Đánh giá hiệu quả sử dụng chế phẩm EM trong xử lý nguyên liệu trồng nấm linh chi (ganoderma lucidum)

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ SỬ DỤNG CHẾ PHẨM EM TRONG XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU TRỒNG NẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) PHAN THỊ MỸ PHƯƠNG Đà Nẵng, năm 2020 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ SỬ DỤNG CHẾ PHẨM EM TRONG XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU TRỒNGNẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) Ngành: Cơng nghệ sinh học Khóa: 2016-2020 Sinh viên: Phan Thị Mỹ Phương Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Bích Hằng Đà Nẵng, năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi với liệu trình bày khóa luận trung thực Đây kết nghiên cứu chưa công bố cơng trình khác trước Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm vi phạm quy định đạo đức khoa học Đà nẵng, tháng 07 năm 2020 Sinh viên thực Phan Thị Mỹ Phương i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp nhận nhiều quan tâm giúp đỡ từ cá nhân tập thể suốt thời gian thực Đầu tiên xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn quý báu tới ThS Nguyễn Thị Bích Hằng tạo điều kiện, ln giúp đỡ tơi thực hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Chủ Nhiệm khoa toàn thể quý thầy cô giáo khoa Sinh – Môi trường, trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu, xây dựng thành cơng khóa luận Tơi xin cảm ơn tập thể lớp 16CNSH bạn sinh viên phịng Cơng nghệ Sinh học Nấm ln động viên giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Cuối xin chân thành cảm ơn tới Ba, Mẹ gia đình ln lo lắng, chăm sóc tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Đà Nẵng, tháng 07 năm 2020 Sinh viên thực Phan Thị Mỹ Phương ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 NẤM LINH CHI 1.1.1 Giới thiệu nấm Linh chi 1.1.2 Đặc điểm hình thái, cấu trúc nấm Linh chi 1.1.3 Chu kỳ sống nấm Linh chi 1.1.4 Điều kiện sinh trưởng phát triển nấm Linh chi (Nguyễn Hữu Đống cs, 2005) 1.1.5 Thành phần dược tính nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) 1.2 CHẾ PHẨM EM (Effective Microorganisms) 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại (Đoàn Đức Lân, 2014) 1.2.3 Thành phần trình hoạt động vi sinh vật chế phẩm EM (Trương Quốc Tùng, 2012) 1.2.4 Hoạt động tổng hợp vi sinh vật chế phẩm EM 12 1.2.5 Tác dụng EM 12 1.3 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 14 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 15 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 17 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Bố trí thí nghiệm đánh giá cảm quan đống ủ 17 2.2.2 Phương pháp đánh giá sinh trưởng, phát triển nấm Linh chi 18 iii - Thời gian tơ nấm phủ kín bịch nghiệm thức (ngày): tính số ngày từ cấy giống đến lúc lan tơ đầy kín tất bịch phơi thí nghiệm 18 2.2.3 Phương pháp đánh tỷ lệ nhiễm q trình ni trồng 18 2.2.4 Phương pháp đánh giá hình thái nấm Linh chi 18 2.2.5 Phương pháp đánh giá suất khô nấm Linh chi 19 2.2.7 Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán đĩa thạch 19 2.2.8 Phương pháp xử lý số liệu 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN SỢI NẤM LINH CHI 21 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN TỶ LỆ NHIỄM TRONG Q TRÌNH NI SỢI 22 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN HÌNH THÁI NẤM LINH CHI 23 3.4 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN NĂNG SUẤT NẤM LINH CHI THU ĐƯỢC Ở CÁC THÍ NGHIỆM 25 3.5 PHÂN TÍCH KIM LOẠI NẶNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ ATOMIC ABSORBTION SPECTROMETRIC (AAS) 26 3.6 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN TRÊN ĐĨA THẠCH 27 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC 34 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv BYT Bộ Y Tế CP Chế phẩm CT Cơng thức ĐC Đối chứng DK Đường kính EM Effective Microorganisms KLN Kim loại nặng LB Luria-Bertani QCVN Quy chuẩn Việt Nam VSV Vi sinh vật cs Cộng v DANH MỤC BẢNG BIỂU Kí hiệu 1.1 1.2 Tên bảng Các thành phần nấm Linh chi Các hoạt chất sinh học dẫn xuất nấm Linh chi (Ganoderma Lucidum) Trang 7-8 2.1 Kí hiệu cơng thức thí nghiệm 17 3.1 Sự sinh trưởng phát triển sợi nấm nghiệm thức 21 3.2 Tỷ lệ nhiễm bệnh công thức 22 3.3 Hình thái nấm Linh chi cơng thức thí nghiệm 23 3.4 Năng suất nấm Linh chi cơng thức thí nghiệm 25 3.5 Hàm lượng KLN nấm Linh chi công thức 26 3.6 Khả kháng khuẩn cao chiết nấm CT 27 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Kí hiệu Tên hình 3.1 Hệ sợi nấm phủ kín bịch 37 ngày cơng thức thí nghiệm 22 3.2 Kích thước nấm Linh chi trưởng thành ngày 70 cơng thức thí nghiệm 24 3.3 Khảng kháng E.coli cao chiết nấm Linh công thức thí nghiệm 27 vii Trang TĨM TẮT Nghề ni trồng nấm Linh chi nước ta tiến hành từ nhiều năm trước đây, vấn đề xử lý nguyên liệu trồng nấm phương pháp truyền thống sử dụng vôi (CaOH)2, bột nhẹ (CaCO3) bộc lộ nhiều hạn chế Từ hạn chế nói mà việc sử dụng chế phẩm sinh học cụ thể dùng chế phẩm EM thay cho vôi bột nhẹ để xử lý nguyên liệu trồng nấm nghiên cứu phát triển Qua kết nghiên cứu đề tài cho thấy thời gian lan kín bịch, xuất thể, thể trưởng thành nấm Linh chi bổ sung lít chế phẩm EM (CT3) đạt hiệu tốt so với CT1 CT2 Tỷ lệ bịch phôi bị nhiễm nghiệm thức phối trộn EM thấp (0-9,3%), mẫu đối chứng lại có tỉ lệ nhiễm cao (25,3%) Năng suất nấm CT1 đạt cao với 56,82 g/bịch Năng suất nấm CT có bổ sung chế phẩm EM thấp đối chứng mức tương đối cao, cụ thể: CT2 (53,37g/bịch) > CT3 (47,701g/bịch) Tuy nhiên suất khô thu tổng bịch CT3 cao đến CT2 CT1 thấp nhất, với tổng khối lượng nấm thu 305g; 295,9g; 285,38g Bên cạnh đó, kết phân tích kim loại nặng cho thấy hàm lượng kim loại nặng Pb Cd mẫu nấm công thức nghiên cứu thấp mức giới hạn cho phép theo QCVN 8-2:2011/BYT, hàm lượng kim loại nặng Pb Cd thấp CT3 0,033mg/kg, sau đến CT2 với hàm lượng tương ứng 0,034mg/kg cao CT1 0,075mg/kg Ngoài ra, kết kháng khuẩn cao chiết nấm Linh chi CT có khả ức chế phát triển vi khuẩn E.coli Vì vậy, việc bổ sung chế phẩm EM vào khâu xử lý nguyên liệu trồng nấm Linh chi làm giảm tỷ lệ nhiễm, tăng suất, giảm hàm lượng kim loại nặng mà giữ hoạt tính nấm Linh chi viii B A C Hình 3.1 Hệ sợi nấm phủ kính bịch 37 ngày ba CT: A: CT1; B: CT2; C: CT3 Kết ghi nhận Bảng 3.1 cho thấy thời gian từ cấy giống đến hệ sợi nấm phủ kín bịch cơng thức khác dao động từ 36 – 45 ngày Thời gian phủ kín bịch CT2 39,67 ngày CT3 36,33 ngày ngắn công thức CT1 45,3 ngày sai khác có ý nghĩa thống kê Thời gian thể trưởng thành công thức có khác dao động từ 68,276,6 ngày Thời gian thể trưởng thành CT3 68,2 ngày sớm so với CT1 (76,6 ngày) CT2 (76,2 ngày) Thời gian tơ nấm lan kín bịch, xuất thể thể trưởng thành phụ thuộc vào điều kiện như: nhiệt độ, độ ẩm, chất…việc bổ sung chế phẩm EM làm tăng nguồn vi sinh vật hữu hiệu chất Đồng thời vi sinh vật EM cịn tham gia vào q trình phân giải chất hữu cung cấp nhanh nguồn C N cho nấm làm cho hệ tơ nấm lan nhanh, kín trắng bịch sớm (Lê Thúy Thùy Trâm, 2016) 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN TỶ LỆ NHIỄM TRONG Q TRÌNH NI SỢI Trong q trình khảo sát sinh trưởng phát triển nấm việc đánh giá tỷ lệ nhiễm bệnh tiêu quan trọng để đánh giá tổng sản lượng nấm thu Kết đánh giá thể Bảng 3.2 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm bệnh công thức Công thức Đối chứng EM1 EM2 Tỷ lệ nhiễm (%) 25,3 9,3 22 Theo kết Bảng 3.2, tỷ lệ bịch phôi bị nhiễm nghiệm thức phối trộn EM thấp (0-9,3%), mẫu đối chứng lại có tỷ lệ nhiễm cao (25,3%) Theo nghiên cứu Sopit Vetayasuporn (2004) phát có 20% tỷ lệ nhiễm bệnh mơi trường khơng kết hợp EM 0-5% tỷ lệ nhiễm môi trường nuôi cấy kết hợp EM Từ Bảng 3.1 Bảng 3.2 cho thấy có mối tương quan sinh trưởng, phát triển tỷ lệ nhiễm bịch phơi Khi sinh trưởng, phát triển mạnh tỷ lệ nhiễm bệnh thấp bổ sung chế phẩm EM vi sinh vật tiết enzyme phân giải chất phức tạp ligin, cellulose, lingnocellulose thành chất đơn giản, cung cấp dinh dưỡng giúp nấm phát triển nhanh hơn, tốc độ lan tơ kín bịch sớm ngăn cản phát triển vi sinh vật có hại Ngồi ra, q trình phân giải chất nhóm vi khuẩn axit lactic có khả sản xuất axit lactic giai đoạn tăng trưởng chúng (Higa, 2001) Axit lactic chất khử trùng mạnh giúp ngăn cản tiêu diệt vi sinh vật gây hại cản trở phát triển nấm Linh chi nên giảm tỷ lệ nhiễm so với mẫu đối chứng 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN HÌNH THÁI NẤM LINH CHI Kích thước thể không tiêu quan trọng đánh giá suất mà ảnh hưởng đến thị hiếu người tiêu dùng Chúng chịu tác động yếu tố như: giống, điều kiện ngoại cảnh, chế độ chăm sóc giá thể trồng Kích thước thể nấm Linh chi đánh giá tiêu như: đường kính tán (cm), độ dài tán (cm), chiều cao cuống (cm) đường kính cuống (cm) Bảng 3.3 Hình thái nấm Linh chi cơng thức thí nghiệm Độ dày tán (cm) Chiều cao ćng (cm) Đường kính ćng (cm) (Đ/C) 8,974 ± 0,941a 1,46 ± 0,04a 1,567 ± 0,12a 2,96 ± 0,13a (EM1) 7,33 ± 0,32b 1,17 ± 0,131b 1,3 ± 0,1b 2,76 ± 0,1ab (EM2) 6,81 ± 0,48b 1,08 ± 0,09b 0,82 ± 0,1c 2,52 ± 0,09b Công thức Đường kính tán (cm) (Chú thích: Số liệu bảng trung bình lần lặp lại Các chữ số khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức khảo sát theo kiểm định Duncan độ tin cậy 95%) 23 CT1 CT2 CT3 Hình 3.2 Kích thước nấm Linh chi trưởng thành sau 68 ngày cơng thức thí nghiệm Từ kết trình bày Bảng 3.3 cho thấy, kích thước đường kính tán cơng thức thí nghiệm dao động từ 6,81 – 8,974 cm Cụ thể: CT1 đạt lớn (8,974cm), tiếp đến CT2 (7,33cm), cao so với CT3 (6,81cm) Chiều cao cuống nấm CT dao động từ 0,82 -1,567cm Cao CT1 (1,567cm) > CT2 (1,3cm) > CT3 (0,82cm) Kết có sai khác có ý nghĩa thống kê Đường kính cuống thí nghiệm dao động từ 2,52 – 2,96 cm có khác biệt cơng thức thí nghiệm Đường kính cuống dài CT1 (2,96cm), ngắn CT3 (2,52cm) Qua kết thấy rằng, vi sinh vật có chế phẩm sử dụng phần dinh dưỡng nấm trình phân giải, dẫn đến kích thước nấm nhỏ so với CT1 Nguyên nhân khác điều kiện ni trồng chưa đảm bảo để nấm phát triển tốt 24 3.4 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN NĂNG SUẤT NẤM LINH CHI THU ĐƯỢC Ở CÁC THÍ NGHIỆM Đối với nấm Linh chi, suất chịu ảnh hưởng mạnh mẽ đường kính tán, độ dày tán, chiều cao đường kính cuống Qua q trình nghiên cứu phân tích, chúng tơi nhận thấy suất nấm công thức khác chủ yếu hai yếu tố đường kính tán độ dày tán định Bảng 3.4 Năng suất nấm Linh chi cơng thức thí nghiệm Cơng Năng suất tươi Năng suất khô Tổng KL nấm thức (g/bịch) (g/bịch) thu CT1 56,82 ± 0,907a 15,02 ± 0,55a 285,38 CT2 53,37 ± 0,46b 13,45 ± 0,52b 295,9 CT3 47,701 ± 0,74c 12,2 ± 0,87b 305 (Chú thích: Số liệu bảng trung bình lần lặp lại Các chữ số khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức khảo sát theo kiểm định Duncan độ tin cậy 95%) Theo kết nghiên cứu Bảng 3.4 cho thấy suất nấm đạt cao CT1 56,82 g/bịch Năng suất nấm CT có bổ sung chế phẩm EM thấp đối chứng mức tương đối cao Cụ thể: CT2 (53,37g/bịch) > CT3 (47,701g/bịch) Có thể giải thích bổ sung chế phẩm EM vào nguyên liệu trồng nấm trình phân giải q trình hơ hấp vi sinh vật sử dụng phần dinh dưỡng có bịch nguyên liệu nên làm giảm tỷ lệ C/N dẫn đến suất g/bịch bổ sung EM vào thấp đối chứng Tuy nhiên suất khô thu tổng bịch CT3 cao đến CT2 CT1 thấp nhất, với tổng khối lượng nấm thu 305g; 295,9g; 285,38g Từ kết thí nghiệm cho thấy bổ sung chế phẩm EM vào khâu xử lý nguyên liệu trồng giúp nấm phát triển nhanh hơn, tỷ lệ nhiễm thấp cho thu hoạch sớm dẫn đến suất tổng bịch cao 25 3.5 PHÂN TÍCH KIM LOẠI NẶNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ ATOMIC ABSORBTION SPECTROMETRIC (AAS) Nấm xem sinh vật có khả hấp thụ kim loại nặng, việc sử dụng ngun liệu ni trồng nấm có nhiễm kim loại nặng nguyên nhân làm cho nấm hấp thụ tích lũy kim loại nặng thể, dẫn đến số loại nấm ăn nấm dược liệu ni trồng thường có hàm lượng kim loại nặng vượt giới hạn cho phép Trong nghiên cứu này, việc đánh giá sinh trưởng, phát triển nấm linh chi trồng sử dụng chế phẩm EM thay nguồn vôi bột nhẹ chất ni trồng, chúng tơi cịn tiến hành phân tích hàm lượng kim loại nặng mà cụ thể Chì (Pb) Cadimi (Cd), kết phân tích thể bảng 3.5 Bảng 3.5 Hàm lượng KLN nấm Linh chi công thức Mẫu Pb (mg/kg) Cd (mg/kg) ĐC 0,0222 0,0754 EM1 0,0130 0,0343 EM2 0,0113 0,0335 Kết kim loại nặng Bảng 3.5 cho thấy hàm lượng kim loại nặng Pb Cd mẫu nấm công thức nghiên cứu thấp mức giới hạn cho phép theo QCVN 8-2:2011/BYT giới hạn ô nhiễm kim loại nặng thực phẩm Bộ trưởng Bộ Y tế ban hành, hàm lượng kim loại nặng Pb Cd thấp CT3 0,0113mg/kg 0,0335mg/kg, sau đến CT2 với hàm lượng Pb tương ứng 0,0130mg/kg cao CT1 0,0343mg/kg Kết cho thấy hàm lượng kim loại nặng nấm giảm giảm dần hàm hượng vôi bột nhẹ nuôi trồng nấm, điều chứng tỏ nguồn vôi bột nhẹ khai thác từ đá vôi tiềm ẩn nguy gây nhiễm kim loại nặng nấm, việc sử dụng chế phẩm EM xử lý nguyên liệu cho thấy hiệu rõ ràng việc kiểm sốt mối nguy kim loại nặng nấm Vì vậy, tương lai, tiến đến việc nuôi trồng nấm hữu cơ, khơng sử dụng ngun liệu có nguồn gốc vơ việc sử dụng chế phẩm sinh học giúp giảm thời gian nuôi trồng, tăng suất chất lượng nấm đồng thời giảm tích lũy kim loại nặng 26 nấm vấn đề cần thiết để cung cấp sản phẩm dược liệu chất lượng, an toàn cho người sử dụng 3.6 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM ĐẾN HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN TRÊN ĐĨA THẠCH Cao chiết nấm Linh chi pha loãng DMSO 10% Sử dụng chủng vi khuẩn E coli, tiến hành thử khả kháng khuẩn dịch chiết theo phương pháp khuếch tán đĩa thạch Bảng 3.6 Khả kháng khuẩn cao chiết nấm CT Vịng vơ khuẩn Mẫu cao chiết D-d (mm) CT1 15,66 ± 0,5773a CT2 13,66 ± 0,5773b CT3 13,33 ± 1,5275b (Chú thích: Số liệu bảng trung bình lần lặp lại Các chữ số khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức khảo sát theo kiểm định Duncan độ tin cậy 95%) Hình 3.3 Khả kháng E.coli cao chiết nấm Linh chi CT (1) Tetracyclin, (2) DMSO 10%, (3) Dịch cao chiết Kết từ Hình 3.4 cho thấy cao chiết nấm Linh chi CT có khả ức chế sinh trưởng vi khuẩn E.coli Kết cho thấy dịch chiết nấm Linh 27 chi chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học có khả ức chế tiêu diệt vi sinh vật gây hại điển E.coli Kết phù hợp với nghiên cứu Smania cs (1999) nghiên cứu Yihuai cs (2003) loại nấm có chất triterpenoid, polisacchrides có khả chống lại nhiều loại vi khuẩn Bên cạnh nghiên cứu Kleinwachter cs (2001) cho dịch chiết nấm có khả chống viêm, ức chế hoạt động vi sinh vật Như vậy, bổ sung chế phẩm EM vào xử lý nguyên liệu trồng nấm cho thấy ảnh hưởng đến hoạt chất có hoạt tính sinh học, kháng khuẩn mạnh có nấm 28 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu rút kết luận sau: Thời gian lan kín bịch, xuất mầm móng thể, thể trưởng thành nấm Linh chi bổ sung lít chế phẩm EM CT3 đạt hiệu tốt so với công thức thí nghiệm nghiên cứu Việc bổ sung chế phẩm EM CT làm giảm tỷ lệ nhiễm bệnh bịch phôi trồng nấm Linh chi, cụ thể: CT3 không nhiễm, CT2 9,3% CT1 25,3% Năng suất nấm CT1 đạt cao với 56,82 g/bịch Năng suất nấm CT có bổ sung chế phẩm EM thấp đối chứng mức tương đối cao, cụ thể: CT2 (53,37g/bịch) > CT3 (47,701g/bịch) Tuy nhiên suất khô thu tổng bịch CT3 cao đến CT2 CT1 thấp nhất, với tổng khối lượng nấm thu 305g; 295,9g; 285,38g Hàm lượng kim loại nặng Pb Cd công thức nghiên cứu thấp mức giới hạn cho phép theo QCVN 8-2:2011/BYT, hàm lượng kim loại nặng Pb Cd thấp CT3 0,033mg/kg, sau đến CT2 với hàm lượng tương ứng 0,034mg/kg cao CT1 0,075mg/kg Cao chiết nấm Linh chi CT có khả ức chế phát triển vi khuẩn E.coli Kiến nghị - Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn nhân giống chủng vi sinh vật để tạo chế phẩm tốt chuyên dùng ni trồng nấm nói chung nấm Linh chi nói riêng - Định lượng hàm lượng ganoderic acid A nhiều cơng thức thí nghiệm điều kiện ni trồng khác để so sánh chất lượng công thức 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đỗ Huy Bình (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam – tập II, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh (2000), Nấm ăn nấm dược liệu – công dụng công nghệ nuôi trồng Nguyễn Hữu Đống, Zani Federico, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thị Sơn (2005), Nấm ăn – sở khoa học công nghệ nuôi trồng, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Lân Dũng (2004), Công nghệ nuôi trồng nấm tập I, Giáo trình, NXB nơng nghiệp Nguyễn Lân Dũng (2008), Cơng nghệ nuôi trồng nấm tập II, Nhà xuất nông nghiệp Lê Thị Thu Hường, Nguyễn Đình Thi, Trần Thị Ngân, Vũ Tuấn Minh, Lê Thị Thu Hoài (2015), Ảnh hưởng đạm urê đến sinh trưởng, phát triển suất nấm sò trồng rơm Thừa Thiên Huế, Tuyển tập kết NCKH trồng 2014-2015 Nxb Đại học Huế, 225-232 Đàm Thu Huyền (2015), Nghiên cứu hồn thiện quy trình ni trồng nấm Sị hương, NXB Học viện Nông nghiệp Việt Nam TP Hà Nội Nguyên Minh Khang (2010), Cơng nghệ ni trồng nấm, Giáo trình, Đại học Bình Dương Đỗ Hải Lan, Đặng Thị Hiền, Phạm Thị Phương Nhung, Nguyễn Tiến Vượng (2005), Tìm hiểu ảnh hưởng chế phẩm EM tới sinh trưởng phát triển số giai đoạn hai loài lan hồ điệp tím nhung Đai châu trắng tím, Luận văn, Đại học Tây Bắc Đoàn Đức Lân (2014), Chế Phẩm EM – Một sản phẩm độc đáo công nghệ sinh học Nhật Bản, Đại học Tây Bắc,Khoa Hóa-Sinh Trần Thanh Loan (2013), Kỹ thuật sử dụng chế phẩm sinh học sản xuất nông nghiệp, Tài Liệu Kỹ thuật, ArecA 30 Đỗ Tất Lợi cs (1994), Nấm Linh chi nuôi trồng sử dụng, NXB Nông Nghiệp, TP Hồ Chí Minh Ngơ Xn Mạnh, Lương Thị Hà, Ngô Xuân Trung (2015), Hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa chúng số loại nấm ăn, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 13, số 2: 272-278 Trần Văn Minh, Lê Duy Thắng (2001), Sổ tay hướng dẫn trồng nấm, Nhà xuất Nông Nghiệp Pham Thị Ngọc, Nguyễn Thanh Mẫn, Lê Thị Hằng (2014), Ảnh hưởng loại chất mức bổ sung chế phẩm EM đến suất nấm bào ngư trắng (Pleurotus Florida), Khoa Nông học, Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Ngun (2010), Giáo trình mơ đun trồng nấm Linh chi, NXB Bộ Nơng nghiệp phát triển nơng thơn Đồn Sáng (2003), Linh chi nguyên chất bệnh thời nay, NXB Y học Hà Nội, Việt Nam Sở khoa học Cơng nghệ Mơi trường Thái Bình (1998), Hướng dẫn sử dụng chế phẩm vi sinh vật hữu hiệu EM sản xuất đời sống Lê Xuân Thám (1996), Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điểm hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma Lucidum Luận án PGS.TS, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội, Việt Nam Lê Xuân Thám (2010), Nấm cơng nghệ chuyển hóa mơi trường – Nấm linh chi Ganoderma lucidum Donk, Nhà xuất Khoa học Và Kỹ Thuật, Hà Nội Trung tâm phát triển Việt – Nhật (2004), Giới thiệu công nghệ vi sinh vật hữu hiệu EM Trương Quốc Tùng (2012), Công nghệ vi sinh hữu hiệu – EM, Liên hiệp hội khoa học kỹ thuật Việt Nam 31 Tài liệu Tiếng Anh Collins AR (2005), Antioxidant intervention as a route to cancer prevention, European Journal of Cancer, 41(13): 1923-1930 Cieenc Techol Aliment (2011), “Physiochemical analysis and centesimal composition of Pleurotus ostreatus mushroom grown in residues from the Amazon”, Food Science and Technology, 31(2), 456-461 Carlos A.Z.C., Fabisan C.N.A., Jorge R-C., Melva L-L., Maria X.R-B., Marisa C.R.R (2011), Optimizing a culture medium for biomass and phenolic compounds production using Ganoderma lucidum, Journal of Microbiology, 44(1): 215223 Hikino H, Konno C, Mirin Y, Hayashi T (1985), Isolation and hypoglycemic activity of ganoderans A and B, glycans of Ganoderma lucidum fruit bodies, Planata Med, 4:339–340 Hadacek, F.; Greger, H (2000), Testing of antifungal natural products: Methodologies, comparability of results and assay choice, Phytochem Anal., 11:137-147 T.Higa and G N Wididana (1980), The Concept and Theori.es of Effective Microorganisms, University of the Ryukyus, Okinawa, Japan Sopit Vetayasuporn (2004), Effective Microorganisms for Enhancing Pleurotus ostreatus (Fr.) Kummer Production, Journal of Biological Sciences, 4:706710 Saltarelli R., Lotti M., Zambonelli A., Buffalini M., Casadei L., Vallorani L., Stocchi V., Ceccaroli P (2009), Biochemical characterisation and antioxidant activity of mycelium of Ganoderma lucidum from Central Italy, Food Chemistry, 143151 Jiang J., Valachovicova T., Harvey K., Sliva D., Slivova V (2004), Ganoderma lucidum inhibits proliferation and induces apoptosis in human prostate cancer cells PC3, 1093-1099 Higa, T (2001), The Technology of Effective Microorganisms-Concept and Philosophy, University of the Ryukyus, Okinawa, Japan 32 Lin H-J., Lin L-H., Haung C-F., Wu C-Y., Ou K-L., Chang Y-S (2014), An Immunomodulatory Protein (Ling Zhi-8) from a Ganoderma lucidum Induced Acceleration of Wound Healing in Rat Liver Tissues after Monopolar Electrosurgery Chee W.L, Angelo V., Sheot H.C (2011), Feed-forward neural network assisted by discriminant analysis for the spectroscopic discriminantion of cracked spores Ganoderma lucidum, A prospective biotechnology production tool, AMB Express Yegenoglu H., Oke F., Aslim B (2011), Comparison of Antioxidant Capacities of Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst and Funalia trogii 62 (Berk.) Bondartsev & Singer by Using Different In Vitro Methods", Journal Of Medicinal Food, 512-16 Jia J, Hua Y.S., Wu Y., Wang Q-Z., Li N-N., Guo Q-C., Dong X-C., Zhang X (2009), Evaluation of in vivo antioxidant activities of Ganoderma lucidum polysaccharides in STZ-diabetic rats, Food Chemistry, 32-36 T.Higa and G N Wididana (1980), The Concept and Theori.es of Effective Microorganisms, University of the Ryukyus, Okinawa, Japan Himangini Joshi, Somduttand, Piyush Choudhary and S.L Mundra (2019), Role of Effective Microorganisms (EM) in Sustainable Agriculture, International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences, 172-181 33 PHỤ LỤC Phụ lục Giống cấp I, giống cấp II nấm Linh chi Phụ lục Quy trình đóng bịch đến hình thành thể nấm Linh chi 34 Phụ lục Máy quang phổ hấp phụ nguyên tử AAS Phụ lục Hàm lượng KLN Cd CT thí nghiệm Cd Abs KQ theo Đ/C KQ tính PL KQ (mg/l-mg/kg) 9,054054054 75,45045 0,07545045 EM1 0.61094 1,34 4,127972973 34,39977 0,034399775 EM2 0,59559 4,024256757 33,53547 0,033535473 ĐC Phụ lục Đường chuẩn KLN Cd Chart Title 0.35 y = 0.1482x + 0.0009 R² = 0.9979 Axis Title 0.3 0.25 0.2 Series1 0.15 0.1 Linear (Series1) 0.05 0 0.5 1.5 Axis Title 35 2.5 Phụ lục Hàm lượng KLN Pb CT thí nghiệm Pb ĐC EM1 EM2 KQ theo Đ/C 2,666666667 1,566666667 1,363333333 Abs 0,008 0,0047 0,00409 KQ tính PL 22,22222 13,05556 11,36111 KQ (mg/l-mg/kg) 0,022222222 0,013055556 0,011361111 Phụ lục Đường chuẩn KLN Pb 0.3 y = 0.0032x R² = 0.9499 0.25 0.2 Series1 0.15 Linear (Series1) 0.1 0.05 0 20 40 60 80 100 Phụ lục Thành phần môi trường LB Trypton 10g/L NaCl 10g/L Cao nấm men 5g/L 36 ... học việc ứng dụng chế phẩm vi sinh thay vôi bột nhẹ khâu xử lý nguyên liệu trồng nấm Linh chi MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Khảo sát, đánh giá hiệu sử dụng chế phẩm EM xử lý nguyên liệu trồng nấm để nâng cao... dưỡng, hạn chế phát triển vi sinh vật gây bệnh Xuất phát từ lý tiến hành đề tài: ? ?Đánh giá hiệu sử dụng chế phẩm EM xử lí nguyên liệu trồng nấm Linh chi (Ganoderma Lucidum)? ?? nhằm đưa dẫn liệu khoa... SƯ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƯỜNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ SỬ DỤNG CHẾ PHẨM EM TRONG XỬ LÝ NGUYÊN LIỆU TRỒNGNẤM LINH CHI (GANODERMA LUCIDUM) Ngành: Công nghệ sinh học Khóa: 2016-2020