Non - Vibrio parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (Ahpnd) trên tôm nuôi

Bài viết Non - Vibrio parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (Ahpnd) trên tôm nuôi trình bày bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) hay còn gọi là hội chứng chết sớm (EMS) đã và đang trở thành một trong những mối nguy hại nhất đối với nghề nuôi tôm công nghiệp khu vực Đông Nam Á, trong đó có Việt Nam,... Mời các bạn cùng tham khảo.

Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam 2016, tập 14, số 5: 690-698 www.vnua.edu.vn Vietnam J Agri Sci 2016, Vol 14, No 5: 690-698 NON-VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS GÂY BỆNH HOẠI TỬ GAN TỤY CẤP (AHPND) TRÊN TÔM NUÔI Đặng Thị Lụa*, Nguyễn Viết Khuê, Phan Thị Vân Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản Email*: danglua@ria1.org Ngày gửi bài: 22.01.2016 Ngày chấp nhận: 29.04.2016 TÓM TẮT Bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) hay gọi hội chứng chết sớm (EMS) trở thành mối nguy hại nghề nuôi tôm công nghiệp khu vực Đơng Nam Á, có Việt Nam Bệnh xuất tôm sú tôm thẻ chân trắng thường xảy tôm 20 - 45 ngày tuổi với tỷ lệ chết lên tới 100% Tác nhân gây bệnh AHPND xác định vi khuẩn mang Plasmid có chứa gen Toxin gây hoại tử gan tụy cấp Dựa đặc điểm sinh hóa vi khuẩn, kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu nhận biết gen Toxin giải trình tự đoạn gen 16S-rRNA, kết nghiên cứu khẳng định có chủng vi khuẩn gây bệnh AHPND tôm nuôi nước lợ Việt Nam, bao gồm 02 chủng vi khuẩn thuộc lồi Vibrio parahaemolyticus, V parahaemolyticus KC12.020 V parahaemolyticus KC13.14.2 01 chủng vi khuẩn non - V parahaemolyticus, V harveyi KC13.17.5 Việc phát thêm lồi vi khuẩn khơng phải V parahaemolyticus (non -V parahaemolyticus) gây bệnh AHPND phát không nhà khoa học Việt Nam mà phát giới Từ khóa: AHPND/EMS, non-V parahaemolyticus, tơm chân trắng, tôm sú, Vibrio parahaemolyticus Non-Vibrio Parahaemolyticus Causing Acute Hepatopancreatic Necrosis on Brackish Shrimps ABSTRACT Acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND), also known as Early Mortality Syndrome (EMS), has become one of the most harmful threats to the shrimp aquaculture industry in Southeast Asia, including Vietnam It occurs on both tiger and white leg shrimps at 20 - 45 days of age with a mortality rate up to 100% AHPND pathogens were identified as bacteria containing plasmid carrying toxin genes that cause acute hepatopancreatic necrosis Observation of biochemical characteristics, the use of PCR technique using specific primers to detect the toxin genes and sequence analysis of 16S-rRNA gene confirmed that there were at least three strains of AHPND pathogenic bacteria on brackish shrimp cultured in Vietnam, of which two strains belong to Vibrio parahaemolyticus species, including V parahaemolyticus KC13.14.2 and V parahaemolyticus KC12.020; and the other strain of Vibrio sp KC13.17.5 Vibrio sp KC13.17.5 was confirmed as V harveyi KC13.17.5, a non V parahaemolyticus species The detection of non - V parahaemolyticus that caused AHPND is a new finding not only in Vietnam but also worldwide Keywords: AHPND/EMS, non - V parahaemolyticus, tiger shrimp, Vibrio parahaemolyticus, white leg shrimp M U Bnh hoọi t gan ty cỗp (Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease - AHPND) hay cñn gõi hûi chết sĉm (Early 690 Mortality Syndrome - EMS) ang c xem l mứi nguy họi nhỗt ứi vi nghề nuöi töm cöng nghiệp Ċ khu vĆc Đöng Nam mỗy nởm gổn ồy (FAO, 2013; Leaủo and Mohan, 2012) Dðch bệnh đāČc ghi nhên đæu tiên Ċ Trung Quøc Đặng Thị Lụa, Nguyễn Viết Khuê, Phan Thị Vân nëm 2009, sau đò tiếp tĀc đāČc ghi nhên Ċ Thái Lan nëm 2010, Việt Nam nëm 2011, Malaysia nëm 2012 (FAO, 2013) v gổn ồy ó xuỗt hin Mexico nëm 2013 (Schryver et al., 2014) Ở Việt Nam, nởm 2012, bnh hoọi t gan ty cỗp tớnh xuỗt hin 192 xó thuỷc 54 huyn cỵa 16 tợnh, thnh Nởm 2013, dch bnh xuỗt hin 199 xó thuỷc 19 tợnh, thnh v nởm 2014 dch bnh xuỗt Ċ 233 xã thủc 22 tỵnh, thành cị ni töm nāĉc lČ phäm vi câ nāĉc (CĀc Thú y, 2014) AHPND xây Ċ câ töm sý tửm thờ chồn trớng, chỵ yu cỏc vỹng nuửi tưm thåm canh bán thåm canh Ċ giai độn 20 - 45 ngày sau thâ nuöi tď lệ chết cị thể lên đến 100% Tưm bệnh cị biểu ngĂng ën, bći chêm, vó móng, màu tưm nhČt nhät, gan tĀy cò biểu sāng, nhÿn teo dðch bệnh xây Ċ hæu hết tháng nëm (Schryver et al., 2014; Leaño and Mohan, 2012) Tác nhån gåy bệnh AHPND đāČc cho vi khn Vibrio parahaemolyticus (Tran et al., 2013), ngồi cđn cò thể vi khuèn Vibrio sp (Kwai et al., 2014) Kết quâ nghiên cău såu tác nhån gåy bnh AHPND cho thỗy bõn chỗt gồy AHPND l vi khuèn mang Plasmid cò chăa gen đûc lĆc gåy hoọi t gan ty cỗp (Lightner, 2014; Lo et al., 2014; Tinwongger et al., 2014a) Trong nghiên cău này, mût sứ chỵng vi khuốn phồn lờp t tửm nuửi nc l cỏc t dch bnh AHPND xuỗt hin Bớc c nuửi cỗy v nh danh da trờn kít thĄ sinh hịa API 20E, sàng lõc dĆa kĐ thuêt PCR vĉi cặp m÷i đặc hiệu nhên biết gen Toxin gồy hoọi t gan ty cỗp v c đðnh danh bìng kĐ thuêt sinh hõc phån tĄ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu nghiên cứu Cỏc chỵng vi khuốn (Vibrio sp KC12.020, Vibrio sp KC13.14.2, Vibrio sp KC13.17.5 Vibrio sp KC13.24.2) sĄ dĀng nghiên cău đāČc phån lêp tĂ tưm chån tríng cò biểu bð bệnh AHPND thu täi mût sø tỵnh miền Bíc đČt dðch bệnh lāu gią Ċ -80°C täi Phđng thí nghiệm thủc Trung tồm Quan trớc mửi trng v Bnh thỵy sõn Bớc, Vin nghiờn cu Nuửi trững thỵy sõn Chỵng vi khuốn Vibrio sp KC12.020 c thu tọi Hõi Phủng nởm 2012, cỏc chỵng Vibrio sp KC13.14.2, Vibrio sp KC13.17.5 Vibrio sp KC13.24.2 đāČc thu täi Nghệ An nëm 2013 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Định danh vi khuẩn phân lập từ tôm bị bệnh AHPND kớt sinh húa API 20E Vi khuốn c lỗy t -80C v nuửi cỗy lọi trờn mửi trng TCBS (Thiosulfate Citrate Bile Salts) Các khuèn läc mõc rĈi in hỡnh trờn ùa TCBS c la chừn nuửi cỗy sang Nutrient Agar (+) nuửi cỗy thuổn API-20E c sĄ dĀng để thĄ phân ăng sinh hòa, đðnh danh lồi bìng cách tra trĆc tiếp trang web hú trČ đinh danh APIweb (https://apiweb.biomerieux.com) 2.2.2 Nhận biết vi khuẩn gây bệnh AHPND kỹ thuật PCR Để nhên biết cỏc chỵng vi khuốn ó phồn lờp t tửm bnh cũ phõi l cỏc chỵng gồy bnh AHPND hay khửng, cỏc chỵng vi khuốn nuửi cỗy mửi trng NB (Nitrient Broth) đāČc sĄ dĀng để tách chiết DNA sĄ dĀng nhā ngn ADN khn méu cho phân ăng PCR sĄ dĀng cặp m÷i AP3 (Sirikharin et al., 2014) v cp mữi Toxin c cung cỗp bi giỏo sā Ikuo Hirono, trāĊng phđng thí nghiệm cưng nghệ gen, TrāĈng Đäi hõc Khoa hõc Cöng nghệ Tokyo (Bâng 1) Chu k nhồn nhit cỵa phõn ng PCR c áp dĀng nhā sau: giai độn tiền biến tính Ċ 94°C phút, theo sau vĉi 35 chu kč nhiệt g÷m giai độn biến tính phýt Ċ 94°C, giai độn bít cặp 30 giåy Ċ 53°C giai đoän tùng hČp 40 giåy Ċ 72°C, kết thýc vĉi mût giai đoän kéo dài phýt Ċ 72°C Sân phèm PCR đāČc điện di thäch agarose 1% dung dðch 1X TAE (Tris-acetate-EDTA) cò bù sung Ethelium Bromine đõc kết quâ dāĉi ánh sáng đèn UV 691 Non-Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm nuôi 2.2.3 Định danh vi khuẩn gây bệnh AHPND kỹ thuật sinh học phõn t Cỏc chỵng vi khuốn gồy bnh AHPND tip tĀc đāČc đðnh danh bìng kĐ thuêt sinh hõc phân t da trờn s tng ững cỵa gen 16S-rRNA ADN cỵa vi khuốn c s dng lm khuửn mộu cho phân ăng PCR sĄ dĀng cặp m÷i 16SrRNA (Bâng 1) để khuếch đäi độn gen 16S-rRNA 874 bp Giâi trình tự đoạn gen 16S-rRNA, đánh giá mức độ tương đồng định danh vi khuẩn: Sân phèm PCR dāćng tính tĂ phân ăng PCR sĄ dĀng cặp m÷i 16S-rRNA đāČc gín vào pGEM-T easy vector (Promega, Madison, USA) biến näp vào competent cells (E coli MJ 109) Plasmid cò chăa 16S-rRNA ADN T vector đāČc giâi trình tĆ bìng máy sequencer sĄ dĀng Big Dye Terminator (Applied Biosystems) Mc ỷ tng ững cỵa oọn gen 16S-rRNA cỏc chỵng nghiờn cu ny c so sỏnh vi trỡnh t Nucleotide cỵa cỏc oọn16S-rRNA cỵa cỏc chỵng vi khuốn khác đāČc đëng kĎ ngån hàng gen bìng cách BLAST (Basic Local Alighment Search Tool) GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) theo phng phỏp Blastx Sau ũ, vic nh danh chỵng vi khuèn sĄ dĀng nghiên cău së đāČc cën că dĆa măc đû tāćng đ÷ng vĉi gen 16S-rRNA cỵa loi vi khuốn ó cửng bứ trờn GenBank Bâng Các cặp mồi sử dụng nghiên cứu Trình tự Nuleoctides Cặp mồi AP3 F: ATGAGTAACAATATAAAACATGAAAC Kích thước(bp) Nguồn gốc cặp mồi 336 Sirikharin et al (2014) 630 Phịng thí nghiệm giáo sư Hirono 874 Được thiết kế nghiên cứu R:GTGGTAATAGATTGTACAGAA Toxin F: GTGGAAATGGTGAACTTGCG R: TACGAGCATTGTTAGGGGTTA 16S-rRNA F: CGTGCCAGCAGCCGCGGTAA R: GCCCGGGAACGTATTCACCG KC 13 24 Hình Kết q thử phân ứng sinh hóa chủng vi khuẩn phån lập từ tôm bị bệnh AHPND 692 Đặng Thị Lụa, Nguyễn Viết Khuê, Phan Thị Vân KẾT QU VÀ THÂO LUẬN 3.1 Phân lập định danh vi khuẩn gây bệnh AHPND kít sinh hóa API 20E Kết q đðnh danh chỵng vi khuốn c phồn lờp t tửm b bnh AHPND bìng kít sinh hịa API 20E (Hình 1) đāČc so sánh vĉi khòa đðnh danh vi khuèn APIweb cho thỗy Vibrio sp KC12.020 v Vibrio sp KC13.24.2 c đðnh danh læn lāČt V parahaemolyticus KC12.020 V parahaemolyticus KC13.24.2 Vibrio sp KC13.14.2 Vibrio sp KC13.17.5 khưng cho phân ăng sinh hịa tāćng đ÷ng vĉi bỗt k loi vi khuốn no nhng gổn gi nhỗt vi c im sinh hũa cỵa chỵng vi khuốn ứi V parahaemolyticus ATCC 43996 V vulnificus biotype hệ thøng phån loäi APIweb Vibrio sp KC13.14.2 khác vi chỵng V parahaemolyticus ATCC 43996 ứi chng phân ăng sinh hịa, ONPG (ß-galactosidase) ARA (ARAbinose) khỏc vi chỵng V vulnificus biotype ứi chng phân ăng sinh hịa GEL (GELatinase) (sø liệu khưng trình bày) Trong đị, Vibrio sp KC13.17.5 khác vĉi chỵng V parahaemolyticus ATCC 43996 ứi chng phõn ăng sinh hòa, ONPG, URE (UREase), GEL ARA khỏc vi chỵng V vulnificus biotype ứi chng phân ăng sinh hịa URE (sø liệu khưng trình bày) 3.2 Nhận biết vi khuẩn gây bệnh AHPND kỹ thuật PCR Bìng việc sĄ dĀng cặp m÷i AP3 Toxin để nhên biết đoän gen Toxin gåy hoäi t gan ty cỗp ó xỏc nh chỵng vi khuèn V parahaemolyticus KC12.020, Vibrio sp KC13.14.2 Vibrio sp KC13.17.5 l cỏc chỵng vi khuốn gồy bnh AHPND (Hỡnh 2) Cüng vĉi việc xác đðnh tác nhån gåy bệnh AHPND l chỵng vi khuốn V parahaemolyticus riờng bit (unique) (Tran et al., 2013), mût sø nhòm nghiên cău sau ũ ó ững thi khợng nh vi khuốn gồy bệnh AHPND chăa Plasmid mang gen đûc lĆc Toxin gåy hin tng hoọi t gan ty cỗp (Lo et al., 2014; Tinwongger et al., 2014a) v cng xuỗt phỏt tĂ nhąng kết quâ nghiên cău khoa hõc này, Hình Kết quâ xác định vi khuẩn gåy bệnh AHPND kỹ thuật PCR Ghi chú: A (Sử dụng cặp mồi Toxin: (1, 2) V parahaemolyticus KC12.020; (3, 4) Vibrio sp KC13.7.5; (5, 6) Vibrio sp KC13.14.2; (7, 8) V parahaemolyticus KC13.24.2; (+) Đối chứng dương AHPND (cung cấp giáo sư Hirono) (-) Nước cất); B (sử dụng cặp mồi AP3: (1) V parahaemolyticus KC12.020; (2) Vibrio sp KC13.7.5; (3) Vibrio sp KC13.14.2; (4) V parahaemolyticus KC13.24.2 (5) Đối chứng dương AHPND (cung cấp giáo sư Hirono); M (Market 100bp) 693 Non-Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm nuôi phāćng pháp chèn đoán nhanh tác nhån gåy bệnh AHPND đāČc phát triển dĆa việc nhên biết gen Toxin (Sirikharin et al., 2014; Tinwongger et al., 2014b) Theo kết quâ nghiên cu gổn ồy nhỗt, Kwai et al (2014) ó bc đỉu nhên đðnh tác nhån gåy bệnh AHPND ngồi V parahaemolyticus cị thể cđn Vibrio sp DĆa vào kết quõ nghiờn cu cỵa chýng tửi cũ th khợng nh cũ ớt nhỗt chỵng vi khuốn V parahaemolyticus KC12.020, Vibrio sp KC13.14.2 Vibrio sp KC13.17.5 gåy bệnh AHPND töm nuöi nāĉc lČ Ċ Việt Nam Kết quâ hoàn toàn phü hČp vĉi nghiên cău trāĉc (Tran et al., 2013; Kwai et al., 2014) DĆa đặc điểm sinh hòa, Vibrio sp KC13.14.2 Vibrio sp KC13.17.5 khửng hon ton trỹng vi cỏc c im cỵa V parahaemolyticus, nh vờy chýng cũ th l nhng chỵng vi khn thủc lồi Vibrio khác Kết q cỵng cho nhờn nh bc ổu cỵa nhũm Kwai et al (2014) rìng V parahaemolyticus cị thể khưng phâi l loi Vibrio nhỗt gồy AHPND lm rụ chỵng vi khuốn gồy bnh AHPND, Vibrio sp KC13.14.2 Vibrio sp KC13.17.5, có phâi V parahaemolyticus hay khơng, tiến hành nghiên cău såu hćn sinh hõc phån tĄ đāČc trình bày Ċ mĀc 3.3 Nhąng kết q nghiên cău cÿng gịp phỉn khỵng đðnh Việt Nam cị thể chèn đốn, xét nghiệm bệnh AHPND töm nuöi nāĉc lČ sĄ dĀng cặp m÷i đāČc cưng bø bĊi nhịm nghiên cău trờn th gii nh mữi AP3 cỵa nhũm nghiờn cu Thỏi Lan v mữi Toxin cỵa nhũm nghiờn cu Nhờt Bân 3.3 Định danh vi khuẩn gây bệnh AHPND k thut sinh hc phõn t Ba chỵng vi khuốn c xỏc nh l chỵng gồy bnh AHPND tip tc đāČc đðnh danh bìng kĐ thuêt sinh hõc phån tĄ dĆa việc giâi trình tĆ gen 16S-rRNA Sân phèm dng tớnh cỵa phõn ng PCR vi cp mữi nhờn bit oọn gen 874 bp cỵa 16S-rRNA (Hỡnh 3) ó đāČc tinh säch, biến näp vào T vector giâi trình tĆ Nucleotides (Hình 4, 6) Kết quâ BLAST ngån hàng GenBank đøi vĉi trình tĆ độn gen 16S-rRNA cỵa chỵng vi khuốn V parahaemolyticus KC.12.020 (Hỡnh 4) cho thỗy cũ s tng ững cao nhỗt vi vi khuèn V parahaemolyticus K5030 (măc tāćng đ÷ng 98%; E-value: 2e-51) Nhā vêy, kết quâ giâi trình tĆ gen 16S-rRNA khỵng đðnh việc phån lội vi khn V parahaemolitycus KC.12.020 dĆa đặc điểm sinh hóa xác M Hình Kết q khuếch đäi độn gen 16S-rRNA chủng vi khuẩn gåy bệnh AHPND Ghi chú: (1, 2) V parahaemolyticus KC.12.020; (3, 4) Vibrio sp KC13.17.5; (5, 6) Vibrio sp KC13.14.2; (+) Đối chứng dương AHPND (cung cấp giáo sư Hirono); (-) Nước cất (M) Marker 694 Đặng Thị Lụa, Nguyễn Viết Khuê, Phan Thị Vân Kết quâ BLAST ngån hàng GenBank đøi vĉi trình t oọn gen 16S-rRNA cỵa chỵng vi khuốn Vibrio sp KC.13.14.2 (Hỡnh 5) cho thỗy cũ s tng ững cao vi 16S-rRNA cỵa V parahaemolyticus, c bit vi V parahaemolyticus K5030 (măc tāćng đ÷ng 100%; E-value: 2e-52) Vì gen 16S-rRNA bõo thỵ v c trng cho mỳi loi nờn vic đðnh danh vi khuèn dĆa việc giâi trình tĆ gen 16S-rRNA thāĈng cị đû xác cao Nhā vêy,kết quõ ny cũ th khợng nh chỵng vi khuốn Vibrio sp KC13.14.2 thuỷc loi V parahaemolyticus v t ồy chỵng vi khuèn āČc đùi tên thành V parahaemolyticus KC13.14.2 Kết quâ BLAST ngån hàng GenBank đøi vĉi trình t oọn gen 16S-rRNA cỵa chỵng vi khuốn Vibrio sp KC.13.17.5 (Hỡnh 6) cho thỗy cũ s tng ững cao vi trỡnh t oọn gen 16S-rRNA cỵa mỷt sứ loi vi khn cưng bø ngån hàng GenBank, bao g÷m partial V harveyi WP017190965.1 (măc tāćng đ÷ng 100%; E-value: 7e-24); V scophthalmi LMG19158 (măc tāćng đ÷ng 98%; E-value: 8e-22) V anguillarum (măc tāćng đ÷ng 96%; E-value: 7e21) So sánh vĉi kết quâ đðnh danh dĆa đặc điểm sinh hịa đāČc trình bày Ċ mĀc 3.1 Vibrio sp KC.13.17.5 lọi c xem l gổn gi nhỗt vi V parahaemolyticus V vulnificus biotype Nhā vêy, kết hČp câ phāćng pháp đðnh danh dĆa đặc điểm sinh hịa dĆa trình tĆ gen 16S-rRNA cị thể khỵng đðnh Vibrio sp KC13.17.5 khưng thủc lồi V parahaemolyticus, nhiờn vộn cha ỵ c s khoa hừc phån lội Vibrio sp KC13.17.5 thủc lồi vi khn sø lồi cị măc tāćng đ÷ng cao V harveyi (partial), V scophthalmi hay V anguillarum 10 20 30 40 50 60 70 80 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 CGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCATGCAGGTGGTTTGT 90 100 110 120 130 140 150 160 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 TAAGTCAGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGGAATTGCATTTGAAACTGGCAGACTAGAGTACCGTAGAGGGGGGTA 170 180 190 200 210 220 230 240 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 GAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAGATACTGA 250 260 270 280 290 300 310 320 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 CACTCAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCTACTTGGAGG 330 340 350 360 370 380 390 400 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 TTGTGGCCTTGAGCCGTGGCTTTCGGAGCTAACGCGTTAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCA 410 420 430 440 450 460 470 480 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 AATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTG 490 500 510 520 530 540 550 560 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 ACATCCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGT 570 580 590 600 610 620 630 640 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 GTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTGTTTGCCAGCGAGTAATGTCGGGAACTCCAG 650 660 670 680 690 700 710 720 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 GGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGCCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGT 730 740 750 760 770 780 790 800 | | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 GCTACAATGGCGCATACAGAGGGCAGCCAACTTGCGAAAGTGAGCGAATCCCAAAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAG 810 820 830 840 850 860 870 | | | | | | | | | | | | | | | KC12.020 TCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGC Hình Trình tự nucleotides độn gen 16S-rRNA chủng vi khuẩn V parahaemolitycus KC.12.020 695 Non-Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tơm ni Hình Trình tự nucleotides độn gen 16S-rRNA chủng vi khuẩn Vibrio sp KC13.14.2 Sau Ċ mût nghiên cău khác, bìng cách giâi trình tĆ bỷ gen cỵa Vibrio sp KC13.17.5, nhũm nghiờn cu cỵa chýng tửi ó cũ ỵ c s khoa hừc đðnh danh Vibrio sp KC13.17.5 V harveyi KC13.17.5 Đåy mût thưng tin mĉi cị Ď nghïa mặt khoa hõc nên đāČc nhịm cưng bø nhanh kết quâ dāĉi däng thöng báo tĈ GenomeA (Kondo et al., 2015) KT LUN Cũ ớt nhỗt chỵng vi khuốn gồy bnh AHPND trờn tửm nuửi nc l Vit Nam, 696 ũ chỵng thuỷc loi V.parahaemolyticus, bao gữm chỵng V parahaemolyticus KC12.020 v chỵng V parahaemolyticus KC13.14.2; v 01 chỵng non-V parahaemolyticus, ũ l chỵng V harveyi KC13.17.5 LI CM N Nhũm tỏc giõ xin c gi li cõm n chồn thnh nhỗt n giáo sā Ikuo Hirono cûng sĆ sĆ hỳ tr vic cung cỗp mộu ADN ứi chng cỵa chỵng vi khuốn gồy bnh AHPND v s giýp đċ việc giâi trình tĆ gen Đặng Thị Lụa, Nguyễn Viết Khuê, Phan Thị Vân Hình Trình tự nucleotides đoän gen 16S-rRNA chủng vi khuẩn Vibrio sp KC13.17.5 TÀI LIỆU THAM KHÂO Cục Thú y (2014) Tổng kết Nuôi tôm nước lợ năm 2014 xây dựng kế hoạch năm 2015 Bến Tre, ngày 4/11/2014 FAO (2013) Report of the FAO/MARD TechnicalWorkshop on Early Mortality Syndrome (EMS) orAcute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome(AHPND) of Cultured Shrimp (underTCP/VIE/3304) FAO Fisheries and Aquaculture Report No 1053, Ha Noi, Viet Nam p.54 Kondo, H., Van, P.T., Dang, T.L and Hirono, I (2015) Draft genome sequence of Non-Vibrio parahaemolyticus Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease Strain KC13.17.5, isolated from diseased shrimp in Viet Nam Genome Announc, 3(5): e00978-15 doi:10.1128/genomeA.00978-15 Kwai, L.T, Ung, E H, Choo, S W, Yew, S M, Wee, W Y, and Yap, K P (2014) An AP1, &3 PCR Positive non - Vibrio parahaemolitycus bacteria with AHPND histopathology Paper presented at the 9th Symposium on Diseases in Asian 697 Non-Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm nuôi Aquaculture (DAA9), Ho Chi Minh city, Vietnam, 24-28 November, 2014 Book of abstract, p 77 Leaño, E M., and Mohan, C.V (2012) Early mortality syndrome threatens Asia’s shrimp farms GlobalAquaculture Advocate, pp 38 - 39 Lightner, D V (2014) Documentation of a unique strain of Vibrio parahaemolitycus as the agent of Early Mortality Syndrome (EMS) or Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (ANPHD) affecting Penaeid shrimp with note on the putative toxins Paper presented at the 9th Symposium on Diseases in Asian Aquaculture (DAA9), Ho Chi Minh city, Vietnam, 24-28 November, 2014 Book of abstract, p 71 Lo, C.F., Lee, C.T., Chen, I.T., Yang, Y.T., and Wang, H C (2014) Recent Advances in the newly emergent acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) Paper presented at the 9th Symposium on Diseases in Asian Aquaculture (DAA9), Ho Chi Minh city, Viet Nam, 24-28 November, 2014 Book of abstract, p 72 Sirikharin, R., Taengchaiyaphum, S., Sritunyalucksana, K., Thitamadee, S., Flegel, T W., Mavichak, R., and Proespraiwong, P (2014) A new and improved PCR method for detection of AHPND bacteria.http://www.enaca.org/modules/news/articl e.php?article_id=2030 698 Schryver, D P., Defoirdt, T., and Sorgeloos, P (2014) Early mortality syndrome outbreaks: a microbial management issue in shrimp farming PLoS pathogens, 10(4): e1003919 Tinwongger, S., Thawonsuwan, J., Kongkumnerd, J., Nozaki, R., Kondo, H., and Hirono, I (2014a) Characterization of vỉulence factor of AHPND Vibrio parahaemolyticus which is the causative agent of shrimp disease Paper presented at the 9th Symposium on Diseases in Asian aquaculture (DAA9), Ho Chi Minh city, Viet Nam 24-28 November, 2014 Book of abstract, p 73 Tinwongger, S., Proespraiwong, P., Thawonsuwan, J., Sriwanayos, P., Kongkumnerd, J., Chaweepack, T., Mavichak, R., Unajak, S., Nozaki, R., Kondo, H., and Hirono, I (2014b) Development of PCR diagnosis for shrimp acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) strain of Vibrio parahaemolyticus Fish Pathology 49(4): 159-164 Tran, L., Nunan, L., Redman, R M., Mohney, L L., Pantoja, C R., Fitzsimmons, K., and Lightner, D V (2013) Determination of the infectious nature of the agent of acute hepatopancreatic necrosis syndrome affecting penaeid shrimp Disease of Aquatic Organisms, 105: 45 - 55  ... (Tris-acetate-EDTA) cò bù sung Ethelium Bromine đõc kết quâ dāĉi ánh sáng đèn UV 691 Non- Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm nuôi 2.2.3 Định danh vi khuẩn gây bệnh. .. 16S-rRNA chủng vi khuẩn V parahaemolitycus KC.12.020 695 Non- Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) tôm ni Hình Trình tự nucleotides độn gen 16S-rRNA chủng vi khuẩn Vibrio. .. Positive non - Vibrio parahaemolitycus bacteria with AHPND histopathology Paper presented at the 9th Symposium on Diseases in Asian 697 Non- Vibrio Parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND)