1253 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour) Merr.) trồng Khánh Hòa 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi chiết đến hàm. .. chiết Kết báo cáo giá trị EC50 nồng độ dịch chiết cho khả khử gốc tự DPPH 50% 1251 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa dịch chiết bầu đất (Gynura procumbens (Lour)