Nghiên cứu đặc điểm sinh học và khả năng sinh CELLULASE của một số chủng xạ khuẩn phân lập được từ đất ở vĩnh phúc

TRNG A HC S PHM H NI KHOA SINH-KTNN TRN TH LY NGHIấN CU C IM SINH HC V KH NNG SINH CELLULASE CA MT S CHNG X KHUN PHN LP C T T TNH VNH PHC KHO LUN TT NGHIP I HC CHUYấN NGNH: VI SINH HC Ngi hng dn khoa hc Ths Nguyn Khc Thanh H Ni, thỏng nm 2010 LI CM N Em xin by t lũng bit n sõu sc ti Ths Nguyn Khc Thanh ó tn tỡnh ch bo, hng dn em sut quỏ trỡnh hc v thc hin ti Em cng xin chõn thnh cm n ton th cỏc thy cụ t vi sinh ó ch bo v giỳp , em cú th hon thnh c khúa lun tt nghip ny Em xin chõn thnh cm n ban ch nhim khoa Sinh- KTNN, ban giỏm hiu nh trng ó to iu kin tt nht em cú th hon thnh c khúa lun tt nghip ny Cui cựng em cm n gia ỡnh v bn bố ó ng viờn giỳp em sut thi gian qua Em xin chõn thnh cm n! Xuõn Hũa , thỏng 05 nm 2010 Sinh viờn Trn Th Ly LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi Cỏc kt qu nghiờn cu, s liu c trỡnh by khúa lun l hon ton trung thc v khụng trựng vi kt qu ca tỏc gi khỏc Tỏc gi Trn Th Ly CC T VIT TT VSV : Vi sinh vt ISP : International Steptomyces Project CFU : Colony Forming Unit HSKS : H si khớ sinh HSCC : H si c cht DANH MC BNG V HèNH TRONG KHểA LUN BNG Bng Tờn bng Trang 3.1 Cỏc chng x khun sinh cellulase phõn lp c t t 22 tnh Vnh Phỳc 3.2 nh hng ca thi gian n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu 27 3.3 nh hng ca ngun cacbon t nhiờn n hot tớnh 32 cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu 3.4 nh hng ca ngun nit n kh nng sinh trng v 33 hot tớnh cenlulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu 3.5 nh hng ca pH n kh hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu 34 HèNH Hỡnh Tờn hỡnh Trang 3.1 Mt s hỡnh nh v x khun 24 3.2 Hỡnh nh khun lc v cung sinh bo t ca cỏc chng 26 x khun nghiờn cu 3.3 nh hng ca thi gian nuụi cy n hot tớnh cellulase 29 ca chng M10 3.4 Hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun sinh trng 33 mụi trng cacbon t nhiờn BIU Biu Tờn biu Trang nh hng ca thi gian n kh nng sinh cellulase 28 ca cỏc chng x khun nghiờn cu nh hng ca ngun nit n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu 35 nh hng ca nng pH n hot tớnh cellulase 36 ca cỏc chng x khun nghiờn cu MC LC Phn m u Chng Tng quan ti liu 1.1 c im v phõn loi x khun 1.1.1 Mt s phng phỏp phõn loi x khun ..5 1.1.2 Vai trũ ca x khun 1.2 Nhu cu dinh dng ca x khun 1.2.1 Nhu cu cacbon 1.2.2 Nhu cu nit 1.2.3 Nhu cu vitamin v khoỏng 10 1.3 Cỏc yu t nh hng n i sng ca x khun.10 1.4 Cellulase v cellulose 12 1.4.1 Cellulose . 13 1.4.1 Cellulase . 14 1.5 Trin vng, ng dng ca cellulase .14 Chng Vt liu v phng phỏp nghiờn cu 17 2.1 Vt liu 17 2.1.1 Nguyờn liu 17 2.1.2 Húa cht 17 2.1.3 Dng c v thit b 17 2.1.4 Mụi trng phõn lp x khun .17 2.1.5 Mụi trng th hot tớnh cellulase ca x khun19 2.2 Phng phỏp nghiờn cu .20 2.2.1 Phng phỏp ly mu .20 2.2.2 Phng phỏp phõn lp x khun t mu t 20 2.2.3 Phng phỏp bo qun ging..21 2.2.4 Phng phỏp xỏc nh kh nng sinh cellulase ca x khun 21 Chng Kt qu v tho lun22 3.1 Phõn lp, tuyn chn x khun sinh cellulase t t 22 3.2 c im hỡnh thỏi ca cỏc chng x khun nghiờn cu 25 3.3 Nghiờn cu nh hng ca cỏc cỏc yu t mụi trng v iu kin nuụi cy n hot tớnh cellulase ca mt s chng x khun ..27 3.3.1 nh hng ca thi gian nuụi cy 27 3.3.2 nh hng ca ngun cacbon 31 3.3.3 nh hng ca ngun nit 34 3.3.4 nh hng ca pH 35 Kt lun v ngh 37 Ti liu tham kho 38 Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội M U Cellulose l loi hp cht hu c di t nhiờn, chim ti 4050 % hydratcacbon Cellulose l thnh phn ch yu to lờn b khung xng t bo thc vt Trung bỡnh mi nm c tớnh cú khong 30 t tn cht hu c c cõy sinh tng hp trờn trỏi t ú cú 30 % l thnh t bo thc vt, thnh phn ch yu ca thnh t bo thc vt l cellulose Hng nm trỏi t phi nhn v mt lng cht thi khng l (cht thi sinh hot, cht thi thc vt nh lỏ, cnh cht thi cụng nghip) phõn gii lng ln cellulose ny khu h vi sinh vt (VSV) t úng vai trũ khụng nh Mun lm c iu ú cỏc vi sinh vt phi sn sinh cellulase, enzyme cellulase ny úng vai trũ phõn gii cellulose Trong t cú rt nhiu loi VSV cú kh nng sinh tng hp cellulase, x khun l mt nhng loi y X khun úng vai trũ quan trng quỏ trỡnh hỡnh thnh t, quỏ trỡnh mựn húa, tham gia vo vũng tun hon chuyn húa cỏc hp cht hu c Mc dự x khun khụng cú kh nng sinh trng nhanh bng nm mc nhiờn hot tớnh cellulase ca x khun mnh hn rt nhiu, bờn cnh ú x khun cú kh nng thớch ng tt vi mụi trng t, nc v c mụi trng khụng khớ Nu nm mc cn iu kin m cao mi cú th phỏt trin thỡ x khun sinh trng iu kin m thp, nhng mc dự vy cỏc nghiờn cu cho thy rng mụi trng m thp x khun sinh trng kộm hn rt nhiu so vi mụi trng lng, mt s loi hot tớnh enzyme cũn kộm i Ngy vi s phỏt trin ca cụng ngh sinh hc, ngy cng nhiu enzyme c ng dng i sng nh: proteinase ng dng cụng nghip ch bin sa, amylase cụng nghip ru, cellulase ng dng Trần Thị Ly K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội sn xut giy, cụng nghip may, si, sn xut thc n cho gia sỳc, x lý cht thi nụng nghip, sn xut cỏc loi ng probiotin Nh vy cellulase v x khun u cú vai trũ quan trng i sng ngi ú cng l lý tụi chn v nghiờn cu ti: Nghiờn cu c im sinh hc v kh nng sinh cellulase ca mt s chng x khun phõn lp c t t tnh Vnh Phỳc nhm hiu rừ hn v kh nng sinh cellulase ca mt s chng x khun, cỏc yu t mụi trng v iu kin nuụi cy nh hng nh th no n kh nng sinh cellulase v hot tớnh cellulase t ú a hng phự hp nhm thu c sn lng cellulase cao nht t cỏc chng x khun c chn, phc v cho cỏc ng dng tip theo Mc tiờu ti Phõn lp, tuyn chn cỏc chng x khun cú hot tớnh cellulase cao t t tnh vnh phỳc Nghiờn cu nh hng ca cỏc yu t mụi trng v iu kin (thi gian, pH, ngun cacbon, ngun nit) n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun Ni dung ca ti - Phõn lp, tuyn chn x khun cú hot tớnh cellulase cao t t ti Xuõn Hũa Phỳc Yờn Vnh Phỳc - Nghiờn cu c im hỡnh thỏi ca mt s chng x khun cú hot tớnh cellulase cao - Nghiờn cu nh hng ca cỏc yu t mụi trng v iu kin nuụi cy n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun c chn + nh hng ca thi gian + nh hng ca ngun cacbon Trần Thị Ly K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội Cn c vo kt qu thu c tụi a mt s kt lun sau: - S phõn b x khun cỏc loi t khỏc l khỏc - Cựng mt loi t cỏc sõu khỏc s phõn b ca x khun khỏc - Cỏc chng x khun phõn lp c cú hot tớnh cellulase khỏ mnh Trong ú chng M3, M7, M10, M13 cú hot tớnh cellulase mnh nht Tụi chn chng ny tip tc tin hnh cỏc nghiờn cu tip theo 3.2 c im hỡnh thỏi ca cỏc chng x khun nghiờn cu Tụi tin hnh nghiờn cu c im hỡnh thỏi ca chng M3, M7, M10, M13 thy rng trờn mụi trng Gause I: - Chng M3: HSKS mu nõu, HSCC mu vng xn, sc t tan mu vng, thi gian xut hin khun lc 24 - 48h, cung sinh bo t dng thng - Chng M7: HSKS mu hng, HSCC mu da cam, sc t tan mu gch, thi gian xut hin khun lc 24-48h, cung sinh bo t dng múc, xon khụng hon ton - Chng M10: HSKS mu xỏm, HSCC mu vng xn, sinh sc t tan vng nht thi gian xut hin khun lc 24 - 48h, cung sinh bo t dng xon thng - Chng M13: HSKS mu xỏm, HSCC mu vng xn, sinh sc t tan mu trng c, thi gian xut hin khun lc t 24- 48h, cung sinh bo t dng ln súng Trần Thị Ly 25 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội M7 a M3 M13 b c Hỡnh 3.2: hỡnh nh khun lc v cung sinh bo t ca chng x khun nghiờn cu a- Khun lc x khun b, c- Cung sinh bo t ca chng x khun nghiờn cu Trần Thị Ly 26 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 3.3 Nghiờn cu nh hng ca mt s yu t mụi trng v iu kin nuụi cy n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun 3.3.1 nh hng ca thi gian nuụi cy Bng cỏch cy chm im cỏc chng x khun M3, M7, M10, M13 trờn hp petri cú cha mụi trng 1% CMC, nuụi t m t n ngy, mi ngy mang mu th vi Lugol I Kt qu trỡnh by bng sau: Bng 3.2: nh hng ca thi gian n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu Chng M3 M7 M10 M13 Mu sc vũng phõn gii Ngy Tớm m 10 10 14 13 Tớm m 22 18 24 21 Tớm nht 27 21 29 27 Trong sut 29 25 32 28 Trong sut Hot tớnh enzyme : D-d n v: mm Trần Thị Ly 27 K32D Sinh Hot tớnh cellulase (D-d) Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 35 30 25 20 15 10 M3 Ngy M7 M10 M13 Biu 1: nh hng ca thi gian nuụi cy n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu T bng 3.2 v biu tụi nhn thy thi gian cú nh hng rt ln n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun, lng cellulase thu c nhiu nht l vo thi im 48- 72h nuụi cy Trần Thị Ly 28 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội M10-1 M10-2 M10-3 M10-4 M10-5 Hỡnh 3.3: nh hng ca thi gian nuụi cy n hot tớnh cellulase ca chng M10 Trần Thị Ly 29 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội Mu sc ca vũng phõn gii bin i t tớm m sang tớm nht ri cui cựng chuyn sang sut iu ny cú th gii thớch nh sau: ngy th nht sau cy chng x khun lờn mụi trng thch a cha ngun cacbon l CMC Cỏc chng x khun ny bỏm dớnh trờn b mt thch (giai on tim phỏt) chỳng bt u sinh tng hp cellulase Cỏc enzyme ny khuch tỏn mụi trng, phõn gii cellulose thnh cỏc oligosaccharide thu nng lng cung cp cho quỏ trỡnh sinh trng Khi nhum mu Lugol I cỏc oligosacharit ny bt mu nờn vũng phõn gii cú mu tớm m Sang ngy th 2-3 cỏc chng x khun phõn chia nhanh chúng nhm tng sinh t bo (giai on logarid) Quỏ trỡnh ny ũi hi cn cung cp mt lng ln cht dinh dng, ú cht dinh dng ta a vo l c nh Khi mụi trng nghốo dinh dng, ngun nng lng thu t vic oxi húa cellulose thnh oligosaccharide khụng cung cp cho quỏ trỡnh phỏt trin, chỳng bt u sinh tng hp enzyme phõn gii oligosaccharide thnh glucose Dn dn lng cellulose mụi trng b phõn hy hon ton, ngun dinh dng cn kit, qun th x khun bc vo giai on suy vong suy vong, vũng phõn gii sut, ớt tng v khớch thc Tuy nhiờn cỏc enzyme cú mt mụi trng nuụi cy Vic nghiờn cu tỏc ng ca thi gian n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun em li nhng hiu bit v quỏ trỡnh phỏt trin ca x khun núi chung v kh nng sinh enzyme ca cỏc chng x khun tng thi kỡ sinh trng núi riờng Ngi ta cú th nghiờn cu ng thỏi sinh trng, ng thỏi sinh enzyme bit c thi im no thu c nhiu enzyme nht t ú thit lp mt dõy truyn sn xut hon chnh cho phự hp nht em li li nhun kinh t cao Trần Thị Ly 30 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 3.3.2 nh hng ca ngun cacbon Cacbon l mt nhng ngun dinh dng khụng th thiu i vi i sng ca bt kỡ loi sinh vt no, ngun cacbon ny tn ti nhiu dng khỏc t cỏc hp cht vụ c n gin (CO 2) n cỏc hp cht vụ c phc ( ng, cỏc polisaccharide) Cellulose l ngun cacbon ch yu t nhiờn, lng cellulose ny phn ln t rỏc thi (thõn, lỏ, r thc vt, rỏc thi cụng nghip) ng húa c lng cellulose khng l ny ũi hi cỏc chng x khun núi riờng v cỏc VSV núi chung phi cú kh nng tng hp cellulase S phỏt trin ca cụng ngh sinh hc Ngi ta bt u ngh n vic tn dng ngun cellulose ph thi (bó ngụ, bó u, bó mớa, v lc, v tru) sn xut cỏc loi thc n cho gia sỳc õy l mt ngun ph thi nụng nghip khỏ di hu nh cha c tn dng tỡm chng x khun cú hot tớnh cellulase mnh sinh trng trờn cỏc mụi trng cú ngun cacbon ny, tụi tin hnh nuụi cy chng x khun M3, M7, M10, M13 cỏc mụi trng cha ngun cacbon t nhiờn l lừi ngụ, v lc , v tru t ú tỡm chng cú hot tớnh cellulase cao ng dng vo i sng sn xut Tụi tin hnh cy cỏc chng x khun M3, M7, M10, M13 ln lt cỏc mụi trng lng cha lừi ngụ, v lc, v tru Nuụi lc n nhit (30 oC, 160v/p) ngy ri li tõm thu lng enzyme thụ, em th hot tớnh cellulase bng phng phỏp nh dch Kt qu c trỡnh by bng sau: Trần Thị Ly 31 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội Bng 3.3: nh hng ca ngun cacbon t nhiờn n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu Chng M3 M7 M10 M13 Ngụ 21 26 29 27 Lc 31 23 28 28 Tru 23 29 32 33 C cht Hot tớnh enzyme: D-d n v: mm T bng trờn ta nhn thy chng x khun chng M10 thớch hp nht vi mụi trng cha lừi ngụ, chng M3 phỏt trin mnh nht mụi trng cha v lc Chng M13 mụi trng v tru Trong chng x khun nghiờn cu chng M10 v M13 cú kh nng sinh trng v phỏt trin ng u cỏc mụi trng cha ngun cacbon t nhiờn Ba ngun cacbon: lừi ngụ, v lc, v tru cú cu to ch yu l cellulase v hemicellulase ging vi ngun cacbon t nhiờn iu ny cú th gii thớch ti nuụi cy cỏc chng x mụi trng cha cỏc ngun ny u cho hot tớnh cellulase cao Trần Thị Ly 32 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội Hỡnh 3.4 Hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun sinh trng mụi trng cacbon t nhiờn 3.3.3 nh hng ca ngun nit Cy cỏc chng x khun M3, M7, M10, M13 ln lt cỏc mụi trng cha ngun Nit khỏc nhau, nuụi lc n nhit (160v/p) ngy Sau ú li tõm thu sinh t bo v dch enzyme thụ, cõn lng khụ t bo v th hot tớnh enzyme bng phng phỏp nh dch Kt qu trỡnh by bng sau Bng 3.4: nh hng ca ngun nit n kh nng sinh trng v hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu NH4Cl Chng D-d (mm) M3 24 M7 26 M10 18 M13 17 Mtb (g) 0,375 0,391 0,351 0,489 (NH4)2SO4 KNO3 D-d (mm) 22 20 32 24 D-d (mm) 28 21 30 32 Mtb (g) 0,450 0,386 0,417 0,417 KNO2 Mtb (g) 0,381 0,405 0,486 0,512 D-d (mm) 19 32 27 28 Mtb (g) 0,367 0,317 0,315 0,283 Mtb : Khi lng khụ t bo D-d: Hot tớnh cellulase Trần Thị Ly 33 K32D Sinh ( D-d) Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 35 30 25 20 15 10 M3 M7 M10 M13 (Chng x khun) NH4Cl (NH4)2SO4 KNO3 KNO2 Biu 2: nh hng ca ngun nit n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu T bng 3.4 v biu 2, tụi nhn thy cỏc chng x khun sinh trng tt nht ngun nitrat, i vi ngun nitrit x khun sinh trng yu nht Hot tớnh cellulase ca chng M3 v M13 mnh nht mụi trng nitrat Ngc li chng M10 li cú hot tớnh cellulase mnh nht sinh trng mụi trng cú cha ngun amụn Riờng chng M7 li cú hot tớnh cellulase mnh i vi mụi trng nitrit Trần Thị Ly 34 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội Theo Nguyn Thnh t, VSV ng húa NO 3- tt hn cỏc ngun khỏc iu ny cú th gii thớch ti cỏc chng x khun sinh trng tt mụi trng cha ngun nitrat [8] Mi quan h gia sinh trng v kh nng sinh enzyme l rt mt thit Phn ln vi cỏc loi sinh vt mt mụi trng nu sinh trng tt thỡ kh nng sinh enzyme cao Tuy nhiờn mt s loi mụi trng nuụi cy thu enzyme khỏc bit so vi mụi trng thu sinh iu ny cú ngha l: mt iu kin mụi trng nht nh no ú VSV sinh trng tt cha chc ó cho lng enzyme cao Vic nghiờn cu tỏc ng ca cỏc yu t mụi trng n kh nng sinh enzyme ca VSV giỳp ta tỡm mụi trng ti u ch dựng vo vic nuụi cy thu enzyme 3.3.4 nh hng ca nng pH Nuụi lc n nhit cỏc chng x khun M3, M7, M10, M13 mụi trng ó hiu chnh pH (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9) Sau ngy ly ly tõm thu dch enzyme thụ v sinh t bo, em cõn lng khụ t bo v th hot tớnh enzyme bng cỏch o ng kớnh vũng phõn gii Kt qu th hin bng sau: Bng 3.5: nh hng ca pH n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu pH Chng M3 17 21 23 22 27 29 26 20 M7 19 22 28 29 22 21 14 11 M10 16 20 21 21 27 29 22 17 M13 17 19 22 25 28 29 25 19 Hot tớnh enzyme: D-d n v: mm Trần Thị Ly 35 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 35 30 25 D-d 20 15 10 5 pH 9M3 M7 M10 M13 Biu 3: nh hng ca pH n hot tớnh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu T bng 3.5 v biu 3, chỳng tụi nhn thy nng pH cú nh hng rt ln n kh nng sinh trng cng nh kh nng tng hp cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu Cỏc chng x khun nghiờn cu sinh tng hp nhiu enzyme pH t 6-8, riờng chng M7 pH thớch hp nm vo khong 4-5 iu ny cú th gii thớch nh sau: chng M7 phõn lp c t t rung, phn ln t trng lỳa tnh vnh phỳc u thuc loi t chua (cú pH [...]... nhiu v chớnh xỏc da trờn c s phỏt trin sinh hc phõn Trần Thị Ly 4 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 t, húa sinh hc, lớ sinh hc phõn loi nhanh chúng v chớnh xỏc ngi ta s dng phõn loi s, nghiờn cu cỏc chng loi phỏt sinh Tuy nhiờn hin nay trong thc nghim ngi ta vn ch yu da vo c im hỡnh thỏi, tớnh cht nuụi cy, c im sinh lớ - sinh húa, min dch v sinh hc phõn t Hin nay cú rt nhiu khúa... gii Trần Thị Ly 13 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 Trong t nhiờn cellulose khỏ bn vng, khụng tan v b trng lờn khi hp th nc Cellulose b thy phõn khi un núng vi axit hay kim nng khỏ cao hoc b phõn gii bi cỏc cellulase sinh ra t nhiu loi sinh vt 1.4.2 Cellulase Cellulase xỳc tỏc cho quỏ trỡnh chuyn hoỏ cellulose thnh cỏc sn phm ho tan, d s dng (hp th) H thng cellulase bao gm: + Cellobihydrolase... lp c 4 chng Trong 15 chng x khun phõn lp c u sinh cellulase, hu ht cỏc chng x khun cú hot tớnh cellulase khỏ mnh Trong ú chng M10 cú hot tớnh cellulase mnh nht, chng M1 cú hot tớnh cellulase yu nht Theo Nguyn Xuõn Thnh, t l mụi trng sng tt nht i vi VSV [6] Trong cỏc loi t, t mựn l loi t thớch hp nht i vi VSV, loi t ny cha y cỏc yu t thun li cho quỏ trỡnh sinh trng ca VSV (Nhit , m, pH, hm lng dinh... gch, thi gian xut hin khun lc 24-48h, cung sinh bo t dng múc, xon khụng hon ton - Chng M10: HSKS mu xỏm, HSCC mu vng xn, sinh sc t tan vng nht thi gian xut hin khun lc 24 - 48h, cung sinh bo t dng xon thng - Chng M13: HSKS mu xỏm, HSCC mu vng xn, sinh sc t tan mu trng c, thi gian xut hin khun lc t 24- 48h, cung sinh bo t dng ln súng Trần Thị Ly 25 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội... 30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 4 M3 5 Ngy M7 M10 M13 Biu 1: nh hng ca thi gian nuụi cy n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun nghiờn cu T bng 3.2 v biu 1 tụi nhn thy thi gian cú nh hng rt ln n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun, lng cellulase thu c nhiu nht l vo thi im 48- 72h nuụi cy Trần Thị Ly 28 K32D Sinh ... hoc ly t mt b su tp ging vi sinh vt cú sn Tuyn chn chng VSV cú kh nng sinh trng, phỏt trin nhanh, sinh tng hp enzyme cao, n nh Cu trỳc ca mi protein enzyme c to thnh trong t bo u c xỏc nh bi tớnh cht di truyn ca t bo, do ú cú th dựng tỏc nhõn t bin tỏc ng lờn b mỏy di truyn ca VSV nhm to ra cỏc dng t bin cú kh nng sinh tng hp c bit cao mt loi enzyme no ú Trần Thị Ly 10 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp... nng sinh tng hp cellulase iu ny gii thớch ti sao cỏc chng x khun phõn lp c t t li cú hot tớnh cellulase cao t rung cú hm lng mựn khụng cao, nghốo dinh dng Phn ln t canh tỏc tnh Vnh Phỳc thuc loi t chua Mu t rung tụi dựng phõn lp x khun c ly vựng rung thp, s lng x khun phõn lp c t loi t ny rt ớt Hot tớnh cellulase ca nhng chng phõn lp c t loi t ny yu hn nhiu so vi t mựn Trần Thị Ly 23 K32D Sinh. .. khun a, b Mt s chng x khun sinh cellulase phõn lp c c, d - Hot tớnh cellulase ca mt s chng x khun nghiờn cu Trần Thị Ly 24 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 Cn c vo kt qu thu c tụi a ra mt s kt lun sau: - S phõn b x khun cỏc loi t khỏc nhau l khỏc nhau - Cựng mt loi t cỏc sõu khỏc nhau s phõn b ca x khun khỏc nhau - Cỏc chng x khun phõn lp c cú hot tớnh cellulase khỏ mnh Trong ú... bt giy, cụng nghip thuc da Trần Thị Ly 15 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 Mt trong nhng ng dng quan trng na ca cellulase l ng dng cellulase vo bic bo v mụi trng Hin nay cellulase c s dng trong vic x lý rỏc thi nụng nghip, rỏc thi ụ th, rỏc thi ca cỏc nh mỏy giy, thuc da x lớ ngun nc ụi nhim em li hiu qu cao Trần Thị Ly 16 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 CHNG... tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 M7 a M3 M13 b c Hỡnh 3.2: hỡnh nh khun lc v cung sinh bo t ca chng x khun nghiờn cu a- Khun lc x khun b, c- Cung sinh bo t ca chng x khun nghiờn cu Trần Thị Ly 26 K32D Sinh Khóa luận tốt nghiệp Tr-ờng ĐHSP Hà Nội 2 3.3 Nghiờn cu nh hng ca mt s yu t mụi trng v iu kin nuụi cy n kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun 3.3.1 nh hng ca thi gian nuụi cy Bng cỏch cy chm im ... vi sinh vt (VSV) t úng vai trũ khụng nh Mun lm c iu ú cỏc vi sinh vt phi sn sinh cellulase, enzyme cellulase ny úng vai trũ phõn gii cellulose Trong t cú rt nhiu loi VSV cú kh nng sinh tng hp cellulase, ... khun sinh cellulase Trong ú chng M3, M7, M10, M13 cú kh nng sinh cellulase mnh nht - Kh nng sinh cellulase ca cỏc chng x khun tựy thuc theo thi gian, ngy tui thi gian 48- 72h hot tớnh cellulase. .. hoc b phõn gii bi cỏc cellulase sinh t nhiu loi sinh vt 1.4.2 Cellulase Cellulase xỳc tỏc cho quỏ trỡnh chuyn hoỏ cellulose thnh cỏc sn phm ho tan, d s dng (hp th) H thng cellulase bao gm: + Cellobihydrolase