Quy định về lấy mẫu: nhằm lấy một lượng mẫuthuốc đại diện để có thể kết luận về chất lượngmang tính pháp lý Địa điểm lấy mẫu: Trung tâm dược phẩm, kho cácdoanh nghiệp sản xuất dược, công ty TNHH kinhdoanh dược phẩm, nhà thuốc bệnh viện… Ưu tiên lấy mẫu: thuốc có giá trị kinh tế cao, chấtlượng không ổn định, nghi ngờ thuốc giả, thuốckém phẩm chất… Lấy mẫu kiểm nghiệm Quy định về lấy mẫu Tiến hành lấy mẫu Tiến hành kiểm nghiệm Nhận mẫu Kiểm nghiệm, xử lý kết quả Trả lời kết quả Lưu mẫu Thí dụ minh họa
VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TP HỒ CHÍ MINH Lấy mẫu kiểm nghiệm Quy định lấy mẫu Tiến hành lấy mẫu Tiến hành kiểm nghiệm Nhận mẫu Kiểm nghiệm, xử lý kết Trả lời kết Lưu mẫu Thí dụ minh họa Quy định lấy mẫu: nhằm lấy lượng mẫu thuốc đại diện để kết luận chất lượng mang tính pháp lý Địa điểm lấy mẫu: Trung tâm dược phẩm, kho doanh nghiệp sản xuất dược, công ty TNHH kinh doanh dược phẩm, nhà thuốc bệnh viện… Ưu tiên lấy mẫu: thuốc có giá trị kinh tế cao, chất lượng khơng ổn định, nghi ngờ thuốc giả, thuốc phẩm chất… LẤY MẪU THUỐC KIỂM TRA TRÊN THỊ TRƢỜNG Điều kiện cần lưu ý lấy mẫu Nơi lấy mẫu không gây nhiễm bẩn tác động làm thay đổi tính chất mẫu Người lấy mẫu: phải có chun mơn định đáp ứng u cầu trình lấy mẫu Ghi nhận xét sơ bồ lô hàng điều kiện bảo quản mẫu lúc lấy Đồ đựng mẫu phải sạch, khô, khơng làm hỏng mẫu, có nhãn ghi chép thơng tin đầy đủ Sau lấy mẫu, phải làm biên bản, đóng gói, ghi nhãn, niêm phong bảo quản mẫu Phải có chữ ký xác nhận đại diện nơi lấy mẫu, người lấy mẫu người chứng kiến Lấy mẫu thuốc thành phẩm để kiểm tra giám sát chất lượng: a) Việc lấy mẫu theo nguyên tắc lấy mẫu ngẫu nhiên phải lấy mẫu vị trí khác lơ hàng b) Căn tiêu chuẩn chất lượng thuốc, số lượng thuốc lấy cho đủ để thử nghiệm lưu mẫu Dạng bào chế Thuốc viên nén, viên nang Quy cách Số lượng đơn vị thành phẩm lấy Đầu nguồn Cuối nguồn 1 hoạt chất 100 80 hoạt chất 200 100 • Đầu nguồn: kho xí nghiệp, cơng ty, khoa dược bệnh viện • Cuối nguồn: nhà thuốc, trung tâm dược phẩm Nhận mẫu: Kiểm tra mẫu cịn niêm phong khơng, cịn đầy đủ thông tin không… Kiểm nghiệm, xử lý kết quả: kiểm nghiệm viên (tối thiểu phải qua thời gian tập sự) thực Các bước thực hiện: ◦ Chuẩn bị tài liệu: Tiêu chuẩn dược điển, tiêu chuẩn nhà sản xuất ◦ Chuẩn bị dụng cụ thí nghiệm, hóa chất, thuốc thử, chất đối chiếu… theo yêu cầu phương pháp thử ◦ Chuẩn bị thiết bị phân tích: hiệu chuẩn, kiểm tra, bảo trì TỦ ĐỰNG MẪU CHỜ KIỂM NGHIỆM BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM MỘT CÁCH HỢP LÝ Độ hoà tan ( Phụ lục 11.4 ) Thiết bị: Kiểu giỏ quay Tốc độ quay: 100 vòng/phút Mơi trường hồ tan: 900 ml nước Thời gian: 60 phút Cách tiến hành: Thực phương pháp sắc ký lỏng ( Phụ lục 5.3) Pha động, dung dịch chuẩn điều kiện sắc ký thực phần định lượng Dung dịch thử: Lấy phần dung dịch môi trường sau hòa tan, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Lấy xác thể tích dịch lọc, pha pha động A để có nồng độ ampicilin xác khoảng 0,006% u cầu: Khơng 80,0% lượng ampicilin, C16H19N3O4S, so với lượng ghi nhãn hoà tan 60 phút Mất khối lƣợng làm khơ Cân xác khoảng 100 mg bột thuốc, sấy chân không áp suất mm Hg 600C Lượng phải từ 10,0 đến 15,0% chế phẩm chứa ampicilin trihydrat Lượng không lớn 4% chế phẩm chứa ampicilin khan Định lƣợng Bằng phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3), Pha động A: Hỗn hợp gồm thể tích dung dịch acid acetic 10% (TT), 100 thể tích dung dịch kali dihydrophosphat 0,2 M (TT), 100 thể tích acetonitril (TT) nước vừa đủ 2000 ml Pha động B: Hỗn hợp gồm thể tích dung dịch acid acetic 10% (TT), 100 thể tích dung dịch kali dihydrophosphat 0,2 M (TT), 800 thể tích acetonitril (TT) nước vừa đủ 2000 ml Pha động: Là hỗn hợp gồm 85 thể tích pha động A 15 thể tích pha động B Dung dịch chuẩn: Dung dịch ampicilin chuẩn 0,006% pha động A Dung dịch phân giải: Dung dịch chứa 0,025% ampicilin chuẩn 0,002% cephradin chuẩn, pha pha động A Dung dịch thử: Cân thuốc 20 nang, tính khối lượng trung bình, trộn nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột tương ứng với 60 mg ampicilin, lắc 15 phút với 80 ml pha động A thêm pha động A đến vừa đủ thể tích 100,0 ml Lọc, lấy 5,0 ml dịch lọc pha loãng thành 50,0 ml pha động A Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm 4,6 mm), nhồi pha tĩnh C (5m) (cột Nucleosil C18 thích hợp) Detector hấp thụ tử ngoại đặt bước sóng 254 nm Tốc độ dịng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 50 l Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiêm dung dịch phân giải, độ phân giải pic ampicilin pic cephradin phải khơng nhỏ 3,0; điều chỉnh thành phần pha động để đạt yêu cầu Tiêm dung dịch thử dung dịch chuẩn Tính hàm lượng ampicilin, C16H19N3O4S , viên từ diện tích pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn dung dịch thử, hàm lượng C16H19N3O4S ampicilin chuẩn Là viên nén chứa artesunat, C19H28O8 Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: Hàm lƣợng artesunat, C19H28O8, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Chỉ tiêu Yêu cầu Phƣơng pháp thử Tính chất Viên nén màu trắng Cảm quan Định tính Artesunat Theo chuyên luận riêng Độ đồng khối lượng Khối lượng trung bình 10% Theo chuyên luận chung Tạp chất liên quan Phải đạt yêu cầu quy định Theo chun luận riêng Độ hịa tan Khơng 60% Theo chuyên luận riêng lượng artesunat, C19H28O8, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Định lượng Hàm lƣợng artesunat, C19H28O8, từ 90,0 đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Theo chuyên luận riêng Dung dịch vanilin 5% acid sulfuric Hoà tan 0,25 g vanilin (TT) ml acid sulfuric (TT), pha dùng Dung dịch hydroxylamin hydroclorid ethanol Hoà tan 3,5 g hydroxylamin hydroclorid (TT) 95 ml ethanol 60%, thêm 0,5 ml dung dịch methyl da cam 0,2% ethanol 60% (TT) thêm dung dịch kali hydroxyd 0,5 N ethanol 60% (CĐ) đến xuất màu vàng hoàn toàn, pha loãng thành 100 ml với ethanol 60% Dung dịch natri hydroxyd M Hoà tan 80 g natri hydroxyd (TT) nước vừa đủ 1000 ml Dung dịch acid hydrocloric 10% Pha loãng 24 ml acid hydrocloric (TT) với nước vừa đủ 100 ml Dung dịch sắt (III) clorid 5% Hoà tan g sắt (III) clorid (TT) nước vừa đủ 100 ml Định tính Có thể chọn nhóm định tính sau: Nhóm 1: Phép thử A Nhóm 2: Các phép thử B, C D A Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 50 mg artesunat, thêm 25 ml aceton (TT) Lắc kỹ, lọc, bay dịch lọc đến khơ nhiệt độ phịng Làm khơ cắn 24 bình hút ẩm chứa silica gel Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) cắn thu phải phù hợp với phổ đối chiếu artesunat B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G Dung môi khai triển: Ether dầu hoả (khoảng sôi 40 - 60C) : ethyl acetat : acid acetic (48 : 36 : 1) Dung dịch thử: Lắc lượng bột viên tương ứng với mg artesunat với 10 ml dicloromethan (TT), lọc Dung dịch đối chiếu: Dung dịch artesunat chuẩn 0,05% dicloromethan (TT) Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 l dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Lấy sắc ký để khơ ngồi khơng khí, sau phun dung dịch vanilin 5% acid sulfuric, quan sát sắc ký đồ ánh sáng ban ngày Vết thu sắc ký đồ dung dịch thử phải phù hợp với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu vị trí, hình dạng độ đậm màu sắc C Cân lượng bột viên tương ứng với 100 mg artesunat, thêm 40 ml ethanol (TT), lắc kỹ để hoà tan lọc.Lấy nửa phần dịch lọc (một nửa phần dịch lọc lại để thử phản ứng D) thêm vào ml dung dịch hydroxylamin hydroclorid ethanol (TT) 0,25 ml dung dịch natri hydroxyd M (TT) Đun hỗn hợp cách thuỷ đến sôi, để nguội, acid hoá dung dịch acid hydrocloric 10% (TT), thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% (TT), dung dịch xuất màu tím đỏ D Bốc phần dịch lọc lại phản ứng C cách thuỷ đến ml Lấy vài giọt cho vào khay sứ trắng, thêm giọt dung dịch vanilin 5% acid sulfuric (TT) xuất màu nâu đỏ Tạp chất liên quan Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G Dung môi khai triển: Ether dầu hoả (khoảng sôi 40 - 60C) : ethyl acetat : acid acetic (48 : 36 : 1) Dung dịch thử: Lắc lượng bột viên tương ứng 50 mg artesunat với 10 ml dicloromethan (TT), lọc Dung dịch đối chiếu (1): Pha lỗng thể tích dung dịch thử thành 100 thể tích dicloromethan (TT) Dung dịch đối chiếu (2): Pha lỗng thể tích dung dịch thử thành 200 thể tích dicloromethan (TT) Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 l dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Lấy sắc ký để khơ ngồi khơng khí, sau phun dung dịch vanilin 5% acid sulfuric (TT), quan sát sắc ký đồ ánh sáng ban ngày Trên sắc ký đồ dung dịch thử, vết phụ ngồi vết khơng có màu đậm màu màu vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) khơng có q vết phụ khác có màu khơng đậm màu vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) Độ hoà tan (Phụ lục 11.4) Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Mơi trường hồ tan: 900 ml nước cất Tốc độ quay: 100 vòng/phút Thời gian: 30 phút Cách tiến hành: Lấy phần dung dịch môi trường sau hoà tan, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Hút xác 20 ml dịch lọc vào bình định mức 25 ml, thêm 2,5 ml dung dịch natri hydroxyd 1M (TT), hồ lỗng với nước vừa đủ đến vạch, lắc Chuẩn bị 25 ml dung dịch chuẩn có nồng độ 0,045 mg artesunat/1ml dung dịch natri hydroxyd 0,1M (TT) Làm ấm bình dung dịch chuẩn dung dịch thử nồi cách thuỷ nhiệt độ 50 1C 45 phút Sau làm nguội nhanh cách ngâm bình nước mát Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thử dung dịch chuẩn bước sóng 289 nm (Phụ lục 4.1) vòng 20 phút kể từ lúc lấy khỏi nồi cách thuỷ, cốc đo dày cm, dùng dung dịch natri hydroxyd 0,1M (TT) làm mẫu trắng Tính hàm lượng artesunat, C19H28O8, hồ tan viên từ độ hấp thụ đo dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C19H28O8 artesunat chuẩn u cầu: Khơng 60% lượng artesunat, C19H28O8, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Định lƣợng: Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp đồng thể tích acetonitril (TT) dung dịch đệm phosphat pH 3,0 (hoà tan 1,36 g kali dihydrophosphat (TT) 1000 ml nước, điều chỉnh dung dịch tới pH 3,0 acid phosphoric đậm đặc (TT)) Dung dịch chuẩn: Dung dịch artesunat chuẩn acetonitril (TT) có nồng độ xác khoảng mg/ml Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 m) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 216 nm Nhiệt độ cột: 30oC Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 20 l Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký Tiêm riêng biệt lần dung dịch chuẩn, chạy sắc ký để kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký Độ lệch chuẩn tương đối diện tích đáp ứng từ lần tiêm lặp lại không lớn 2,0% Dung dịch thử: Cân 20 viên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với 100 mg artesunat, thêm 25,0 ml acetonitril (TT), lắc kỹ, lọc Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn thử Tính hàm lượng artesunat, C19H28O8, có viên dựa vào diện tích pic thu dung dịch thử, dung dịch chuẩn hàm lượng C19H28O8 artesunat chuẩn ... pháp Áp dụng cho thuốc nang, thuốc bột (đơn liều), thuốc cốm (không bao, đơn liều) Cân khối lượng nang hay gói (thuốc bột, thuốc cốm) Với viên nang cứng, tháo rời hai nửa vỏ nang, dùng lau vỏ... dùng viên nén hay viên nang Khi sử dụng thiết bị kiểu giỏ quay, cho viên nén hay viên nang vào giỏ khô, hạ giỏ xuống vị trí trước quay Trong trường hợp dùng thiết bị kiểu cánh khuấy, cho viên nén. .. viện • Cuối nguồn: nhà thuốc, trung tâm dược phẩm Nhận mẫu: Kiểm tra mẫu cịn niêm phong khơng, cịn đầy đủ thông tin không… Kiểm nghiệm, xử lý kết quả: kiểm nghiệm viên (tối thiểu phải qua