Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hoá học từ dịch chiết n – hexane của rễ cây thầu dầu tía (ricinus communis l ) trong dung môi ethanol

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA HỌC KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP Chun ngành: Cử nhân hoá dược ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TỪ DỊCH CHIẾC N – HEXANE CỦA RỄ CÂY THẦU DẦU TÍA (RICINUS COMMUNIS L.) TRONG DUNG SVTH: Trần Phượng Hằng MSSV: 314054161114 Lớp: 16CHDE Người hướng dẫn: TS Trần Mạnh Lục Đà Nẵng, tháng 06/2020 Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP SINH VIÊN Họ tên sinh viên : Trần Phượng Hằng Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hoá học từ dịch chiết n – Hexane rễ thầu dầu tía (Ricinus communis L.) dung môi ethanol Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị − Nguyên liệu: thầu dầu tía được thu hái ở Quảng Nam vào tháng 01/2020 − Dụng cụ thiêt bị: bếp cách thủy, cân phân tích, phễu Buchner, cớc thủy tinh, phễu chiết, bộ chưng ninh,… Nội dung nghiên cứu − Chiết mẫu bằng phương pháp ngâm chiết với dung môi ethanol 96 − Định tính thành phần nhóm chức cao chiết − Sắc ký lớp mỏng kết hợp phân lập phân đoạn cao chiết n – hexane để xác định thành phần hoá học rễ thầu dầu tía Giáo viên hướng dẫn: TS Trần Mạnh Lục Ngày giao đề tài: 01/2020 Ngày hoàn thành: 06/2020 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn TS Trần Đức Mạnh TS Trần Mạnh Lục Sinh viên đã hoàn thành nộp báo cáo cho khoa tháng 06 năm 2020 Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực hiện Khố luận Tớt nghiệp (KLTN) đã mang đến cho em nhiều học quý giá giúp em rèn luyện được nhiều kỹ cho mình, hành trang cho cơng việc em sau Với lịng biết ơn chân thành sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy TS Trần Mạnh Lục Thầy đã tin tưởng giao đề tài cho em, tạo điều kiện tớt nhất, ln tận tình hướng dẫn, bảo truyền đạt tri thức cho em suốt trình hồn thành khóa luận Em xin gửi đến lời cảm ơn chân thành đến thầy TS Bùi Xuân Vững bộ môn Hóa Lý, thầy TS Võ Châu Tuấn bộ môn Hóa Sinh cô Ths Trần Thị Diệu My bộ môn Hóa học hợp chất thiên nhiên đã truyền dạy kiến thức quý báu giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để em có thể hồn thành khố luận Kính chúc quý thầy cô sức khoẻ, hạnh phúc, thành công cuộc sống nghiệp giảng dạy Em xin gửi lời cảm ơn đến chị Nhi khóa đã ln tận tình dạy quan tâm em śt thời gian thực hiện khố luận Cảm ơn chị đã động viên hỗ trợ, tận tình hướng dẫn dành nhiều thời gian để giúp em giải lúc khó khăn thực hiện khố luận Ći cùng, xin cám ơn gia đình đã ln chăm sóc, lo lắng ln ủng hợ Sự đợng viên ba mẹ nguồn động lực giúp vượt qua khó khăn cuộc sống Em xin chân thành cảm ơn tất người i Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AAS Atomic absorption spectroscopy – Quang phổ hấp thụ ánh sảng GC Gas Chromatography – Sắc kí khí GC – MS Gas chromatography & mass spectrometry – Sắc kí khí kết hợp khới phổ KLTN Khố luận Tớt nghiệp MS Mass Spectrometry – Phổ khối lượng SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự TDT Thầu dầu tía WHO World Health Organization – Tổ chức y tế giới YHCT Y học Cổ Truyền ii Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng DANH MỤC HÌNH Hình 1 Cây thầu dầu tía mọc hoang .4 Hình Thân thầu dầu tía Hình Lá thầu dầu tía .6 Hình Hoa thầu dầu tía Hình Quả hạt Thầu dầu tía Hình Rễ Thầu dầu tía Hình Dầu hạt thầu dầu .9 Hình Buồng cấy vi sinh vô trùng (a) đĩa peptri đã được đổ môi trường cấy vi sinh 23 Hình 2 Ngun lý chiết phân bớ lỏng – lỏng 25 Hình Máy đo sắc ký khí ghép khới phổ GC – MS 7890A/5975C hãng Agilent chương trình nhiệt đợ lị cợt 29 Hình Bảng mỏng silicagel Kieselgel 60F254 30 Hình Các bình triển khai cho sắc ký lớp mỏng 31 Hình Đèn tử ngoại dùng phát hiện vết chất sắc ký lớp mỏng .32 Hình Các cột sắc ký dùng cho sắc ký cột 33 Hình Các bình hứng dung dịch giải ly .34 Hình Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 38 Hình Nguyên liệu rễ thầu dầu tía .39 Hình Kết điều chế cao ethanol rễ Thầu dầu tía .40 Hình 3 Chiết phân bớ lỏng – lỏng bằng hexane từ tổng cao ethanol 41 Hình Kết chạy SKLM phân đoạn cao hexane giải ly bằng dung môi đơn hexane (a), ethyl acetate (b) hệ dung môi hexane – ethyl acetete tỷ lệ : (c), : (d), : (e), : (f) 60 Hình Kết chạy SKLM phân đoạn cao ethyl acetate giải ly bằng dung môi đơn hexane (a), ethyl acetate (b) hệ dung môi hexane – ethyl acetate tỷ lệ : (c), : (d), : (e), : (f) 61 Hình Kết chạy SKLM phân đoạn cao nước giải ly bằng dung môi đơn hexane (a), ethyl acetate (b) hệ dung môi hexane – ethyl acetate tỷ lệ : (c), : (d),6 : (e), : (f) .62 Hình Kết chuẩn bị cột sắc ký đưa mẫu phân đoạn cao hexane lên cột 63 iii Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng Hình Kết chạy sắc ký mỏng phân đoạn cao hexane giải ly bằng hệ dung môi hexane – ethyl acetate (khởi đầu với tỷ lệ hexane : ethyl acetate = 8:2 sau đó 6:4 kết thúc bằng dung môi đơn ethyl actate) 64 Hình Sắc ký mỏng bình hứng gợp lại thành phân đoạn TDT.H1 64 Hình 10 Sắc ký mỏng phân đoạn TDT.H2 – TDT.H6 65 Hình 11 Sắc ký mỏng bình hứng gợp chung cho phân đoạn TDT.H1 65 Hình 12 Phân đoạn TDT.H1: khởi đầu với benzene, sau đó chloroform kết thúc bằng ethyl actate 65 Hình 13 Phân đoạn TDT.H1.1 (gợp bình TDT.H1.7 – TDT.H1.12) Phân đoạn TDT.H1.7 (gợp bình TDT.H1.107– TDT.H1.109) 66 iv Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Thành phần acid béo dầu thầu dầu 10 Bảng Đợc tính tế bào ớng nghiệm chiết xuất phần thân Ricinus communis L chống lại tế bào ung thư 11 Bảng Chiết xuất phần hạt Ricinus communis L chống lại tế bào ung thư 12 Bảng Các hoá chất sử dụng nghiên cứu 21 Bảng Kết khảo sát khối lượng cao chiết loại nguyên liệu 39 Bảng Kết khảo sát độ ẩm rễ TDT 40 Bảng 3 Kết điều chế cao ethanol rễ Thầu dầu tía 40 Bảng Thể tích dịch chiết khối lượng cao hexane 41 Bảng Thể tích dịch chiết khối lượng cao ethyl acetate thu được từ tổng cao ethanol .42 Bảng Khối lượng cao chiết thu được bằng phương pháp chiết lỏng – lỏng 42 Bảng Thành phần nhóm chức phân đoạn cao hexane 43 Bảng Thành phần nhóm chức phân đoạn cao ethyl acetate 46 Bảng Thành phần nhóm chức phân đoạn cao nước 48 Bảng 10 Tổng hợp kết định tính thành phần hố học 51 Bảng 11 Thành phần hoá học định danh được phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 51 Bảng 12 Thành phần hoá học định danh được phân đoạn cao ethyl acetate tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 55 Bảng 13 Thành phần hoá học định danh được phân đoạn cao nước tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 58 Bảng 14 Kết giá trị Rf chất xuất hiện mỏng phân đoạn cao hexane giải ly bằng hệ dung môi hexane – ethyl acetate tỷ lệ : (d) 61 Bảng 15 Kết xác định Rf chất xuất hiện mỏng phân đoạn cao ethyl acetate, giải ly bằng ethyl acetate 62 Bảng 16 Kết xác định Rf chất xuất hiện mỏng phân đoạn cao nước, giải ly bằng dung môi ethyl acetate 63 Bảng 17 Thành phần hóa học định danh được phân đoạn TDT.H1.1 67 Bảng 18 Thành phần hóa học định danh được phân đoạn TDT.H1.7 71 v Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC BẢNG v MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.1 Đối tượng nghiên cứu 1.2 Phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu 2.1 Nghiên cứu lý thuyết 2.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục đề tài 1.1 Tên gọi 1.2 Mô tả thực vật 1.3 Tḥc tính dược lý 10 1.4 Thành phần hoá học 17 1.5 Một số thuốc chữa bệnh từ thầu dầu 19 CHƯƠNG 21 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Nguyên liệu, hoá chất dụng cụ 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hoá chất, dụng cụ thiết bị 21 2.2 Khảo sát khối lượng cao chiết thử hoạt tính kháng khuẩn 22 2.2.1 Khảo sát khối lượng cao chiết nguyên liệu đầu 22 2.2.2 Thử hoạt tính kháng khuẩn 22 2.3 Phương pháp chiết tách thu nhận mẫu cao chiết 24 2.3.1 Phương pháp ngâm dầm (chiết rắn – lỏng) điều chế tổng cao ethanol 24 vi Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng 2.3.2 Phương pháp ngâm chiết lỏng – lỏng tách phân đoạn cao từ tổng cao ethanol 24 2.4 Xác định thành phần nhóm chức phân đoạn cao chiết 25 2.4.1 Phân tích định tính thành phần nhóm chức phân đoạn cao chiết từ tổng cao ethanol 25 2.4.2 định danh thành phần hoá học phân đoạn cao chiết từ tổng cao ethanol bằng phương pháp GC/MS 29 2.5 Các phương pháp sắc ký 30 2.5.1 Sắc ký mỏng 30 2.5.2 Phương pháp sắc ký cột 33 2.5.3 Sắc ký khí ghép khới phổ (GC – MS) 36 2.6 Nghiên cứu thực nghiệm 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết điều chế tổng cao ethanol cap phân đoạn tách từ tổng cao ethanol từ rễ thầu dầu tia 39 3.2 Kết khảo đợ ẩm rễ thầu dầu tía 39 3.3 Kết điều chế tổng cao ethanol cao phân đoạn tách từ tổng cao ethanol từ rễ thầu dầu tía 40 3.3.1 Kết điều chế tổng cao ethanol bằng phương pháp ngâm chiết 40 3.3.2 Kết điều chế cao phân đoạn từ tổng cao ethanol bằng phương pháp phân bố 41 3.4 Kết định tính nhóm chức cao phân đoạn tách từ tổng cao ethanol bằng thuốc thử đặc trưng 43 3.4.1 Kết định tính nhóm chức có phân đoạn cao n – hexane tách từ tổng cao ethanol 43 3.4.2 Kết định tính nhóm chức có phân đoạn cao ethyl acteate tách từ tổng cao ethanol 46 3.4.3 Kết định tính nhóm chức có phân đoạn cao nước tách từ tổng cao ethanol 48 3.5 Kết định danh thành phần hoá học chất phân đoạn cao tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 51 vii Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE SVTH: Trần Phượng Hằng 3.5.1 Kết định danh thành phần hoá học chất cao phân đoạn tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 51 3.5.2 Kết định danh thành phần hoá học chất phân đoạn cao ethyl acetate tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 55 3.5.3 Kết định danh thành phần hoá học chất phân đoạn cao nước tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 58 3.6 Kết phân lập phân đoạn chất phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao ethanol 60 3.6.1 Kết định danh thành phần hoá học chất phân đoạn cao nước tách từ tổng cao ethanol rễ thầu dầu tía 60 3.7 Kết chạy sắc ký cột phân đoạn cao n- hexane tách từ tổng cao ethanol 63 3.7.1 Tiến hành sắc ký cột cao n – hexane 63 3.7.2 Kết định danh thành phần hoá học chát phân đoạn TDT.H1.1 TDT.H1.7 67 CHƯƠNG 76 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 viii Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE STT 17 Thời Diện gian tích lưu peak (phút) (%) 17.749 45.90 SVTH: Trần Phượng Hằng Tên gọi – CTPT Công thức cấu tạo Hexadecanoic acid, ethyl ester O O (C18H36O2) 18 18.684 1.22 Heptadecanoic acid, ethyl ester O O (C19H38O2) Ethyl linoleate 19 19.291 2.00 (C20H36O2) O O Ethyl oleate 20 19.354 7.21 (C20H38O2) O O 21 19.410 2.12 Ethyl 9octadecanoate O O (C20H38O2) Ethyl stearate 22 19.594 6.24 (C20H40O2) O O Hexacosane 23 19.674 1.22 (C26H54) 24 20.051 9.34 3-methylbutyl dodecanoate 70 O O Khoá luận tốt nghiệp – 16 CHDE STT Thời Diện gian tích lưu peak (phút) (%) SVTH: Trần Phượng Hằng Tên gọi – CTPT Công thức cấu tạo (C17H34O2) Tetracontane 25 22.370 1.47 (C40H82) Hexatriacontane 26 23.558 1.67 (C36H74) Dotriacontane 27 25.037 1.62 (C32H66) Nhận xét: Từ bảng 3.17, phương pháp GC-MS đã định danh được 27 cấu tử phân đoạn TDT.H1A Cấu tử có hàm lượng cao Hexadecanoic acid, ethyl ester (45,9 %), ngồi có mợt sớ cấu tử đáng quan tâm 3methylbutyl dodecanoate (9,34 %), Ethyl oleate (7,21 %), Ethyl stearate (6,24 %) Các cấu tử lại chiếm hàm lượng vết (