Nghiên cứu đặc điểm sinh học, hoá học và khả năng ứng dụng của loài sưa ( dalbergia tonkinensis prain) ở một số tỉnh đông bắc việt nam

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN LUYỆN THỊ THANH NGA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC, HÓA HỌC VÀ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG CỦA LOÀI SƢA (DALBERGIA TONKINENSIS PRAIN) Ở MỘT SỐ TỈNH ĐÔNG BẮC VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: Thực vật học Hà Nội- 2012 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN LUYỆN THỊ THANH NGA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC, HÓA HỌC VÀ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG CỦA LOÀI SƢA (DALBERGIA TONKINENSIS PRAIN) Ở MỘT SỐ TỈNH ĐÔNG BẮC VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: Thực vật học Ngƣời hƣớng dẫn : TS Trần Huy Thái_Viện sinh thái tài nguyên sinh vật ThS Dương Thị Thanh Thảo_Trường ĐHSP Hà Nội Hà Nội- 2012 LỜI CẢM ƠN Trong trình làm khóa luận, nhận hướng dẫn giúp đỡ TS Trần Huy Thái ThS Dương Thị Thanh Thảo Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy cô Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán phòng Tài nguyên thực vật – Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật tạo điều kiện thuận lợi tận tình giúp đỡ suốt trình tìm hiểu & nghiên cứu viện Trong trình thực đề tài, nhận giúp đỡ nhiều tổ chức, cá nhân trường Nhân dịp này, xin trân trọng cảm ơn: Ban chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN _ Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2; đặc biệt giúp đỡ, động viên gia đình, bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu Một lần nữa, xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội , ngày 10 tháng 05 năm 2012 Sinh viên Luyện Thị Thanh Nga LỜI CAM ĐOAN Để đảm bảo tính trung thực, khách quan khóa luận, xin cam đoan: Khóa luận “Nghiên cứu đặc điểm sinh học, hoá học khả ứng dụng loài Sƣa (Dalbergia tonkinensis Prain) số tỉnh Đông Bắc Việt Nam” công trình nghiên cứu cá nhân tôi, thực hướng dẫn TS Trần Huy Thái ThS Dương Thị Thanh Thảo Các kết trình bày khóa luận trung thực, khách quan chưa công bố công trình trước Hà Nội , ngày 10 tháng 05 năm 2012 Sinh viên Luyện Thị Thanh Nga MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG VÀ HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tình hình nghiên cứu giới Tình hình nghiên cứu Việt Nam CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN, VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Địa điểm nghiên cứu 2.3 Thời gian nghiên cứu 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu sinh học 2.4.2 Nghiên cứu hóa học 2.4.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 12 3.1 Một số thông tin phân loại 12 3.1.1 Danh pháp vị trí phân loại 12 3.1.2 Đặc điểm hình thái 12 3.1.3 Đặc điểm sinh học sinh thái 15 3.1.4 Phân bố 16 3.1.5 Giá trị sử dụng 16 3.2 Khả nhân giống loài Sưa 16 3.2.1 Khả nhân giống sinh dưỡng 16 3.2.2 Khả nhân giống hạt 17 3.3 Khả sinh trưởng loài Sưa mọc từ hạt 19 3.4 Thử hoạt tính sinh học loài Sưa 22 3.4.1 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 22 3.4.2 Thử hoạt tính chống oxy hóa 22 3.4.3 Thử hoạt tính gây độc tế bào 23 3.5 Phân lập hợp chất từ loài Sưa (Dalbergia tonkinensis) 23 3.5.1 Xây dựng quy trình phân lập chất 23 3.5.2 Hằng số vật lý kiện phổ chất 25 KẾT LUẬN 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 DANH MỤC BẢNG, SƠ ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH Bảng Tên bảng Một số đặc điểm hình thái hạt loài Sưa Trang (Dalbergiatonkinenis Prain) 14 Khả nẩy mầm từ cành hom loài Sưa 16 Kết thí nghiệm đợt I 17 Kết thí nghiệm đợt II 18 Kết thí nghiệm đợt III 18 Khả sinh trưởng loài Sưa mọc từ hạt 19 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định từ cành 22 Hoạt tính chống oxy hóa từ dịch chiết cành 22 Hoạt tính kháng ung thư từ dịch chiết cành 23 Sơ đồ Tên sơ đồ Trang Chiết phân đoạn phân lập chất từ cặn chiết nước 24 Phân lập hoạt chất từ cặn chiết clorofooc 25 ảnh Tên ảnh Trang Loài Sưa (Dalbergia tonkinensis Prain) 12 Hình thái loài Sưa 13 Hình thái hạt loài Sưa 13 Loài Sưa nảy mầm 20 Loài Sưa gieo khay 20 Loài Sưa gieo bầu đất 21 Cây Sưa gieo trực tiếp đất vườn 21 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Sưa hay gọi Sưa trắng, Trắc thối (Dalbergia tonkinensis Prain), gỗ trung bình, mọc rải rác rừng thường xanh nguyên sinh thứ sinh Gỗ cứng, mịn, thơm, không mối mọt, dùng xây dựng làm hàng mỹ nghệ cao cấp Cây trồng làm bóng mát làm cảnh Cây phân bố số tỉnh nước ta Lạng Sơn, Bắc Ninh, Phú Thọ, Hà Tây, Hòa Bình, Ninh Bình, Nghệ An, Gia Lai, Kon Tum, Đồng Nai Hiện tại, bị săn lùng khai thác cạn kiệt, làm cho số lượng tự nhiên lại chủ yếu nhỏ Theo thông tin thị trường, gỗ lõi loài Sưa có giá trị cao, bán theo kilogam Sưa loài gỗ quý đưa vào Sách Đỏ Việt Nam (1996) Nghị định 32/2006/NĐ-CP ngày 30/3/2006 thuộc nhóm IA - thực vật rừng nghiêm cấm khai thác, sử dụng mục đích thương mại Cho đến nay, chưa có tài liệu nước, ghi nhận tác dụng làm thuốc xác định hợp chất hoá học có hoạt tính sinh học loài Sưa Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, đề xuất đề tài “Nghiên cứu đặc điểm sinh học, hoá học khả ứng dụng loài Sƣa (Dalbergia tonkinensis Prain) số tỉnh Đông Bắc Việt Nam” nhằm nghiên cứu cách đầy đủ thành phần hoá học, hoạt tính sinh học khả gây trồng, bảo tồn phát triển loài Sưa Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái, khả nhân giống thành phần hóa học Sưa (Dalbergia tonkinensis Prain) cho việc bảo tồn phát triển loài Sưa Việt Nam Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu số đặc điểm phân loại: danh pháp, đặc điểm hình thái, sinh học sinh thái, phân bố, giá trị sử dụng - Nghiên cứu khả nhân giống, sinh trưởng phát triển loài Sưa - Phân tích thành phần hóa học thử nghiệm hoạt tính sinh học loài Sưa Ý nghĩa đề tài Ý nghĩa khoa học: Góp phần bổ sung dẫn liệu (sinh thái, nhân giống hóa học) loài Sưa (Dalbergia tonkinensis Prain) Việt Nam Ý nghĩa thực tiễn: Kết nghiên cứu đề tài bước đầu đưa số kết khả nhân giống, gây trồng phát triển loài Sưa CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu giới Chi Trắc (Dalbergia L f.) thuộc họ Đậu (Fabaceae Lindl.) giới có 100 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới; gồm phần lớn gỗ trung bình, dây leo gỗ, bụi trườn loài gỗ lớn Đa phần loài chi Trắc (Dalbergia L f.) cho gỗ tốt, có giá trị kinh tế thường dùng làm đỗ mỹ nghệ cao cấp[1,4] Theo số tài liệu số phận số loài chi Dalbergia sử dụng làm thuốc loài D ansamica loài D hancei Trung Quốc, rễ dùng làm thuốc để chữa phong thấp; loài D hancei Trung Quốc, nhựa chữa đau bụng đầy hơi; D foliacea Lào, người ta dùng vỏ đem giã đắp vết thương nhiễm trùng loài D candentansiis An Giang, làm thuốc trị ung nhọt, chữa đau đầu, thổ huyết, u nhọt [3,4] Một vài tài liệu có số loài có họ hàng gần gũi với loài Sưa Trắc nói riêng chi Trắc (Dalbergia L f.) nói chung cho biết: Loài Trắc nam (Dalbergia cochinchinensis Pierre) có chứa 10 hợp chất phenolic Các hợp chất nhóm phenolic từ loài Trắc nam có hoạt tính ức chế 5α–dihydrotestosterone, hợp chất nguyên nhân gây bệnh đồng tính[9.10] Các chất chalcone butein (2’, 3’, 4’, 4’tetrahydroxy chalcone) tách chiết từ gỗ loài Trắc tàu (Dalbergia odorifera T Chen) có hoạt tính kháng oxy hoá Tại Trung Quốc, lõi gỗ loài dùng làm thuốc chữa trị số loại bệnh như: hỗn loạn máu, cầm máu, tổn thương, sưng tấy, ung nhọt, khái huyết, băng huyết, đau bụng an thần Một số hợp chất flavonoid tách chiết từ gỗ loài có hoạt tính 17 3.1.5 Giá trị sử dụng - Trồng làm bóng mát, làm cảnh - Gỗ dùng xây dựng làm hàng mỹ nghệ cao cấp 3.2 Khả nhân giống loài Sƣa(Dalbergia tonkinensis Prain) 3.2.1 Khả nhân giống sinh dưỡng Các số liệu nhân giống hom trình bày (bảng 2) cho thấy 100% cành giâm nẩy chồi sau giâm đến 12 ngày Tỷ lệ sống cành hom đạt khoảng 43% (đối chứng), 58% (300ppm IAA) 54,1% (300 ppm) Sau khoảng tháng giâm cành rễ Việc xử lý chất kích thích rễ IAA IBA nống độ từ 100 đếm 300ppm có tác dụng tăng thêm tỷ lệ sống với cành giâm loài Sưa Bảng Khả nẩy mầm từ cành hom loài Sƣa Thời gian Hom Tỷ lệ nẩy Nồng độ chất kích thích rễ (ppm) giâm cành Giống mầm đối tỷ lệ nẩy mầm (%) chứng IAA IBA (%) 100 200 300 100 200 300 Lô Non 46,6 53,3 60,0 63,3 53,3 56,6 60,0 (20/3/2011) già 43,3 50,0 56,6 60,0 43,3 50,0 53,3 Lô non 43,3 50,0 53,3 56,6 46,6 53,3 53,3 (25/4/2011) già 40,0 43,3 50,0 53,3 40,0 43,3 50,0 3.2.2 Khả nhân giống hạt Trước gieo hạt, đem xử lý hạt nước ấm với nhiệt độ nước khoảng 40 – 45oC khoảng thời gian từ đến 12 tiếng với lô thí nghiệm Thí nghiệm đợt I (tháng 12/2010) 18 Tôi gieo 400 hạt vào lô thí nghiệm: Cả lô gieo trực tiếp đất màu phù sa xử lý Kết trình bày bảng Bảng Kết thí nghiệm đợt I Phƣơng pháp xử lý hạt Xử lý nước nóng Thời gian Ngày gieo Số hạt gieo Số hạt Thời gian Tỷ lệ nảy mầm nảy mầm nảy mầm xử lý (giờ) Lô số 4h 26/12/2010 100 79 11 ngày 79% Lô số 8h 26/12/2010 100 71 13 ngày 71% Lô số 12h 26/12/2010 100 51 14 ngày 51% Đối Gieo trực 26/12/2010 100 52 13 ngày 52% chứng tiếp Thí nghiệm đợt II (tháng 4/2011) Tôi gieo 400 hạt vào lô thí nghiệm: Cả lô gieo bầu xử lý Kết trình bày bảng Bảng 4: Kết thí nghiệm đợt II Phƣơng pháp xử lý hạt Xử lý Thời gian Ngày gieo nước xử lý (giờ) Số hạt gieo Số hạt Thời gian Tỷ lệ nảy mầm nảy mầm nảy mầm nóng Lô số 4h 28/4/2011 100 87 ngày 87% Lô số 8h 28/4/2011 100 76 11 ngày 76% 19 Lô số 12h 28/4/2011 100 58 11 ngày 58% Đối Gieo trực 28/4/2011 100 61 13 ngày 61% chứng tiếp Thí nghiệm đợt III (tháng 8/2011) Tôi gieo 400 hạt vào lô thí nghiệm: Cả lô gieo khay nhựa Kết trình bày bảng Bảng Kết thí nghiệm đợt III Phƣơng pháp xử lý hạt Xử lý Thời gian Ngày gieo nước xử lý (giờ) Số hạt gieo Số hạt Thời gian Tỷ lệ nảy mầm nảy mầmnảy mầm nóng Lô số 4h 3/8/2011 100 57 13 ngày 57% Lô số 8h 3/8/2011 100 48 13 ngày 48% Lô số 12h 3/8/2011 100 47 15 ngày 47% Đối Gieo trực 3/8/2011 100 41 15 ngày 41% chứng tiếp Như vậy, qua kết thí nghiệm, việc gieo hạt qua xử lý ngâm nước ấm cho tỷ lệ nảy mầm tương đối cao Việc xử lý hạt việc ngâm nước ấm khoảng rút ngắn thời gian nảy mầm việc gieo hạt không xử lý 20 3.3 Khả sinh trƣởng loài Sƣa mọc từ hạt Bảng Khả sinh trƣởng loài Sƣa mọc từ hạt Tỷ lệ sống (%) tháng tháng tháng tháng tháng tháng 26/12/2010 Đất phù sa 79 7,5 15,4 23,3 32,5 43,2 54,2 28/4/2011 Trong bầu 87 7,8 15,5 23,4 32,3 44,0 55,1 3/8/2011 Trong khay 57 8,0 16,1 24,1 33,2 45,2 56,0 Ngày gieo Nền đất Chiều cao (cm) 10 12 Như vậy, từ kết bảng cho thấy sau gieo tháng gieo đất phù sa đạt 7,5cm, sau tháng 15,4cm, sau tháng 23,3cm, sau tháng 32,5cm, sau 10 tháng cao 43,2cm, sau 12 tháng cao 54,2 cm Ảnh Loài Sƣa nảy mầm 21 Ảnh Loài Sƣa gieo khay Ảnh Loài Sƣa gieo bầu đất 22 Ảnh Cây Sƣa gieo trực tiếp đất vƣờn 3.4 Thử hoạt tính sinh học loài Sƣa 3.4.1 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Bảng Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định từ cành Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC: g/ml) Ký Vi khuẩn Vi khuẩn Gr(+) Nấm mốc Nấm men Gr(-) TT hiệu P mẫu E coli aeruginos a B S A F subtillis aureus niger oxysporum S cerevisia e C albicans Cành (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) Lá (-) Kết bảng cho thấy hai mẫu phân tính biểu hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 3.4.2 Thử hoạt tính chống ôxy hoá 23 Bảng Hoạt tính chống oxy hóa từ dịch chiết cành Nồng độ mẫu SC50 Stt Kí hiệu mẫu Chứng (+) 50 74,5  0,2 26,19 Dương tính Chứng (-) - 0,0  0,0 - Âm tính Lá 200 38,21  0,1 - Âm tính Cành 200 21,36  0,1 - Âm tính SC% (g/ml) (g/ml) Kết Kết cho thấy: Các mẫu thử: Lá (Dalbergia tonkinensis), Cành (Dalbergia tonkinensis) không biểu hoạt tính chống oxy hoá hệ DPPH 3.4.3 Thử hoạt tính gây độc tế bào Bảng Hoạt tính kháng ung thƣ từ dịch chiết cành STT Ký hiệu Tỷ lệ tế bào sống (%) Kết luận mẫu Hep-G2 Lu RD DMSO 100,00,0 100,00,0 100,00,0 Âm tính Chứng (+) 0,80,5 1,20,09 1,10,2 Dương tính Cành 98,40,2 89,70,4 79,50,5 Âm tính Lá 97,60,5 93,50,9 86,30,6 Âm tính Kết bảng cho thấy mẫu thử không biểu có hoạt tính gây độc tế bào 3.5 Phân lập hợp chất từ loài Sƣa (Dalbergia tonkinensis Prain) 3.5.1 Xây dựng quy trình phân lập hợp chất Mẫu sưa phơi khô, xay nhỏ (1,9 kg) chiết hồi lưu ba lần với MeOH, dịch chiết gom lại cô cạn thu 31 g cặn chiết Cặn MeOH sau hòa vào nước chiết phân đoạn CHCl thu g cặn CHCl3 Phần nước lại lọc qua cột trao đổi ion (Dianion 24 HP20) rửa giải metanol/nước (30/70, 70/30 100/0, v/v) Phân đoạn rửa 70% MeOH chạy qua cột sắc ký silica gel với hệ dung môi CHCl3-MeOH-H2O (30:10:1, v/v/v) thu hợp chất 1: Genistein màu vàng (250 mg) Cặn chiết CHCl3 tách thành ba phân đoạn nhỏ (F1-3) cột sắc ký silica gel với hệ dung môi rửa giải CHCl3-Me2CO (2/1, v/v) Hợp chất 2: Lanceolarin (12 mg) hợp chất 3: 9,10-threo-3-[7-(3,10dihydroxy-9-hydroxymethyl-2,5-dimethoxy)-9,10dihydrophenanthrenyl]propenal (15 mg) thu từ phân đoạn F2 F3 tương ứng sắc ký cột pha thường pha đảo với hệ dung môi thích hợp (sơ đồ 2) : Bột khô sưa (1,9 kg) - Chiết MeOH - Loại MeOH áp suất giảm - Bổ sung lit nước cất Cặn MeOH - Bổ sung lít clorofooc (31 g) (chiết 03 lần) Cặn nước (24 g) Cặn clorofooc (7 g) - Chạy cột Dianion Phân đoạn 30% MeOH (15 g) Phân đoạn 70% MeOH (2 g) Phân đoạn 100% MeOH (7 g) - Silicagel CC - CHCl3-MeOH-H2O (30:10:1, v/v/v) Hợp chất (250 mg) Sơ đồ Chiết phân đoạn phân lập chất từ cặn chiết nước 25 Cặn chiết clorofooc (7 g) - Silica gel CC - CHCl3-Me2CO (2/1, v/v) F1 (4 g) F2 (1 g) F3 (2 g) - YMC CC - Me2CO-H2O (3/1, v/v) Hợp chất (12 mg) Hợp chất (15 mg) Sơ đồ Phân lập hoạt chất từ cặn chiết clorofooc 3.5.2 Hằng số vật lý kiện phổ chất  Hợp chất Genistein Chất rắn màu nâu nhạt, công thức phân tử C15H10O5 (M = 270) Phổ khối lượng ESI-MS m/z: 271 [M+H]+ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) H: 6,22 (1H, br s, H-8), 6,32 (1H, br s, H-6), 6,86 (2H, br d, J = 8,0 Hz, H-3', H-5'), 7,37 (2H, br d, J = 8,0 Hz, H-2', H-6'), 8,00 (1H, br s, H-2); 13 C-NMR (CD3OD, 125 MHz) C: 182,1 (C-4), 165,7 (C-4'), 163,6 (C-7), 159,5 (C-5), 158,6 (C-9), 154,5 (C-2), 131,2 (C-2',6'), 124,6 (C-1'), 123,2 (C-3), 116,2 (C3',5'), 106,2 (C-10), 100,0 (C-6) 94,7 (C-8) 26  Hợp chất Lanceolarin Chất rắn màu nâu nhạt, công thức phân tử C 27H30O14 (M = 578) Phổ khối lượng ESI-MS m/z: 579 [M+H]+ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) H: aglycone: 3,85 (3H, br s, OMe), 6,56 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,74 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 7.00 (2H, br d, J = 8,0 Hz, H-3', H-5'), 7,50 (2H, br d, J = 8,0 Hz, H-2', H-6'), 8,15 (1H, br s, H-2); Glucose: 5,00 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1''), 3,50 (1H, m, H-2''), 3,69 (1H, m, H-3'), 3,36 (1H, m, H-4''), 3,51 (1H, m, H5''), 3,65 (1H, m, Ha-6''), 4,08 (1H, m, Hb-6''); Apiose: 4,99 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-1'''), 3,96 (1H, m, H-2'''), 4,04 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-4a'''), 3,80 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-4b''') 3,63 (2H, br s, H-5'''); 13 C-NMR (CD3OD, 125 MHz) #C: aglycone: 182,4 (C-4), 159,2 (C-4'), 161,5 (C-7), 163,5 (C-5), 157,2 (C-9), 155,4 (C-2), 131,3 (C-2',6'), 124,5 (C-1'), 124,8 (C-3), 115,0 (C-3',5'), 108,1 (C-10), 101,4 (C-6), 96,2 (C-8), 55,8 (OMe); Glucose: 101,8 (C-1''), 74,8 (C2''), 78,1 (C-3''), 71,7 (C-4''), 77,3 (C-5''), 69,0 (C-6''); Apiose: 111,2 (C-1'''), 78,3 (C-2'''), 80,4 (C-3'''), 75,1 (C-4''') 66,0 (C-5''')  Hợp chất 9,10-threo-3-[7-(3,10-dihydroxy-9-hydroxymethyl-2,5dimethoxy)-9,10-dihydrophenanthrenyl]propenal Chất rắn màu vàng, công thức phân tử C20H20O6 (M = 356) Phổ khối lượng ESI-MS m/z: 357 [M+H]+ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) H: 3,67 (1H, m, H-9), 3,89 (3H, s, 2-OMe), 3,93 (3H, s, 5-OMe), 3,97 (2H, m, H-11), 5,64 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-10), 6.60 (1H, dd, J = 7,5, 15,5 Hz, H-2'), 6,89 (1H, br s, H-4), 6,90 (1H, br s, H-1), 7,04 (1H, s, H-6), 7,13 (1H, s, H-8), 7,40 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-1') 9,63 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-3'); 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C: 53,0 (C-9), 56,0 (2-OMe), 56,1 (5-OMe), 63,9 (C-11), 88,9 (C-10), 27 108,7 (C-4), 112,3 (C-6), 118,1 (C-8), 119,4 (C-1), 126,4 (C-2'), 128,1 (C-7), 129,1 (C-8a), 132,2 (C-4a, C-10a), 144,5 (C-5), 145,9 (C-3), 146,7 (C-2), 151,5 (C-4b), 153,0 (C-1') 193,5 (C-3') Không thấy tương tác H-2' (H 6,60) với C-7 (C 128,1), H-1' (H 7,40) với C-6 (C 112,3) C-8 (C 118,1) khẳng định nhóm propenal đính vào vị trí C-7 Ngoài cấu trúc có hai nhóm metoxi có H 3,89 (2-OMe) 3,93 (5-OMe) xác định gắn vào vị trí C-2 (C 146,7) C-5 (C 144,5) dựa tương tác HC quan sát thấy phổ HMBC Ngoài ra, xuất pic m/z 357 [M+H]+ phổ ESI-MS hoàn toàn phù hợp công thức phân tử C20H20O6 Kết hợp kiện so sánh với tài liệu tham khảo [16], hợp chất xác định 9,10-threo-3-[7(3,10-dihydroxy-9-hydroxymethyl-2,5-dimethoxy)-9,10 dihydrophenanthrenyl]propenal Đây lần dihydrophenanthrene tìm thấy chi Dalbergia khung 28 KẾT LUẬN Sưa loại ưa sáng, mọc nhanh, ưa đất tốt, mọc rải rác rừng, đất có tầng dày giàu chất dinh dưỡng, độ cao tới 500-600m Cây phân bố khắp nước.Trong tự nhiên gặp với kích thước lớn Tỷ lệ tái sinh tự nhiên từ hạt thấp Kết trọng lượng trung bình khô 0,21 gam; chiều dài trung bình 6,25 cm; chiều rộng trung bình 1,87 cm Qua phân tích liệu hạt cho thấy, trọng lượng trung bình hạt 0,0564 gam; chiều dài trung bình hạt 1,03 cm; chiều rộng trung bình hạt 0,6 cm Tỷ lệ sống cành hom đạt khoảng 43% (đối chứng), 58% (300ppm IAA) 54,1% (300 ppm) Sau khoảng tháng giâm cành rễ Thời gian mọc chồi gần khác biệt lần lấy mẫu tuổi cành giâm Việc xử lý chất kích thích rễ IAA IBA nống độ từ 100 đếm 300ppm có tác dụng tăng thêm tỷ lệ sống với cành giâm loài Sưa 7-16 % so với đối chứng Kết qua việc gieo hạt qua xử lý ngâm nước nóng từ cho tỷ lệ nẩy mầm đạt tỷ lệ tương ứng (87%,79% 57%) đất bầu, đất luống phù sa đất khay nhựa; tỷ lệ cao so với tỷ lệ nẩy mầm mà hạt xử lý từ hay 12 Thời gian nẩy mầm kéo dài từ ngày đến 15 ngày Thời gian thật khoảng 20 ngày Sau gieo tháng gieo đất phù sa đạt 7,5cm, sau tháng 15,4cm, sau tháng 23,3cm, sau tháng 32,5cm, sau 10 tháng cao 43,2cm, sau 12 tháng cao 54,2 cm Các dịch chiết thô metanol từ cành loài Sưa thử hoạt tính vi sinh vât kiểm định, chống oxyhoas gây độc tế bào chưa phát thấy hoạt tính 29 Đã xây dựng qui trình phân lập xác định cấu trúc hóa học số hợp chất từ loài Sưa Một số hợp chất loài Sưa xác định Ginestein;lanceolarin;9,10-threo-3-7-3,10-dyhdroxy-9- hydroxymethyl-2,5-dimethoxy-9,10, hyhdrophenanthrenyl propenal 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) nnk (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam Tập Nxb Nông nghiệp Tr 779-786 Bộ khoa học Công nghệ, Viện Khoa học công nghệ Việt Nam (2007), Danh lục Đỏ Việt Nam, Nxb KHTN CN Tr 275 Võ Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, Nxb Y học Tr 1252 Võ Văn Chi (2007), Từ điển thực vật học thông dụng, Tập 1, Nxb KHKT Tr 878-888 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ thường thấy Việt Nam, Nxb Trẻ, Tr 878 – 889 Quỹ Quốc tế bảo vệ thiên nhiên WWF (2003), Sổ tay điều tra giám sát đa dạng sinh học, Nxb Giao thông vận tải Tài liệu Tiếng Anh Chan S C., Chang Y S., Wang J P., Chen S C., Kuo S C (1998) Three new flavonoits and antiallergic, anti-inflammatory constituents from the heartwood of Dalbergia odorifera Planta Medica, 64: 153-158 Ito C., Itoigawa M., Kanematsu T., Ruangrungsi N., Mukainaka T., Tokuda H., Nishino H., Furukawa H.(2003) Isoflavonoids from Dalbergia oliveri Phytochemistry, 64: 1265-1268 Pathak V., Shirota O., Sekita S., Hirayama Y., Hakamata Y., Hayashi T., Yanagawa T., Satake M.(1997) Antiandrogenic phenolic constituents from Dalbergia cochinchiensis Phytochemistry, 46: 1219-1223 10.Shirota O., Pathak V., Sekita S., Satake M., Nagashima Y., Hirayama Y., Hakamata Y., Hayashi T.(2003) Phenolic constituents from Dalbergia cochinchinensis Journal of Natural Products, 66: 1128-1131 31 Yu X., Wang W., Yang M.(2007) Antioxidant activities of compounds isolated from Dalbergia odorifera T Chen and their inhibition effects on the decrease of glutathione level of rat lens induced by UV irradiation Food Chemistry, 104: 715-720 [...]... hình nghiên cứu ở Việt Nam Cho đến nay, chưa có bất kỳ tài liệu nào ở nước ta ghi nhận về tác dụng làm thuốc của loài Sưa, cũng như các hợp chất hoá học có hoạt tính sinh học của loài này 6 CHƢƠNG 2 ĐỐI TƢỢNG, ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Loài Sưa (Dalbergia tonkinensis Prain) thuộc chi Trắc (Dalbergia L f.) của Họ Đậu (Fabaceae Lindl) 2.2 Địa điểm nghiên cứu. .. địa điểm: Một số tỉnh phía Bắc, Tuyên Quang (Na Hang), Thái Nguyên ( ồng Hỷ), Hà Giang (Bắc Mê, Vị Xuyên, Quảng Bạ), Quảng Ninh (Vân Đồn, Minh Châu, Quan Lạng) Nghệ An (Nghĩa Đàn)… trại Cổ Nhuế 2.3 Thời gian nghiên cứu Từ tháng 12/ 2010-3/2012 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.4.1 Nghiên cứu về sinh học - Điều tra khảo sát sự phân bố, một số đặc điểm sinh học sinh thái của loài Sưa (Dalbergia tonkinensis Prain). .. tích hoá và thử hoạt tính sinh học - Nghiên cứu khả năng nhân giống và khả năng sinh trưởng của loài Sưa theo các phương pháp nghiên cứu thông dụng về nông lâm học - Điều tra thu thập tri thức bản địa trong nhân dân theo thep phương pháp PRA về việc khai thác và sử dụng loài Sưa tại một số nơi trong khu vực nghiên cứu 2.4.2 Nghiên cứu về hóa học  Phƣơng pháp phân lập các hợp chất 7 1 Sắc ký lớp mỏng (TLC)... 6,4'dihydroxy-7-methoxyflavan và 2,2'-5-trihydroxy-4-methoxybenzophenone, 5 được phân lập từ thân loài này Năm 2003, năm hợp chất isoflavonoit được phân lập và xác định cấu trúc từ loài D oliveri, trong đó có 2 chất mới là olibergin A và B Chỉ có một số nghiên cứu về sinh học, sinh thái của cây Sưa ở Trung Quốc, còn những nghiên cứu về hóa học và hoạt tính sinh học của loài Sưa trên thế giới hầu như chưa... 3,80 (1 H, d, J = 7,5 Hz, H-4b''') và 3,63 (2 H, br s, H-5'''); 13 C-NMR (CD3OD, 125 MHz) #C: aglycone: 182,4 (C-4), 159,2 (C-4'), 161,5 (C-7), 163,5 (C-5), 157,2 (C-9), 155,4 (C-2), 131,3 (C-2',6'), 124,5 (C-1'), 124,8 (C-3), 115,0 (C-3',5'), 108,1 (C-10), 101,4 (C-6), 96,2 (C-8), 55,8 (OMe); Glucose: 101,8 (C-1''), 74,8 (C2''), 78,1 (C-3''), 71,7 (C-4''), 77,3 (C-5''), 69,0 (C-6''); Apiose: 111,2 (C-1'''),... cerevisia e C albicans 1 Cành (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) 2 (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) (- ) Lá (- ) Kết quả ở bảng 7 cho thấy cả hai mẫu phân tính đều không có biểu hiện hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 3.4.2 Thử hoạt tính chống ôxy hoá 23 Bảng 8 Hoạt tính chống oxy hóa từ dịch chiết cành và lá Nồng độ mẫu SC50 Stt Kí hiệu mẫu 1 Chứng (+ ) 50 74,5  0,2 26,19 Dương tính 2 Chứng (- ) - 0,0  0,0 - Âm tính... học và Công nghệ Việt Nam 3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 8 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): 1H-NMR (5 00 MHz) và 13C-NMR (1 25 MHz) được đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2.4.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học  Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định  Các chủng vi sinh vật kiểm định bao gồm: - Vi khuẩn Gr (- ): Escherichia coli (ATCC... 132,2 (C-4a, C-10a), 144,5 (C-5), 145,9 (C-3), 146,7 (C-2), 151,5 (C-4b), 153,0 (C-1') và 193,5 (C-3') Không thấy tương tác giữa H-2' ( H 6,60) với C-7 ( C 128,1), giữa H-1' ( H 7,40) với C-6 ( C 112,3) và C-8 ( C 118,1) khẳng định nhóm propenal đính vào vị trí C-7 Ngoài ra trong cấu trúc của 3 còn có hai nhóm metoxi có H 3,89 (2 -OMe) và 3,93 (5 -OMe) được xác định gắn vào vị trí C-2 ( C 146,7) và C-5 ( C... 5,64 (1 H, d, J = 7,0 Hz, H-10), 6.60 (1 H, dd, J = 7,5, 15,5 Hz, H-2'), 6,89 (1 H, br s, H-4), 6,90 (1 H, br s, H-1), 7,04 (1 H, s, H-6), 7,13 (1 H, s, H-8), 7,40 (1 H, d, J = 15,5 Hz, H-1') và 9,63 (1 H, d, J = 7,5 Hz, H-3'); 13 C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C: 53,0 (C-9), 56,0 (2 -OMe), 56,1 (5 -OMe), 63,9 (C-11), 88,9 (C-10), 27 108,7 (C-4), 112,3 (C-6), 118,1 (C-8), 119,4 (C-1), 126,4 (C-2'), 128,1 (C-7), 129,1 (C-8a),... của Likhiwitayawuid và cộng sự hiện đang được áp dụng tại viện nghiên cứu ung thư Quốc gia của Mỹ (NCI) và trường đại học Dược, đại học Tổng hợp Illinois, Chicago, Mỹ  Tính kết quả - Giá trị CS: Là khả năng sống sót của tế bào ở nồng độ nào đó của chất thử tính theo % so với đối chứng Dựa trên kết quả đo được của chúng OD (ngày 0), DMSO 10% và so sánh với giá trị OD khi trộn mẫu để tìm giá trị CS(%) ... ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN LUYỆN THỊ THANH NGA NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC, HÓA HỌC VÀ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG CỦA LOÀI SƢA (DALBERGIA TONKINENSIS PRAIN) Ở MỘT SỐ TỈNH ĐÔNG BẮC VIỆT NAM. .. dụng làm thuốc xác định hợp chất hoá học có hoạt tính sinh học loài Sưa Xuất phát từ sở khoa học thực tiễn trên, đề xuất đề tài Nghiên cứu đặc điểm sinh học, hoá học khả ứng dụng loài Sƣa (Dalbergia. .. (Dalbergia tonkinensis Prain) số tỉnh Đông Bắc Việt Nam nhằm nghiên cứu cách đầy đủ thành phần hoá học, hoạt tính sinh học khả gây trồng, bảo tồn phát triển loài Sưa Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đặc