Khảo sát tình hình đồng hiện diện antihbs ở người nhiễm hbv mạn

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KHẢO SÁT TÌNH HÌNH ĐỒNG HIỆN DIỆN ANTIHBS Ở NGƯỜI NHIỄM HBV MẠN Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Khoa Y Chủ trì nhiệm vụ: TS Nguyễn Thị Cẩm Hường Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ KHẢO SÁT TÌNH HÌNH ĐỒNG HIỆN DIỆN ANTIHBS Ở NGƯỜI NHIỄM HBV MẠN Cơ quan chủ quản (ký tên đóng dấu) Chủ trì nhiệm vụ (ký tên) TS Nguyễn Thị Cẩm Hường Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TP HCM, ngày 20 tháng 08 năm 2019 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài: “Khảo sát tình hình đồng diện antiHBs người nhiễm HBV mạn” Thuộc lĩnh vực (tên lĩnh vực): Truyền nhiễm Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: TS Nguyễn Thị Cẩm Hường Ngày, tháng, năm sinh: 11/06/1979 Nam/ Nữ: nữ Học hàm, học vị: Tiến sĩ Chức danh khoa học: TS BS Chức vụ: giảng viên Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0983773915 Fax: E-mail: dr_camhuong@ump.edu.vn Tên tổ chức công tác: Bộ môn Nhiễm, Đại học Y Dược TP HCM Địa tổ chức: 217 Hồng Bàng, Phường 11, Quận 5, TP HCM Địa nhà riêng: 333 Nguyễn Trãi, Phường 7, Quận 5, TP HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ(1): Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Khoa Y, Đại học Y dược TP HCM Điện thoại: Fax: Website: www.yds.edu.vn Địa chỉ: 217 Hồng Bàng, Phường 11, Quận 5, TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Tên Khoa Trung tâm, đơn vị - nơi quản lý trực tiếp cá nhân làm chủ nhiệm đề tài II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 06 năm 2018 đến tháng 03 năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng 06 năm 2018 đến tháng 06 năm 2019 - Được gia hạn (nếu có): Từ tháng… năm… đến tháng… năm… Kinh phí sử dụng kinh phí: kinh phí tự túc Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia thực tham gia chủ chủ yếu đạt Thuyết minh yếu Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân Tên cá nhân Nội dung Sản phẩm đăng ký theo tham gia tham gia chủ yếu đạt Thuyết minh thực TS BS TS BS Chọn mẫu Bài báo khoa Nguyễn Thị Nguyễn Thị huyết học Cẩm Hường Cẩm Hường lưu trữ, gửi xét nghiệm antiHBs, phân tích liệu, viết báo cáo nghiệm thu Ghi chú* PGS TS Phạm PGS TS Phạm Thiết kế Thị Lệ Hoa Thị Lệ Hoa nghiên cứu, phân tích liệu, viết báo cáo nghiệm thu - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham số đoàn, số lượng người tham gia ) gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, địa điểm ) Ghi chú* kinh phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: Số TT Thời gian Các nội dung, công việc (Bắt đầu, kết thúc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) - tháng … năm) Theo kế Thực tế đạt Người, quan thực hoạch Viết đề cương 1/3/2018 5/2018 TS BS N.T Cẩm Hường PGS TS PT Lệ Hoa Thực xét nghiệm antiHBs 1/6/2019 9/2018 TS BS Nguyễn Thị Cẩm Hường Nhập phân tích số liệu 1/8/2018 12/2018 TS BS N.T Cẩm Hường PGS TS PT Lệ Hoa Viết báo cáo nghiệm thu, 1/11/2018 6/2019 báo, TS BS N.T Cẩm Hường PGS TS PT Lệ Hoa - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng - Lý thay đổi (nếu có): Theo kế Thực tế hoạch đạt b) Sản phẩm Dạng II: Yêu cầu khoa học Số TT Tên sản phẩm cần đạt Theo kế hoạch Thực tế Ghi đạt - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Bài báo Yêu cầu khoa học Số lượng, nơi cần đạt công bố Theo Thực tế (Tạp chí, nhà kế hoạch đạt xuất bản) Đăng tạp chí Bài báo tiếng 01 bài, nước Anh thực - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số Cấp đào tạo, Chuyên TT ngành đào tạo Số lượng Theo kế hoạch - Lý thay đổi (nếu có): Ghi Thực tế đạt (Thời gian kết thúc) đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số Tên sản phẩm TT đăng ký Kết Ghi Theo Thực tế (Thời gian kết kế hoạch đạt thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Địa điểm Số Tên kết TT ứng dụng Thời gian (Ghi rõ tên, địa Kết nơi ứng sơ dụng) Đánh giá hiệu đề tài mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: Nghiên cứu khảo sát ban đầu đặc điểm bệnh nhân nhiễm HBV mạn có đồng diện HBsAg antiHBs, tiền đề cho nghiên cứu khảo sát diện, vai trò liên quan đột biến gen vùng S HBV với nhóm VGB mạn có biến chứng xơ gan hay HCC b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Chủ nhiệm đề tài Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký) (Họ tên, chữ ký đóng dấu) BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC MỤC LỤC Chữ viết tắt từ khoá 10 Danh mục bảng 11 Đặt vấn đề 12 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 15 Kết 19 Bàn luận 25 Kết luận 27 Tài liệu tham khảo 28 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A A AFP ALT antiHBs APRI ARFI AST C CHB CT scan DNA G G HBeAg HBsAg HBIg HBV HCC HCV HIV IQR MHR MRI T Adenine Arginine Alfa fetoprotein Alanine transaminase Kháng thể chống kháng nguyên bề mặt anti hepatitis B surface Aspartate aminotransferase to Platelet Ratio index Acoustic Radiation Force Impulse Imaging Aspartate transaminase Cytosin Chronic Hepatitis B Computed tomography Scan DeoxyRibo Nucleic acid Glycine Guanine Hepatitis B e antigen Hepatitis B virus surface antigen Hepatiti B Immuno globulin Hepatiti B virus Chỉ số tỷ số AST tiểu cầu Viêm gan B mạn Chụp cắt lớp điện toán Kháng nguyên HBe Kháng nguyên bề mặt HBV Siêu vi viêm gan B Hepato cellular carcinoma Ung thư biểu mô tế bào gan Hepatiti C virus Human immunodeficiency virus Interquartile range Major Hydrophilic region Magnetic resonance imaging Thymin Siêu vi viêm gan C 10 Khoảng tứ phân vị Chụp cộng hưởng từ CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết kế nghiên cứu: cắt ngang mô tả 2.2 Dân số đích: bệnh nhân nhiễm HBV mạn 2.3 Dân số chọn mẫu: Bệnh nhân nhiễm HBV mạn khám điều trị phòng khám viêm gan Bệnh viện Đại học Y Dược TP HCM bệnh nhân nội trú khoa nhiễm A Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới.
 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu: Phòng khám viêm gan BV Đại học Y Dược TP HCM khoa nhiễm A Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới 2.5 Cở mẫu: Nhằm mục tiêu xác định tỷ lệ đồng diện HBsAg antiHBs bệnh nhân nhiễm HBV mạn Theo cơng thức tính cỡ mẫu cho nghiên cứu cắt ngang mô tả ' #$%& ' *(1 − *) != /' Trong đó: n số đối tượng tối thiểu cần chọn α xác suất sai lầm loại I, α = 0,05 →!"#$ % = 1,96 p=0,05 tỉ lệ nhiễm đồng diện HBsAg antiHBs bệnh nhân nhiễm HBV mạn SVVGB theo nghiên cứu Pancher (2015) [13][ d=0,007, n= 441 2.6 Tiêu chuẩn chọn bệnh loại trừ: Tiêu chuẩn chọn: Mẫu huyết lưu trữ bệnh nhân nhiễm HBV mạn thuộc đề tài nghiên cứu "Khảo sát độ t biến Precore Basal core promoter bệnh nhân viêm gan B mạn", thoả tiêu chuẩn: • Bệnh nhân nhiễm HBV mạn ≥ 16 tuổi 
 • Có hồ sơ bệnh án điện tử hay cá nhân theo dõi HBeAg ALT, AST tháng (ngoại trừ nhóm HCC hay Xơ gan) 
 • Thuộc nhóm giai đoạn nhiễm HBV như: 15 o Nhiễm HBV mạn HBeAg dương o Nhiễm HBV mạn HBeAg âm o Viêm gan B mạn có biến chứng Xơ gan, HBeAg âm hay dương khơng có HCC
 o Viêm gan B mạn có biến chứng HCC, HBeAg âm hay dương có hay khơng có xơ gan • Chưa điều trị ngưng điều trị đặc hiệu tháng Tiêu chuẩn loại ra: • Có bệnh gan kèm theo có gây tăng ALT, AST gây ảnh hưởng đến phân loại giai đoạn nhiễm HBV (bệnh gan rượu cách hỏi thói quen lượng rượu uống, bệnh gan HCV với anti HCV (+) HCV RNA (+), bệnh gan thuốc có sử dụng thuốc thảo dược hay tân dược thời gian dài, đồng nhiễm HIV có xét nghiệm ELISA anti HIV (+)).
 • Xơ gan hay ung thư bệnh gan mạn tính khác (xơ gan rượu, chuyển hóa, tự miễn): có chứng bệnh gan rượu, có bệnh rối loạn chuyển hố lipid hay đái tháo đường type II kèm theo, có bilan xét nghiệm bệnh gan tự miễn bất thường.
 • Bệnh nhân mang thai vào thời điểm vào nghiên cứu Kỹ thuật chọn mẫu: lấy trọn tất mẫu huyết lưu trữ có đầy đủ liệu cần phân tích thực xét nghiệm antiHBs 2.7 

Biến số định nghĩa biến số:
 2.7.1 Biến số nghiên cứu Biến độc lập - Đặc điểm dân số học: Tuổi, giới - Đặc điểm virus HBV: HBsAg định lượng, HBeAg, HBV DNA, Genotype, đột biến Precore G1896A, độ t biến Basal core promoter A1762T/G1764A, T1753V, T1753V/A1762T/G1764A - Nhóm giai đoạn nhiễm HBV: nhiễm HBV mạn HBeAg dương, nhiễm HBV mạn HBeAg âm, nhiễm HBV mạn có biến chứng xơ gan hay HCC Biến phụ thuộc: 16 - Tình trạng đồng diện antiHBs HBsAg 2.7.2 Định nghĩa biến số: - Tuổi: biến liên tục, tuổi = “năm nghiên cứu - năm sinh”, hay phân nhóm < 30, 30-50, > 50 tuổi - Giới: biến phân nhóm, nam, nữ - Đặc điểm nhiễm HBV: o HBeAg: biến phân nhóm: HBeAg dương hay HBeAg âm o HBV DNA: tải lượng HBV, biến liên tục, hay phân nhóm < 5, 5-8, >8 log cps/ml o Mật độ HBsAg: biến liên tục hay phân nhóm log IU/ml o Genotype: biến phân nhóm: genotype B, C, genotype B C, khơng xác định o Đột biến G1896A: • Có đột biến có thay base Guanine thành Adenine nucleotide 1896 • Khơng có đột biến: khơng tìm thấy đột biến hay phản ứng giải trình tự tìm đột biến thất bại o Đột biến A1762T/G1764A: • Có đột biến: có diện chủng đột biến hay diện đồng thời chủng đột biến chủng hoang dại hai vị trí nucleotide vị trí 1762 với thay base Adenine thành Thymine với vị trí 1764 với thay base Guanine thành Adenine • Khơng có đột biến: khơng tìm thấy đột biến vị trí hay có vị trí đột biến 1762 hay 1764; phản ứng giải trình tự tìm đột biến thất bại o Đột biến T1753V (hay T1753A/C/G): • Có đ ột biến có thay base Thymine vị trí 1753 thành Adenine hay Cytosine, Guanine • Khơng có đột biến: khơng tìm thấy đột biến hay phản ứng giải trình tự tìm đột biến thất bại o Đột biến ba T1753V/ A1762T/G1764A: 17 • Có đột biến có diện chủng đột biến hay diện đồng thời chủng đột biến chủng hoang dại vị trí 1753, 1762, 1764 • Khơng có đột biến: khơng tìm thấy đột biến hay phản ứng giải trình tự tìm đột biến thất bại - Phân nhóm giai đoạn nhiễm HBV: o Nhiễm HBV mạn HBeAg dương: HBsAg dương > tháng, HBeAg dương, HBV DNA ≥ log cps/ml o Nhiễm HBV mạn HBeAg âm: HBsAg dương > tháng, HBeAg âm, HBV DNA ≥ log cps/ml o Nhiễm HBV mạn có biến chứng xơ gan: HBsAg (+), HBV DNA ≥ 300 copies/ml có phân độ Child Pugh B C (hay ARFI >F4, hay APRI >2) có chứng suy tế bào gan với tăng áp tĩnh mạch cửa (lòng bàn tay son, albumin/máu < 35 g/dl, taux de prothrombin < 60%), tiểu cầu giảm < 120.000/mm3; báng bụng, dãn tĩnh mạch thực quản, lách to…) o Nhiễm HBV mạn có biến chứng HCC: HBsAg (+), HBV DNA ≥ 300 copies/ml kèm theo: • AFP > 200 ng/ml, siêu âm bụng có sang thương có tính chất phù hợp với HCC kèm theo có CT Scan MRI bụng có sang thương ngấm thuốc có tăng quang động mạch thải thuốc tĩnh mạch muộn HOẶC: • AFP > 200 ng/ml, siêu âm bụng có sang thương có tính chất phù hợp với HCC kèm thuyên tắc tĩnh mạch cửa - Tình trạng đồng diện HBsAg antiHBs: o Có đồng diện anti HBs ≥ 10 mIU/ml o Khơng có đồng diện antiHBs âm hay < 10 mIU/ml 2.8 Kỹ thuật đo lường biến số: - Định lượng HBsAg: kỹ thuật miễn dịch ện hóa phát quang BV Đại học Y Dược TP HCM dùng thuốc thử Elecsys HBsAgII Quant (Roche), đơn vị IU/ml, khoảng định lượng từ 0,05-52.000 IU/ml - antiHBs xét nghiệm định tính theo phương pháp miễn dịch đ iện hóa phát quang ECLIA (ElectroChemiluminescent Immunoassay) với thuốc thử Cobas (Roche) máy xét nghiệm miễn dịch Elecsys Cobas e, Trung tâm chẩn 18 đốn Y Khoa Hồ Hảo.
 - HBeAg: xét nghiệm định tính theo phương pháp miễn dịch điện hóa phát quang ECLIA (ElectroChemiluminescent Immunoassay) với thuốc thử Cobas (Roche) máy xét nghiệm miễn dịch Elecsys Cobas e, Khoa Xét nghiệm BV Đ ại học Y Dược TP HCM hay BV Bệnh Nhiệt đ ới với thuốc thử ARCHITECT ABBOTT, máy Architect i system, hai xét nghiệm sử dụng kỹ thuật định tính nên khơng có sai biệt kết thực hai bệnh viện khác - Định lượng HBV DNA: kỹ thuật PCR thời gian thực (RT-PCR), thực khoa xét nghiệm bệnh viện: BV Đại học Y Dược TP HCM có ngưỡng phát 300 copies/µL, BV Bệnh Nhiệt Đ ới có ngưỡng phát 250 copies/ml - Xác đ ịnh genotype HBV: kỹ thuật nested PCR thực Trung tâm Y sinh học phân tử, Đại học Y Dược TP HCM - Xác định đột biến vùng Precore, vùng Basal core promoter cách giải trình tự gen, kết giải trình tự ghi nhận vị trí nucleotide bị biến đổi cách so sánh trình tự từ nucleotide 1740 đến nucleotide 1915 với trình tự chuẩn có mã số Genbank HBV genotype B AB981582, genotype C AB981580, sử dụng phần mềm CLC Main Workbench 2.9 Phương pháp xử lý phân tích số liệu: Dữ liệu nhập phân tích phần mềm SPSS 20.0.
Tỷ lệ người nhiễm HBV đồng diện HBsAg antiHBs tính tỷ lệ %, so sánh tỷ lệ nhóm dân số khảo sát phép kiểm Chi bình phương, Các giá trị trung vị nhóm so sánh phép kiểm Man- Whitnney U (cho nhóm) hay Kruskal wallis (cho nhóm trở lên) để so sánh biến số khơng có phân phối chuẩn Mức ý nghĩa xác nhận p log cps/ml, trung vị (IQR) HBV DNA = 6,57 (5-8,01) log cps/ml HBsAg = 3,4 (2,9-4,15) log IU/ml (bảng 2) Bảng 1: Đặc điểm dân số (n = 521) Đặc điểm dân số Giới Nam Nữ Nhóm tuổi 50 tuoi Phân nhóm Nhiễm HBV mạn HBeAg dương Nhiễm HBV mạn HBeAg âm VGB mạn có Xơ gan VGB mạn có HCC Đồng diện khơng có Bảng 2: Đặc điểm nhiễm HBV (n=521) Đặc điểm HBeAg âm Dương Nhóm HBV DNA (log cps/ml) 8 Nhóm HBsAg (log IU/ml) (n=456) 3 Genotype B C B& C Không xác định 21 Tần số (n) 350 171 98 272 151 Tỷ lệ % 67,2 32,8 18,8 52,2 29 210 40,3 191 36,7 69 51 470 51 13,2 9,8 90,2 9,8 Tần số (n) 266 255 130 256 135 135 321 323 129 15 Tỷ lệ % 51,1 48,9 25,0 49,1 25,9 25,9 61,6 62,0 24,8 2,9 54 10,4 3.2 Tỷ lệ đồng diện Có 51 bệnh nhân nhiễm HBV mạn có đồng diện antiHBs, tỷ lệ 9,8% Tỷ lệ đồng diện antiHBs thấp nhóm nhiễm HBV mạn HBeAg dương (7,6%), 9,9% nhóm viêm gan B mạn HBeAg âm, nhóm xơ gan (8,7%) gần tương đương cao rõ nhóm có HCC (19,6%) (p=0,079), khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so sánh tỷ lệ đồng diện nhóm (bảng 3) Tuy nhiên khác biệt có ý nghĩa thống kê so sánh tỷ lệ đồ ng dịện antiHBs nhóm HCC nhóm nhiễm HBV mạn HBeAg dương (p=0,01, phép kiểm Chi bình phương) Bảng 3: Phân bố tình trạng đồng diện HBsAg antiHBs nhóm giai đoạn nhiễm HBV (n=521) Phân nhóm Nhiễm HBV mạn HBeAg dương Đồng diện, n (%) Có (n=51) Khơng (n=470) 16 (7,6) 194 (92,4) Nhiễm HBV mạn HBeAg âm 19 (9,9) 172 (90,1) VGB mạn có Xơ gan VGB mạn có HCC (8,7) 10 (19,6) 63 (91,3) 41 (80,4) P 0,079 % theo hàng, phép kiểm Chi bình phương 3.3 Các yếu tố liên quan đến tình trạng đồng diện Bảng 4: Phân bố tình trạng đồng diện theo tuổi giới (n=521) Đặc điểm Đồng diện, n (%) Có (n=51) Khơng (n=470) nam 34 (9,7) 316 (90,3) Giới Nữ 17 (9,9) 154 (90,1) Tuổi < 30 12 (12,2) 86 (87,8) 30-50 28 (10,3) 244 (89,7) >50 11 (7,3) 140 (92,7) % theo hàng, phép kiểm Chi bình phương P 0,94 0,4 Khơng khác biệt tỷ lệ đồng diện theo giới nhóm tuổi (bảng 4) Tình trạng đồng diện có tỷ lệ cao genotype C so với genotype B (17,4% so với 6,8%, p