LUẬN văn THẠC sĩ CÔNG NGHỆ SINH học (FULL) nghiên cứu sự đa dạng sinh học của một số chủng xạ khuẩn thuộc chi streptomyces phân lập tại thái nguyên và định hướng ứng dụng

MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục kí hiệu, viết tắt vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình vẽ viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ XẠ KHUẨN 1.1.1 rí phân loại phân bố xạ khuẩn tự nhiên 1.1.2 ặc điểm sinh học xạ khuẩn 1.1.3 ặc điểm xạ khuẩn chi Streptomyces .6 1.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN 1.2.1 Phương pháp phân loại truyền thống .7 1.2.2 Phương pháp phân loại dựa vào thị phân tử gene 16S rRNA 1.3 SINH TỔNG HỢP CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN 12 1.3.1 Cơ chế sinh tổng hợp chất kháng sinh 12 1.3.2 yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 13 1.3.3 chiết chất kháng sinh 15 1.4 XẠ KHUẨN ỨNG DỤNG TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT 16 1.4.1 ấm nguyên nhân chủ yếu gây bệnh hại trồng 16 1.4.2 khuẩn chống nấm gây bệnh thực vật 17 1.5 XẠ KHUẨN ỨNG DỤNG TRONG BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG .19 iii 1.5.1 ển chọn xạ khuẩn sinh enzyme 19 1.5.2 số enzyme chủ yếu ứng dụng bảo vệ môi trường 20 Chương : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 sinh vật kiểm định 23 2.2 HĨA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ MƠI TRƯỜNG 23 2.2.1 Hóa chất 23 2.2.2 Dụng cụ thiết bị .24 2.2.3 trường nghiên cứu 24 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.3.1 Phương pháp phân lập tuyển chọn xạ khuẩn 26 2.3.2 Phương pháp đếm số lượng tế bào .26 2.3.3 Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh 27 2.3.4 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme .28 2.3.5 Phương pháp xác định khả chịu nhiệt enzyme 28 2.3.6 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học xạ khuẩn 28 2.3.7 Phương pháp xác định trình tự đoạn gene 16S rRNA 30 2.3.8 Nghiên cứu bước đầu trình lên men sinh tổng hợp kháng sinh 33 2.3.9 Phương pháp tách chiết chất kháng sinh 33 2.3.10 Xác định ảnh hưởng dịch nuôi cấy đến khả nảy mầm hạt .34 2.3.11 Phương pháp xử lý số liệu 34 Chương : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .35 3.1 SỰ PHÂN BỐ VÀ TÍNH ĐA DẠNG SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN .35 3.1.1 phân bố xạ khuẩn đất 35 3.1.2 đa dạng sinh học xạ khuẩn .36 Hoạt tính kháng sinh chọn lọc chủng xạ khuẩn có HTKS cao 37 3.2.1 Hoạt tính kháng sinh chủng xạ khuẩn phân lập 37 3.2.2 ển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh cao 41 3.3 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ PHÂN LOẠI CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 44 3.3.1 Đặc điểm hình thái chủng xạ khuẩn HT 17.8 HT19.1 44 3.3.2 ểm nuôi cấy 45 3.3.3 ểm sinh lý, sinh hóa 46 3.3.4 Phân loại chủng xạ khuẩn HT17.8 HT19.1 51 3.4 NGHIÊN CỨU SINH TỔNG HỢP VÀ MỘT SỐ TÍNH CHẤT CỦA CHẤT KHÁNG SINH CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 59 3.4.1 Nghiên cứu sinh tổng hợp chất kháng sinh 59 3.4.2 chiết xác định số tính chất chất kháng sinh chủng HT17.8.62 3.5 TUYỂN CHỌN XẠ KHUẨN CĨ HOẠT TÍNH ENZYME .64 3.5.1 Hoạt tính enzyme xạ khuẩn 64 3.5.2 Khả chịu nhiệt enzyme 66 3.6 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CKS TRONG DỊCH NUÔI CẤY CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 TỚI KHẢ NĂNG NẢY MẦM CỦA HẠT 68 KẾT LUẬN 71 KIẾN NGHỊ 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 ĐẶT VẤN ĐỀ Tính cấp thiết đề tài Hàng năm, giới vi nấm gây bệnh thực vật đạo ôn, khô vằn, thối cổ rễ, mốc sương… gây tổn thất nặng nề cho mùa màng, chúng chiếm tới 83% số bệnh trồng [15] Theo thống kê Tổ chức Nông Lương Liên hiệp Quốc (FAO), thiệt hại nông nghiệp bệnh vi nấm lên tới 11,6% tổng sản lượng nơng nghiệp giới [46].Trong đó, việc sử dụng thuốc hóa học bảo vệ thực vật từ lâu gây ảnh hưởng nghiêm trọng tới sức khỏe người, làm cân sinh thái gây nhiễm mơi trường Chính vậy, việc sử dụng loại VSV đối kháng, chất sinh học diệt khuẩn vào vùng sinh thái khác trồng đích mà nhà khoa học hướng đến, xạ khuẩn sinh kháng sinh đối tượng trung tâm tìm kiếm [22] Xạ khuẩn thuộc nhóm sinh vật nhân sơ (Prokaryote) với số lượng loài lớn phân bố nhiều vùng sinh thái khác Chúng ngày biết đến rộng rãi với nhiều ứng dụng thực tế thông qua việc tạo sản phẩm trao đổi thứ cấp có giá trị sử dụng cao CKS, chất chống ung thư, chất kích thích sinh trưởng nhiều hợp chất y dược khác Thêm vào đó, XK khả sinh enzyme ngoại bào nên sử dụng rộng rãi làm chế phẩm sinh học có ý nghĩa đặc biệt quan khai khống tới phát triển đa dạng trọng công nghệ xử hệ động, thực vật lại chưa có lý rác thải [9], [18] Thái Nguyên tỉnh giàu tiềm nông, lâm nghiệp nên có khu hệ VSV phong phú, số có khơng lồi XK sinh CKS Mặt khác, Thái Ngun lại nằm vùng sinh khống, có nhiều loại hình khống sản phân bố tập trung Điển hình khu vực núi Pháo thuộc xã Hà Thượng, huyện Đại Từ khu vực thị trấn Trại Cau thuộc huyện Đồng Hỷ, nơi diễn hoạt động khai thác khoáng sản mạnh mẽ Các hoạt động khai thác khống sản có tác động đáng kể đến mơi trường đất, nước qua đó, ảnh hưởng đến hệ VSV Trên thực tế có nghiên cứu ảnh hưởng hoạt động nghiên cứu ảnh hưởng hoạt động tới phân bố hoạt tính sinh học đến hệ VSV đất khu vực Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn đặt trên, để góp phần khai thác nguồn VSV vô phong phú Thái Nguyên, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu đa dạng sinh học số chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces phân lập Thái Nguyên định hướng ứng dụng” Mục tiêu nghiên cứu - Khảo sát phân bố, đặc điểm hình thái XK mẫu đất thu địa điểm nghiên cứu - Nghiên cứu hoạt tính sinh học chủng XK phân lập để từ tuyển chọn số chủng có nhiều triển vọng ứng dụng thực tế, đặc biệt công tác bảo vệ thực vật môi trường Nội dung nghiên cứu - Lấy mẫu, phân lập khiết XK từ mẫu đất - Kiểm tra HTKS chủng phân lập với VSV kiểm định để tuyển chọn chủng có HTKS cao - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, ni cấy, sinh lý – sinh hóa phân loại số chủng XK có hoạt tính kháng nấm tuyển chọn - Nghiên cứu khả sinh tổng hợp CKS chủng XK lựa chọn - Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào nghiên cứu tuyển chọn số chủng có hoạt tính enzyme cao, có nhiều triển vọng ứng dụng thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ XẠ KHUẨN 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố xạ khuẩn tự nhiên Theo hệ thống phân loại nay, XK thuộc ngành Tenericutes (gồm vi khuẩn G (+) XK), thuộc giới vi khuẩn thật (Eubacteria) siêu giới nhân sơ (Prokaryota) Xạ khuẩn thuộc lớp Actinobacteria, phân lớp Actinobacteridae, Actinomycetales, bao gồm 10 phân bộ, 35 họ, 110 chi khoảng 1.000 loài Trong có 478 lồi thuộc chi Streptomyces 500 lồi thuộc chi cịn lại xếp vào nhóm XK [58], [5] Tên xạ khuẩn – Actinomycetes – bắt nguồn từ tiếng Hy Lạp “actys” (tia) “mykes” (nấm) ban đầu XK coi vi nấm chúng sinh trưởng giống với nấm Tuy nhiên, đến nay, XK chứng minh thuộc nhóm vi khuẩn G(+), có tỷ lệ G+C cao (>55%) DNA [60] Xạ khuẩn nhóm VSV đa dạng đa số sinh trưởng hiếu khí, hoại sinh phân bố rộng rãi đất, nước, không khí, xác thực vật Nhưng chủ yếu XK phân bố nhiều đất Số lượng XK đất khơng phụ thuộc vào thành phần, tính chất đất mà phụ thuộc vào độ ẩm, mức độ canh tác khả che phủ thảm thực vật Xạ khuẩn phân bố nhiều lớp đất đất tơi, xốp, có độ ẩm thích hợp, giàu chất hữu chất khống Số lượng XK đạt tới 9.800.000 – 80.000.000 CFU gam đất [33] Sự phân bố XK đất phụ thuộc nhiều vào pH đất Xạ khuẩn phân bố nhiều loại đất trung tính kiềm yếu axit yếu, có pH khoảng 6,8 – 7,5 Trong lớp đất kiềm hay axit gặp XK gặp lớp đất có độ kiềm mạnh Nhìn chung, nhiệt độ ơn hịa 25 - 30ºC pH trung tính điều kiện tối ưu cho XK phát triển Mặc dù vậy, nhiều loài XK phân lập môi trường khắc nghiệt ví dụ lồi Arthrobacter ardleyensis ưa lạnh phân lập từ trầm tích hồ Nam cực sống nhiệt độ 0ºC [27] loài Nocardiopis alkaliphila phân lập từ đất sa mạc Ai Cập sống pH 9,5 - 10 [32] Xạ khuẩn nhóm VSV đóng vai trị quan trọng tự nhiên Chúng tham gia tích cực vào q trình chuyển hóa nhiều hợp chất hữu phức tạp đất mà nhiều VSV khác không hấp thu Các XK chi Streptomyces đặc biệt nhiều đất nơi chúng phân hủy hoại sinh nhiều hợp chất hữu enzyme ngoại bào Chúng phân hủy sử dụng chất hữu khó phân hủy axit humic đất [5] Nhiều chủng XK có khả hịa tan lignin cách sinh enzyme thủy phân cellulase, hemicellulase ngoại bào có ý nghĩa quan trọng công nghiệp bảo vệ môi trường Thực tế, mùi mốc đặc trưng nhiều loại đất liên quan đến sản sinh hợp chất hữu dễ bay có tên geosmin [57], [25], [44] 1.1.2 Đặc điểm sinh học xạ khuẩn 1.1.2.1 Đặc điểm hình thái Đặc điểm bật XK có hệ khuẩn ty (mycelium) phát triển, phân nhánh khơng có vách ngăn Đường kính khuẩn ty thay đổi khoảng từ 0,2 µm – µm, chiều dài đạt tới vài cm Kích thước khối lượng khuẩn ty thường không ổn định phụ thuộc vào loại điều kiện nuôi cấy Theo ISP, màu sắc KTKS chủng XK chia thành nhóm màu: White (W) nhóm trắng, Gray (Gy) nhóm xám, Red (R) nhóm đỏ, Yellow (Y) nhóm vàng, Green (Gn) nhóm xanh, Blue (B) nhóm xanh da trời, Violet (V) nhóm tím, nhóm màu khơng xác định (X) [5], [40] Khi nuôi cấy môi trường dịch thể, XK tạo thành dạng bông, già tạo thành kết tủa lắng xuống đáy, phần kết tủa bao gồm hạt liti, sản phẩm phân hủy màng nguyên sinh chất vách tế bào [19] Khi nuôi cấy môi trường đặc khuẩn ty XK phát triển thành loại Một loại cắm sâu vào môi trường gọi hệ sợi chất (khuẩn ty chất substrate mycelium) với chức chủ yếu dinh dưỡng Một loại phát triển bề mặt thạch gọi hệ sợi khí sinh (khuẩn ty khí sinh - aerial mycelium) với chức chủ yếu sinh sản [41] Nhiều loại XK, KTKS phát triển theo hình phóng xạ, tạo thành nhiều vịng trịn đồng tâm Bản chất tượng chưa giải thích cách thỏa đáng [19] Sau thời gian phát triển, đỉnh KTKS xuất cuống sinh bào tử – quan sinh sản đặc trưng XK Trên CSBT mang từ 30 ÷ 100 bào tử, đơi mang tới 200 bào tử, có mang bào tử hai bào tử CSBT đặc điểm quan trọng để phân loại XK Tuy nhiên nhiều trường hợp, đặc điểm khơng ổn định mà thay đổi theo mơi trường ni cấy Bào tử XK có nhiều hình dạng khác nhau, thường có hình trụ, hình ovan, hình cầu, hình que với kích thước trung bình khong 0,7 ữ 0,9 ì 0,7 ữ 1,9 àm B mặt bào tử XK nhẵn (Sm - Smooth), có gai (Sp - Spiny), khối u (Wa - Warty), nếp nhăn (Ru - Rugose) hay dạng tóc Ha - Hair like Nhìn chung, lồi, hình dạng bào tử XK tương đối ổn định, xem đặc điểm quan trọng để phân loại XK [47] Hình thái khuẩn lạc XK khác nhau, kích thước hình dạng chúng thay đổi phụ thuộc vào mơi trường điều kiện ni Khuẩn lạc thường có đường kính 0,5 ÷ mm, có khuẩn lạc có đường kính đạt tới cm lớn Khuẩn lạc XK thường rắn chắc, không trơn ướt hay suốt vi khuẩn hay nấm men mà thường có dạng thơ ráp, xù xì, có dạng vơi với nhiều màu sắc khác có nếp tỏa theo hình phóng xạ 1.1.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa XK thuộc nhóm sinh vật dị dưỡng, chúng sử dụng đường, rượu, axit hữu cơ, lipit, protein nhiều hợp chất hữu khác để làm nguồn cacbon, sử dụng muối nitrat, muối amôn, urê, pepton để làm nguồn nitơ Tuy nhiên khả hấp thụ chất khơng giống lồi hay chủng khác Phần lớn XK nhóm VSV hiếu khí, ưa ấm, số ưa nhiệt, nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng 25 - 30 C Tuy nhiên, nhiệt độ tối ưu cho sinh tổng hợp Hình 3.14 Ảnh hưởng dịch ni cấy chủng HT17.8 lên khả nảy mầm hạt Kết hình 3.14 cho thấy nhìn chung dịch ni cấy chủng HT17.8 có ảnh hưởng tới khả nảy mầm hạt Cụ thể, nồng độ dịch nuôi cấy 100% gây ức chế khả nảy mầm hạt, đặc biệt thóc dưa leo, khả nảy mầm giảm 50% Ở nồng độ 1% 10% dịch ni có tác động khơng đáng kể đến nảy mầm hạt, riêng dưa leo, nồng độ 10% dịch ni có tác dụng kích thích nảy mầm hạt Kết bổ sung vào kết nghiên cứu số tác giả dịch ni cấy số chủng xạ khuẩn có khả kích thích nảy mầm số loại hạt [10], [15] Hình 3.15 Ảnh hưởng dịch ni cấy chủng HT19.1 lên khả nảy mầm hạt 69 Hình 3.16 Ảnh hưởng dịch ni cấy chủng HT19.1 lên khả nảy mầm hạt dưa leo Kết thử nghiệm ảnh hưởng dịch nuôi cấy chủng HT19.1 đến khả nảy mầm hạt trình bày hình 3.15 3.16 cho thấy: Khi ngâm hạt với dịch ni cấy khơng pha lỗng (nồng độ 100%) khả nảy mầm hạt ln so với đối chứng nước cất, chí với dưa leo nồng độ 100% tỷ lệ nảy mầm giảm 50% Dịch nuôi cấy nồng độ thấp khả nảy mầm hạt bị ức chế, nhiên không ức chế mạnh nồng độ 100% Đặc biệt, với đỗ xanh, nồng độ 1%, 10% khả nảy mầm hạt cao so với đối chứng Như vậy, nồng độ dịch ni 1%, 10% có khả làm tăng tỷ lệ nảy mầm hạt đỗ xanh Đặc biệt, theo dõi thời gian nảy mầm hạt nồng độ pha lỗng khác nhau, chúng tơi nhận thấy: Mặc dù nồng độ pha loãng dịch ni cấy khác hạt nảy mầm, nhiên thời gian nảy mầm độ dài mầm có khác đáng kể Ở nồng độ pha lỗng 1% 10% hạt thường nảy mầm nhanh sau 24h chiều dài mầm cao đối chứng nước cất, nồng độ pha lỗng 50% 100% phải sau 48 - 72h thí nghiệm quan sát nảy mầm hạt mầm thường ngắn Như vậy, nghiên cứu sơ cho thấy dịch nuôi cấy nồng độ 50% 100% gây ức chế khả nảy mầm hạt Tuy nhiên, nồng độ thấp (1% 10%) khơng ức chế mà cịn có tác dụng kích thích khả nảy mầm sinh trưởng hầu hết loại hạt thí nghiệm Những nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng việc sử dụng CKS nồng độ khác ứng dụng thực tiễn theo mục đích đối tượng khác Tuy nhiên, nghiên cứu bước đầu, cần phải có bước khảo sát với CKS 80 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn tinh khiết để có kết luận xác nồng độ CKS ảnh hưởng tới nảy mầm hạt KẾT LUẬN Từ 40 mẫu đất thu từ loại đất khác thuộc tỉnh Thái Nguyên, phân lập 162 chủng XK Số lượng XK phân bố loại đất dao động từ 1,7 ± 6 0,67 × 10 đến 12,07 ± 0,58 × 10 CFU/g đất Tỷ lệ chủng thuộc nhóm xám: 51,23%, nhóm trắng: 24,07%, nhóm xanh: 8,02%, nhóm hồng: 5,56%, nhóm tím: 2,47%, nhóm vàng: 1,23% Trong tổng số chủng có HTKS có: tỷ lệ kháng vi khuẩn VK G (+) 74,39%, kháng VK G (-) 45,12%, kháng nấm mốc 70,73% Từ tuyển chọn chủng HT17.8 HT19.1 có HTKS cao Trên sở kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa phân tích trình tự đoạn gen 16S rRNA, chủng XK nghiên cứu định tên là: Streptomyces sp HT17.8 Streptomyces parvullus HT19.1 Đã xác định điều kiện lên men cho sinh tổng hợp CKS dung mơi thích hợp để tách chiết CKS chủng HT17.8 HT19.1: - Chủng HT17.8: môi trường lên men thích hợp Gause 2, nguồn nitơ thích hợp pepton, sử dụng iso – butanol để tách chiết CKS từ sinh khối n – butanol để tách chiết CKS từ dịch ngoại bào cho hiệu cao - Chủng HT19.1: môi trường lên men thích hợp A4H, nguồn nitơ thích hợp cao nấm men Đã khảo sát hoạt tính enzyme: amylase, cellulase protease chủng XK phân lập tuyển chọn chủng HT12.7 có hoạt tính enzyme cao bền nhiệt Đã bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng dịch nuôi cấy chủng xạ khuẩn HT17.8 HT19.1 tới nảy mầm hạt Ở nồng độ dịch ni cấy 1% 10% có tác dụng kích thích nảy mầm hạt KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu điều kiện lên men tách chiết CKS từ chủng HT17.8 HT19.1 Nghiên cứu nâng cao HTKS chủng HT17.8 HT19.1 Tìm hiểu khả ứng dụng CKS từ chủng HT17.8 HT19.1 chè TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Kiều Hữu Ảnh, Phạm Văn Ty, Lê Gia Hy, Bùi Thị Việt Hà, Nguyễn Thanh Huyền (2003), “Tách chiết chất kháng sinh từ chủng xạ khuẩn Streptomyces hygroscopicus TC-54 có hoạt tính cao chống nấm gây bệnh”, Tạp chí Sinh học, 25 (2A), 85 - 91 Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB KH&KT, Hà Nội Vi Thị Đoan Chính (2011), Tuyển chọn nghiên cứu xạ khuẩn có khả đối kháng với số chủng vi khuẩn gây nhiễm trùng bệnh viện, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp Bộ, Mã số B2009 - TN07 - 02 Vi Thị Đoan Chính, Trịnh Ngọc Hồng, Trịnh Đình Khá, Vũ Thị Lan (2007), “Nghiên cứu phân bố xạ khuẩn sinh chất kháng sinh phân lập từ đất Thái Nguyên”, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc NCCB khoa học sống, 433 – 437 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2007), Vi sinh vật học (tái lần thứ 6), NXB Giáo dục Nguyễn Lân Dũng (dịch) (1993), Thực tập vi sinh vật học, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội Lê Đức, Nguyễn Quốc Việt (2007), “Tác động hoạt động khai thác khoáng sản Đại Từ, Đồng Hỷ, Thái Nguyên đến môi trường khu vực”, Hội tháo Khoa học Quốc gia “Những vấn đề môi trường phát triển bền vững vùng đông bắc”, 153 – 159 Lý Thị Thanh Hà cs (2007), “Nghiên cứu hoạt tính sinh học số chủng xạ khuẩn phân lập Trùng Khánh – Cao Bằng”, Hội thảo Khoa học Quốc gia “Những vấn đề môi trường phát triển bền vững vùng đông bắc, 692 – 695 Đỗ Thu Hà (2004), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Quảng Nam – Đà Nẵng, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 10 Bùi Thị Việt Hà (2006), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Hà Nội 11 Bùi Thị Việt Hà, Nguyễn Thanh Huyền, Đinh Xuân Tuấn, Kiều Hữu Ảnh (2004), “Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật chủng xạ khuẩn T-41 D-42”, Tạp chí Di truyền ứng dụng, 4, 50 - 56 12 Ngơ Bích Hảo (2004), “Tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp hạt giống số trồng ảnh hưởng nấm gây bệnh đến nảy mầm sức sống con”, Tạp chí KHKT Nơng nghiệp, 2(1) 13 Nguyễn Bá Hiên, Hoàng Hải, Nguyễn Xuân Thành (2006), Giáo trình vi sinh vật học cơng nghiệp, NXB Giáo Dục 14 Lê Gia Hy, Khuất Hữu Thanh (2010), Cơ sở công nghệ vi sinh ứng dụng, NXB Giáo dục 15 Lê Gia Hy (1994), Nghiên cứu xạ khuẩn chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh đạo ôn thối cổ rễ phân lập Việt Nam, Luận án Tiến sĩ, Hà Nội 16 Biền Văn Minh (2002), Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên, Luận án tiến sĩ, Hà Nội 17 Lương Đức Phẩm (1998), Công nghệ vi sinh vật, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 47 - 49 18 Nguyễn Huỳnh Minh Quyên (2011), Điều tra, nghiên cứu số hoạt chất có khả kháng vi sinh vật kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn, Báo cáo kết thực đề tài KHCN đặc biệt cấp Đại học Quốc gia, Mã số QG 09 48 19 Nguyễn Xuân Thành, Nguyễn Thị Hiền (2003), Giáo trình vi sinh vật học nông nghiệp, NXB Đại học Sư phạm 20 Phạm Hồng Ngọc Thùy (2008), “Bước đầu nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme chitosanase kỹ thuật từ Streptomyces griseus”, Tạp chí Khoa học – Cơng nghệ Thủy sản, 21 Trần Đình Toại, Trần Thị Hồng (2007), “Tương lai ứng dụng Enzyme xử lý phế thải”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 23, 75 - 85 22 Nguyễn Văn Tuất, Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất, chế biến sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc sinh học, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 23 Trần Thị Cẩm Vân (2001), Giáo trình vi sinh vật học môi trường, NXB ĐHQG Hà Nội 24 Ngô Vĩnh Viễn, Hà Minh Trung, Mai Thị Liên, (1998), “Một số kết nghiên cứu bệnh đạo ôn (1991 - 1995)”, Nghiên cứu bệnh hại, 81 – 89 Tiếng Anh 25 Annaliesa S A., Elizabeth M H (2001), “The taxonomy of Streptomyces and related gener”, International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 51, 797 - 814 26 Bryden D., Fahy P., Jone L C Moffett., Seberry., Taylor., Howard (2005), Antibiotics in Agronomy and Horticulture, National Health and Medical Research Council 27 Chen M., Xiao X., Wang P., Zeng X., Wang F (2008), “Arthrobacter ardleyensis sp nov isolated from Antarctic lake sediment and deep-sea sediment”, Arch Microbiol, 183, 301- 305 28 Demain A.L (1974), “How antibiotic producing microorganisms avoid suicide, Annuals of the New York Academy of sciences”, 601 – 602 29 FAO yearbook – Production (1994), 7, 43 30 Gause G F., Preobrazhenskaya T P., Sveshnikova M A., Terekhova L P., Maximova T S (1983), “A guide for the determination of actinomycetes”, Genera Streptomyces, Streptoverticillium, and Chaina, USA 31 Haijun D., Taifo M., Ingo T., Sungsook L., Heinz G (2001), “Biosynthesis of the Validamycin A by Streptomyces hygroscopicus var limoneus”, J Am Chem Soc., 123, 2733 - 2742 32 Hozzein W.N., Li W.J., Ali M.I.A., Hammouda O., Mousa A.S., Xu L.H., Jiang C.L (2004), “Nocardiopsis alkaliphila sp nov., a novel alkaliphilic actinomycete isolated from desert soil in Egypt”, Int J Syst Evol Microbiol, 54, 247 - 252 33 Jeffrey L S H (2008), “Isolation, characterization and identification of actinomycetes from agriculture soils at Semongok, Sarawak”, African Journal of Biotechnology, (20), 3697 - 3702 34 Jesus G M., Silvia G A., Ana I A , Francisco R V (1999), “Use of the 16S–23S ribosomal genes spacer region in studies of prokaryotic diversity”, Unidad de Microbiological, Centro de Biologia Molecular y Celular, 18 , Spain 35.Kataoka M., Ueda K., Kudo T., Seki T., Yoshida T (1997), “Application of the variable region in 16S rRNA to create an index for rapid species identification in the genus Streptomyces”, FEMS Microbiol Lett, 151, 249 – 255 36 Keswanit J., Whitman W B (2001), “Relationship of 16S rRNA sequence similarity to DNA hybridzation in prokaryotes”, International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 51, 667 - 678 37 Ludwig W., Schleifer K H (1994), “Bacterial phylogeny based on 16S and 23S rRNA sequence analysis”, FEMS Microbiol Rev., 15, 155 - 173 38 Lima M.B., De Azeredo L.A., Coelho R.R., Freire D.M (2006), “Thermophilic protease production by Streptomyces sp 594 in submerged and solid-state fermentations using feather meal”, J Appl Microbiol, 100(4), 641 - 39 Marinelli F (2009), “Antibiotics and Streptomyces: The future of antibiotic discovery”, Microbiol Today, 36, 20 - 21 40 Miyadoh S (2001), “Identification manual of Actinomycetes”, Business Center for Academic Scieties Japan, 65 - 66 41 Nonomura H (1974), “Key for classification and identification of 458 species of Streptomyces included in ISP”, J Ferment Technol, 52 (2), 78 - 92 42 Paul J., Tracy M., Philip W., Fenical W (2005), “Marine actinomycete diversity and natural product discovery”, Antonie van Leeuwenhoek, 87 (1), 43 48 43 Patricia S M, Virginia O S, George W S, Alan L J (2002), “Antibiotic use in plant agriculture”, Ann Rev Phytopathol, 40, 443 - 465 44 Shang S Y., Jan Y W (1999), “Protease and amylase production of Streptomyces rimosus in submerged and solid state cultivations”, Bot Bull Acad Sin, (40), 259 - 265 45 Schloss P.D., Handelsman J (2006), “Toward a census of Bacteria in soil”, PloS Comp Biol, 2(7) 46 Shen V Ch (1992), Development and application of agricultural antibiotic Jingangmicin in China, FAO regional consultation on biological control of plant diseases, Hangzhau, China 47 Shirling E.B., Gottlieb D (1996), “Methods for characterization of streptomyces species”, International Journal of Systematic Bacteriology, 16 (3) 48 Strobel G., Daisy B (2003), “Bioprospecting for microbial endophytes and their natural products microbial”, Microbiol Mol Biol Rev., 67, 491-502 49 Takeuchi T., Sawada H., Tanaka F., Matsuda I (1996), “Phylogenetic analysis of Streptomyces spp causing Potato scab base on 16S rRNA sequences”, International journal of systematic bacteriology, 476-479 90 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 Thomas T., Michael J., Hitchcock M , Edward K (1980), “Distinct kynureninase and hydroxykynureninase enzymes in an actinomycin- producing strain of 91 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Streptomyces parvullus”, Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Enzymology, 612 (1), 97 – 106 51 Vachkova R., Kappas A., Tyagunenko E., Markaki M., Voutsinas G (1998), “Spicific recombinogenic activity of a new polyene antibiotic”, National Library of medicine, 130 – 135 52 Vasanthabharathi V., Lakshminarayana R., Jayalakshmi S (2011), “Melanin production from manine Streptomyces”, African Journal of Biotechnology, 10(54), 11224 - 11234 53 Waksman S A (1961), identification and descriptions of “The Actinomycetes: genera and species”, Classification, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, 2, USA 54 Waksman S.A., Gregory F.J (1954), “Actinomycin-II Classification of organisms producing different forms of actinomycin”, Antibiotics and Chemotherapy, 4, 1050 - 1056 55 Williams S T., Sharpe M E., Holt J G (1989), “Bergey’s manual of systematic bacteriology”, Williams & Wilkins, Baltimore, USA 56 Yamaguchi (1998), “Natural product – derived fungicides as exemplified by the antibiotic”, Fungicidal Activity, 57 – 79 57 Ziad J., Ahlam D., Qotaiba A., Ismail S (2008), “Influence of culture conditions on cellulase production by Streptomyces sp J2”, Jordan Journal of Biological Sciences, (4), 141 – 146 Các trang Web 58 http://en.wikipedia.org/wiki/Actinobacteria 59 http://www.bacterio.cict.fr/s/streptomycesc.html 60 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/phanloaixakhuan01.htm DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Đỗ Thị Tuyến, Lương Thị Hương Giang, Đào Thị Hằng, Nguyễn Thị Hương Liên, Vi Thị Đoan Chính (2011), Hoạt tính kháng sinh xạ khuẩn đất khu vực có hoạt động khai thác khống sản, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ - ĐH Thái Nguyên, 86(10), 153 – 158 ... phong phú Thái Nguyên, tiến hành thực đề tài: ? ?Nghiên cứu đa dạng sinh học số chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces phân lập Thái Nguyên định hướng ứng dụng? ?? Mục tiêu nghiên cứu - Khảo sát phân bố,... xử lý số liệu 34 Chương : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .35 3.1 SỰ PHÂN BỐ VÀ TÍNH ĐA DẠNG SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN .35 3.1.1 phân bố xạ khuẩn đất 35 3.1.2 đa dạng sinh học xạ khuẩn. .. nghiên cứu xử lý theo phương pháp thống kê sinh học phần mềm excel Mỗi thí nghiệm lặp lại lần Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 SỰ PHÂN BỐ VÀ TÍNH ĐA DẠNG SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN 3.1.1 phân bố xạ khuẩn