Nhân giống cây tục đoạn (dipsacus japonicus miq) bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP & PTNT TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP PHAN THỊ THU TRANG NHÂN GIỐNG CÂY TỤC ĐOẠN (Dipsacus japonicus Miq) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học1: Ngƣời hƣớng dẫn khoa học 2: PGS.TS BÙI VĂN THẮNG TS KHUẤT THỊ HẢI NINH Hà Nội, 2018 HÀ NỘI, 2018 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan, đề tài nghiên cứu “Nhân giống Tục Đoạn (Dipsacus japonicus Miq) phƣơng pháp nuôi cấy in vitro” tơi nhóm nghiên cứu thực hiện, chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Nếu nội dung nghiên cứu tơi trùng lặp với công nghiên cứu cơng bố, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Ngƣời cam đoan Phan Thị Thu Trang ii LỜI CÁM ƠN Đề tài nghiên cứu đƣợc thực Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Trƣờng Đại học Lâm nghiệp Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Viện tạo điều kiện để công việc chuyên môn đề tài đƣợc tiến hành thuận lợi Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Văn Thắng TS Khuất Thị Hải Ninh tận tình hƣớng dẫn tơi q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn góp ý, dẫn, chia sẻ kinh nghiệm cán nghiên cứu Viện Công nghiệp sinh học lâm nghiệp giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho q trình thực đề tài Đồng thời, tơi nhận đƣợc động viên, quan tâm giúp đỡ nhiệt tình bạn bè đồng nghiệp nơi công tác Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình ngƣời thân ln bên tôi, động lực để vƣợt qua khó khăn để hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Học viên Phan Thị Thu Trang iii MỤC LỤC TRANG LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung Tục Đoạn (D japonicus Miq) 1.1.1 Đặc điểm sinh vật học, phân bố giá trị kinh tế Tục Đoạn (D japonicus Miq) 1.1.2 Tình hình bảo tồn, khai thác phát triển Tục Đoạn 1.1.3 Các phương pháp nhân giống Tục Đoạn (D japonicus Miq) 10 1.2 Tình hình nghiên cứu Tục Đoạn (D japonicus Miq) 12 1.2.1 Tình hình nghiên cứu Tục Đoạn giới 12 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Tục Đoạn Việt Nam 13 1.3 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro số loài dƣợc liệu Việt Nam 14 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nội dung nghiên cứu 20 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm thu thập số liệu 21 2.2.2 Phương pháp xử lý số liệu 24 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Tạo mẫu Tục Đoạn (D japonicus Miq) 27 iv 3.1.1 Tạo mẫu từ hạt 27 3.1.2 Tạo mẫu từ chồi 29 3.2 Ảnh hƣởng chất điều hồ sinh trƣởng, mơi trƣờng dinh dƣỡng hàm lƣợng đƣờng đến khả tạo cụm chồi 31 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo cụm chồi 31 3.2.2 Ảnh hưởng loại môi trường dinh dưỡng đến khả tạo cụm chồi 35 3.2.3 Ảnh hưởng hàm lượng đường đến khả tạo cụm chồi 37 3.3 Ảnh hƣởng chất điều hoà sinh trƣởng đến khả rễ chồi 41 3.4 Nghiên cứu kỹ thuật chăm sóc in vitro giai đoạn vƣờn ƣơm 44 3.4.1 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống non 44 3.4 Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sống sinh trưởng in vitro vườn ươm 45 KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KHUYẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Ký hiệu Tên đầy đủ BAP Benzyl aninopurine CTTN Cơng thức thí nghiệm ĐC Đối chứng CS Cộng ĐHST Điều hòa sinh trƣởng IBA Indole butiric acid LSD Khoảng sai dị tối thiểu (Least significant difference) MS MS* 10 NAA Naphtyl acetic acid 11 STT Số thứ tự 12 Sig Mức ý nghĩa (Significant) 13 TB Trung bình 14 TDZ Thidiazuron 15 WPM Woody plant medium Murashige and Skoog, 1962 (một loại môi trƣờng nuôi cấy mô) Murashige and Skoog, 1962 (một loại môi trƣờng nuôi cấy mô) vi DANH MỤC BẢNG TRANG Bảng 3.1 Ảnh hƣởng thời gian loại hóa chất khử trùng đến khả tạo mẫu Tục Đoạn, sau tuần nuôi cấy 27 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng mẫu chồi b ng HgCl2 0,1 đến khả tạo mẫu Tục Đoạn sau tuần nuôi cấy 29 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến khả tạo cụm chồi Tục Đoạn sau tuần nuôi cấy 32 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng loại môi trƣờng dinh dƣỡng đến khả tạo cụm chồi Tục Đoạn in vitro 35 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng hàm lƣợng loại đƣờng đến khả tạo cụm chồi Tục Đoạn in vitro 38 Bảng 3.6 Khả rễ chồi in vitro Tục Đoạn môi trƣờng 42 MS bổ sung NAA, IBA 42 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thời gian huấn luyện đến khả sống 45 mô Tục Đoạn 45 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng loại giá thể đến khả sống sinh trƣởng in vitro Tục Đoạn 46 vii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ TRANG Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ ( ) mẫu hạt Tục Đoạn nảy chồi khử trùng b ng HgCl2 0,1% NaClO với thời gian khác 28 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ mẫu Tục Đoạn nảy chồi khử trùng b ng HgCl2 0,1 với thời gian khác 30 Biều đồ 3.3 Tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi môi trƣờng MS bổ sung chất điều hoà sinh trƣởng nồng độ khác nhau………………………… .31 Biều đồ 3.4 Số chồi TB/cụm Tục Đoạn mơi trƣờng MS bổ sung chất điều hồ sinh trƣởng nồng độ khác 33 Biều đồ 3.5 Chiều cao TB chồi Tục Đoạn môi trƣờng MS bổ sung chất điều hoà sinh trƣởng nồng độ khác 33 Biểu đồ 3.6 Tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi môi trƣờng MS, MS*, WPM sau tuần nuôi cấy………………………………………………… …… 34 Biểu đồ 3.7 Số chồi TB/cụm môi trƣờng MS, MS*, WPM 36 sau tuần nuôi cấy 36 Biểu đồ 3.8 Chiều cao trung bình chồi môi trƣờng MS, MS*, WPM 36 sau tuần nuôi cấy 36 Biểu đồ 3.9 Tỷ lệ ( ) mẫu tạo cụm chồi môi trƣờng bổ sung 38 Biểu đồ 3.10 Số chồi TB/cụm môi trƣờng bổ sung loại đƣờng khác (sau tuần nuôi cấy) 39 Biểu đồ 3.11 Chiều cao trung bình chồi môi trƣờng bổ sung loại đƣờng khác (sau tuần nuôi cấy) 39 Biểu đồ 3.12 Số lƣợng trung bình rễ/chồi (sau tuần cấy) 43 Biểu đồ 3.13 Số lƣợng chiều dài trung bình rễ /chồi (sau tuần cấy) 43 Biểu đồ 3.14 Tỉ lệ sống sót giá thể khác 47 Biểu đồ 3.15 Chiều cao trung bình giá thể khác 47 viii DANH MỤC CÁC HÌNH TRANG Hình 1.1 Cây Tục Đoạn Hình 2.1 Mẫu Tục Đoạn làm vật liệu nuôi cấy 22 Hình 3.1 Mẫu hạt Tục Đoạn nảy mầm in vitro sau tuần nuôi cấy 29 Hình 3.2 Mẫu Tục Đoạn nảy chồi sau tuần nuôi cấy 31 Hình 3.3 Cụm chồi Tục Đoạn sau tuần cấy chuyển sang mơi trƣờng nhân chồi 34 Hình 3.4 Cụm chồi Tục Đoạn sau tuần nuôi cấy loại môi trƣờng: A: WPM, B: MS* C: MS 37 Hình 3.5 Cụm chồi Tục Đoạn sau tuần nuôi cấy môi trƣờng hàm lƣợng đƣờng khác nhau: A: công thức D4; B: công thức D1; 40 Hình 3.6 Cụm chồi Tục Đoạn sau tuần nuôi cấy môi trƣờng hàm lƣợng đƣờng khác 41 Hình 3.7 Cây Tục Đoạn hồn chỉnh mơi trƣờng MS + 0,4 mg/l NAA 44 Hình 3.8 Cây mơ Tục Đoạn giá thể GT2 48 ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài Việt Nam quốc gia có nguồn tài nguyên thực vật phong phú đa dạng giới, với 5.117 loài dƣới loài, thuộc 1.823 chi, 360 họ ngành Thực vật bậc cao có mạch, với số taxon thuộc nhóm Rêu, Tảo Nấm lớn, có cơng dụng làm thuốc (Danh lục thuốc Việt Nam, 2016) Theo Tổ chức Y tế Thế giới, 80 dân số nƣớc phát triển có nhu cầu sử dụng y học cổ truyền thuốc từ thảo dƣợc để chăm sóc bảo vệ sức khỏe Trong vài thập niên gần đây, nhiều nƣớc đẩy mạnh việc nghiên cứu, bào chế sản xuất dƣợc phẩm có nguồn gốc từ dƣợc liệu để hỗ trợ, phòng ngừa điều trị nhiều loại bệnh Theo thống kê ngành Y tế, nhu cầu sử dụng dƣợc liệu Việt Nam vào khoảng 60.000 - 80.000 dƣợc liệu/năm Lĩnh vực sản xuất kinh doanh dƣợc liệu cho sản xuất thuốc, thực phẩm chức mang lại nguồn lợi lớn cho kinh tế Tuy nhiên, phần lớn khối lƣợng dƣợc liệu phải nhập khẩu, Việt Nam lại quốc gia có tiềm nguồn tài nguyên dƣợc liệu phong phú Năm 2013, theo Quyết định số 1976/QĐ-TTg ngày 30/10/2013 Thủ tƣớng Chính phủ “Phê duyệt quy hoạch tổng thể phát triển dƣợc liệu đến năm 2020 định hƣớng đến năm 2030” định số 206/QĐ-BYT, ngày 22/1/2015 Bộ trƣởng Y tế việc ban hành danh mục dƣợc liệu ƣu tiên phát triển giai đoạn 2015 – 2020, nh m bảo tồn khai thác dƣợc liệu tự nhiên Việt Nam quy hoạch vùng dƣợc liệu trọng điểm để lựa chọn sản xuất khai thác hợp lý Trong đó, triển khai sản xuất 28 loài dƣợc liệu địa phục vụ cho sản xuất Tục Đoạn lồi dƣợc liệu đƣợc qui hoạch trồng vùng núi cao vùng núi trung bình có khí hậu Á nhiệt đới 52 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb.Thời đại Phạm Thị Tố Liên, Võ Thị Bạch Mai (2007), Bư c đầu nghiên cứu tạo dịch treo tế bào Đinh lăng Polyscias fruticosa (L.) Harms, Tạp chí phát triển KH&CN, tập 10, số 07 - 2007 10 Phùng Văn Phê, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Trung Thành (2010), Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi In vitro loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl)”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, 26(4), 248-253 11 Vũ Quang Nam, Bùi Văn Thắng Nguyễn Thị Thơ (2013), Nhân giống Xạ đen (Celastrus hindsii Benth.) phương pháp nuôi cấy mô, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm nghiệp 2013, số 2: tr.11-16 12 QUYẾT ĐỊNH Phê duyệt quy hoạch tổng thể phát triển dƣợc liệu đến năm 2020 định hƣớng đến năm 2030 Thủ tƣớng phủ, CƠNG BÁO/Số 783 + 784/Ngày 14-11-2013 55 13 QUYẾT ĐỊNH việc ban hành danh mục dƣợc liệu ƣu tiên phát triển giai đoạn 2015 – 2020, Bộ trƣởng Y tế, số 206/QĐ-BYT, 22/1/2015 14 Vũ Hoài Sâm, Bùi Đức Quỳnh, Nguyễn Thị Hƣơng, Nguyễn Văn Khiêm, (2016), “Nghiên cứu nhân giống in vitro bách hợp (Lilium brownii F.E.Brown)”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 14(1): 121-129, 2016 121 15 Lê Thị Thảo (2013), “ Nghiên cứu số đặc tính sinh dược dịch chiết từ Tục Đoạn (Dipsacus japonicus Miq.), Báo cáo Trƣờng ĐHSP Hà Nội II 16 Lê Thị Nhƣ Thảo, Hoàng Hữu Tuấn, Mai Thị Phƣơng Hoa, Đỗ Tiến Vinh, Trần Văn Minh (2014), “Nhân giống Đinh lăng nhỏ kỹ thuật ni cấy chồi đỉnh”, Tạp chí Dƣợc liệu, tập 19, số 1/2014, tr 46-52 17 Nguyễn Quang Thạch cộng (2012), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) in vitro bảo tồn nguồn dược liệu quý”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 2012 Tập 10, số 4: tr.597-603 53 18 Bùi Văn Thắng, Cao Thị Việt Nga, Vùi Văn Kiên, Nguyễn Văn Việt (2016), “Nghiên cứu nhân giống Đảng sâm (Codonopsis Javanica) phương pháp nuôi in vitro”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm nghiệp, số 4- 2016 19 Bùi Văn Thắng (2017), “Nhân giống in vitro hà thủ ô đỏ (Polygonum multifoum Thunb.) tuyển chọn Tỉnh Hà Giang”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm nghiệp, số – 2017 20 Hoàng Thị Thế, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Thủy (2013), “Quy trình nhân giống in vitro Ba kích (Morinda officenalis How)” Tạp chí Khoa học Phát triển 2013, tập 11, số 3: 285-292 21 Trịnh Thị Thủy, Trần Văn Sung, Guenter Adam (1999), “Nghiên cứu thành phần hóa học Tục Đoạn (Dipsacus japonicus)”, Tạp chí Hóa học (Vietnamese Journal of Chemistry), 37 ( 2), 64-69 22 Trịnh Thị Thủy, Trần Văn Sung, G Adam (2002), “Nghiên cứu thành phần hóa học Tục Đoạn (Dipsacus japonicus) II-Triterpene glycosids”, Tạp chí Hóa học (Vietnamese Journal of Chemistry), 40 (3), 13-19 23 Phạm Thị Thì, Đồn Thị Quỳnh Hƣơng, Dƣơng Ngọc Kiều Thi, Phạm Văn Thắng Nguyễn Thoại Ân (2016), Xây dựng quy trình nhân nhanh Đinh lăng có hàm lượng Saponin cao phương pháp in vitro, Tạp ch Khoa học Trƣờng Đại học Cần Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 44 (2016): tr.104-112 24 Nguyễn Hải Tuất, Ngô kim Khôi (1996), Xử lý thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông lâm nghiệp máy vi tính, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội, 128 trang 25 Nguyễn Hải Tuất, Nguyễn Trọng Bình (2005), Khai thác sử dụng SPSS để xử lý số liệu lâm nghiệp, Nxb Nông nghiệp 54 26 Mai Trƣờng, Trần Thị Ngọc Hà, Phan Tƣờng Lộc, Lê Tấn Đức, Trần Trọng Tuấn, Đỗ Đăng Giáp, Bùi Đình Thạch, Phạm Đức Trí, Nguyễn Đức Minh Hùng, Nguyễn Thị Thanh, Nguyễn Văn Kết, Trần Công Luận, Nguyễn Hữu Hổ (2013), “Nghiên cứu ni cấy mơ sẹo có khả sinh phơi mô phôi soma Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)” Tạp chí sinh học, 2013, 35(3se): tr.145-157 27 Mai Trƣờng, Trần Thị Ngọc Hà, Trần Trọng Tuấn, Phan Tƣờng Lộc, Đỗ Đăng Giáp, Bùi Đình Thạch, Nguyễn Thị Ngọc Hân, Phạm Đức Trí, Lê Tấn Đức, Nguyễn Đức Minh Hùng, Nguyễn Văn Kết, Nguyễn Hữu Hổ (2014), “Tạo nhân phôi soma Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) mơi trường lỏng”, Tạp chí Khoa học Phát triển, 2014, tập 12, số 7: tr.1085-1095 28 Viện dƣợc liệu (2016), Danh lục thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội 29 Hoàng Văn Vinh (2001), Cây thuốc vị thuốc đông, Nxb Hà Nội II TIẾNG ANH 30 Cong, Guangting Cui, Lei Zang, Meng Hao, Lirong (2013) “Attenuation of renal ischemia/reperfusion injury by a polysaccharide from the roots of Dipsacus asperoides”, Information Systems Division, National Agricultural Library, http://www.nal.usda.gov/ 31 Choi NH, Jang JY, Choi GJ, Choi YH, Jang KS, Nguyen VT, Min BS, Le Dang Q, Kim JC (2017), “Antifungal activity of sterols and dipsacus saponins isolated from Dipsacus asper roots against phytopathogenic fungi”, Pestic Biochem Physiol, 141:103-108 32 Dong Chil Koo, So Yoon Baek, Sang Hoon Jung, Sang Hee Shim, (2013), “Aldose reductase inhibitory compounds from extracts of Dipsacus asper”, Biotechnology 18, Issue 5, pp 926–931 and Bioprocess Engineering, Volume 55 33 Hyo Won Jung, Jin KiJung, Kun HoSon, Dong HwaLee, Tae MinKang, Young ShikKim, Yong-KiPark (2012), “Inhibitory effects of the root extract of Dipsacus on collagen-induced arthritis in mice”, Journal of Ethnopharmacology, Volume 139, Issue 1, , Pages 98-103 34 Jing Jing Liu, Xinluan Wang, Xinluan Wang, Bao-lin Guo, Guang-Zhong Tu (2011), “Triterpenoid saponins from Dipsacus asper and their activities in vitro”, Journal of Asian natural products research, 13(9):851-60 · 35 Kam Ming Ko and Hoi Yan Leung (2007), “Enhancement of ATP generation capacity, antioxidant activity and immunomodulatory activities by Chinese Yang and Yin tonifying herbs”, Chin Med 2007; 2: 36 Li Dahui, Wang Zaigui, Liu Xueshi and Yuan Yi (2012), “Identification of the medicinal plant Dipsacus asperoides from three other species in genus Dipsacus (Dipsaceae) by internal transcribed spacer of ribosomal deoxyribonucleic acid (rDNA ITS)”, Journal of Medicinal Plants Research Vol 6(2), pp 289-295 Mối quan hệ loài 37 McCown B.H and G Lloyd (1981), Woody plant medium (WPM) – a mineral nutrient formulation for microculture of woody plant species, HortScience 16: 453-453 38 Miao Z.-C., Feng R., Zhou Y.-X., and Wei F (2000a), “Chemical structure and NMR of a new saponin from Dipsacus japonicus (Dipsacaceae)”, Acta Bot Sin 42, 421 – 426 39 Miao Z.-C., Zhou Y.-X., Feng R., and Wei F (2000b), “Structural determination of a new bidesmosidic tri- terpenoid glycoside from Dipsacus japonicas”, Chin J Org 20, 81 – 87 40 Murashige T and Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol plant, 15: 473 – 497 56 41 Narayan Das Prajapati, (2003) A Handbook of Medicinal Plants: A Complete Source Book, Agrobios, India 42 Sei Ryang Oh, Keun Young Jung, Kun Ho Son, Si Hyung Park, Im Seon Lee, Kyung Seop Ahn and HyeongKyu Lee (1999), “In vitro Anticomplementary Activity of Hederagenin Saponins Isolated from Roots of Dipsacus asper”, Arch Pharm Res Vol 22, No 3, 317-319, 1999 Note 43 Shaw P J A; Shackleton K (2011), Joly, Simon, ed "Carnivory in the teasel Dipsacus fullonum - the effect of experimental feeding on growth and seed set" PLoS ONE (3): e17935 44 Shizhen Li (1990), Medicinal & Aromatic Plants Abstracts, Publications & Information Directorate, CộNG SựIR, 1990 45 T Liebold , R K Straubinger, H W Rauwald (2011), “Growth inhibiting activity of lipophilic extracts from Dipsacus sylvestris Huds roots against Borrelia burgdorferi s s in vitro”, Pharmazie 66: 628–630 (2011) doi: 10.1691/ph.2011.0887 46 Van Dan Nguyen (1999), Selected Medicinal Plants in Vietnam, Tập 1, Science and Technology Publishing Housemo, Ha Noi 47 Xu li, Wang Wei, (2002) Chinese material medica combination $ applications, Donica publishing Ltd, Waddington Road, St Albans, Herts AL35EX 48 YiTao, XiChen, WeidongLi, BaochangCai, LiuqingDi, LiyunShi, LihongHu (2017), “Global and untargeted metabolomicộng evidence of the protective effect of different extracts of Dipsacus asper Wall ex C.B Clarke on estrogen deficiency after ovariectomia in rats”, Journal of Ethnopharmacology, Volume 199, Pages 20-29 49 YiTao,YingshanDu, WeidongLi, BaochangCai, LiuqingDi, LiyunShi, LihongHu (2017), “Integrating UHPLC–MS/MS quantification and DAS 57 analysis to investigate the effects of wine-processing on the tissue distributions of bioactive constituents of herbs in rats: Exemplarily shown for Dipsacus asper”, Journal of Chromatography B Volumes 1055 - 1056, Pages 135 - 143 50 Wei F., Lou Z C., Gao M., and Miao Z C (1995), “Application of new techniques of NMR in structure elu- cidation of japondipsaponin E1 isolated form Dipsacus japonicus Miq”, Acta Pharm Sin 30, 831 - 837 51 Wei F., Liu L.-M., and Lou Z.-C (1998), “Application of new techniques of NMR in structure elucidation of japondipsaponin E2 isolated form Dipsacus japonicus Miq”, J Shenyang Pharm Univ 15, 120 - 124 52 Zhi Long Liu, Guo Hua Jiang, Ligang Zhou, and Qi Zhi Liu (2013) “Analysis of the Essential Oil of Dipsacus japonicus Flowering Aerial Parts and its Insecticidal Activity against Sitophilus zeamais and Tribolium castaneum”, Z Naturforsch C 2013 Jan-Feb;68(1-2):13-8 PHỤ BIỂU Phụ biểu 01 Kết kiểm tra tỷ lệ hạt nảy mầm công thức khử trùng khác Chi-Square Tests Value Asymp Sig df (2-sided) Pearson Chi-Square 74.123a 000 Likelihood Ratio 71.336 000 8.284 004 Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 810 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 24.33 Phụ biểu 02 Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu nảy chồi cơng thức thí nghiệm khác Value Asymp Sig df (2-sided) Pearson Chi-Square 10.851a 013 Likelihood Ratio 10.967 012 223 637 Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 360 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 12.75 Phụ biểu 03 Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi môi trƣờng MS bổ sung chất điều hoà sinh trƣ ng nồng độ khác gian khác Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases Asymp Sig df (2-sided) 2.716E2a 000 364.478 000 195.572 000 865 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 35.69 Phụ biểu 04 Kết kiểm tra thống kê chiều cao chồi só chồi/cụm mơi trƣờng MS bổ sung chất điều hoà sinh trƣ ng nồng độ khác gian khác ANOVA Sum of Squares sochoi Between Groups Mean Df Square 64.996 8.125 Within Groups 141.993 856 166 Total 206.990 864 339510.650 75074.788 856 414585.438 864 Hchoi Between Groups Within Groups Total F Sig 48.978 000 42438.831 483.886 000 87.704 Phụ biểu 05 Kết kiểm tra thống kê tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi loại mơi trƣờng khống khác MS, MS* WPM Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Asymp Sig (2-sided) df 1.236E2a 000 144.643 000 Likelihood Ratio Linear-by-Linear 115.992 000 Association N of Valid Cases 262 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 27.25 Phụ biểu 06 Kết kiểm tra thống kê chiều cao chồi só chồi/cụm loại mơi trƣờng khống khác MS, MS* WPM ANOVA Sum of Squares sochoi Between Groups Within Groups Total Hchoi Between Groups Within Groups Total Mean Square df 21.869 940 22.809 11.476 1.580 13.056 F 10.934 69.794 Sig .000 157 5.738 21.789 263 002 Phụ biểu 07 Kết kiểm tra thống kê tỉ lệ mẫu tạo cụm chồi mơi trƣờng MS có bổ sung hàm lƣợng loại đƣờng khác Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Asymp Sig (2sided) df 26.542a 000 34.121 000 3.731 053 Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 449 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 8.62 Phụ biểu 08 Kết kiểm tra thống kê chiều cao chồi só chồi/cụm loại mơi trƣờng MS có bổ sung hàm lƣợng loại đƣờng khác ANOVA Sum of Squares sochoi Between Groups Within Groups Total Hchoi Between Groups Within Groups Total Mean Square df 12.091 2.073 10 14.164 14 207 052 467 10 047 673 14 F 3.023 14.579 Sig .000 207 1.107 405 Phụ biểu 09 Kết kiểm tra chiều dài rễ, số rễ/chồi bổ sung NAA nồng độ khác ANOVA Sum of Squares Chiều dài rễ Between 1.693 Within Groups 3.564 37 096 Total 8.643 40 11.307 3.769 9.318 37 252 20.625 40 Between Groups Within Groups Total F Square 5.078 Groups Số lƣợng rễ Mean df Sig 17.573 000 14.965 000 Phụ biểu 10 Kết kiểm tra chiều dài rễ, số rễ/chồi bổ sung IBA nồng độ khác ANOVA Sum of Squares Chiều dài rễ Between Groups Within Groups Total Sore Between Groups Within Groups Total Mean df Square 506 169 934 16 058 1.440 19 1.841 614 1.338 16 084 3.179 19 F Sig 2.890 068 7.335 003 Phụ biểu 11 Kết kiểm tra thống kê tỉ lệ sống sau huấn luyện vƣờn ƣơm Chi-Square Tests Value Pearson ChiSquare Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases df Asymp Sig (2-sided) 2.133E2a 000 215.234 000 160.376 000 640 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 24.00 Phụ biểu 12 Kết kiểm tra thống kê tỉ lệ sống vƣờn ƣơm Chi-Square Tests Value Pearson ChiSquare Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases df Asymp Sig (2-sided) 1.438E2a 000 158.066 000 8.369 004 640 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 68.25 Phụ biểu 13 Kết kiểm tra thống kê tỉ lệ sống loại giá thể khác Chi-Square Tests Value 1.199E2a 115.168 df Asymp Sig (2-sided) Pearson Chi-Square 000 Likelihood Ratio 000 Linear-by-Linear 056 812 Association N of Valid Cases 640 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 44.00 Phụ biểu 14 Kết kiểm tra thống kê chiều cao loại giá thể khác ANOVA Loai giathe Sum of Squares Between Groups Within Groups Total Mean Square df 492.642 246.321 56.168 637 088 548.810 639 F 2.794E Sig .000 Phụ biểu 15 Thành phần môi trƣờng MS, MS* WPM TT Thành phần Murashige-Skoog (MS) (mg/l) MurashigeSkoog (MS*) (mg/l) Wood pant medium (WPM) (mg/l) Muối khoáng NH4NO3 1650,00 825,00 400 KNO3 1900,00 950,00 - CaCl2.2H2O 440,00 440,00 471,26 KH2PO4 170,00 170,00 170 MgSO4.7H2O 370,00 370,00 370,00 MnSO4.H2O 16,90 16,90 22,3 ZnSO4.7H2O 8,60 8,60 8,6 CuSO4.5H2O 0,025 0,025 0,25 KI 0,83 0,83 - 10 CoCl2.6H2O 0,025 0,025 - 11 H3BO3 6,20 6,20 6,2 12 Na2MoO4.2H2O 0,25 0,25 0,25 13 FeSO4.7H2O 27,84 27,84 27,84 14 Na2EDTA 37,24 37,24 37,24 Vitamin chất hữu 15 B1 1,00 1,00 1,00 16 Nicotinic axit 0,50 0,50 0,50 17 B6 0,50 0,50 0,50 18 Glyxin 2,00 2,00 2,00 19 Myo-inositol 100,0 100,0 100,0 ... ? ?Nhân giống Tục Đoạn (Dipsacus japonicus Miq) phƣơng pháp nuôi cấy in vitro? ?? Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu chung: Xây dựng đƣợc kỹ thuật nhân giống Tục Đoạn b ng phƣơng pháp nuôi cấy in vitro Mục... nghiên cứu nhân giống in vitro Tục Đoạn Vì vậy, việc nghiên cứu nhân giống in vitro Tục Đoạn cần thiết 1.2 Tình hình nghiên cứu Tục Đoạn (D japonicus Miq) Các cơng trình nghiên cứu Tục Đoạn chƣa... 1.1 Cây Tục Đoạn Hình 2.1 Mẫu Tục Đoạn làm vật liệu nuôi cấy 22 Hình 3.1 Mẫu hạt Tục Đoạn nảy mầm in vitro sau tuần nuôi cấy 29 Hình 3.2 Mẫu Tục Đoạn nảy chồi sau tuần nuôi