Nghiên cứu này được thực hiện nhằm khẳng định tình trạng nhiễm bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển nuôi tại biển Khánh Hòa. Kết quả kiểm tra mô bệnh học ở những cá hấp hối cho thấy sự có mặt của các không bào hình tròn hoặc hình oval ở mắt và não cá bệnh với kích cỡ thay đổi từ 4-30µm. Điều này khẳng định sự có mặt của virus gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển nuôi tại Khánh Hòa.
Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản - số 01/2008 Trường Đại học Nha Trang VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU BỆNH HOẠI TỬ THẦN KINH Ở CÁ BIỂN NUÔI TẠI KHÁNH HỊA 1 ThS Trần Vĩ Hích , KS Phạm Thị Duyên Khoa Nuôi trồng Thủy sản - Trường Đại học Nha Trang Virus hoại tử thần kinh (VNN) lan rộng khắp nơi giới với số lượng loài cá biển cảm nhiễm ngày gia tăng (Munday Nakai 1997) Cá nhiễm virus có biểu bất ổn thần kinh như: bơi bất thường, màu sắc thể chuyển sang trắng xám Chúng phát dấu hiệu bất thường, tương tự với dấu hiệu bệnh hoại tử thần kinh cá biển nuôi thương phẩm (cá mú - Epinephelus spp, cá chẽm - Lates calcarifer cá giò -Rachycentron canadum) Khánh Hòa gây tỉ lệ chết cho cá nuôi cao Kết kiểm tra mô bệnh học cá hấp hối cho thấy có mặt khơng bào hình trịn hình oval mắt não cá bệnh với kích cỡ thay đổi từ 4-30µm Điều khẳng định có mặt virus gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển ni Khánh Hịa I MỞ ĐẦU nhiều tác giả, nhiên đến chưa Bệnh hoại tử thần kinh (VNN - viral nervous necrosis) hay cịn gọi bệnh não có thơng báo vấn đề Nghiên cứu thực nhằm khẳng định tình võng mạc (VER - viral encephalopathy and vetinopathy) piscine nodavirus (Betanodavirus) trạng nhiễm bệnh hoại tử thần kinh cá biển nuôi biển Khánh Hịa gây nhiều lồi cá biển phân bố rộng rãi nhiều vùng địa lý khác (Takana ctv II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2003, Tanaka ctv 2004, Curtis ctv Vật liệu 2001 ) Bệnh lần mô tả cá chẽm Dicentrarchus labrax Ballance & Các loài cá biển ni Khánh Hịa cá mú (Epinephelus spp.) cá chẽm (Lates Galletde Saint A 1988 cá chẽm, Later calcarifer Úc (Glazebook ctv 1990) có xuất dấu hiệu tương tự dấu hiệu Sau bệnh tìm thấy nhiều lồi cá biển khác bao gồm 19 loài thuộc 10 bệnh VNN mô tả nhiều tác Curtis ctv 2001, Tanaka ctv calcarifer) cá bớp (Rachycentron canadum) họ từ vùng Ấn Độ - Thái Bình Dương đến Địa 2003, Tanaka ctv 2004 Trung Hải Scandinavi (Munday Nakai 1997) Bệnh thường xảy giai đoạn ấu Việc thu mẫu tiến hành từ tháng 8/2006 - 9/2007 Mỗi mẫu (đìa lồng ni) trùng ấu niên gây tỉ lệ chết tích lũy cao Ở Khánh Hịa, năm gần có dấu hiệu bệnh thu từ 5-10 cá Mẫu vận chuyển sống phịng thí nghiệm để kiểm nghề ni tơm khơng cịn chiếm vị trí độc tơn, nghề ni cá biển xác định tra, phân tích Phương pháp mô bệnh học ngành kinh tế quan trọng đem lại lợi Cá có kích thước lớn 3cm giải nhuận cao cho người nuôi Tuy nhiên vấn đề dịch bệnh mối đe dọa trực tiếp đến phẫu lấy não mắt, cố định dung dịch Bouin’s, cá nhỏ 3cm cố nhà sản xuất giống nuôi cá thương phẩm Kết điều tra sơ định nguyên đầu cá dung dịch Bouin’s Mô cố định chuẩn bị theo kỹ cho thấy cá nuôi vùng biển Khánh thuật mô học tiêu chuẩn, cắt lát từ – 7µm Hịa thường gặp bệnh có dấu hiệu tương tự bệnh hoại tử thần kinh thông báo nhuộm với thuốc nhuộm Hematocyline 19 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản - số 01/2008 Trường Đại học Nha Trang Eosin, sau đươc gắn bom canada quan cá mú cọp (E fuscoguttatus), cá mú mè (E sát đưới kính hiển vi quang học Phương pháp xử lý số liệu tauvina), cá mú nghệ (E lanceolatus), cá mú chấm đen (E malabaricus), cá chẽm (Lates Toàn số liệu thu thập xử lý phần mềm Epi info phiên 3.4.3 Sử dụng phân tích logistic regression để phân tích nguy mắc bệnh VNN lồi cá biển nhóm cá có kích thước khác III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong suốt trình nghiên cứu chúng tơi phân tích 101 mẫu cá ni bao gồm lồi cá mú chấm nâu (Epinephelus coioides) calcarifer) cá bớp (Rachycentron canadum) Tất mẫu cá đưa phân tích có dấu hiệu bất thường như: bỏ ăn, bơi không cố định, bơi xoắn bơi nghiêng, thân đen sẫm, cong xương sống, số trường hợp dễ dàng nhận thấy bóng căng phồng ruột tích đầy dịch màu xanh (hình 1) A B Hình Dấu hiệu bên ngồi cá Mú chấm nâu Epinephelus coioides bị bệnh VNN A: Ruột cá bị bệnh VNN tích dịch màu xanh, khơng chứa thức ăn B: Cá Mú bệnh VNN cong thân, bơi nghiêng bóng căng phồng Kết phân tích mơ bệnh học cho thấy có xuất không bào (sự thay đổi tổ chức mô đặc trưng Piscine nodavirus gây ra) mô não võng mạc mắt cá biển ni Khánh Hịa (hình 2) A B Hình Mơ não cá Mú chấm nâu (Epienephelus coioides) bị bệnh VNN A Mô não cá mú chấm nâu (Epinephelus coioides) bị nhiễm VNN nhẹ B Mô não cá mú chấm nâu (Epinephelus coioides) bị nhiễm VNN nặng 20 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản - số 01/2008 A Trường Đại học Nha Trang B Hình Mơ mắt cá Mú chấm nâu (Epinephelus coioides) bị bệnh VNN A Mô mắt cá Mú chấm nâu (Epinephelus coioides) bị nhiễm VNN nhẹ B Mô mắt cá Mú chấm nâu (Epinephelus coioides) bị nhiễm VNN nặng Bảng Tần số nhiễm bệnh VNN đặc điểm khơng bào hình thành lồi cá biển ni Khánh Hịa Lồi Epinephelus coioides Kích cỡ Lượng Tần số (cm) mẫu nhiễm 2,5-20 31 Đặc điểm khơng bào Hình dạng Đường kính (µm) 15/31 Trịn 4-16 (6,12)-(12,25) - E fuscoguttatus 21-27 0/2 Elip - E tauvina E lanceolatus 6-20 3,5-25 4 2/8 0/4 Tròn - 5-12 - E malabaricus Lates calcarifer 3-15 2-16 31 1/3 5/31 Tròn Tròn 8-12 4-20 Elip (4-8)-(8-28) Tròn Elip 6-24 (4-12)-(12-30) Rachycentron canadum 3-23 22 5/22 Kết nghiên cứu mô bệnh học tác nhân gây bệnh phá hủy tế bào 30µm Kết phù hợp với nghiên cứu Curtis ctv (2001), Lai ctv (2001), thần kinh võng mạc mắt cá mắc bệnh tạo không bào có hình dạng kích Yukio ctv (2004) Tuy nhiên, nghiên cứu không nhận thấy khác thước khác (bảng 1) biệt kích cỡ khơng bào mơ mắt Ở mơ mắt não lồi cá mú, cá chẽm cá bớp có dấu hiệu mắc bệnh, chúng não cá có biểu bệnh thơng báo Danayadol ctv (1995) cho không tìm thấy tồn dạng khơng bào: dạng trịn dạng elip, kích cỡ từ 4- bào hình thành mơ mắt có kích thước lớn khơng bào não 21 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản - số 01/2008 Trường Đại học Nha Trang Phân tích nguy nhiễm VNN cá biển chẽm cá bớp cho thấy nguy mắc bệnh ni theo kích cỡ lồi Kết nghiên cứu nguy VNN cá mú cao gấp 3,12 lần so với cá chẽm (P = 0,047) số liệu thu không nhiễm VNN số lồi cá biển ni cho thấy khác biệt có nghĩa (P = 0,55) Khánh Hịa phụ thuộc vào lồi cá ni kích cỡ cá thả ni Kết phân tích nguy nguy mắc bệnh VNN cá bớp cá chẽm (bảng 2) mắc nhiễm VNN nhóm cá ni: cá mú, cá Bảng Phân tích nguy mắc bệnh VNN cá mú, cá chẽm cá bớp Chỉ tiêu Hệ số chênh 95% C.I Coefficient Sai số chuẩn ZStatistic Mức ý nghĩa Cá bớp/cá chẽm 1.5294 0.3839 6.0923 0.4249 0.7052 0.6025 0.5468 Cá mú/cá chẽm 3.12 1.0166 9.5756 1.1378 0.5721 1.9887 0.0467 * * * -1.6487 0.4883 -3.3762 0.0007 CONSTANT Lý giải nguy mắc nhiễm VNN cá mú cao nhiều so với cá chẽm, chúng tơi Nam nói chung xuất phát từ nguồn giống nhập nội khơng kiểm sốt chặt chẽ Trong cho nguồn giống đóng vai trị định Cá mú đối tượng ni phổ biến ngư dân đó, phong trào ni cà chẽm Khánh Hòa phát triển chưa đến ba năm Con Khánh Hòa, nguồn giống lấy chủ yếu từ tự giống có nguồn gốc chủ yếu từ Trường Đại nhiên nhập từ Đài Loan, Trung Quốc nước Đông Nam Á như: học Nha Trang nên việc kiểm sốt lây lan bệnh VNN thơng qua giống ấu trùng Indonesia, Phillipin, Thái Lan…Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu cho biết có xuất kiểm sốt tốt hơn, nguy mắc nhiễm VNN đối tượng nuôi thấp bệnh VNN cá nuôi thuộc nước (Munday Nakai 1997; Yukio ctv 2004; Kết nghiên cứu khơng có khác biệt nguy mắc bệnh Zafran ctv …) Rất bệnh VNN xảy VNN lồi mú chấm nâu, mú chấm cá mú nuôi Khánh Hịa nói riêng Việt đen mú mè (bảng 3) Bảng Phân tích nguy mắc bệnh VNN lồi nhóm cá mú Chỉ tiêu Hệ số Coeffi- Sai số Z- Mức ý chênh 95% C.I cient chuẩn Statistic nghĩa Loài (Mú chấm đen/mú chấm nâu) 0.5333 0.0437 6.5081 -0.6286 1.2764 -0.4925 0.6224 Loài (Mú mè/mú chấm nâu) 0.3556 0.0619 2.0418 -1.0341 0.8918 -1.1595 0.2462 * * * -0.0645 0.3594 -0.1796 0.8575 CONSTANT Phân tích nguy mắc bệnh VNN theo nhóm kích cỡ cá mú ni Khánh Hịa nguy mắc bệnh VNN khác (P=0,02) nhóm cá ni có kích cỡ khác Kết phân tích tình trạng mắc bệnh VNN 48 đàn cá mú nuôi Khánh Hịa (bảng 4) 22 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản - số 01/2008 Trường Đại học Nha Trang Bảng Phân tích nguy mắc bệnh VNN theo nhóm kích cỡ cá mú Chỉ tiêu Hệ số chênh 95% C.I Coefficient Sai số chuẩn ZStatistic Mức ý nghĩa Kích cỡ 0.8371 0.7242 0.9675 -0.1779 0.0739 -2.4075 0.02 CONSTANT * * * 0.9186 0.6109 1.5036 0.13 Những số liệu phân tích 13cm nguy mắc bệnh VNN cá nguy mắc bệnh VNN cá mú có kích thước nhỏ 6cm cao gấp 10 lần (P=0,04) mú có kích thước từ 7-12cm cao gấp 9,6 lần (P=0,05) so với nhóm cá có kích thước lớn so với nhóm cá có kích cỡ lớn hơn (bảng 5) Bảng Phân tích nguy mắc bệnh VNN cá mú theo nhóm kích cỡ (nhóm 1: >12cm, nhóm 2:>6 – 12cm, nhóm 3: ≤6cm) Hệ số Chỉ tiêu chênh 95% C.I Sai số Z- Mức ý Coefficient chuẩn Statistic nghĩa Kích cỡ (nhóm2/1) 9.625 0.9799 94.5381 2.2644 1.1657 1.9426 0.05 Kích cỡ (nhóm3/1) 10 1.0872 91.9817 2.3026 1.1322 2.0338 0.04 CONSTANT * * * -2.3979 1.0445 -2.2958 0.02 KẾT LUẬN Bệnh VNN xuất cá mú, cá chẽm so với nhóm cá có kích cỡ lớn 13cm nguy mắc bệnh VNN cá cá bớp ni Khánh Hịa Nguy mắc bệnh VNN cá mú cao gấp mú có kích thước từ 7-12cm cao gấp 9,6 lần (P = 0,05) so với nhóm cá có kích thước 3,12 lần so với cá chẽm (P = 0,047) Nguy mắc bệnh VNN cá mú có kích lớn thước nhỏ 6cm cao gấp 10 lần (P = 0,04) TÀI LIỆU THAM KHẢO Chi S C, Lo B J and Lin S.C 2001 Characterization of grouper nervous necrosi virus (GNNV), Journal of Fish Disease, 24, – 13 Chi S.C, Shieh J R., Lin S.J 2003 Genetic and antigenic analysis of betanodaviruses isolated from aquatic organisms in Taiwan Diseases of aquatic organisms 55, 221-228 Curtis P A, M Drawbridge, T Iwamoto, T Nakai, R P Hedrick and A P Gendron 2001 Nodavirus infection of juvenile white seabass, Atractoscion nobilis, cultured in southern California: First record of viral nervous necrosis (VNN) in North America Journal of fish diseases 24, 263-271 Danayadol Y., Direkbusarakom S & Supamattaya K 1995 Viral nervous necrosis in Epinephelus malabaricus, cultured in Thailand In: Disease in Asian Aquaculture II edited by M Shariff, J.R Arthur & R.P Subasinghe Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila pp: 277 – 233 23 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản - số 01/2008 Trường Đại học Nha Trang Lai Y S, H-C Chiu, S Murali, I-C Guo, S-C Chen, K Fang and C-Y Chang 2001 In vitro neutralization by monoclonal antibodies against yellow grouper nervous necrosis virus (YGNNV) and immunolocalization of virus infection in yellow grouper, Epinephelus awoara (Temminck & Schlegel) Journal of Fish diseases 24, 237-244 Munday B L & Nakai T (1997) Special topic review: nodavirus as pathogens in larval and juvennile marine finfish World Journal of Microbiology and histopathology, 375 –381 Munday, B L, et al 1992 Mass mortality associated with a viral-induced vacuolating encephalopathy and retinopathy of larval and juvenile barramundi, Lates calcarifer Bloch Aquaculture, 103, 197-211 Smail D A , A.L.S Munro 2001 The virology of teleosts In: Fish pathology edited by Ronald J Roberts, third edition, W.B Saunders pp: 133-150 Tanaka S, I Kuriyama, T Nakai and Miyazaki 2003 Susceptibility of cultured juveniles of several marine fish to the sevenband grouper nervous necrosis virus Journal of fish diseases 26, 109-115 10 Tanaka S, M Takagi and T Miyazaki 2004 Histopathological studies on viral nervous necrosis of sevenband grouper, Epinephelus septemfasciatus Thunberng, at the grow-out stage Journal of fish diseases 27, 385-399 11 Yukio Maeno, Leobert D De La Pena and Erlinda R Cruz-Lacierda 2004 Mass mortalities associated with viral nervous necrosis in hatchery-reared sea bass Lates calcarifer in Philippines JARQ 38 (1), 69-73 12 Zafran, et al 2000 Viral nervous necrosis in humpback grouper Cromileptes altivelis larvae and juvenile in Indonesia Fish Pathology, 35, 95-96 ABSTRACT VIRAL NERVOUS NECROSIS INFECTION OF MARINE FISH CULTURED IN KHANH HOA Viral nervous necrosis (VNN) has spread worldwide among cultured marine fish with the number of susceptible host species continuing to grow (Munday and Nakai 1997) Affect fish exhibit a range of neurological signs, such as abnormal swimming behaviour and pale-grey discoloration of the body In Khanh Hoa, grow-out fish (grouper-Epinephelus spp, sea bass-Lates calcarifer and cobiaRachycentron canadum) had been suffering from a disease characterized by similar clinical signs with high mass mortality Histological investigations in moribund fish revealed marked vacuolation in the retina and brain The size of vacuolation was varying from 4-30um with different shape from oval to circle These results indicate the presence of VNN in cultured marine fish in Khanh Hoa 24 ... 0,55) Khánh Hịa phụ thuộc vào lồi cá ni kích cỡ cá thả ni Kết phân tích nguy nguy mắc bệnh VNN cá bớp cá chẽm (bảng 2) mắc nhiễm VNN nhóm cá ni: cá mú, cá Bảng Phân tích nguy mắc bệnh VNN cá mú, cá. .. -2.3979 1.0445 -2.2958 0.02 KẾT LUẬN Bệnh VNN xuất cá mú, cá chẽm so với nhóm cá có kích cỡ lớn 13cm nguy mắc bệnh VNN cá cá bớp nuôi Khánh Hòa Nguy mắc bệnh VNN cá mú cao gấp mú có kích thước từ... Phân tích nguy mắc bệnh VNN theo nhóm kích cỡ cá mú ni Khánh Hòa nguy mắc bệnh VNN khác (P=0,02) nhóm cá ni có kích cỡ khác Kết phân tích tình trạng mắc bệnh VNN 48 đàn cá mú ni Khánh Hịa (bảng